專利名稱：檢測口腔內細菌的檢測器及口腔內細菌的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種能簡易測定被檢者口腔內細菌數量的檢測器及口腔內細菌的檢測方法。本申請要求以2009年2月2日在日本提出的特愿2009-021902號專利申請為優
先權，并引用其內容。
背景技術：
眾所周知，口腔內細菌會引發牙周病、齲齒、口臭等多種疾病。另外，近年來其作為肺炎的誘因受到關注。誘發肺炎等疾病的病原細菌常存在于口腔內。因此，期望通過口腔護理來保持口腔的清潔，以減少被吸入到肺部的口腔內細菌的數量。一般通過培養法來測定口腔內細菌的數量。即，以消毒棉簽等擦拭口腔內部，將其在培養基中擴散、稀釋，然后接種培養，統計增殖的菌落數。但是，這種培養方法需要較多的培養基和培養天數，操作復雜，并且需要能夠處理細菌的特定設備和技術。因此，作為不需要特定設備或技術的細菌的分析方法，例如專利文獻1公開了一種試紙，其含有針對口腔內微生物特有的酶活性的顯色酶基質，并公開了將其與可能含有口腔內微生物的試樣直接接觸，然后滴入顯色液，以肉眼觀察試紙的顯色程度來測定口腔內微生物數量的方法。現有技術文獻專利文獻1日本特開2005-73650號公報

發明內容
本發明要解決的技術問題但是，由于專利文獻1中所記載的方法是通過顯色程度的強弱來判斷口腔內微生物的數量，因此容易受到測定者的主觀影響，易產生判斷偏差。另外，眾所周知口腔內細菌數量為1 X106f/mL以上時發生肺炎的概率較高，但是難以瞬間判斷口腔內細菌的數量是否在1 X IO6個/mL以上。為了既能準確判斷，又能瞬間判斷，因此需另行準備一個能表示顯色酶基質的顯色程度與口腔內細菌數量間關系的比色表等來進行對比。但是，例如被測者本人進行判斷的情況下，測定時手頭必須要有比色表，因此每人均需準備一份比色表，不實用。本發明是鑒于上述問題而完成的，其目的是提供一種不需要與另行準備的比色表進行對比，并且不受測定者主觀影響，能夠簡易測定口腔內細菌數量的檢測器及口腔內細菌數量的檢測方法。解決技術問題的技術手段為實現上述目的，本發明采用下述技術方案。
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(1)本發明提供一種檢測口腔內細菌的檢測器，所述檢測器具有檢測主體，所述檢測主體由板體及插入到該板體內的吸水性載體構成；所述吸水性載體可儲存因口腔內細菌特有的酶活性而顯色的顯色酶基質以及口腔內細菌特有的酶；所述板體染有規定顏色，所述規定顏色為所述顯色酶基質根據口腔內細菌數量所顯現的顏色。(2)在上述(1)中所述的檢測器中，優選在所述檢測主體的一個面上層疊有透明基材。(3)在上述(1)中所述的檢測器中，優選在所述檢測主體的一側面上依次層疊有粘結層和剝離紙。(4)在上述(1) (3)所述的檢測器中，所述顯色酶基質優選L-亮氨酸-β -萘酰胺鹽酸鹽和/或DL-丙氨酸-β -萘酰胺鹽酸鹽。(5)上述(1) (4)所述檢測器中所具有的所述板體優選染成以麥克佩斯濃度計測定的品紅濃度為0. 35 0. 43的顏色。此時，能夠測定公認的發生肺炎的概率較高時的口腔內細菌的數量。(6)上述(1) ( 所述檢測器中所具有的所述吸水性載體，也可以含有所述顯色酶基質或使該顯色酶基質顯色的顯色液。(7)另外，本發明提供一種口腔內細菌的檢測方法，所述方法為將待測試樣、顯色酶基質及使該顯色酶基質顯色的顯色液滴至所述檢測口腔內細菌的檢測器的吸水性載體上，使顯色酶基質顯色，與板體顏色相比較，測定口腔內細菌的數量。(8)本發明還提供一種口腔內細菌的檢測方法，所述方法為將待測試樣，以及顯色酶基質與使該顯色酶基質顯色的顯色液兩者中不被所述吸水性載體所含有的一個滴至所述檢測口腔內細菌的檢測器的吸水性載體上，使顯色酶基質顯色，與板體顏色相比較，測定口腔內細菌的數量。發明效果通過本發明的檢測口腔內細菌的檢測器及口腔內細菌的檢測方法，不需要另行準備比色表等進行對比，并且不受測定者的主觀影響，能夠簡易測定口腔內細菌的數量。


圖1為表示本發明的檢測口腔內細菌的檢測器的一個實例的立體圖。圖2為圖1的A-A’截面圖。圖3為表示本發明的檢測口腔內細菌的檢測器的另一實例的截面圖。圖4為表示本發明的檢測口腔內細菌的檢測器的另一實例的立體圖。
具體實施例方式以下，對本發明的檢測口腔內細菌的檢測器進行詳細說明。圖1、2表示本發明的檢測口腔內細菌的檢測器(以下只稱作“檢測器”)的一個實例。該實例所示的檢測器1具有檢測主體10，所述檢測主體10包含板體11及插入到該板體11內的吸水性載體12。另外，圖1為檢測器1的立體圖，圖2為圖1的A-A’截面圖。另外，在圖2 4中，與圖1相同的結構要素使用相同的附圖標記，省略對其的說明。吸水性載體12儲存因口腔內細菌特有的酶活性而發生顯色的顯色酶基質及口腔內細菌特有的酶。吸水性載體12具有吸水性，是能夠吸收并包含后述顯色酶基質及顯色液的載體。 作為這樣的載體，可以舉例如紙、濾紙、吸水性聚合物、纖維、無紡布、棉等。吸水性載體12的形狀不限于圖1所示。另外，吸水性載體12的厚度可以與后述板體11的厚度相同。在圖1、2所示的板體11的大概中心位置上設有貫通孔，為了固定吸水性載體12 而將其嵌入該貫通孔。對貫通孔的大小或形狀無特殊限定，但是當其為圓形時，圓的直徑優選5 20mm左右。作為板體11的材質，可以舉例如發泡聚苯乙烯、發泡聚乙烯、發泡聚丙烯、發泡聚氨酯樹脂、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚氨酯樹脂、ABS樹脂、丙烯酸樹脂、聚碳酸酯等塑料， 紙，木材，金屬等。作為板體11的厚度無特殊限定，但優選0. 5 5. 0mm。板體11染有規定顏色，所述規定顏色為根據口腔內細菌數量，所述顯色酶基質所顯現的顏色。可以至少在板體11的表面染有規定顏色，但是理想情況是在其背面也染有同樣的顏色。如果板體11的兩面均被染色，就能從檢測器1的兩面目測檢測結果。另外，本發明中所述的“規定顏色”，是指以口腔內細菌誘發的例如肺炎、牙周病、 齲齒、口臭等疾病的發生率較高時的口腔內細菌的數量為基準值，根據該基準值顯色酶基質所顯現的顏色(基準色)。顯色酶基質因酶量(濃度)的不同顯色的程度有所不同。通常來說，酶量越大越強，即有顯色濃的傾向。另外，口腔內細菌的數量與酶量成正比，因此有顯色酶基質顯色越強口腔內細菌數量越多的傾向。因此，將板體11染成規定顏色時，可以改變酶濃度來尋找顯色酶基質發生顯色時的顯色程度(色濃度)與酶濃度(或口腔內細菌數量)之間的關系，然后染成與顯色酶基質顯色程度相匹配的色調。例如，如上所述口腔內細菌數量為IXlO6個/mL以上時發生肺炎的概率較高。因此，以酶濃度相當于口腔內細菌數量為1 X IO6個/mL時顯色酶基質所顯現的顏色為基準色，將板體11染成該基準色。具體為染成以麥克佩斯濃度計測得的品紅濃度為0. 35 0. 43 的顏色。據此，詳細說明如后述，但當使用本發明的檢測器1檢測口腔內細菌數量時，將顯色酶基質的顯色程度與板體11的顏色相比較，較淡時說明口腔內細菌的數量不足IXlO6 個/mL，顯色程度與板體11相同、或者較濃時說明口腔內細菌的數量大于IX IO6個/mL。因此，通過口腔內細菌數量能夠瞬間判斷是否在肺炎發生率較高的基準值以上。例如板體11可以選定肺炎情況下呈基準色的顏色，并染成該基準色，但是本發明并不局限于此。例如還可以將顯色酶基質因各個酶濃度顯現的各種顏色呈漸變性地對一個板體進行染色。這樣染色的話能夠更詳細測定口腔內細菌的數量。作為對板體11染色的方法，無特殊限定，可以在形成板體11后在板體11的表面或背面涂布涂料對其進行染色使其呈現規定色調。另外，也可以在板體11的原料中添加顏料使其呈現規定色調，然后形成板體11。圖1、2所示的檢測器1，在其檢測主體10的一個面上，直接或通過粘結層(圖中略)層疊有透明基材20。但是，當檢測主體10的一個面上層疊有透明基材20時，板體11 的兩面都染成規定顏色。作為透明基材20的厚度，無特殊限定，但是優選50 200 μ m。另外，本發明中“透明”是指沒有染色，并且能夠以目視確認顯色酶基質顯色時的顯色程度的狀態。透明基材20直接層疊于檢測主體10上時，作為透明基材20的材質，可以例舉如丙烯酸樹脂、聚氨酯樹脂、環氧樹脂、縮丁醛樹脂、纖維素類樹脂等熱固性樹脂，或聚氨酯丙烯酸酯、環氧丙烯酸酯、聚酯丙烯酸酯、聚醚丙烯酸酯等光固性寡聚物等。另一方面，當透明基材20通過粘結層層疊于檢測主體10上時，作為透明基材20 的材質，可以例舉如玻璃、塑料薄膜(如玻璃紙、聚烯烴、氯乙烯樹脂等)等。另外，作為構成粘結層的粘結劑，除了透明外無其他限定，可以例舉如環氧樹脂類、聚丙烯樹脂類、聚氨酯樹脂類等粘結劑。粘結層的厚度優選50 200 μ m。檢測口腔內細菌時，以消毒棉簽等擦拭口腔內，將待測試樣(唾液等)附著于吸水性載體上。通過吸水性載體使待測試樣的細菌中所特有的酶與顯色酶基質相接觸，并且通過顯色液使其顯色，將其顯色程度與板體11的顏色相比較。但是，有時口腔內會殘留食品的殘渣(即食物殘渣)，因此有時食物殘渣與唾液等同時被采集包含在待測試樣中。將含有食物殘渣的待測試樣附著于吸水性載體上，使其與顯色酶基質相接觸發生顯色時，與食物殘渣相接觸的部分易顯色較深，因此有時難以判定口腔內實際細菌的數量所引起的顯色程度。但是，如圖1、2所示，如果檢測主體10的另一面層疊有透明基材20，即使待測試樣中含有食物殘渣也能從透明基材20 —側以目視確認均一的顯色狀態，因此更容易進行判斷。這是因為，食物殘渣難以滲透到吸水性載體12中，因此即使待測試樣中含有食物殘渣，食物殘渣也會殘留在吸水性載體12的表面，待測試樣中除食物殘渣以外的成分則滲透入吸水性載體12中，到達吸水性載體12的背面。吸水性載體12含有顯色酶基質或顯色液， 即能夠使其滲透，因此顯色酶基質或顯色液也能滲透入吸水性載體12中并能到達其背面。 因此，不僅能夠確認顯色酶基質在吸水性載體12的表面發生顯色的狀態，也可以確認在其背面也發生顯色的狀態，但特別地，食物殘渣不能滲透到其背面，因此能夠確認均一的顯色狀態。檢測主體10的另一面，相當于吸水性載體12的背面，因此能夠從透明基材20 —側目視檢測器1，從而確認顯色酶基質均一的顯色狀態。另外，如果檢測主體10的另一面層疊有透明基材20，吸水性載體12可以被更牢固地固定于板體11的貫通孔內。另外，如圖3所示，可以在檢測主體10的一面上依次層疊粘結層30和剝離紙40 來代替透明基材20。但是，當在檢測主體10的一面上依次層疊粘結層30和剝離紙40時， 需將板體11的兩面均染成規定顏色。作為構成粘結層30的粘結劑，可以例舉如丙烯酸樹脂類、橡膠類、聚氨酯樹脂類、 聚酯類、硅氧樹脂類等粘結劑。作為粘結層30的厚度，無特殊限定，但優選50 200 μ m。
作為剝離紙40，可以使用各種紙(日本紙、牛皮紙等)、織布、無紡布、或塑料薄膜 (如玻璃紙、聚烯烴、氯乙烯樹脂等)等。另外，剝離紙40相對于粘結層30的剝離力比檢測主體10相對于粘結層30的剝離力小。作為剝離紙40的厚度，無特殊限定，但是優選50 200 μ m。另外，也可以使用市售的雙面膠帶代替粘結層30與剝離紙40。當檢測主體10的一面上層疊有粘結層30和剝離紙40時，在檢測時當通過吸水性載體使待測試樣中的細菌所特有的酶與顯色酶基質相接觸后，可以剝離掉剝離紙40露出粘結層30，將檢測器1貼附于腕、手、胸、腋下、足等身體的某一部位，將其溫熱到37°C左右的體溫下。其目的是促進酶反應。另外，如果檢測主體10的一面上層疊有粘結層30，吸水性載體12會更牢固地固定于板體11的貫通孔中。并且，如果使用透明的粘結劑或透明的剝離紙，能夠從粘結層30或剝離紙40 —側以目視確認均一的顯色狀態，因此即使待測試樣中含有食物殘渣也能很容易地進行測定。下面，具體地說明口腔內細菌及顯色酶基質。通過革蘭氏鑒別，細菌可大體分為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌。在革蘭氏陽性菌中作為口腔內的常駐菌存在最多的細菌是溶血性鏈球菌。革蘭氏陰性菌中包括屬于下列屬的各種微生物，所述屬為擬桿菌屬(但除去擬桿菌普通擬桿菌、脆弱擬桿菌)、普氏菌屬、韋榮氏球菌屬(但除去小韋榮氏球菌)、梭桿菌屬、奈瑟菌屬、布蘭漢球菌屬、不動桿菌屬、金氏菌屬、莫拉克氏菌屬、布魯氏菌屬、博德特氏菌屬、產堿桿菌屬、希瓦氏菌屬、假單胞菌屬、土壤桿菌屬、黃桿菌屬、放線桿菌屬、巴氏桿菌屬、氣單胞菌屬、心桿菌屬、鄰單胞菌屬、弧菌屬、嗜血桿菌屬、加德納菌屬、布丘氏菌屬 (Buttiauxella)、西地西菌屬、枸杞酸桿菌屬、愛德華菌屬、腸桿菌屬、歐文氏菌屬、大腸桿菌屬、哈夫尼菌屬、克雷伯氏桿菌屬、克呂沃爾氏菌屬、摩根氏菌屬、變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬、沙門氏菌屬、沙雷氏桿菌屬、志賀桿菌屬、塔特姆氏菌屬或耶爾森氏菌屬。在分析這些革蘭氏陰性菌時，作為全部革蘭氏陰性菌所特有的酶可以使用如丙氨酸氨基肽酶。另一方面，溶血性鏈球菌包括如化膿鏈球菌、無乳鏈球菌、馬疫鏈球菌、無乳鏈球菌、獸疫鏈球菌、類馬鏈球菌(Strescoccus equisimilis)、咽峽炎鏈球菌、豕鏈球菌、乳房鏈球菌、豬鏈球菌、肺炎鏈球菌、血鏈球菌、口腔鏈球菌、麻疹鏈球菌、牛鏈球菌、馬腸鏈球菌、變異鏈球菌或唾液鏈球菌。在分析這些溶血性鏈球菌時，作為所有溶血性鏈球菌所特有的酶可以使用亮氨酸
氨基肽酶。另外，分析革蘭氏陽性菌時，作為所有革蘭氏陽性菌所特有的酶，可以使用如磷酸酶。磷酸酶是一種存在于大多數的革蘭氏陽性菌或一部分革蘭氏陰性菌中的酶。顯色酶基質是一種與上述酶反應之前不顯色、根據酶活性開始顯色的化合物。另外，顯色時需要有顯色液存在。作為這樣的顯色酶基質，無特殊限定，可以直接使用公知的顯色物質，或者使用以酶基質與顯色物質相合成形成的合成酶基質。作為顯色物質，可以例舉如對硝基苯酚、鄰硝基苯酚、對硝基苯胺、β -萘胺或他們的衍生物。
作為與顯色物質相結合的酶基質，可以例舉如L-亮氨酸、L-丙氨酸等。這些酶基質與顯色物質相結合時，可以使用公知的技術，例如通過共價鍵(如肽鍵、酯鍵、糖甙鍵等)結合。另外，也可以使用市售的合成酶基質。在這些顯色酶基質中，作為通過革蘭氏陰性菌特有的酶(丙氨酸氨基肽酶)活性進行顯色的顯色酶基質，可以使用如L-丙氨酸β -萘酰胺、L-丙氨酸對硝基苯胺、L-丙氨酸-2-酰胺基吖啶酮、L-丙氨酸4-三氟甲基-7香豆素酰胺醋酸鹽、DL-丙氨酸-β -萘酰胺鹽酸鹽。作為通過溶血性鏈球菌特有的酶(亮氨酸氨基肽酶)活性進行顯色的顯色酶基質，可以使用如L-亮氨酸β -萘酰胺、L-亮氨酸對硝基苯胺、L-亮氨酸-2-酰胺基吖啶酮、 L-亮氨酸-7-酰胺基-4-甲基香豆素鹽酸鹽、L-亮氨酸-β -萘酰胺鹽酸鹽。作為通過革蘭氏陽性菌特有的酶(磷酸酶)活性進行顯色的顯色酶基質，可以使用如4-甲基傘形酮磷酸酯、4-三氟甲基傘形酮磷酸酯、7-(3-苯基香豆素)磷酸酯、 5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸酯、4-硝基苯-磷酸酯、1-萘基磷酸酯、對硝基苯基磷酸酯、 吡啶基-2-甲氧基-4-(2-硝基乙烯基)-苯基磷酸酯。這些顯色酶基質，既可以單獨使用一種也可以兩種以上合并使用。在這些顯色酶基質中，從放置于陰暗處(5°C左右)1年也難以發生顯色的角度來看，尤其優選L-亮氨酸 β -萘酰胺鹽酸鹽和/或DL-丙氨酸-β -萘酰胺鹽酸鹽。作為使顯色酶基質顯色的顯色液，可以舉例如對二甲氨基肉桂醛、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙、1-萘酚-2-磺酸鹽等。在本發明的檢測器中，可以使吸水性載體事先含有上述顯色酶基質或顯色液。作為使吸水性載體含有上述顯色酶基質或顯色液的方法，可以例舉如將這些物質在適當的溶劑中溶解，使吸水性載體含有該溶液的方法。此時，使用對顯色酶基質及顯色液的性能不造成影響的溶劑。具體可以使用N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙醇、甲醇、丙酮、二乙醚、丁醇、磷酸緩沖液、三馬來酸鹽緩沖液、純凈水等。另外，如果吸水性載體同時含有顯色酶基質和顯色液兩者，易造成保存穩定性下降，顯色酶基質有時會發生顯色。另外，可以在檢測器的檢測主體上層疊能夠剝離的保護膜(但是，當在檢測主體的一個面上層疊有透明基材或粘結層等時，在檢測主體的另一面上層疊保護膜)。如果層疊有保護膜，可以防止污染物等附著在檢測主體上。在檢測時，可以剝離保護膜進行使用。另外，如果使保護膜具有剝離、粘附功能，則在檢測中或檢測后，可以保護好檢測主體，尤其可以預防污染物等附著于吸水性載體上。本發明的檢測器并不限定于上述形式。例如如圖4所示，也可以插入吸水性載體 12，使其與板體11相鄰接。本發明的檢測器可以通過如下述方式制造。例如制作如圖1、2所示的檢測器1時，將板體11制成所期望的形狀，向板體11的兩面涂布涂料進行著色使其呈現規定色調。接著，在板體11的大致中央位置實施穿孔處理，設置貫通孔。另外，準備一個相當于板體11上設置的貫通孔大小的吸水性載體12，將吸水性載體12嵌入板體11的貫通孔中使其固定，制作成檢測主體10。
接著，在檢測主體10的一個面上，通過粘結層層疊透明基材20，所述粘結層由上述透明粘結劑構成，從而制得檢測器1。另外，作為透明基材20的材料，可以使用上述熱固性樹脂或光固性寡聚物，將這些樹脂涂布于檢測主體10的一個面上，通過加熱或光照使樹脂固化形成透明基材20。制作如圖3所示的檢測器1時，首先，以上述相同的方法制作檢測主體10。接著，在檢測主體10的一個面上涂布粘結劑，形成粘結層30，在該粘結層30上層疊剝離紙40，得到檢測器1。另外，也可以另行準備一張在剝離紙上涂布粘結劑形成粘結層的板體，將其與檢測主體10貼合，使粘結層位于內側，形成檢測器1。并且，也可以使用市售雙面膠帶粘貼于檢測主體10的一個面上。但是，此時在雙面膠帶的單面上貼附有剝離紙。制作如圖4所示的檢測器1時，將板體11制成所期望的形狀，向板體11的兩面涂布涂料進行著色使其呈現規定色調。接著，通過粘結劑等粘貼吸水性載體12使其與板體11相鄰接，從而制作成檢測主體10。接著，與上述方法相同，在檢測主體10的一個面上，層疊透明基材20，制得檢測器 1。另外，使吸水性載體包含顯色酶基質或顯色液時，將顯色酶基質或顯色液溶解于適當的溶劑中形成濃度為0. 01 10質量％的溶液，將吸水性載體浸漬于上述溶液中，使吸水性載體含有該溶液。接著通過自然干燥、送風干燥、減壓真空干燥、冷凍干燥等進行干燥。對吸水性載體所含溶液的量無特殊限定，但是例如使用濃度為0. 01 10質量％ 的溶液時，每Ig吸水性載體浸入0. 5 3. Og溶液則浸漬充分。如上所述的本發明的檢測器，具有由吸水性載體和染色的板體構成的檢測主體。 該板體上染有的顏色為顯色酶基質顯現的顏色，所述顯色酶基質根據口腔內細菌所特有的酶活性顯色。顯色程度表示口腔內細菌的數量，因此檢測時無需另行準備比色卡進行對比， 并且不受檢測者的主觀影響，可以簡單判斷口腔內細菌的數量。例如，使用染成品紅濃度為 0. 35 0. 43顏色的板體，可以瞬間判斷口腔內細菌的數量是否在肺炎發生率較大的基準值以上。下面，說明本發明的檢測口腔內細菌的檢測方法(以下，簡稱為“檢測方法”)。本發明的檢測方法是一種使用上述本發明的檢測器判定口腔內細菌數量的方法。 具體地，將待測試樣、顯色酶基質及顯色液滴入檢測器的吸水性載體上(但不含有顯色酶基質或顯色液)，使顯色酶基質顯色，與板體的顏色相比較判斷口腔內細菌的數量。作為待測試樣，只要是可能含有作為檢測對象的細菌的試樣即可，無特殊限定，但可以例舉如來源于口腔內的生物試樣(唾液、齒垢等)、或口腔內的擦拭液(咽、牙齒、牙縫、 牙齦、舌上、舌下或擦拭這些地方的混合擦拭液、擦拭口腔內整體的擦拭液等)等。待測試樣可以采用例如用消毒棉簽等用力擦拭口腔內部整體4 5圈左右取得的待測試樣。可以將取得的待測試樣以直接涂布的方式滴入檢測器的吸水性載體中。另外， 也可以將取得待測試樣的消毒棉簽等浸入例如0. 5mL滅菌磷酸緩沖液或滅菌生理鹽水中， 洗出口腔內的擦拭物，以吸管等吸取0. 02 0. 2mL該液體滴入吸水性載體中。另外，也可以通過直接舔舐吸水性載體的方式取得待測試樣。例如使用如圖4所示的檢測器1時，吸水性載體12未被板體11包圍，因此易進入口腔內，容易舔舐吸水性載體12。以上述適當的溶劑將顯色酶基質稀釋到濃度為0. 01 10質量％左右進行使用。 將顯色酶基質的稀釋液滴入吸水性載體的滴入量優選20 200 μ L0滴入顯色酶基質的時機既可以是滴加待測試樣之前，也可以是滴加待測試樣之后。但是，當直接舔舐吸水性載體取得待測試樣時，在采取試樣后滴入顯色酶基質。將待測試樣及顯色酶基質滴入吸水性載體后，優選放置5 30分鐘使其進行酶反應。此時，如果將其放置于溫度保持在30 40°C的保溫庫中，更有利于酶反應的進行。另外，使用如圖3所示的檢測器1時，也可以剝離剝離紙40使其露出粘結層30，將檢測器1粘貼于腕、手、胸、腋下、足等身體的某一部位，通過體溫進行溫熱。通常以上述適當的溶劑將顯色液稀釋到濃度為0. 01 10質量％左右進行使用。 將顯色液的稀釋液滴入吸水性載體的滴入量優選20 100 μ L0對滴入顯色液的時機無特殊限定，可以在滴入待測試樣及顯色酶基質之前滴入， 也可以在滴入待測試樣及顯色酶基質之后滴入。另外，也可以在滴入待測試樣和顯色酶基質之間滴入。但當滴入待測試樣及顯色酶基質之后滴入顯色液時，優選滴入待測試樣及顯色酶基質后放置5 30分鐘使其進行酶反應后，滴入顯色液。一旦滴入顯色液，顯色酶基質因待測試樣中的口腔內細菌所特有的酶活性發生顯色，因此可以將顯色程度與板體的顏色進行比較，來判斷口腔內細菌的數量。另外，若顯色液揮發可能會導致顯色酶基質的顯色變弱，因此最好在顯色后2 10分鐘內進行判定。尤其是使用如圖1、2所示的檢測器1時，能夠從透明基材20 —側以目視確認均一的顯色狀態，因此即使待測試樣中含有食物殘渣也能容易地進行判定。另外，使用具有染色成品紅濃度為0.35 0.43顏色的板體的檢測器進行檢測時， 能夠瞬間判定口腔內細菌的數量是否在肺炎發生率較高的基準值以上。即，顯色酶基質的顯色程度與板體顏色相比較淡時，可以判定待測試樣的口腔內細菌的數量不足1XIO6個/ mL ；當顯色程度與板體顏色相同或較濃時，可以判定口腔內細菌的數量為IX IO6個/mL以上。本發明的檢測方法并不限定于上述方式，例如使用吸水性載體含有顯色酶基質或顯色液的檢測器時，可以通過下述方法進行檢測。S卩，向檢測器的吸水性載體中滴入待測試樣，以及顯色酶基質與顯色液兩者中不被所述吸水性載體所含有的一個，使顯色酶基質顯色，與板體顏色相比較判定口腔內細菌的數量。具體地，當吸水性載體中含有顯色酶基質時，首先，將以消毒棉簽等取得的待測試樣直接涂布于吸水性載體上，或將取得了待測試樣的消毒棉簽等浸入滅菌磷酸緩沖液或滅菌生理鹽水中，洗出口腔內的擦拭物，將該液體滴入吸水性載體中；使待測試樣與顯色酶基質接觸，放置5 30分鐘促進酶反應。此時優選將其放置于溫度保持在30 40°C的保溫庫中。接著，向吸水性載體中滴入稀釋到濃度為0. 01 10質量％左右的顯色液，使顯色酶基質顯色，將顯色的程度與板體的顏色相比較來判斷口腔內細菌的數量。另外，也可以在滴入待測試樣前將顯色液滴入吸水性載體中。另一方面，當吸水性載體含有顯色液時，首先，與上述方法相同將待測試樣直接涂布于吸水性載體上，或將洗出口腔內擦拭物的液體滴入吸水性載體中。接著，將稀釋到濃度為0.01 10質量％左右的顯色酶基質滴入吸水性載體中，使待測試樣與顯色酶基質相接觸，放置5 30分鐘促進酶反應。隨著酶反應的進行顯色酶基質發生顯色，因此當顯色程度不再發生變化時與板體顏色進行比較判定口腔內細菌的數量。另外，也可以在滴入待測試樣前將顯色酶基質滴入吸水性載體中。如上所述的本發明的檢測方法，使用上述本發明的檢測器，因此不需要與比色卡等進行對比，并且不受測定者的主觀影響，能簡單地判斷口腔內細菌的數量。例如，使用具有染成品紅濃度為0. 35 0. 43顏色的板體的檢測器進行檢測時，能夠瞬間判斷口腔內細菌的數量是否在肺炎發生率較高的基準值以上。附圖標記說明1 檢測口腔內細菌的檢測器；10 檢測主體；11 板體；12 吸水性載體；20 透明基材；30 粘結層；40 剝離紙。
權利要求
1.一種檢測口腔內細菌的檢測器，其具有檢測主體，所述檢測主體由板體及插入到該板體內的吸水性載體構成；所述吸水性載體儲存因口腔內細菌特有的酶活性而顯色的顯色酶基質以及口腔內細菌特有的酶；所述板體染有規定顏色，所述規定顏色為所述顯色酶基質根據口腔內細菌數量所顯現的顏色。
2.如權利要求1所述的檢測口腔內細菌的檢測器，其特征在于，在所述檢測主體的一個面上層疊有透明基材。
3.如權利要求1所述的檢測口腔內細菌的檢測器，其特征在于，在所述檢測主體的一個面上依次層疊有粘結層和剝離紙。
4.如權利要求1 3任一項所述的檢測口腔內細菌的檢測器，其特征在于，所述顯色酶基質為L-亮氨酸-β -萘酰胺鹽酸鹽和/或DL-丙氨酸-β -萘酰胺鹽酸鹽。
5.如權利要求1 4任一項所述的檢測口腔內細菌的檢測器，其特征在于，所述板體染成以麥克佩斯濃度計測定的品紅濃度為0. 35 0. 43的顏色。
6.如權利要求1 5任一項所述的檢測口腔內細菌的檢測器，其特征在于，所述吸水性載體含有所述顯色酶基質或使該顯色酶基質顯色的顯色液。
7.一種口腔內細菌的檢測方法，其特征在于，將待測試樣、顯色酶基質及使該顯色酶基質顯色的顯色液滴至如權利要求1 5任一項所述的檢測口腔內細菌的檢測器的吸水性載體上，使顯色酶基質顯色，與板體顏色相比較，測定口腔內細菌的數量。
8.一種口腔內細菌的檢測方法，其特征在于，將待測試樣，以及顯色酶基質與使該顯色酶基質顯色的顯色液兩者中不被所述吸水性載體所含有的一個滴至權利要求6所述的檢測口腔內細菌的檢測器的吸水性載體上，使顯色酶基質顯色，與板體顏色相比較，測定口腔內細菌的數量。
全文摘要
本發明涉及一種檢測口腔內細菌的檢測器(1)，其具有檢測主體(10)，所述檢測主體(10)由板體(11)及插入到該板體(11)內的吸水性載體(12)構成；所述吸水性載體(12)儲存因口腔內細菌特有的酶活性而顯色的顯色酶基質以及口腔內細菌所特有的酶；所述板體(11)染有規定顏色，所述規定顏色為所述顯色酶基質根據口腔內細菌數量顯現的顏色。本發明還涉及口腔內細菌的檢測方法，其通過使用檢測口腔內細菌的檢測器(1)，測定口腔內細菌的數量。
文檔編號C12M1/34GK102300979SQ201080006166
公開日2011年12月28日 申請日期2010年2月1日 優先權日2009年2月2日
發明者椛澤啟吾, 黑田英行 申請人:藤倉化成株式會社