專利名稱：生產(chǎn)二十碳五烯酸的微生物、脂肪酸組成物及其制作方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明有關(guān)于分離的微生物以及其菌株與突變株、生物質(zhì)、微生物油、組成物及培養(yǎng)物；生產(chǎn)微生物油、生物質(zhì)及突變株的方法；及使用分離的微生物、生物質(zhì)及微生物油的方法。
背景技術(shù)：
脂肪酸的分類是基于碳鏈的長(zhǎng)度與飽和度特性。脂肪酸是基于鏈中所存在的碳數(shù)而稱作短鏈、中鏈或長(zhǎng)鏈脂肪酸，當(dāng)碳原子之間并無雙鍵存在時(shí)稱作飽和脂肪酸，當(dāng)雙鍵存在時(shí)稱作不飽和脂肪酸。當(dāng)僅存在一個(gè)雙鍵時(shí)，不飽和的長(zhǎng)鏈脂肪酸為單元不飽和；當(dāng)存在一個(gè)以上的雙鍵時(shí)，則為多元不飽和。 多元不飽和脂肪酸(PUFA)的分類是基于自脂肪酸甲基端開始的第一個(gè)雙鍵的位置ω-3(η_3)脂肪酸在第三個(gè)碳具有第一個(gè)雙鍵，而ω_6(η_6)脂肪酸則在第六個(gè)碳具有第一個(gè)雙鍵。例如，二十二碳六烯酸(“DHA”)是一種鏈長(zhǎng)為22個(gè)碳及具有6個(gè)雙鍵的ω-3長(zhǎng)鏈多元不飽和脂肪酸(LC-PUFA)，通常命名為“22:6η-3。其它ω-3 LC-PUFA包括經(jīng)命名為“20:5 η-3的二十碳五烯酸(“ΕΡΑ”)，及經(jīng)命名為“22:5 η_3的ω-3 二十二碳五烯酸("DPA n-3)。DHA及EPA已被稱作“必需”脂肪酸。ω-6 LC-PUFA包括經(jīng)命名為“20:4 η_6的二十碳四烯酸(“ARA”)及經(jīng)命名為“22:5 η-6的ω-6 二十二碳五烯酸(“DPAn_6)。ω-3脂肪酸是生物學(xué)上的重要分子，其等因位于細(xì)胞膜中而影響細(xì)胞生理、調(diào)節(jié)生物活性化合物的生產(chǎn)與基因表現(xiàn)及作為生物合成受質(zhì)。Roche，H. Μ.于期刊“Pioc. Nutr.Soc. ”第58期第397-401頁乙文(1999年)。例如，DHA構(gòu)成人類大腦皮層中的約15%至20%的脂質(zhì)，構(gòu)成視網(wǎng)膜中的30%至60%的脂質(zhì)，以高濃度存在于睪丸與精子中，及為母乳中的一重要組分。Berg6, J. P.與Barnathan,G.于期刊“Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. ”第96期第49-125頁乙文(2005年)。DHA構(gòu)成腦中的高達(dá)97%的ω-3脂肪酸，及視網(wǎng)膜中的高達(dá)93%的ω-3脂肪酸。此外，DHA是胎兒與嬰兒發(fā)育以及成人認(rèn)知功能的維護(hù)所必需。同上。因?yàn)樵谌梭w中無法重新合成ω-3脂肪酸，而必需自營(yíng)養(yǎng)來源獲得所述脂肪酸。亞麻仁油與魚油被認(rèn)為是良好的ω-3脂肪酸膳食來源。亞麻仁油不含有ΕΡΑ、DHA, DPA或ARA，但卻含有十八碳三烯酸(C18:3 n_3)，其是使身體能夠制造EPA的一種結(jié)構(gòu)單元。然而有證據(jù)顯示代謝轉(zhuǎn)換作用的速率可能緩慢與不定，特別在健康不佳的個(gè)體中。魚油則依特定的物種與其等的飲食，而在脂肪酸組成的類型與水平方面有顯著的差異。例如，相較于野生魚類，水產(chǎn)養(yǎng)殖所飼養(yǎng)的魚的ω-3脂肪酸水平較低。而且，魚油具有含環(huán)境污染物的風(fēng)險(xiǎn)，及可能伴隨著安定性問題與魚的腥臭或味道。破囊壺菌是破囊壺菌目(Thraustochytriales)的微生物。破囊壺菌包括裂殖壺菌屬(Schizochytrium)與破囊壺菌屬(Thraustochytrium)的成員，及經(jīng)確認(rèn)包括DHA與EPA在內(nèi)的ω-3脂肪酸的一種替代來源。見第5，130,242號(hào)美國(guó)專利。相較于對(duì)應(yīng)的魚油或微型藻油，自所述海生異營(yíng)性微生物所生產(chǎn)的油通常具有較單純的多元不飽和脂肪酸廊型。Lewis,Τ. E.于期刊“Mar. Biotechnol. ”第 I 期第 580-587 頁乙文(1999 年)。已報(bào)導(dǎo)破囊壺菌物種的菌株所生產(chǎn)的ω-3脂肪酸，在該生物體所生產(chǎn)的總脂肪酸中占了高百分比。第5，130，242號(hào)美國(guó)專利；Huang7J.等人于期刊“J. Am. Oil. Chem. Soc. ”第78期第605-610 頁乙文(2001 年)；Huang, J.等人于期刊“Mar. Biotechnol. ”第 5 期第 450-457 頁乙文(2003年)。然而，分離出的破囊壺菌在其身分與所生產(chǎn)的LC-PUFA量方面有所不同，藉此一些先前所述的菌株在培養(yǎng)中所具有的ω-6脂肪酸水平可能不佳及/或可能展現(xiàn)低的生產(chǎn)力。有鑒于此，對(duì)于展現(xiàn)高生產(chǎn)力與適合需要的LC-PUFA廓型的微生物分離作用的需求，仍持續(xù)存在。
發(fā)明概要本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的一種分離的微生物。本發(fā)明有關(guān)于具有在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的特性的一種分離的微生物。本發(fā)明有關(guān)于一種分離的微生物，其所包含的一種18s rRNA含有SEQ ID NO :1的一種多核苷酸序列或與SEQ ID NO 1的相同度至少94%的一種多核苷酸序列。本發(fā)明有關(guān)于一種分離的微生物，其包含的一種18s rRNA多核苷酸序列與在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏微生物的一種18s rRNA多核苷酸序列的相同度至少94%。本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的一種分離的微生物，其中該微生物所生產(chǎn)的總脂肪酸包含超過約10重量％的二十碳五烯酸。本發(fā)明有關(guān)于具有在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的特性的一種分離的微生物，其中該微生物所生產(chǎn)的總脂肪酸包含超過約10重量％的二十碳五烯酸。
中的二十碳五烯酸含量至少約12重量％。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的分離的微生物是一種突變型菌株。本發(fā)明有關(guān)于在ATCC 登錄號(hào) ΡΤΑ-10212、ΡΤΑ-10213、ΡΤΑ-10214、ΡΤΑ-10215、ΡΤΑ-10208、ΡΤΑ-10209、ΡΤΑ-10210 或 ΡΤΑ-10211 所保藏的一種分離的微生物。本發(fā)明有關(guān)于包含本發(fā)明的任一微生物或其混合物的一種生物質(zhì)。本發(fā)明有關(guān)于一種分離的生物質(zhì)，其中該生物質(zhì)的細(xì)胞干重中的至少約20重量％為脂肪酸，其中超過約10重量％的脂肪酸為二十碳五烯酸，及其中該脂肪酸包含各低于約5重量％的二十碳四烯酸與二十二碳五烯酸η-6。在一些實(shí)施例中，至少約25重量％的脂肪酸為二十二碳六烯酸。在一些實(shí)施例中,本發(fā)明有關(guān)于包含甘油三酯(triacylglycerol)的一種分離的生物質(zhì)，其中至少約12重量％的甘油三酯為二十碳五烯酸。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于本發(fā)明的任一分離的生物質(zhì)，其中該脂肪酸進(jìn)一步包含各低于約5重量％的油酸、亞麻油酸、十八碳三烯酸、二十烯酸及芥子酸。 本發(fā)明有關(guān)于包含本發(fā)明的任一微生物或其混合物的一種分離的培養(yǎng)物。本發(fā)明有關(guān)于供非人類動(dòng)物或人類用的一種食用產(chǎn)品、化妝品或藥學(xué)組成物，其包含本發(fā)明的任一微生物或生物質(zhì)或其混合物。本發(fā)明有關(guān)于一種微生物油，其包含至少約20重量％的二十碳五烯酸與各低于約5重量％的二十碳四烯酸、二十二碳五烯酸η-6、油酸、亞麻油酸、十八碳三烯酸、二十烯酸、芥子酸及十八碳四烯酸。在一些實(shí)施例中，該微生物油進(jìn)一步包含至少約25重量％的二十二碳六烯酸。本發(fā)明有關(guān)于包含至少約10重量％的甘油三酯部分的一種微生物油，其中該甘油三酯部分中的至少約12重量％的脂肪酸為二十碳五烯酸，其中該甘油三酯部分中的至少約25重量％的脂肪酸為二十二碳六烯酸，及其中該甘油三酯部分中的低于約5重量％的脂肪酸為二十碳四烯酸。本發(fā)明有關(guān)于供非人類動(dòng)物或人類用的一種食用產(chǎn)品、化妝品或藥學(xué)組成物，其包含本發(fā)明的任一微生物油。在一些實(shí)施例中，該食用產(chǎn)品是一種嬰兒奶粉。在一些實(shí)施例中，該嬰兒奶粉是適合早產(chǎn)嬰兒使用。在一些實(shí)施例中，該食用產(chǎn)品是一種乳、一種飲料、一種治療用飲品、一種營(yíng)養(yǎng)飲品或其組合物。在一些實(shí)施例中，該食用產(chǎn)品是用于非人類動(dòng)物或人類食品中的一種添加劑。在一些實(shí)施例中，該食用產(chǎn)品是一種營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑。在一些實(shí)施例中，該食用產(chǎn)品是一種動(dòng)物飼料。在一些實(shí)施例中，該動(dòng)物飼料是一種水產(chǎn)養(yǎng)殖用飼料。在一些實(shí)施例中，該動(dòng)物飼料是一種家畜飼料、一種動(dòng)物園動(dòng)物飼料、一種役畜飼料、一 種牲畜飼料或其組合物。本發(fā)明有關(guān)于用于生產(chǎn)含有ω-3脂肪酸的一種微生物油的一種方法,該方法包括在一培養(yǎng)中培育本發(fā)明的任一分離的微生物或其混合物，以生產(chǎn)一種含有ω-3脂肪酸的油。在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括萃取該油。本發(fā)明有關(guān)于用于生產(chǎn)含有ω-3脂肪酸的一種微生物油的一種方法,該方法包含自本發(fā)明的任一生物質(zhì)萃取一種含有ω-3脂肪酸的油。在一些實(shí)施例中，該微生物油使用一種有機(jī)溶劑萃取制程萃取，例如己烷萃取作用。在一些實(shí)施例中，該微生物油使用一種無溶劑萃取制程萃取。本發(fā)明有關(guān)于藉由本發(fā)明的一種方法所生產(chǎn)的一種微生物油。本發(fā)明有關(guān)于用于生產(chǎn)本發(fā)明的一種生物質(zhì)的一種方法，其包括在一培養(yǎng)中培育本發(fā)明的任一分離的微生物或其混合物，以生產(chǎn)一種生物質(zhì)。本發(fā)明有關(guān)于用于生產(chǎn)本發(fā)明的一種突變型菌株的一種方法，其包括誘發(fā)本發(fā)明的任一微生物的突變，及分離的該突變型菌株。 本發(fā)明有關(guān)于本發(fā)明的任一分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物在制造用于治療發(fā)炎或相關(guān)病況的一藥劑的用途。本發(fā)明有關(guān)于本發(fā)明的任一分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物用于治療發(fā)炎或相關(guān)病況的用途。本發(fā)明有關(guān)于用于治療發(fā)炎或相關(guān)病況的本發(fā)明的任一分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物。本發(fā)明有關(guān)于在需要的一個(gè)體中用于治療發(fā)炎或一相關(guān)病況的一種方法，其包括對(duì)于該個(gè)體投予本發(fā)明的任一分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物及一種藥學(xué)上可接受的載劑。較佳實(shí)施例的詳細(xì)說明本發(fā)明有關(guān)于分離的微生物以及其菌株與突變株，以及其生物質(zhì)、微生物油、組成物及培養(yǎng)物。本發(fā)明有關(guān)于生產(chǎn)來自本發(fā)明的微生物的微生物油、生物質(zhì)及突變株的方法，及使用該生物、生物質(zhì)及微生物油的方法。所述的微生物是非常高產(chǎn)的及產(chǎn)生獨(dú)特的脂肪酸廓型，其特征部分在于高水平的ω-3脂肪酸，特別是高水平的ΕΡΑ。微生物本發(fā)明有關(guān)于分離的微生物及自其所衍生的菌株。自本發(fā)明的一種分離的微生物所“衍生”的一菌株，可為一種天然或人工衍生物諸如例如一突變株、變異株或重組菌株。如在此所用的“分離的”一詞并不一定反映一分離物經(jīng)純化的程度，而是指自天然形式或天然環(huán)境的分離作用或隔離作用。一分離物可包括但不限于一種分離的微生物、一種分離的生物質(zhì)、一種分離的培養(yǎng)物、一種分離的微生物油及一種分離的序列(諸如在此所揭露的一種分離出的多核苷酸序列)。如在此所用的“微生物”一詞，包括但不限于“微型藻”、“破囊壺菌”等詞及與所述的任一保藏微生物相關(guān)聯(lián)的分類學(xué)分類。本發(fā)明所及的任一微生物及包括所述的保藏微生物所用的“破囊壺菌目(Thraustochytriales)'"破囊壺菌”、“裂殖壺菌屬(Schizochytrium) ”及“破囊壺菌屬(Thraustochytrium) ”等詞，以目前的分類學(xué)分類及包括可取得的系譜信息為基礎(chǔ)，及無意受限于分類學(xué)分類在本申請(qǐng)案申請(qǐng)日之后修訂的情事。·
在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的一種分離的微生物。與ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212相關(guān)聯(lián)的分離的微生物，在此稱作破囊壺菌屬物種(Thraustochytrium sp.)ATCCPTA-10212。與 ATCC 登錄號(hào) PTA-10212 相關(guān)聯(lián)的分離的微生物，依據(jù)布達(dá)佩斯條約(Budapest Treaty)于2009年7月14日保藏于美國(guó)維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道10801號(hào)的美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanType Culture Collection)的專利保藏庫(Patent Depository)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏的一種分離的菌株。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于具有在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的特性的一種分離的微生物或自其所衍生的一菌株。在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的特性可包括其生長(zhǎng)與表現(xiàn)型性質(zhì)(表現(xiàn)型性質(zhì)的實(shí)例包括形態(tài)學(xué)與繁殖性質(zhì))、其物理與化學(xué)性質(zhì)(諸如干重與脂質(zhì)廓型)、其基因序列及其組合，其中所述特性可區(qū)別該物種與先前鑒定的物種。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于具有在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的特性的一種分離的微生物，其中該特性包括一種含有SEQ ID NO: I的一多核苷酸序列或與SEQ ID NO :1的相同度至少94%、95%、96%、97%、98%或99%的一種多核苷酸序列的18s rRNA、在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的形態(tài)學(xué)與繁殖性質(zhì)及在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏物種的脂肪酸廓型。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的分離的微生物具有與在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏微生物實(shí)質(zhì)上相同的表現(xiàn)型性質(zhì)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的分離的微生物具有與在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏微生物實(shí)質(zhì)上相同的生長(zhǎng)性質(zhì)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于一種分離的微生物，其所包含的一種18s rRNA含有SEQ IDNO :I的一多核苷酸序列或與SEQ ID NO :1的相同度至少94%、95%、96%、97%、98%或99%的一種多核苷酸序列。在一些實(shí)施例中,本發(fā)明有關(guān)于一種分離的微生物,其所包含的一種18s rRNA多核苷酸序列與在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏微生物的18s rRNA多核苷酸序列的相同度至少94%。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏微生物的一種突變型菌株。在其它實(shí)施例中，該突變型菌株系在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10213、ΡΤΑ-10214或ΡΤΑ-10215所保藏的一菌株。與ATCC登錄號(hào)PTA_10213、PTA_10214及PTA-10215相關(guān)聯(lián)的微生物，依據(jù)布達(dá)佩斯條約(Budapest Treaty)于2009年7月14日保藏于美國(guó)維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道10801號(hào)的美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanType Culture Collection)的專利保藏庫(Patent Depository)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的一種分離的微生物。與ATCC登錄號(hào)PTA-10208相關(guān)聯(lián)的分離的微生物在此稱作裂殖壺菌屬(Schizochytrium sp) ATCCPTA-10208。與 ATCC 登錄號(hào) PTA-10208 相關(guān)聯(lián)的微生物，依據(jù)布達(dá)佩斯條約(Budapest Treaty)于2009年7月14日保藏于美國(guó)維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道10801號(hào)的美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American TypeCulture Collection)的專利保藏庫(Patent Depository)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏的一種分離的菌株。 在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的一種分離的微生物，其中該微生物所生產(chǎn)的總脂肪酸包含超過約10重量％、超過約11重量％、超過約12重量％、超過約13重量％、超過約14重量％、超過約15重量％、超過約16重量％、超過約17重量％、超過約18重量％、超過約19重量％或超過約20重量％的EPA。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的一種分離的微生物，其中該微生物所生產(chǎn)的總脂肪酸包含約10重量％至約55重量％、約10重量％至約50重量％、約10重量％至約45重量％、約10重量％至約40重量％、約10重量％至約35重量％、約10重量％至約30重量％、約15重量％至約55重量％、約15重量％至約50重量％、約15重量％至約45重量％、約15重量％至約40重量％、約15重量％至約35重量％、約15重量％至約30重量％、約20重量％至約55重量％、約20重量％至約50重量％、約20重量％至約45重量％、約20重量％至約40重量％、約20重量％至約35重量％或約20重量％至約30重量％的EPA。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于具有在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的特性的一種分離的微生物，其中該微生物所生產(chǎn)的總脂肪酸包含超過約10重量％的二十碳五烯酸。在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏微生物的特性包括其生長(zhǎng)與表現(xiàn)型性質(zhì)(表現(xiàn)型性質(zhì)的實(shí)例包括形態(tài)學(xué)與繁殖性質(zhì))、其物理與化學(xué)性質(zhì)(諸如干重與脂質(zhì)廓型)、其基因序列及其組合，其中所述特性可區(qū)別該物種與先前鑒定的物種。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于具有在ATCC登錄號(hào)PTA-10212所保藏物種的特性的一種分離的微生物，其中該特性包括一種含有SEQ ID NO :2的多核苷酸序列的18s rRNA、在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的形態(tài)學(xué)與繁殖性質(zhì)及在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的脂肪酸廓型。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的分離的微生物所具有的物理與化學(xué)性質(zhì)，與在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏的微生物實(shí)質(zhì)上相同。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏微生物的一種突變型菌株。在其它實(shí)施例中，該突變型菌株在ATCC登錄號(hào)PTA-10209、PTA-10210或PTA-10211 所保藏的一菌株。與 ATCC 登錄號(hào) PTA-10209、PTA-10210 及 PTA-10211 相關(guān)聯(lián)的微生物，依據(jù)布達(dá)佩斯條約(Budapest Treaty)在2009年9月25日保藏于于美國(guó)維吉尼亞州20110-2209馬納沙斯(Manassas)大學(xué)大道10801號(hào)的美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)的專利保藏庫(Patent Depository)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于本發(fā)明的生產(chǎn)一個(gè)甘油三酯部分的一種分離的微生物，其中該甘油三酯部分的EPA含量是至少約12重量％、至少約13重量％、至少約14重量％、至少約15重量％、至少約16重量％、至少約17重量％、至少約18重量％、至少約19重量％或至少約20重量％。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于生產(chǎn)一個(gè)甘油三酯部分的一種分離的微生物，其中該甘油三酯部分的EPA含量是約12重量％至約55重量％、約12重量％至約50重量％、約12重量％至約45重量％、約12重量％至約40重量％、約12重量％至約35重量％、約12重量％至約30重量％、約15重量％至約4重量5%、約15重量％至約40重量％、約15重量％至約35重量％、約15重量％至約30重量％或約20重量％至約30重量％。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于本發(fā)明的生產(chǎn)一個(gè)甘油三酯部分的一種分離的微生物的一突變株、變異株或重組體，其中該甘油三酯部分的EPA含量是至少約10重量％、至少約11重量％、至少約12重量％、至少約13重量％、至少約14重量％、至少約15重量％、至少約16重量％、至少約17重量％、至少約18重量％、至少約19重量％或至少約20重量％。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明有關(guān)于本發(fā)明的生產(chǎn)一個(gè)甘油三酯部分的一種分離的微生物的一突變株、變異株或重組體，其中該甘油三酯部分的EPA含量是約12重量％至約55 重量％、約12重量％至約50重量％、約12重量％至約45重量％、約12重量％至約40重量％、約12重量％至約35重量％、約12重量％至約30重量％、約15重量％至約55重量％、約15重量％至約50重量％、約15重量％至約45重量％、約15重量％至約40重量％、約
15重量％至約35重量％、約15重量％至約30重量％、約20重量％至約55重量％、約20重量％至約50重量％、約20重量％至約45重量％、約20重量％至約40重量％、約20重量％至約35重量％或約20重量％至約30重量％。可藉由眾所周知的程序產(chǎn)生突變型菌株。常用的程序包括輻射、高溫處理及以誘突變劑處理。變異型菌株可為所述物種的其它天然存在的分離株及/或亞分離株。可藉由分子生物學(xué)中用于表現(xiàn)外源基因或改變內(nèi)源基因的功能或表現(xiàn)的任何眾所周知的方法，產(chǎn)生重組型菌株。在一些實(shí)施例中，該突變株、變異株或重組型菌株所生產(chǎn)的ω-3脂肪酸及尤其EPA的量，高于野生型菌株。在一些實(shí)施例中，該突變株、變異株或重組型菌株生產(chǎn)較低量的一或多種脂肪酸，諸如較低量的DHA、ARA、DPAn-6或其組合。在一些實(shí)施例中，該突變株、變異株或重組型菌株所生產(chǎn)的每升培養(yǎng)液的細(xì)胞干重，高于野生型菌株。所述突變株、變異株或重組型菌株是自本發(fā)明的一種分離的微生物所衍生的菌株實(shí)例。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的一種分離的微生物及包括其突變株、變異株及重組體，包含自該微生物所分離出的一或多個(gè)部分中的脂肪酸廓型。自該微生物所分離出的一或多個(gè)部分包括總脂肪酸部分、固醇酯部分、甘油三酯部分、游離脂肪酸部分、固醇部分、甘油二酯部分、極性部分(包括磷脂部分)及其組合。一特定部分的脂肪酸廓型可包括與在此所揭露的該特定部分相關(guān)聯(lián)的脂肪酸廓型中的任一者。本發(fā)明有關(guān)于產(chǎn)生一突變株的一種方法，其包括誘發(fā)本發(fā)明的任一微生物的突變及分離該突變型菌株。培養(yǎng)與分離生物質(zhì)本發(fā)明有關(guān)于包含本發(fā)明的一或多種分離的微生物的培養(yǎng)。用于接種、生長(zhǎng)及回收微生物叢諸如微型藻與破囊壺菌的各種發(fā)酵作用參數(shù)，是本領(lǐng)域中所知。如見第5，130，242號(hào)美國(guó)專利，其在此并入本案以為參考數(shù)據(jù)。液態(tài)或固態(tài)培養(yǎng)基可含有天然或人造海水。供異營(yíng)性生長(zhǎng)的碳源包括但不限于葡萄糖、果糖、木糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、糖蜜、海藻糖、葡萄糖胺、葡聚糖、脂肪類、油類、甘油、乙酸鈉及甘露糖醇。氮源包括但不限于蛋白胨、酵母提取物、聚蛋白胨、麥芽提取物、肉提取物、酪蛋白胺基酸、玉米浸液、有機(jī)氮源、麩胺酸鈉、尿素、無機(jī)氮源、乙酸銨、硫酸銨、氯化銨及硝酸銨。供在ATCC登錄號(hào)ΡΤΑ-10212所保藏微生物生長(zhǎng)的一種典型的培養(yǎng)基，示于表I中表I :ΡΤΑ-10212容器培養(yǎng)基
權(quán)利要求
1.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10212所保藏物種的分離的微生物。
2.一種具有在ATCC登錄號(hào)PTA-10212所保藏物種的特性的分離的微生物。
3.一種分離的微生物，其所包含的一種18s rRNA含有SEQ ID NO :I的一種多核苷酸序列或與SEQ ID NO : I的相同度至少94%的一種多核苷酸序列。
4.一種分離的微生物，其所包含的一種18s rRNA多核苷酸序列與在ATCC登錄號(hào)PTA-10212所保藏微生物的一種18s rRNA多核苷酸序列的相同度為至少94%。
5.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的分離的微生物，其中該微生物所生產(chǎn)的總脂肪酸包含超過約10重量％的二十碳五烯酸。
6.一種具有在ATCC登錄號(hào)PTA-10208所保藏物種的特性的分離的微生物，其中該微生物所生產(chǎn)的總脂肪酸包含超過約10重量％的二十碳五烯酸。
7.—種生產(chǎn)一個(gè)甘油三酯部分的分離的微生物，其中該甘油三酯部分中的二十碳五烯酸含量為至少約12重量％。
8.如權(quán)利要求I至7任一所述的分離的微生物，其中該微生物是一種突變型菌株。
9.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10212保藏的分離的微生物。
10.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10213保藏的分離的微生物。
11.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10214保藏的分離的微生物。
12.—種在ATCC登錄號(hào)PTA-10215保藏的分離的微生物。
13.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10208保藏的分離的微生物。
14.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10209保藏的分離的微生物。
15.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10210保藏的分離的微生物。
16.一種在ATCC登錄號(hào)PTA-10211保藏的分離的微生物。
17.—種包含如權(quán)利要求I至16任一所述的微生物或其混合物的生物質(zhì)。
18.一種分離的生物質(zhì)，其中該生物質(zhì)的細(xì)胞干重中的至少約20重量％為脂肪酸，其中超過約10重量％的脂肪酸為二十碳五烯酸，及其中該脂肪酸包含各低于約5重量％的二十碳四烯酸與二十二碳五烯酸n-6。
19.如權(quán)利要求18所述的分離的生物質(zhì)，其中至少約25重量％的脂肪酸為二十二碳六烯酸。
20.—種包含甘油三酯的分離的生物質(zhì)，其中至少約12重量％的甘油三酯為二十碳五烯酸。
21.如權(quán)利要求18至20任一所述的分離的生物質(zhì)，其中該脂肪酸包含各低于約5重量％的油酸、亞麻油酸、十八碳三烯酸、二十烯酸及芥子酸。
22.—種包含如權(quán)利要求I至16任一所述的微生物或其混合物的分離的培養(yǎng)物。
23.一種供非人類動(dòng)物或人類用的食用產(chǎn)品、化妝品或藥學(xué)組成物，其包含如權(quán)利要求I至21任一所述的微生物或生物質(zhì)或其混合物。
24.一種微生物油，其包含至少約20重量％的二十碳五烯酸及各低于約5重量％的二十碳四烯酸、二十二碳五烯酸n-6、油酸、亞麻油酸、十八碳三烯酸、二十烯酸、芥子酸及十八碳四烯酸。
25.如權(quán)利要求24所述的微生物油，其進(jìn)一步包含至少約25重量％的二十二碳六烯酸。
26.—種包含至少約10重量％的甘油三酯部分的微生物油，其中該甘油三酯部分中的至少約12重量％的脂肪酸為二十碳五烯酸，其中該甘油三酯部分中的至少約25重量％的脂肪酸為二十二碳六烯酸，及其中該甘油三酯部分中的低于約5重量％的脂肪酸為二十碳四烯酸。
27.一種供非人類動(dòng)物或人類用的食用產(chǎn)品、化妝品或藥學(xué)組成物，其包含如權(quán)利要求24至26任一所述的微生物油。
28.如權(quán)利要求23至27任一所述的食用產(chǎn)品，其中該食用產(chǎn)品是一種嬰兒奶粉。
29.如權(quán)利要求28所述的食用產(chǎn)品，其中該嬰兒奶粉適合早產(chǎn)嬰兒使用。
30.如權(quán)利要求23或27所述的食用產(chǎn)品，其中該食用產(chǎn)品是乳、飲料、治療用飲品、營(yíng)養(yǎng)飲品或其組合物。
31.如權(quán)利要求23或27項(xiàng)所述的食用產(chǎn)品，其中該食用產(chǎn)品是用于非人類動(dòng)物或人類食品中的添加劑。
32.如權(quán)利要求23或27項(xiàng)所述的食用產(chǎn)品，其中該食用產(chǎn)品是營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑。
33.如權(quán)利要求23或27項(xiàng)所述的食用產(chǎn)品，其中該食用產(chǎn)品是動(dòng)物飼料。
34.如權(quán)利要求33項(xiàng)所述的動(dòng)物飼料，其中該動(dòng)物飼料是水產(chǎn)養(yǎng)殖用飼料。
35.如權(quán)利要求33項(xiàng)的動(dòng)物飼料，其中該動(dòng)物飼料是家畜飼料、動(dòng)物園動(dòng)物飼料、役畜飼料、牲畜飼料或其組合物。
36.一種用于生產(chǎn)含有ω-3脂肪酸的微生物油的方法，該方法包括 在培養(yǎng)基中培育如權(quán)利要求I至16任一所述的分離的微生物或其混合物，以生產(chǎn)一種含有ω-3脂肪酸的油。
37.如權(quán)利要求36項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括萃取該油。
38.一種用于生產(chǎn)含有ω-3脂肪酸的微生物油的方法，該方法包括自如權(quán)利要求17至21任一所述的生物質(zhì)萃取一種含有ω-3脂肪酸的油。
39.一種藉由如權(quán)利要求36至38項(xiàng)中任一所述的方法所生產(chǎn)的微生物油。
40.一種用于生產(chǎn)如權(quán)利要求17至21任一所述的生物質(zhì)的方法，其包括 在一培養(yǎng)基中培育如權(quán)利要求I至16項(xiàng)任一所述的分離的微生物或其混合物，以生產(chǎn)一種生物質(zhì)。
41.一種藉由如權(quán)利要求40所述的方法所生產(chǎn)的生物質(zhì)。
42.一種產(chǎn)生如權(quán)利要求8所述的突變型菌株的方法，其包括 誘發(fā)如權(quán)利要求I至16任一所述的微生物突變 '及 分離該突變型菌株。
43.如權(quán)利要求I至21、24至26、39及41中任一所述的分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物在制造用于治療發(fā)炎或相關(guān)病況的藥劑的用途。
44.如權(quán)利要求I至21、24至26、39及41中任一所述的分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物在用于治療發(fā)炎或相關(guān)病況的用途。
45.—種用于治療發(fā)炎或相關(guān)病況的如權(quán)利要求I至21、24至26、39及41中任一所述的分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物。
46.一種在需要的個(gè)體中用于治療發(fā)炎或相關(guān)病況的方法，其包括對(duì)于該個(gè)體投予如權(quán)利要求I至21、24至26、39及41中任一所述的分離的微生物、生物質(zhì)或微生物油或其混合物及一種藥學(xué)上可接受的載劑。
全文摘要
本發(fā)明有關(guān)于分離的微生物以及其菌株與突變株、生物質(zhì)、微生物油、組成物及培養(yǎng)物；生產(chǎn)微生物油、生物質(zhì)及突變株的方法；及使用分離的微生物、生物質(zhì)及微生物油的方法。
文檔編號(hào)C12P19/34GK102884201SQ201080062727
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2010年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月19日
發(fā)明者K·E·阿普特, P·W·伯赫恩斯, J·M·漢森, J·W·普菲弗三世, T·L·斯托爾, R·澤克爾 申請(qǐng)人:帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)有限公司