專利名稱：一種益生菌發酵米乳的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種益生菌發酵米乳的制備方法，具體涉及一種酶法制備大米和糙米混合糖化漿料，然后采用復合益生菌發酵，制備一種發酵米乳，屬生物工程領域。
背景技術：
從農業角度來看，將農產品，特別是大宗的糧食類農產品進行深加工，綜合利用， 提高附加值，是目前擺在政府、農民、企業及研究單位的重要課題。以大宗農產品一谷物作為加工對象，將谷物加工成外觀、口感、營養都達到具有國外同類產品技術指標的液態化食品，將極大提高谷物類食品的消費速度，改善人們的營養攝取結構，提高谷物類原料的附加值，帶動農民谷物種植的積極性，增加農民的收入，較大的提高相關企業的經濟效益，提升我國糧食加工的技術水平。同時，由于糧食的液態化加工存在較高的技術門檻，將在一定程度上使我國的飲料行業從市場競爭型向技術領先型轉化，推動我國的飲料行業的發展，拉近與國外同類企業的技術距離。從健康角度來看，人類健康己成為食品開發的主題，研究食物功能成分、開發功能性食品己成為國際上食品研究矚目的熱點和發展趨勢。谷物加工越精細，營養成分損失越多，糙米的營養價值要高出精米幾倍甚至幾十倍，但其口感相對較差，與當代人們對飲食要求的色、香、味格格不入，從而影響了糙米的消費量，同時對人們的健康產生了很大的威脅， 隨著生活水平的逐漸提高，“三高”人群隊伍逐漸擴大，這與人們日常飲食習慣和膳食結構有直接關系。本發明將大米和糙米經過超微粉碎，盡可能的保留谷物中的營養成分，首先通過酶解制備糖化漿料，再通過益生菌發酵技術，生產一種口感香甜，富含活性益生菌和蛋白肽、氨基酸、可溶性膳食纖維、多種維生素的米乳飲料。該產品的規模化生產對維護人類健康具有積極的推動作用。

發明內容
本發明目的在于提供一種益生菌發酵米乳的制備方法。本發明的目的是這樣實現的本發明中所涉及的百分比除另有注明之外為重量比，本發明的產品采用這樣的方法來制備的1.酶制劑的選擇耐高溫α -淀粉酶，活力單位2萬u/g ；糖化酶，活力單位5萬u/g ；木瓜蛋白酶，活力單位50萬u/g。2.益生菌的選擇及培養基的制備A菌-鼠李糖乳桿菌CICC6162 (Lactobacillus rhamnosus)，培養基為蛋白胨
2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg，蛋白質酶解物No. 3 (Difco) Ig, 5%檸檬酸鐵2ml，人工海水700ml，蒸餾水300ml, pH 7. 5，經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。B 菌-類干酪乳桿菌類干酪亞種 CICC6111 (Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)，培養基為酪蛋白胨10g/L，肉湯提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/ L，吐溫 801g/L，K2HPO4 2g/L，醋酸鈉 5g/L，檸檬酸二銨 2g/L，MgSO4X 7H20 0. 2g/L，MnSO4 xH20 0. 05g/L, pH 6. 2-6. 5，經 121°C滅菌 20 分鐘冷卻至 35°C備用。C 菌-短乳桿菌 CICC20023(Lac tobacillus brevis)培養基為酵母浸膏 7. 5
克，蛋白胨7. 5克，葡萄糖10克，磷酸二氫鉀2克，番茄汁100毫升，吐溫800. 5毫升，水900 毫升，瓊脂1. 5 2. 0%,pH7. 0，經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。3.復合益生菌凍干粉的制備過程3. 1原菌種活化分別量取0. 9%的生理鹽水IOml于3只試管內，經121 °C滅菌20分鐘冷卻至30°C， 將3株益生菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0. 9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。3. 2益生菌擴大培養3.2. 1母發酵劑的制備分別量取3株益生菌培養基各200ml于3只500ml三角瓶內，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養基體積的10%接種3. 1步驟中已經活化的菌種，在30°C厭氧箱內靜止培養24小時，作為母發酵劑。3. 2. 2生產發酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于三只500mL三角瓶內， 每瓶200mL，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發酵劑，30°C厭氧培養30——36小時，檢測3株益生菌發酵液活菌數，各發酵液活菌數> IO9個/ml，視同為發酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續培養，直至達到IO9個/ml。3. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥。3. 4復合益生菌凍干粉的復配按凍干菌粉末重量，取A菌粉末2-4份，B菌粉末3_5份，C菌粉末1_2份，充分混勻后用于發酵酶解后的大米和糙米米乳混合漿料，加菌量為酶解后的大米和糙米米乳混合漿料重量的0.01%。4.益生菌發酵米乳的制備4. 1發酵原料的制備將大米、糙米和飲用水按2 1 7的重量比取料，于膠體磨磨漿后過80目細篩， 制成混合米乳漿料。4. 2 配料按混合米乳漿料重量的5 %添加白砂糖，邊加熱邊攪拌，使白砂糖充分溶解，制成含糖混合米乳漿料。4. 3 液化將配好的含糖混合米乳漿料打入發酵罐，蒸汽加熱料液至90°C，此時按含糖混合米乳漿料重量的0. 加入活力單位2萬u/g的耐高溫α “淀粉酶，保持20分鐘，不斷攪拌，然后冷卻至50°C -55°C。
5
4. 4 糖化按含糖混合米乳漿料重量的0. 15%添加活力單位為5萬u/g糖化酶，再按含糖混合米乳漿料重量的0. 2%添加活力單位為50萬u/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻后，50°C -55°C保持4小時。4. 5 滅酶將經過4. 4步驟處理的料液加熱至100°C，保持15分鐘，然后冷卻至30°C。4. 6復合益生菌發酵按4. 5步驟處理后的料液重量的0. 01 %添加3. 4步驟制備的復合益生菌凍干粉， 攪拌均勻，30°C保溫靜止發酵4小時。4. 7無菌灌裝將4. 6步驟處理的料液攪拌均勻后，進行無菌灌裝，獲得益生菌發酵米乳成品。 具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作更詳細的描述實施例一本發明采用的3株益生菌均采購于中國工業微生物菌種保藏中心，分別為鼠李糖乳桿菌CICC6162，類干酪乳桿菌類干酪亞種CICC6111，短乳桿菌CICC20023，本發明中將上述菌株簡稱為A菌、B菌、C菌。1.酶制劑的選擇耐高溫α -淀粉酶，活力單位2萬u/g ；糖化酶，活力單位5萬u/g ；木瓜蛋白酶，活力單位50萬u/g。2.益生菌的選擇及培養基的制備A菌-鼠李糖乳桿菌CICC6162 (Lactobacillus rhamnosus)，培養基為蛋白胨
2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg，蛋白質酶解物No. 3 (Difco) Ig, 5%檸檬酸鐵2ml，人工海水700ml，蒸餾水300ml, pH 7. 5，經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。B 菌-類干酪乳桿菌類干酪亞種 CICC6111 (Lactobacillus paracasei subsp.
paracasei)，培養基為酪蛋白胨10g/L，肉湯提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/ L，吐溫 80 lg/L，K2HPO4 2g/L，醋酸鈉 5g/L，檸檬酸二銨 2g/L，MgSO4X 7H20 0. 2g/L，MnSO4 xH20 0. 05g/L, pH 6. 2-6. 5，經 121°C滅菌 20 分鐘冷卻至 35°C備用。C 菌-短乳桿菌 CICC20023 (Lactobacillus brevis)培養基為酵母浸膏 7. 5
克，蛋白胨7. 5克，葡萄糖10克，磷酸二氫鉀2克，番茄汁100毫升，吐溫800. 5毫升，水900 毫升，瓊脂1. 5 2. 0%,pH7. 0，經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。3.復合益生菌凍干粉的制備過程3. 1原菌種活化 分別量取0. 9%的生理鹽水IOml于3只試管內，經121 °C滅菌20分鐘冷卻至30°C， 將3株益生菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0. 9 %的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。3. 2益生菌擴大培養3. 2. 1母發酵劑的制備
分別量取3株益生菌培養基各200ml于3只500ml三角瓶內，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養基體積的10%接種3. 1步驟中已經活化的菌種，在30°C厭氧箱內靜止培養24小時，作為母發酵劑。3. 2. 2生產發酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于三只500mL三角瓶內， 每瓶200mL，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發酵劑，30°C厭氧培養30——36小時，檢測3株益生菌發酵液活菌數，各發酵液活菌數> IO9個/ml，視同為發酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續培養，直至達到IO9個/ml。3. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥。3. 4復合益生菌凍干粉的復配按凍干菌粉末重量，取A菌粉末2份，B菌粉末3份，C菌粉末1份，充分混勻后用于發酵酶解后的大米和糙米米乳混合漿料，加菌量為酶解后的大米和糙米米乳混合漿料重量的0. 01%。4.益生菌發酵米乳的制備4. 1發酵原料的制備將大米、糙米和飲用水按2 1 7的重量比取料，于膠體磨磨漿后過80目細篩， 制成混合米乳漿料。4. 2 配料按混合米乳漿料重量的5 %添加白砂糖，邊加熱邊攪拌，使白砂糖充分溶解，制成含糖混合米乳漿料。4. 3 液化將配好的含糖混合米乳漿料打入發酵罐，蒸汽加熱料液至90°C，此時按含糖混合米乳漿料重量的0. 加入活力單位2萬u/g的耐高溫α “淀粉酶，保持20分鐘，不斷攪拌，然后冷卻至50°C -55°C。4. 4 糖化按含糖混合米乳漿料重量的0. 15%添加活力單位為5萬u/g糖化酶，再按含糖混合米乳漿料重量的0. 2%添加活力單位為50萬u/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻后，50°C -55°C保持4小時。4. 5 滅酶將經過4. 4步驟處理的料液加熱至100°C，保持15分鐘，然后冷卻至30°C。4. 6復合益生菌發酵
按4. 5步驟處理后的料液重量的0. 01 %添加3. 4步驟制備的復合益生菌凍干粉， 攪拌均勻，30°C保溫靜止發酵4小時。4. 7無菌灌裝將4. 6步驟處理的料液攪拌均勻后，進行無菌灌裝，獲得益生菌發酵米乳成品。實施例二 1.酶制劑的選擇
耐高溫α -淀粉酶，活力單位2萬u/g ；糖化酶，活力單位5萬u/g ；木瓜蛋白酶，活力單位50萬u/g。2.益生菌的選擇及培養基的制備A菌-鼠李糖乳桿菌CICC6162 (Lactobacillus rhamnosus)，培養基為蛋白胨
2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg，蛋白質酶解物No. 3 (Difco) Ig, 5%檸檬酸鐵2ml，人工海水700ml，蒸餾水300ml, pH 7. 5，經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。B 菌-類干酪乳桿菌類干酪亞種 CICC6111 (Lactobacillus paracasei subsp.
paracasei)，培養基為酪蛋白胨10g/L，肉湯提取物10g/L，酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/ L，吐溫801g/L，K2HP042g/L，醋酸鈉 5g/L，檸檬酸二銨 2g/L，MgS04X7H20 0. 2g/L,MnSO4 χΗ20 0. 05g/L, pH 6. 2-6. 5，經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。C 菌-短乳桿菌 CICC20023 (Lactobacillus brevis)培養基為酵母浸膏 7. 5
克，蛋白胨7. 5克，葡萄糖10克，磷酸二氫鉀2克，番茄汁100毫升，吐溫80 0. 5毫升，水 900毫升，瓊脂1. 5 2. 0%,pH7. 0，經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。3.復合益生菌凍干粉的制備過程3. 1原菌種活化分別量取0. 9%的生理鹽水IOml于3只試管內，經121 °C滅菌20分鐘冷卻至30°C， 將3株益生菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0. 9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。3. 2益生菌擴大培養3. 2. 1母發酵劑的制備分別量取3株益生菌培養基各200ml于3只500ml三角瓶內，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養基體積的10%接種3. 1步驟中已經活化的菌種，在30°C厭氧箱內靜止培養24小時，作為母發酵劑。3. 2. 2生產發酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于三只500mL三角瓶內， 每瓶200mL，121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發酵劑，30°C厭氧培養30——36小時，檢測3株益生菌發酵液活菌數，各發酵液活菌數> IO9個/ml，視同為發酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續培養，直至達到IO9個/ml。3. 3粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥。3. 4復合益生菌凍干粉的復配按凍干菌粉末重量，取A菌粉末4份，B菌粉末5份，C菌粉末2份，充分混勻后用于發酵酶解后的大米和糙米米乳混合漿料，加菌量為酶解后的大米和糙米米乳混合漿料重量的0. 01%。4.益生菌發酵米乳的制備4. 1發酵原料的制備將大米、糙米和飲用水按2 1 7的重量比取料，于膠體磨磨漿后過80目細篩， 制成混合米乳漿料。
8
4. 2 配料按混合米乳漿料重量的5 %添加白砂糖，邊加熱邊攪拌，使白砂糖充分溶解，制成含糖混合米乳漿料。4. 3 液化將配好的含糖混合米乳漿料打入發酵罐，蒸汽加熱料液至90°C，此時按含糖混合米乳漿料重量的0. 加入活力單位2萬u/g的耐高溫α “淀粉酶，保持20分鐘，不斷攪拌，然后冷卻至50°C -55°C。4. 4 糖化按含糖混合米乳漿料重量的0. 15%添加活力單位為5萬u/g糖化酶，再按含糖混合米乳漿料重量的0. 2%添加活力單位為50萬u/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻后，50°C -55°C保持4小時。4. 5 滅酶將經過4. 4步驟處理的料液加熱至100°C，保持15分鐘，然后冷卻至30°C。4. 6復合益生菌發酵按4. 5步驟處理后的料液重量的0. 01%添加3. 4步驟制備的復合益生菌凍干粉， 攪拌均勻，30°C保溫靜止發酵4小時。4. 7無菌灌裝將4. 6步驟處理的料液攪拌均勻后，進行無菌灌裝，獲得益生菌發酵米乳成品。
權利要求
1. 一種益生菌發酵米乳的制備方法，其特征是按下述方法制備1)酶制劑的選擇耐高溫α “淀粉酶，活力單位2萬u/g ；糖化酶，活力單位5萬u/g ；木瓜蛋白酶，活力單位50萬u/go2)益生菌的選擇及培養基的制備A菌——鼠李糖乳桿菌CICC6162，培養基為蛋白胨2g，酵母提取物lg，大豆蛋白胨lg， 蛋白質酶解物No. 3，lg，5%檸檬酸鐵2ml，人工海水700ml，蒸餾水300ml，pH 7. 5，經121 °C 滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。B菌——類干酪乳桿菌類干酪亞種CICC6111，培養基為酪蛋白胨10g/L，肉湯提取物 10g/L,酵母提取物5g/L，葡萄糖20g/L，吐溫801g/L，K2HP042g/L,醋酸鈉5g/L，檸檬酸二銨 2g/L, MgSO4X 7H20 0. 2g/L, MnSO4 χ H2O 0. 05g/L, ρΗ 6. 2-6. 5，經 121°C滅菌 20 分鐘冷卻至35°C備用。C菌——短乳桿菌CICC20023，培養基為酵母浸膏7. 5克，蛋白胨7. 5克，葡萄糖10克， 磷酸二氫鉀2克，番茄汁100毫升，吐溫800. 5毫升，水900毫升，瓊脂1. 5 2. 0%，pH7. 0， 經121°C滅菌20分鐘冷卻至35°C備用。3)原菌種活化分別量取0. 9%的生理鹽水IOml于3只試管內，經121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，將3 株益生菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0. 9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解， 在30°C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。4)母發酵劑的制備分別量取3株益生菌培養基各200ml于3只500ml三角瓶內，121 °C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養基體積的10%接種3. 1步驟中已經活化的菌種，在30°C厭氧箱內靜止培養 24小時，作為母發酵劑。5)生產發酵劑的制備首先配制質量百分比濃度為10%的脫脂奶乳濁液，分裝于三只500mL三角瓶內，每瓶 200mL, 121°C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發酵劑，30°C厭氧培養 30——36小時，檢測3株益生菌發酵液活菌數，各發酵液活菌數> IO9個/ml，視同為發酵成熟，如果活菌數< IO9個/ml，繼續培養，直至達到IO9個/ml。6)粉末凍干菌種的制備將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-30°C冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥。7)復合益生菌凍干粉的復配按凍干菌粉末重量，取A菌粉末2-4份，B菌粉末3-5份，C菌粉末1-2份，充分混勻后用于發酵酶解后的大米和糙米米乳混合漿料，加菌量為酶解后的大米和糙米米乳混合漿料重量的0.01%。8)發酵原料的制備將大米、糙米和飲用水按2 1 7的重量比取料，于膠體磨磨漿后過80目細篩，制成混合米乳漿料。9)配料按混合米乳漿料重量的5%添加白砂糖，邊加熱邊攪拌，使白砂糖充分溶解，制成含糖混合米乳漿料。10)液化將配好的含糖混合米乳漿料打入發酵罐，蒸汽加熱料液至90°C，此時按含糖混合米乳漿料重量的0. 加入活力單位2萬u/g的耐高溫α -淀粉酶，保持20分鐘，不斷攪拌，然后冷卻至50°C -55°C。11)糖化按含糖混合米乳漿料重量的0. 15%添加活力單位為5萬u/g糖化酶，再按含糖混合米乳漿料重量的0. 2%添加活力單位為50萬u/g木瓜蛋白酶，攪拌均勻后，50°C _55°C保持4 小時。12)滅酶將經過11)步驟處理的料液加熱至100°C，保持15分鐘，然后冷卻至30°C。13)復合益生菌發酵按12)步驟處理后的料液重量的0.01%添加7)步驟制備的復合益生菌凍干粉，攪拌均勻，30°C保溫靜止發酵4小時。14)無菌灌裝將13)步驟處理的料液攪拌均勻后，進行無菌灌裝，獲得益生菌發酵米乳成品。
全文摘要
本發明提供了一種益生菌發酵米乳的制備方法。以鼠李糖乳桿菌、類干酪乳桿菌類干酪亞種、短乳桿菌三株益生菌為出發菌株，經擴大培養、制備粉末凍干菌種、凍干粉的復配，獲得復合益生菌凍干粉。將大米、糙米和飲用水按2∶1∶7的重量比取料，于膠體磨磨漿后過80目細篩，制成混合米乳漿料，配以5％白砂糖后，經耐高溫α-淀粉酶液化、糖化酶糖化、木瓜蛋白酶水解后，按0.01％接種復合益生菌凍干粉，靜止發酵4小時，再經混合均勻后，無菌灌裝制成益生菌發酵米乳。
文檔編號A23L2/84GK102356912SQ201110339948
公開日2012年2月22日 申請日期2011年11月2日 優先權日2011年11月2日
發明者佟曉芳, 姜帆, 田偉成, 翟清斌, 陳成 申請人:黑龍江省龍蛙糧油進出口有限公司