一種天蠶素抗菌肽生產工藝的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種天蠶素抗菌肽生產工藝，它的步驟如下：（1）攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復壯：從-70℃冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養方式復活菌種，接種于斜面培養基上，在斜面生長條件下生長；（2）種子培養與擴大：將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30ml搖瓶培養基，搖瓶培養條件下培養；（3）枯草芽孢桿菌的發酵。本發明工藝簡單，使生產天蠶素抗菌膚的工藝流程縮短，簡便，節約耗料量40%以上，大大降低了原材料的消耗，節約了成本。
【專利說明】一種天蠶素抗菌肽生產工藝
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及一種天蠶素抗菌肽生產工藝。
【背景技術】
[0002]天蠶素(cecropins)是第一個被發現的動物抗菌肽，1980年，由Boman等從天蠶蛹中分離得到。該類多肽抗生素一般含有37~39個氨基酸殘基，不含半胱氨酸，其N端區域具有強堿性，可形成近乎完美的雙親螺旋結構，而在C端區域可形成疏水螺旋，兩者之間有甘氨酸和脯氨酸形成的鉸鏈區，多數多肽的C端被酰胺化，酰胺化對其抗菌活性具有重要作用。
[0003]此后，人們相繼從家蠶、昨蠶、果蠅、麻蠅中分離到了 cecropins類抗菌肽。1989年,Lee等人從豬小腸中分高到了 cecropin Pl,說明了 cecropins可能在動物中廣泛存在。天蠶素(cecropins)對革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌具有很強的殺傷力，而對真菌和真核細胞沒有毒性。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是提供一種天蠶素抗菌肽生產工藝。
[0005]本發明的技術方案是:一種天蠶素抗菌肽生產工藝，它的步驟如下:
(O攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復壯:從-70°C冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養方式復活菌種，接種于斜面培養基上，在斜面生長條件下生長；
(2)種子培養與擴大:將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30 ml搖瓶培養基，搖瓶培養條件下培養；
(3)枯草芽孢桿菌的發酵:從種子培養到最后30M3發酵罐發酵培養需要3級種子擴大，一級種子擴大:將搖瓶培養好的種子按1:100分別擴大于3個500 ml的錐形瓶，裝50 ml種子培養基，種子培養條件下培養；二級種子擴大:將一級種子擴大的種子按1:100比例擴大于30 L種子發酵罐，裝15 L種子培養基，種子培養條件下培養；三級種子擴大:將二級擴大的種子按1:100擴大于3 M3種子發酵罐,裝1.5 M3種子培養基,種子培養條件下培養,將二級種子擴大培養好的種子按1:20接種于30M3發酵罐，裝21M3發酵培養基，發酵培養條件下培養。
[0006]本發明的有益效果是:本發明工藝簡單，使生產天蠶素抗菌膚的工藝流程縮短，簡便，節約耗料量40%以上，大大降低了原材料的消耗，節約了成本。
【具體實施方式】
[0007]—種天蠶素抗菌肽生產工藝，它的步驟如下:
(O攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復壯:從_7(TC冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養方式復活菌種，接種于斜面培養基上，在斜面生長條件下生長；
(2)種子培養與擴大:將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30 ml搖瓶培養基，搖瓶培養條件下培養；
(3)枯草芽孢桿菌的發酵:從種子培養到最后30M3發酵罐發酵培養需要3級種子擴大，一級種子擴大:將搖瓶培養好的種子按1:100分別擴大于3個500 ml的錐形瓶，裝50 ml種子培養基，種子培養條件下培養；二級種子擴大:將一級種子擴大的種子按1:100比例擴大于30 L種子發酵罐，裝15 L種子培養基，種子培養條件下培養；三級種子擴大:將二級擴大的種子按1:100擴大于3 M3種子發酵罐,裝1.5 M3種子培養基,種子培養條件下培養,將二級種子擴大培養好的種子按1:20接種于30M3發酵罐，裝21M3發酵培養基，發酵培養條件下培養。`
【權利要求】
1.一種天蠶素抗菌肽生產工藝，其特征在于，它的步驟如下: (O攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌復壯:從-70°C冰箱取出凍干粉保存的攜帶天蠶素抗菌肽的枯草芽孢桿菌種，以斜面培養方式復活菌種，接種于斜面培養基上，在斜面生長條件下生長； (2)種子培養與擴大:將斜面上活化好的菌種接種于250ml的錐形瓶上，裝30 ml搖瓶培養基，搖瓶培養條件下培養； (3)枯草芽孢桿菌的發酵:從種子培養到最后30M3發酵罐發酵培養需要3級種子擴大，一級種子擴大:將搖瓶培養好的種子按1:100分別擴大于3個500 ml的錐形瓶，裝50 ml種子培養基，種子培養條件下培養；二級種子擴大:將一級種子擴大的種子按1:100比例擴大于30 L種子發酵罐，裝15 L種子培養基，種子培養條件下培養；三級種子擴大:將二級擴大的種子按1:100擴大于3 M3種子發酵罐,裝1.5 M3種子培養基,種子培養條件下培養,將二級種子擴大培養好的種子按1:20接種于30M3發酵罐，裝21M3發酵培養基，發酵培養條件下培養 。
【文檔編號】C12P21/00GK103849667SQ201210502586
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年11月30日 優先權日:2012年11月30日
【發明者】郭文江 申請人:中農穎泰林州生物科園有限公司