植物藥材鑒別方法及其數據庫以及引子對的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種鑒別一植物藥材種類的方法，包括：(a)獲得一待測植物藥材之DNA樣本；(b)將該待測植物藥材之DNA樣本以至少一引子對進行一聚合酶鏈鎖反應以獲得一聚合酶鏈鎖反應產物；(c)將該聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得該待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜；以及(d)將待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜與一已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜進行比對。
【專利說明】植物藥材鑒別方法及其數據庫以及引子對
【技術領域】
[0001 ] 本發明系關于一種鑒別一植物藥材種類的方法,且特別關于一種鑒別一植物藥材種類的方法，其結合了使用特別設計之引子所進行的聚合酶鏈鎖反應以及高解析雙股分離動力分析(high-resolution melting analysis, HRMA),且此鑒別方法具有可快速并準確鑒別植物藥材的優點。
【背景技術】
[0002]市售藥材基原混雜，常有混用、代用與誤用的情形，然而過去物種鑒定都必須由序列解析，并經由公開數據庫搜尋比對才能完成鑒定，而如此耗費時間與成本，且無法達成快速鑒定。
[0003]用DNA辨識條形碼來鑒別物種已廣被國際認可，其中植物以轉錄間隔區(internal transcribed spacer, ITS)辨識度較高(Chen et al., 2010;Chiou etal.,2007;Heublj 2010;Shaw et al.，2002;Zhao et al.,2006;Ma et al., 2010;Miyamotoet al.，2006)。近年分析技術的進展逐漸以高解析雙股分離動力分析(high-resolutionmelting analysis, HRMA)作為一種快速的辨識的方法(Zhou et al., 2011) ?
[0004]高解析雙股分離動力分析(HRMA)的技術原理是利用在一定的溫度范圍內將聚合酶鏈鎖反應(polymerase chain reaction, PCR)擴增的產物先嵌入突光物質,而后進行高溫解離，將雙股變成單股，同時偵測放出的熒光訊號。熒光值隨著溫度變化而繪制出熔解曲線。利用辨識物種DNA片 段所具有獨特的序列，因而形成獨特的熔解曲線形狀，如同DNA指紋圖譜一樣，具有很高的特異性、穩定性、重復性與鑒識度，可準確區別物種的同異，無需序列特異性探針或序列分析，被視為新一代的遺傳掃描工具。
[0005]有鑒于植物物種鑒定所使用序列間的相近與相異，并考量應用性、成本、靈敏度及分辨率，因此目前鑒定物種之方法中，急需導入特定高效引子的組合并結合HRMA技術，以標準化的流程來快速厘清藥材的基原。

【發明內容】

[0006]本發明提供一種鑒別一植物藥材之種類的方法，包括:(a)獲得一待測植物藥材之DNA樣本；(b)將該待測植物藥材之DNA樣本以至少一引子對進行一聚合酶鏈鎖反應以獲得一聚合酶鏈鎖反應產物；(c)將該聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得該待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜；以及(d)將待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜與一已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜進行比對。
[0007]本發明又提供一種建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法，包括:(a)獲得至少一種已知植物藥材之DNA樣本；(b)將該至少一種已知植物藥材之DNA樣本以相同之至少一引子對分別進行聚合酶鏈鎖反應以獲得分別之聚合酶鏈鎖反應產物；(C)將該分別之聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得該至少一種已知植物藥材之分別的高解析雙股分離動力分析圖譜；以及(d)將該至少一種已知植物藥材之分別的高解析雙股分離動力分析圖譜集合成一數據庫。
[0008]本發明還提供一種用于鑒別一植物藥材種類的數據庫，其系根據上述之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法來建構。
[0009]本發明更提供一種用于鑒別一植物藥材種類的引子對，包括:一順向引子與一逆向引子的組合，其中該順向引子系擇自由下列所組成之群組:序列辨識號:1之引子、序列辨識號:2之引子、序列辨識號:3之引子、序列辨識號:4之引子、序列辨識號:5之引子、序列辨識號:6之引子及與序列辨識號:1、序列辨識號:2、序列辨識號:3、序列辨識號:4、序列辨識號:5或序列辨識號:6具70%以上序列相似度之引子，且其中該逆向引子系擇自由下列所組成之群組:序列辨識號-J之引子、序列辨識號:8之引子、序列辨識號:9之引子、序列辨識號:10之引子、序列辨識號:11之引子、序列辨識號:12之引子及與序列辨識號:7、序列辨識號:8、序列辨識號:9、序列辨識號:10、序列辨識號:11或序列辨識號:12具70%以上序列相似度之引子。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 第1圖顯示本發明9對引子對分別對三七與黃芩之DNA樣本聚合酶鏈鎖反應所獲得之產物進行電泳分析的結果。A JTR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-770R (序列辨識號:
8)；B:ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITR1-R2 (序列辨識號:7);C:1TRI_440F (序列辨識號:3)/ITR1-770R (序列辨識號:8) ；D:1TRI_440F (序列辨識號:3)/ITR1-R2 (序列辨識號:7) ；E:ITR1-530F (序列辨識號:2)/ITR1-770R (序列辨識號:8) ；F:ITR1-530F (序列辨識號:2) /ITR1-R2 (序列辨識號:7) ；G:1TRI_F2 (序列辨識號:I)/ITR1-550R (序列辨識號:
9)；H:ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10) ；1:1TRI_F2 (序列辨識號:I) /ITR1-210R (序列辨識號:12)。1:三七DNA樣本；2:黃芩DNA樣本；M:DNA分子量標準品O
[0011]第2a至2q圖顯示以引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I)/ITRI_470R (序列辨識號:
10)對不同植物藥材之DNA樣本進行聚合酶鏈鎖反應所獲得之產物進行電泳分析的結果。
[0012]第3a至3q圖顯示以引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對不同植物藥材之DNA樣本進行聚合酶鏈鎖反應所獲得之產物進行電泳分析的結果。
[0013]第4圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I) /ITR1-470R (序列辨識號:10)對十字花科之板藍根Isatis indigotica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0014]第5圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I) /ITR1-470R (序列辨識號:10)對三白草科之蕺菜Houttuynia cordata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0015]第6圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I) /ITR1-470R (序列辨識號:10)對大戟科之扛香藤Mallotus repandus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0016]第7圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I) /ITR1-470R (序列辨識號:10)對小蘗科之柔毛淫羊藿Epimedium pubescens所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0017]第8圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I) /ITR1-470R (序列辨識號:10)對山茱萸科之山茱萸Cornus offcinalis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0018]第9圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對川續斷科之川續斷Dipsacus asperoides所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0019]第10圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1) /ITR1-470R (序列辨識號:10)對五加科之刺五加Acanthopanax senticosus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0020]第11圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對天南星科之水半夏Typhonium flagelIiforme所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0021]第12圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對木通科之石月Stauntonia obovatifoliola所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0022]第13圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對木犀科之女貞Ligustrum Iucidus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0023]第14圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對木蘭科之八角茴香Illici um verum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0024]第15圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對毛茛科之牡丹Paeonia suffruticosa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0025]第16圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對水龍骨科之鵝掌金星蕨Phymatodes hastata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0026]第17圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對冬青科之崗梅Ilex asprella Champ所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0027]第18圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對玄參科之玄參Scrophularia ningpoensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0028]第19圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對山柑科之山柑Capparis formosana所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0029]第20圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對禾本科之淡竹葉Lophatherum gracile所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0030]第21圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對列當科之肉灰蓉Cistanche deserticola所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0031]第22圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對百合科之平貝母FritiIlaria ussuriensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0032]第23圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對忍冬科之呂宋莢迷Viburnum Iuzonicum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0033]第24圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對杜仲科之杜仲Eucommia ulmoides所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0034]第25圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對豆科之刺桐Erythrina variegata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。[0035]第26圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對車前草科之車前Plantago asiatica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0036]第27圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對防己科之粉防己Stephania tetrandra所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0037]第28圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對使君子科之使君子Quisqualis indica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0038]第29圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對蕓香科之黃柏Phellodendron chinense var.glabriusculum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0039]第30圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對虎耳草科之常山Dichroa febrifuga所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0040]第31圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對金粟蘭科之九節茶Chloranthus glabra所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0041]第32圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對金 絲桃科之地耳草Hypericum japonicum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0042]第33圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對柳葉菜科之水丁香Ludwigia octovalvis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0043]第34圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對苦木科之鴨膽子Brucea javanica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0044]第35圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對茄科之白毛藤Solanum Iyratum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0045]第36圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對香蒲科之水燭香蒲Typha angustifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0046]第37圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對唇形科之丹參Salivia miltiorrhiza所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0047]第38圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對桔梗科之桔梗Platycodon grandif1rum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0048]第39圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對?？浦orus alba所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0049]第40圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對桑寄生科之桑寄生TaxiIlus chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0050]第41圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對胡麻科之白芝麻Sesamum orientale所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0051]第42圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對馬3?鈴科之關木通Aristolochia manshuriensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0052]第43圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對馬錢科之白埔姜Buddleia asiatica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0053]第44圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對馬鞭草科之蔓荊Vitex trifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0054]第45圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對茜草科之白花蛇舌草Hedyotis diffusa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0055]第46圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對商陸科之商陸Phytolacca asiatica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0056]第47圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對旋花科之英絲子Cuscuta chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0057]第48圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對莎草科之莎草Cyperus rotundus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0058]第49圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對莧科之川牛膝Cyathula officinalis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0059]第50圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對蛇郝科之穗花蛇郝Balanophora laxif1ra所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0060]第51圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對無患子科之蒸枝Litchi chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0061]第52圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對紫金?？浦樯案鵄rdisia crenata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0062]第53圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對紫草科之硬紫草Lithospermum erythrorrhizon所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0063]第54圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對紫董科之紫花地丁 Viola yedoensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0064]第55圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對菊科之云木香Aucklandia Iappa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0065]第56圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對瑞香科之芫花Daphne genkwa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0066]第57圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對葫蘆科之絞股藍Gynostemma pentaphyllum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0067]第58圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對葡萄科之白蘞Ampelopsis japonica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0068]第59圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對鼠李科之酸率仁Ziziphus jujube var.spinosa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0069]第60圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對睡蓮科之蓮Nelumbo nucifera所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0070]第61圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對遠志科之遠志Polygala tenuifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。[0071]第62圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對鳶尾科之射干Belamcanda chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0072]第63圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對蒺藜科之蔡藜Tribulus terrestris所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0073]第64圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對蝶形花科之雞冠刺桐Erythrina crista-galli所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0074]第65圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對衛矛科之雷公藤Tripterygium wilfordii所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0075]第66圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對寥科之唐古特大黃Rheum tanguticum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0076]第67圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對澤瀉科之澤瀉Alisma orientalis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0077]第68圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對錦葵科之山芙蓉Hibiscus taiwanensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。 [0078]第69圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對爵床科之穿心蓮Andrographis paniculata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0079]第70圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對姜科之草豆蘧Alpinia katsumadai所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0080]第71圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對薔薇科之毛葉木瓜Chaenomeles cathayensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0081]第72圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對傘形科重齒毛當歸Angelica pubescens f.biserrata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0082]第73圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對罌粟科之元胡Corydalis yanhusuo所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0083]第74圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對彌猴桃科之元闊葉獼猴桃Actinidia Iatifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0084]第75圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對蘭科之白芨Bletilla striata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0085]第76圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對蘿摩科之芫花葉白前Cynanchum glaucescens所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0086]第77圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對茶茱萸科之青脆枝Nothapodytes foetida所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖P曰。
[0087]第78圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對雨久花科之布袋蓮Eichhornia crassipe所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0088]第79圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對柿樹科之柿子Diospyros kaki所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0089]第80圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對桃金娘科之澳洲茶樹Melaleuca alternifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0090]第81圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對龍腦香科之登吉紅柳桉Shorea polysperma所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0091]第82圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對木麻黃科之木賊葉木麻黃Casuarina equisetfolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0092]第83圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對景天科之匙葉伽藍菜Kalanchoe spathulata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0093]第84圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對夾竹桃科之海檬果Cerbera manghas所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0094]第85圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對石蒜科之文珠蘭Crinum asiaticum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0095]第86圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對楊梅科之青楊梅Myrica adenophora所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0096]第87圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對松蘿科之長松蘿Usnea 1ngissima所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0097]第88圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對菠蘿科之菠蘿Ananas comosus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0098]第89圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對漆樹科之鈍葉大果漆Semecarpus cuneiformis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0099]第90圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對梧桐科之臺灣梭稷樹Reevesia formosana所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0100]第91圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對清風藤科之筆羅子Meliosma rigida所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0101]第92圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對槭樹科之尖葉槭Acer kawakamii所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0102]第93圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對懸鈴木科之英國梧桐Platanus acerifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖P曰。
[0103]第94圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對番蒸枝科之里白瓜馥木Fissistigma glaucescen所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0104]第95圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對七葉樹科之歐洲七葉樹Aesculus hippocastanum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0105]第96圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對胡桃科之黃杞Engelhardtia roxburghiana所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0106]第97圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對旅人蕉科之旅人蕉Ravenala madagascariensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0107]第98圖顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:1)/ITRI_470R (序列辨識號:10)對龍舌蘭科之棒葉虎尾蘭Sansevieria cylindrical所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0108]第99圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對十字花科之板藍根Isatis in digotica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0109]第100圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對三白草科之蕺菜Houttuynia cordata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0110]第101圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對大戟科之扛香藤Mallotus repandus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0111]第102圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對小蘗科之柔毛淫羊藿Epimedium pubescens所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0112]第103圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對山茱萸科之山茱萸Cornus offcinalis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0113]第104圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對川續斷科之川續斷Dipsacus asperoides所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0114]第105圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對五加科之刺五加Acanthopanax senticosus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0115]第106圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對天南星科之水半夏Typhonium flagelIiforme所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0116]第107圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對木通科之石月Stauntonia obovatifoliola所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0117]第108圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對木犀科之女貞Ligustrum Iucidus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0118]第109圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對木蘭科之八角茴香Illicium verum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0119]第110圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對毛茛科之牡丹Paeonia suffruticosa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0120]第111圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對水龍骨科之鵝掌金星蕨Phymatodes hastate所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0121]第112圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對冬青科之崗梅Ilex asprella所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0122]第113圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對玄參科之玄參Scrophularia ningpoensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0123]第114圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對山柑科之山柑Capparis formosana所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。 [0124]第115圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對禾本科之淡竹葉Lophatherum gracile所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0125]第116圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對列當科之肉灰蓉Cistanche deserticola所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0126]第117圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對百合科之平貝母Friti I laria ussuriensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0127]第118圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對忍冬科之呂宋莢迷Viburnum Iuzonicum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0128]第119圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對杜仲科之杜仲Eucommia ulmoides所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0129]第120圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對豆科之刺桐Erythrina variegata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0130]第121圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對車前草科之車前Plantago asiatica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0131]第122圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對防己科之粉防己Stephania tetrandra所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0132]第123圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對使君子科之使君子Quisqualis indica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0133]第124圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對蕓香科之黃柏Phellodendron chinense var.glabriusculum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0134]第125圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對虎耳草科之常山Dichroa febrifuga所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。[0135]第126圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對金粟蘭科之九節茶Chloranthus glabra所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0136]第127圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對金絲桃科之地耳草Hypericum japonicum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0137]第128圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對柳葉菜科之水丁香Ludwigia octovalvis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0138]第129圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對苦木科之鴨膽子Brucea javanica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0139]第130圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對茄科之白毛藤(白英)Solanum Iyratum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0140]第131圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對香蒲科之水燭香蒲Typha angustifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0141]第132圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對唇形科之丹參Salivia miltiorrhiza所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0142]第133圖引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對桔?？浦酃latycodon grandiflorum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0143]第134圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對桑科之桑Morus alba所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0144]第135圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對桑寄生科之桑寄生Taxillus chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0145]第136圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對胡麻科之白芝麻Sesamum orientale所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0146]第137圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對馬3?鈴科之關木通Aristolochia manshuriensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0147]第138圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對馬錢科之白埔姜Buddleia asiatica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0148]第139圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對馬鞭草科之蔓荊Vitex trifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0149]第140圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對茜草科之白花蛇舌草Hedyotis diffusa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0150]第141圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對商陸科之商陸Phytolacca asiatica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0151]第142圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對旋花科之英絲子Cuscuta chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0152]第143圖顯示顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對莎草科之莎草Cyperus rotundus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0153] 第144圖顯示顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對覓科之川牛膝Cyathula officinalis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。[0154]第145圖顯示顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對蛇郝科之穗花蛇郝Balanophora laxif1ra所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0155]第146圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對無患子科之蒸枝Litchi chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0156]第147圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對紫金牛科之珠砂根Ardisia crenata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0157]第148圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對紫草科之硬紫草Lithospermum erythrorrhizon所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0158]第149圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對紫董科之紫花地丁 Viola yedoensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0159]第150圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對菊科之云木香Aucklandia Iappa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0160]第151圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對瑞香科之芫花Daphne genkwa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0161]第152圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對葫蘆科之絞股藍Gynostemma pentaphyllum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖 -1'TfeP曰。
[0162]第153圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對葡萄科之白蘞Ampelopsis japonica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0163]第154圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對鼠李科之酸率仁Ziziphus jujube var.spinosa所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0164]第155圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對睡蓮科之蓮Nelumbo nucifera所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0165]第156圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對遠志科之遠志Polygala tenuifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0166]第157圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對鳶尾科之射干Belamcanda chinensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0167]第158圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對蒺藜科之蔡藜Tribulus terrestris所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0168]第159圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對蝶形花科之雞冠刺桐Erythrina crista-galli所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0169]第160圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對衛矛科之雷公藤Tripterygium wilfordii所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0170]第161圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對寥科之唐古特大黃Rheum tanguticum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0171]第162圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對澤瀉科之澤瀉Alisma orientalis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0172]第163圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對錦葵科之山芙蓉Hibiscus taiwanensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0173]第164圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對爵床科之穿心蓮Andrographis paniculata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0174]第165圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對姜科之草豆蘧Alpinia katsumadai所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0175]第166圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對薔薇科之毛葉木瓜Chaenomeles cathayensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0176]第167圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對傘形科重齒毛當歸Angel ica pubescens f.biserrata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0177]第168圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對罌粟科之元胡Corydalis yanhusuo所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0178]第169圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對彌猴桃科之元闊葉獼猴桃Actinidia Iatifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0179]第170圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對蘭科之白芨Bletilla striata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0180]第171圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對蘿摩科之芫花葉白前Cynanchum glaucescens所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0181]第172圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對茶茱萸科之青脆枝Nothapodytes foetida所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0182]第173圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對雨久花科之布袋蓮Eichhornia crassipe所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0183]第174圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對柿樹科之柿子Diospyros kaki所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0184]第175圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對桃金娘科之澳洲茶樹Melaleuca alternifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0185]第176圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對龍腦香科之登吉紅柳桉Shorea polysperma所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。[0186]第177圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對木麻黃科之木賊葉木麻黃Casuarina equisetfolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0187]第178圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對景天科之匙葉伽藍菜Kalanchoe spathulata所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
譜
[0188]第179圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對夾竹桃科之海檬果Cerbera manghas所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0189]第180圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對石蒜科之文珠蘭Crinum asiaticum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0190]第181圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對楊梅科之青楊梅Myrica adenophora所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0191]第182圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對松蘿科之長松蘿Usnea 1ngissima所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0192]第183圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對菠蘿科之菠蘿Ananas comosus所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0193]第184圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對漆樹科之鈍葉大果漆Semecarpus cuneiformis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0194]第185圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對梧桐科之臺灣梭稷樹Reevesia formosana所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0195]第186圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對清風藤科之筆羅子Meliosma rigida所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0196]第187圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對槭樹科之尖葉槭Acer kawakamii所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0197]第188圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對懸鈴木科之英國梧桐Platanus acerifolia所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0198]第189圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對番蒸枝科之里白瓜馥木Fissistigma glaucescen所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0199]第190圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對七葉樹科之歐洲七葉樹Aesculus hippocastanum所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0200]第191圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4) /ITR1-R2 (序列辨識號:7)對胡桃科之黃杞Engelhardtia roxburghiana所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖
-1'TfeP曰。
[0201]第192圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對旅人蕉科之旅人蕉Ravenala madagascariensis所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0202]第193圖顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對龍舌蘭科之棒葉虎尾蘭Sansevieria cylindrica所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0203]第194(a)至(f)圖分別顯示引子對ITR1-F2 (序列辨識號:I)/ITR1-470R (序列辨識號:10)對白薇與白前、墨旱蓮與紅旱蓮、蒙古黃耆與紅耆、川牛膝與懷牛膝、川木香與云木香，以及半夏與水半夏混用植物藥材所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。[0204] 第195(a)至(f)圖分別顯示引子對ITR1-400F (序列辨識號:4)/ITRI_R2 (序列辨識號:7)對白薇與白前、墨旱蓮與紅旱蓮、蒙古黃耆與紅耆、川牛膝與懷牛膝、川木香與云木香，以及半夏與水半夏混用植物藥材所復制出之片段的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0205]第196圖顯示同一批懷牛膝之DNA樣本與同一批川牛膝之DNA樣本分別進行多次聚合酶鏈鎖反應后之高解析雙股分離動力分析的結果。
[0206]為了讓本發明之上述和其它目的、特征、和優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，并配合所附圖示，作詳細說明如下:
【具體實施方式】
[0207]本發明一實施例中，本發明提供一種鑒別一植物藥材種類的方法。本發明之鑒別一植物藥材種類的方法可包括下述步驟，但不限于此。
[0208]首先獲得一待測植物藥材之DNA樣本。在一實施例中，獲得待測植物藥材之DNA樣本的方式可以一般DNA萃取方法來進行，例如以十六烷基三甲基溴化銨(hexadecy I trimethyl ammonium bromide, CTAB)等試劑來對植物藥材進行DNA萃取,但不限于此。
[0209]接著，可將所獲得之待測植物藥材之DNA樣本以至少一引子對進行一聚合酶鏈鎖反應以獲得一聚合酶鏈鎖反應產物。
[0210]上述至少一引子對可根據在植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的序列所設計，而植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的序列包括轉錄18S核糖體RNA區域之序列、轉錄間隔區(internal transcribed spacer) I (ITSl)之序列、轉錄5.8S核糖體RNA區域之序列、轉錄間隔區2(ITS2)之序列與轉錄28S核糖體RNA區域之序列。對于植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的轉錄間隔區I(ITSl)與轉錄間隔區2而言，不同種類之植物的序列差異度大，因此在一實施例中，可以轉錄18S核糖體RNA之保守區域、轉錄28S核糖體RNA之保守區域或轉錄間隔區I(ITSl)與轉錄間隔區2(ITS2)較保守區域為設計引子之區域。此外，于本發明之鑒別一植物藥材之種類的方法中所使用之至少一引子對，對各種不同之植物皆可進行聚合酶鏈鎖反應并獲得具專一性的聚合酶鏈鎖反應，具備優良之功效。
[0211]在一實施例中，上述至少一引子對可包括至少一順向引子與至少一逆向引子的組合。[0212]上述至少一順向引子可擇自由下列所組成之群組，但不限于此:序列辨識號:1之引子、序列辨識號:2之引子、序列辨識號:3之引子、序列辨識號:4之引子、序列辨識號:5之引子、序列辨識號:6之引子及與序列辨識號:1、序列辨識號:2、序列辨識號:3、序列辨識號:4、序列辨識號:5或序列辨識號:6具70%、80%或90%以上序列相似度之引子。
[0213]又，上述至少一逆向引子可擇自由下列所組成之群組，但也不限于此:序列辨識號:7之引子、序列辨識號:8之引子、序列辨識號:9之引子、序列辨識號:10之引子、序列辨識號:11之引子、序列辨識號:12之引子及與序列辨識號:7、序列辨識號:8、序列辨識號:
9、序列辨識號:10、序列辨識號:11或序列辨識號:12具70%、80%或90%以上序列相似度之引子。[0214]而在一實施例中，上述至少一引子對可包括，但不限于序列辨識號:1之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合等。
[0215]在一特定之實施例中，上述至少一引子對可為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。又，另一特定實施例中，上述至少一引子對可為序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合。
[0216]然后，在獲得上述聚合酶鏈鎖反應產物之后，將上述聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析(high-resolution melting analysis, HRMA)以獲得上述待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0217]再來，將上述待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜與一已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜進行比對，其中若上述待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜與上述已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜一致，則確認上述待測植物藥材與上述已知植物藥材相同,而若上述待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜與上述已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜不一致，則確認上述待測植物藥材與上述已知植物藥材不同或混有其它藥材。
[0218]上述已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜，可由上述已知植物藥材之DNA根據與上述相同之至少一引子對而產生的聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析所獲得。
[0219]在一實施例中，上述已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜可獲自一數據庫，但不限于此。上述數據庫可由將至少一種已知植物藥材之DNA分別根據與上述相同之至少一引子而產生的聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析所分別獲得的高解析雙股分離動力分析圖譜所組成。
[0220]在另一實施例中，將待測植物藥材之DNA樣本以上述至少一引子對來進行聚合酶鏈鎖反應之時，可同時將已知植物藥材之DNA樣本以相同之至少一引子對來進行另一聚合酶鏈鎖反應，以一并獲得已知植物藥材之聚合酶鏈鎖反應產物。又，將上述待測植物藥材之聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析而獲得上述待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜之時，可一并將已知植物藥材之聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得已知植物藥材之高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0221]再者，如上所述，由于本發明之鑒別一植物藥材之種類的方法中所使用之至少一引子對，對各種不同之植物皆可進行聚合酶鏈鎖反應并獲得具專一性的聚合酶鏈鎖反應，因此本發明之鑒別一植物藥材之種類的方法可用于鑒別各種不同植物。在一實施例中，適用于上述鑒別植物藥材的方法之植物藥材的科別的例子可包括，例如，十字花科、三白草科、大戟科、小蘗科、山茱萸科、川續斷科、五加科、天南星科、木通科、木犀科、木蘭科、毛茛科、水龍骨科、冬青科、玄參科、山柑科、禾本科、列當科、百合科、忍冬科、杜仲科、豆科、車前草科、防己科、使君子科、蕓香科、虎耳草科、金粟蘭科、金絲桃科、柳葉菜科、苦木科、茄科、香蒲科、唇形科、桔?？?、?？?、桑寄生科、胡麻科、馬3?鈴科、馬錢科、馬鞭草科、菌草科、商陸科、旋花科、莎草科、莧科、蛇菰科、無患子科、紫金?？?、紫草科、紫董科、菊科、瑞香科、葫蘆科、葡萄科、鼠李科、睡蓮科、遠志科、鳶尾科、蒺藜科、蝶形花科、衛矛科、寥科、澤瀉科、錦葵科、錦葵科、爵床科、姜科、薔薇科、傘形科、罌粟科、獼猴桃科、蘭科、蘿摩科、茶茱萸科、雨久花科、柿樹科、桃金娘科、龍腦香科、木麻黃科、景天科、夾竹桃科、石蒜科、楊梅科、松蘿科、菠蘿科、漆樹科、梧桐科、清風藤科、槭樹科、懸鈴木科、番荔枝科、七葉樹科、胡桃科、旅人蕉科與龍舌蘭科等，但不限于此。
[0222]十字花科之植物可包括，但不限于，板藍根(Isatis indigotica)等。三白草科之植物可包括，但不限于，蕺菜(Houttuynia cordata)等。大戟科植物的例子可包括，但不限于扛香藤(Mallotus repandus)、甘遂(Euphorbia Kansui)、大戟(Euphorbiapekinensis)等。小蘗科植物的例子可包括,但不限于朝鮮淫羊藿(Epimediium koreamun)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens)、八角蓮(Dysosma pleiantha)、十大功勞(Mahoniajaponica)等。山茱萸科之植物可包括,但不限于，山茱萸(Cornus offcinalis)等。川續斷科之植物可包括，但不限于，川續斷(Dipsacus asperoides)等。五加科之植物的例子可包括，例如三七(P anax notoginseng)、西洋參(Panax quinquefolium)、刺五加 (Acanthopanax senticosus)、細柱五加 (Acanthopanax gracilistylus)、三葉五加(Eleutherococcus trifoliatus var.trifoliatus)> 人參(Panax ginseng)等，但不限于此。天南星科之植物可包括，但不限于異葉半夏(Pinellia pedatisecta)、水半夏(Typhonium flagelliforme)、半夏(Pinellia ternata)、獨角蓮(Typhonium giganteum)等。木通科之植物可包括石月(Stauntonia obovatifoliola)等，但不限于此。木犀科之植物可包括女貞(Ligustrum Iucidus)等，但不限于此。木蘭科之植物的例子可包括，例如白玉蘭(Michelia alba)、八角茴香(Illicium verum)、凹葉厚樸(Magnoliaofficinalis var.biloba) > 望春花(Magnolia biondii)、華葉五味子(Schisandrasphenanthera)等，但不限于此。毛茛科之植物可包括，但不限于小木通(ClematidisArmandii)、牡丹(Paeonia suffruticosa)、茍藥(Paeonia Iactiflora)、烏頭(Aconitumcarmichaeli)、黃連(Coptis chinensis)等。水龍骨科之植物的例子可包括鵝掌金星蕨(Phymatodes hastata)等，但不限于此。冬青科之植物可包括,但不限于崗梅(Ilexasprella)等。玄參科之植物可包括，但不限于，玄參(Scrophularia ningpoensis)、地黃(Rehmannia glutionsa)等。山柑科之植物可包括，例如山柑(Capparis formosana)等，但不限于此。禾本科之植物可包括，例如淡竹葉(Lophatherum gracile)等,但不限于此。列當科之植物可包括，但不限于野郝(Aeginetia indica)、肉灰蓉(Cistanchedeserticola)等。百合科之植物的例子可包括，例如菝契(Smilax china)、天冬(Asparaguscochinchinensis)、臺灣黃精(Polygonatum altelobatum)、平貝母(Fritillariaussuriensis)、玉竹(Polygonatum odoratum)、多花黃精(Polygonatum cyrtonema)、百合(Lilum Iancifolium)、知母(Anemarrhena asphodeloides)等，但不限于此。忍冬科之植物的例子可包括，例如冇骨消(Sambucus chineasis)、紅子莢迷(Viburnum formosanum)、呂宋莢迷(Viburnum luzonicum)等，但不限于此。杜仲科之植物可包括，但不限于杜仲(Eucommia ulmoides)等。豆科之植物的例子可包括，例如剌桐(Erythrina variegata)、兔尾草(Uraria crinita)、耳鉤草(Heliotropium indicum)、毛雞骨草(Abrus mollis)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)、多序巖黃耆(Hedysarum polybotrys)、苦參(Sophoraf Iavescensa)、野葛(Puerraria 1bata)、越南槐(Sophora tonkinensis)、蒙古黃耆(Astragalus membranaceus var.mongholic)、一條根(Flemingia macrophylla)、臺灣山豆根(Euchresta formosana)、白鳳豆(Canavalia gladiata)等，但不限于此。車前草科之植物可包括車前(Plantago asiatica)等，但不限于此。防己科之植物可包括，但不限于，臺灣土防己(Cyclea ochiaiana)、粉防已(Stephania tetrandra)等。使君子科之植物可包括使君子(Quisqualis indica)等，但不限于此。蕓香科之植物的例子可包括，例如花椒(Zanthoxylum bungeanum)、黃桕(Phellodendron chinense var.glabriusculum)、酸禮(Citrus aurantium)、臺灣黃薬(Phellodendron amurense var.wilsonii)等，但不限于此?；⒍菘浦参锟砂?，但不限于常山(Dichroa febrifuga)等。金粟蘭科之植物可包括，但不限于九節荼(Chloranthus glabra)等。金絲桃科之植物可包括，但不限于地耳草(Hypericum japonicum)、紅旱蓮(Hypericum ascyron)等。柳葉菜科之植物可包括，水丁香(Ludwigia octovalvis)等，但不限于此。苦木科之植物可包括，但不限于鴨膽子(Brucea javanica)等。煎科之植物的例子可包括，例如中華枸杞(Lyciumchinense)、白毛藤(Solanum Iyratum)、黃水煎(Solanum incanum)、龍葵(Solanumnigrum)等，但不限于 此。香蒲科的植物可包括，但不限于水燭香蒲(Typha angustifolia)等。唇形科之植物的例子可包括，例如印度蘿勒(Ocimum gratissimum)、丹參(Saliviamiltiorrhiza)、夏枯草(Prunella vulgaris)、紫蘇(Perilla frutescens var.arguta)、黃苳(Scutellaria baicalensis)、貓須草(Asparagus cochinchinensis)等，但不限于此。桔?？浦参锏睦涌砂?，但不限于，半邊蓮(Lobelia chinensis)、臺灣土黨參(Cyclocodon Iancifolius)、桔梗(Platycodon grandiflorum)、黨蕓(Codonopsispilosula)等。?？浦参锟砂ㄉ?Morus alba)、臺灣天仙果(Ficus formosana)等，但不限于此。桑寄生科之植物可包括桑寄生(Taxillus chinensis)、大葉桑寄生(TaxillusIiquidambaricola)等，但不限于此。胡麻科之植物可包括，但不限于白芝麻(Sesamumorientale)等。馬覽鈴科之植物的例子可包括，例如馬覽鈴(Aristolochia contorta)、關木通(Aristolochia mandshuriensis)等，但不限于此。馬錢科之植物可包括，但不限于白埔姜(Buddleia asiatica)等。馬鞭草科之植物可包括，但不限于蔓荊(Vitex trifolia)、海州常山(Clerodendrun trichotomum)等。菌草科之植物的例子，可包括，例如九節木(Psychotria rubra)、圓葉雞屎樹(Lasianthus wallichii)、白花蛇舌草(Hedyotisdiffusa)、傘花龍吐珠(Hedyotis corymbosa)、大葉鉤藤(Uncaria macrophylla)、巴戟天(Morinda officinalis)、水梔子(Gardenia jasminoides var.grandiflora)、白鉤藤(Uncaria sessilifructus)、菌草(Rubia cordifolia)等，但不限于此。商陸科之植物可包括，但不限于商陸(Phytolacca asiatica)等。旋花科之植物可包括，但不限于五爪金龍(Ipomoea cairica)、牽牛子(Pharbitis purpurea)、寬絲子(Cuscuta chinensis)等。莎草科之植物可包括，例如莎草(Cyperus rotundus)等，但不限于此。覓科之植物可包括，例如川牛膝(Cyathula officinalis)、懷牛膝(Achryanthes bidentata)等，但不限于此。蛇郝科植物可包括，但不限于穗花蛇郝(Balanophora Iaxiflora)等。無患子科之植物可包括，但不限于荔枝(Litchi chinensis)等。紫金?？浦参锟砂?，但不限于珠砂根(Ardisia crenata)等。紫草科之植物可包括硬紫草(Lithospermum erythrorrhizon)等，但不限于此。紫董科的植物可包括，但不限于紫花地丁(Viola yedoensis)等，但不限于此。菊科之植物的例子可包括，例如云木香(Aucklandia lappa)、牛蒡子(Arctiumlappa)、白 Jtt (Atractylodes macrocephala)、艾(Artemisia argyi)、剌兒菜(Cirisiumsetosum)、紅花(Carthamus tinctorius)、蒼Jtt (Atractylodes Iancea)、茵陳(Artemisiacapillaris)、黃花蒿(Artemisia annua)、墨旱蓮(Eclipta prostrata)、大薊(Cirisiumjaponicum)、地膽草(Elephantopus mollis)、刀傷草(Ixeridium Iaevigatum)、小金英(兔仔菜)(Ixeris chinensis)、山防風(Echinops grijsii)、旱蓮草(Eclipta prostrata)、(杭)菊(Dendranthema morifolium)、南一枝香(Vernonia cinerea)、螺蟲其菊(Wedeliachinensis)等，但不限于此。瑞香科之植物可包括，但不限于芫花(Daphne genkwa)、南嶺堯花(Wikstroemia indica)等，但不限于此。葫蘆科之植物可包括，但不限于絞股藍(Gynostemma pentaphyllum)等。葡萄科之植物可包括，小本山葡萄(Vitis ficifolia)、漢氏山葡萄(Ampelopsis brevipedunculata var.hancei)、白薇(Ampelopsis japonica)等，但不限于此。鼠李科之植物可包括，但不限于，桶鉤藤(Rhamnus formosana)、酸麥仁(Ziziphus jujuba var.spinosa)等。睡蓮科之植物可包括蓮(Nelumbo nucifera)等，但不限于此。遠志科之植物可包括遠志(Polygala tenuifolia)等，但不限于此。鸞尾科之植物可包括，但 不限于射干(Belamcanda chinensis)等。瘈藜科之植物可包括瘈藜(Tribulus terrestris)等，但不限于此。蝶形花科之植物可包括，例如雞冠剌桐(Erythrina crista-galli)等，但不限于此。衛矛科之植物可包括，但不限于雷公藤(Tripterygium wilfordii)、大葉南蛇藤(Celastrus kusanoi)等。蓼科之植物的例子可包括，例如何首烏(Polygonum multiflorum)、虎杖(Polygonum cuspidatum)、唐古特大黃(Rheum tanguticum)、藥用大黃(Rheum officinale)等，但不限于此。澤灣科之植物可包括，但不限于澤?寫(Alisma orientalis)等。錦葵科之植物可包括，例如山芙蓉(Hibiscustaiwanensis)、冬葵子(Malva verticillata)等，但不限于此。爵床科之植物的例子可包括，例如哈哼花(Staurogyne concinnula)、馬藍(Strobilanthes cusia)、九頭獅子草(Peristrophe japonica)、舍即魚膽(Hypoestes purpurea)、白鶴靈芝(Rhinacanthusnasutus)、穿心蓮(Andrographis paniculata)等，但不限于此。姜科之植物的例子可包括，例如山奈(Kaempferia galanga)、郁金(Curcuma kwangsiensis)、益智(Alpiniaoxyphyl la)、草豆蘧(Alpinia katsumadai)、高良姜(Alpinia off icinarum)等，但不限于此。薔薇科之植物的例子可包括，例如山杏(Prunus armenioca var.ansu)、山桃(Prunusdavidiana)、山里紅(Crataegus pinnatifida var.major) Λ 毛葉木瓜(Chaenomelescathayensis)、蛇莓(Duchesnea indica)、玫瑰(Rosa rugosa)等，但不限于此。傘形科之植物，可包括，但不限于川彎(Ligusticum chuanxiong)、白]E (Angelica dahuricavar.formosana)、防風(Saposhnikovia divaricata)、憲活(Notopterygium incisum)、重齒毛當歸(Angelica pubescens f.biserrata)、柴古月(Bupleurum chinense)、高氏柴古月(Bupleurum kaoi)、當歸(Angelica sinensis)、雷公根(Centella asiatica)等,但不限于此。S粟科之植物可包括，但不限于元胡(Corydalis yanhusuo)等。稱猴桃科之植物可包括，但不限于闊葉稱猴桃(Actinidia Iatifolia)等。蘭科植物之例子可包括,例如臺灣金線蓮(Anoectochilus formosanus)、天麻(Gastrodia elata) > [=3? (Bletilla striata)、臺灣白及(Bletilla formosana)等,但不限于此。蘿摩科之植物可包括，但不限于白薇(Cynanchum atratum)、芫花葉白前(Cynanchum glaucescens)、臺灣牛彌菜(Marsdeniaformosana)等。茶茱萸科之植物可包括例如青脆枝(Nothapodytes foetida)等,但不限于此。雨久花科之植物可包括，例如布袋蓮(Eichhornia crassipes),但不限于此。柿樹科之植物可包括,例如柿子(Diospyros kaki)，但不限于此。桃金娘科之植物可包括，例如澳洲茶樹(Melaleuca alternifolia)。龍腦香科之植物可包括,例如登吉紅柳桉(Shoreapolysperma),但不限于此。木麻黃科之植物可包括，例如木賊葉木麻黃(Casuarinaequisetfolia),但不限于此。景天科之植物可包括，例如匙葉伽藍菜(Kalanchoespathulata),但不限于此。夾竹桃科之植物可包括,例如海檬果(Cerbera manghas),但不限于此。石蒜科之植物可包括，例如文珠蘭，但不限于此。楊梅科之植物可包括例如青楊梅(Myrica adenophora),但不限于此。松蘿科之植物可包括,例如長松蘿(Usnea1ngissima),但不限于此。菠蘿科之植物可包括,例如菠蘿(Ananas comosus),但不限于此。漆樹科之植物可包括例如鈍葉大果漆(Semecarpus cuneiformis),但不限于此。梧桐科之植物可包括，例如臺灣梭稷樹(Reevesia formosana),但不限于此。清風藤科之植物可包括，例如筆羅子(Meliosma rigida),但不限于此。槭樹科之植物可包括,例如尖葉槭(Acerkawakamii),但不限于此。懸鈴木科之植物可包括,例如英國梧桐(Platanus acerifolia),但不限于此。番蒸枝科之植物可包括，例如里白瓜馥木(Fissistigma glaucescens),但不限于此。七葉樹科之 植物可包括，例如歐洲七葉樹(Aesculus hippocastanum),但不限于此。胡桃科之植物可包括，例如黃杞(Engelhardtia roxburghiana),但不限于此。旅人蕉科之植物可包括，例如旅人蕉(Ravenala madagascariensis),但不限于此。龍舌蘭科之植物可包括，例如棒葉虎尾蘭(Sansevieria cylindrica),但不限于此。
[0223]在本發明另一實施例中，本發明提供一種建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法。本發明之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法可包括，但不限于下述步驟。
[0224]首先，獲得至少一種已知植物藥材之DNA樣本。在一實施例中，可藉由一般DNA萃取方法來獲得至少一種已知植物藥材之DNA樣本，例如以十六烷基三甲基溴化銨等試劑來對植物藥材進行DNA萃取，但不限于此。
[0225]接著，在獲得上述至少一種已知植物藥材之DNA樣本之后，將所獲得之上述至少一種已知植物藥材之DNA樣本以相同之至少一引子對分別進行聚合酶鏈鎖反應以獲得分別之聚合酶鏈鎖反應產物。
[0226]上述至少一引子對可根據在植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的序列所設計，而植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的序列包括轉錄18S核糖體RNA區域之序列、轉錄間隔區I之序列、轉錄5.8S核糖體RNA區域之序列、轉錄間隔區2之序列與轉錄28S核糖體RNA區域之序列。對于植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的轉錄間隔區I與轉錄間隔區2而言，不同種類之植物的序列差異度大，因此在一實施例中，可以轉錄18S核糖體RNA之保守區域、轉錄28S核糖體RNA之保守區域或轉錄間隔區I與轉錄間隔區2較保守區域為設計引子之區域。此外，于本發明之鑒別一植物藥材之種類的方法中所使用之至少一引子對，對各種不同之植物皆可進行聚合酶鏈鎖反應并獲得具專一性的聚合酶鏈鎖反應，具備優良之功效。。
[0227]上述至少一引子對可包括至少一順向引子與至少一逆向引子的組合。
[0228]上述至少一順向引子可擇自由下列所組成之群組，但不限于此:序列辨識號:1之引子、序列辨識號:2之引子、序列辨識號:3之引子、序列辨識號:4之引子、序列辨識號:5之引子、序列辨識號:6之引子及與序列辨識號:1、序列辨識號:2、序列辨識號:3、序列辨識號:4、序列辨識號:5或序列辨識號:6具70%、80%或90%以上序列相似度之引子。
[0229]此外，上述至少一逆向引子可擇自由下列所組成之群組，但也不限于此:序列辨識號:7之引子、序列辨識號:8之引子、序列辨識號:9之引子、序列辨識號:10之引子、序列辨識號:11之引子、序列辨識號:12之引子及與序列辨識號:7、序列辨識號:8、序列辨識號:
9、序列辨識號:10、序列辨識號:11或序列辨識號:12具70%、80%或90%以上序列相似度之引子。
[0230]在一實施例中，上述至少一引子對可包括，但不限于序列辨識號:1之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號-J之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合等。
[0231]在一特定之實施例中，上述至少一引子對可為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。又，在另一特定實施例中，上述至少一引子對可為序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合。
[0232]再來，將上述分別之聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得上述至少一種已知植物藥材之分別的高解析雙股分離動力分析圖譜。
[0233]最后，將上述至少一種已知植物藥材之分別的高解析雙股分離動力分析圖譜集合成一數據庫而完成用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的建構。
[0234]在本發明又另一實施例中，本發明提供一種用于鑒別一植物藥材種類的數據庫。本發明之數據庫可根據前述本發明之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法來建構，但不限于此。
[0235] 在一實施例中，于根據前述建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法所建構的數據庫中，至少一種已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜，系由上述至少一種已知植物藥材之DNA樣本，藉由使用包括下列之相同的至少一引子對所產生的分別之聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析圖譜而得。所使用之相同的至少一引子對可包括:序列辨識號:1之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合。
[0236]在一特定實施例中，上述至少一引子對可為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。在又另一特定實施例中，上述至少一引子對可為序列辨識號:4之引子與序列辨識號-J之引子的組合。[0237]又，適用本發明數據庫來進行鑒別之植物藥材的科別的例子，可包括，例如十字花科、三白草科、大戟科、小蘗科、山茱萸科、川續斷科、五加科、天南星科、木通科、木犀科、木蘭科、毛茛科、水龍骨科、冬青科、玄參科、山柑科、禾本科、列當科、百合科、忍冬科、杜仲科、豆科、車前草科、防己科、使君子科、蕓香科、虎耳草科、金粟蘭科、金絲桃科、柳葉菜科、苦木科、茄科、香蒲科、唇形科、桔?？?、?？?、桑寄生科、胡麻科、馬兜鈴科、馬錢科、馬鞭草科、茜草科、商陸科、旋花科、莎草科、莧科、蛇菰科、無患子科、紫金牛科、紫草科、紫董科、菊科、瑞香科、葫蘆科、葡萄科、鼠李科、睡蓮科、遠志科、鳶尾科、蒺藜科、蝶形花科、衛矛科、寥科、澤瀉科、錦葵科、錦葵科、爵床科、姜科、薔薇科、傘形科、罌粟科、獼猴桃科、蘭科、蘿摩科、茶茱萸科、雨久花科、柿樹科、桃金娘科、龍腦香科、木麻黃科、景天科、夾竹桃科、石蒜科、楊梅科、松蘿科、菠蘿科、漆樹科、梧桐科、清風藤科、槭樹科、懸鈴木科、番荔枝科、七葉樹科、胡桃科、旅人蕉科與龍舌蘭科等，但不限于此。
[0238]另外，在本發明一實施例中，本發明提供一種用于鑒別一植物藥材種類的引子對。
[0239]上述弓丨子對可包括一順向引子與一逆向引子的組合。
[0240]上述順向引子可擇自由下列所組成之群組:序列辨識號:1之引子、序列辨識號:2之引子、序列辨識號:3之引子、序列辨識號:4之引子、序列辨識號:5之引子、序列辨識號:6之引子及與序列辨識號:1、序列辨識號:2、序列辨識號:3、序列辨識號:4、序列辨識號:5或序列辨識號:6具70%、80%或90%以上序列相似度之引子。又，上述逆向引子則可擇自由下列所組成之群組:序列辨識號-J之引子、序列辨識號:8之引子、序列辨識號:9之引子、序列辨識號:10之引子、序列辨識號:11之引子、序列辨識號:12之引子及與序列辨識號:7、序列辨識號:8、序列辨識號:9、序列辨識號:10、序列辨識號:11或序列辨識號:12具70%,80%或90%以上序列相似度之引子，但也不限于此。
[0241]在一實施例中，上述引子對可包括，例如序列辨識號:1之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合，但不限于此。
[0242]在一特定實施例中，上述引子對可為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。而在另一特定實施例中，上述引子對可為序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合。
[0243]【實施例】
[0244]A.植物材料
[0245]于本實驗中所使用之各種植物藥材皆由財團法人醫藥工業技術發展中心所提供，并且皆經過北京中國科學院協和醫院藥用植物所與國內藥材專家確認無誤用情況。
[0246]B.實驗方法
[0247]1.DNA 抽取:
[0248]使用十六烷基三甲基溴化銨(hexadecyltrimethylammoniumbromide, CTAB)的DNA抽取方法:
[0249]取500mg至Ig樣本置于研缽中，加入液態氮研磨成粉，再用刮杓秤取30_40mg之樣本粉末加入入2mL微量離心管(Eppendorf tube)。接著，將700 μ L萃取緩沖溶液(Extraction buffer)(IOOmM Tris.HCl, pH8.0, 20mM EDTA, IM NaCl, 1%CTAB, l%PVP-40)加入上述微量離心管中與樣本混合均勻。將微量離心管置入65°C恒溫水浴槽30分鐘后取出，再于其中加入等量的三氯甲燒-異戍醇(chloroform-1soamyl alcohol) (24:1),并上下輕晃，使微量離心管中之溶液呈乳狀。再來，將微量離心管以4°C、17，OOOx g離心5分鐘，之后取上清液500 μ L入新的1.5mL微量離心管，并加入ImL的95%乙醇及50 μ L醋酸鈉(sodium acetat e) (NaOAc, 3M, pH5.2)。將此微量離心管放入_20°C冰箱約30分鐘,之后取出以4°C、17，OOOx g離心20分鐘，并移除上清液。接著再加入700 μ L75%乙醇于此微量離心管中，并以4°C、17，OOOx g離心5分鐘，移除上清液，之后倒置干燥(37°C，IOmin)。于干燥后，加入100 μ L的TE buffer (IOmM Tris.HCl, pH8.0, ImM EDTA)于此微量離心管中以回溶DNA。最后將回溶之DNA置入_20°C冰箱保存備用。
[0250]2.引子設計:
[0251]在引子設計方面，以財團法人工業技術研究院所建置植物藥材基因體DNA之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的DNA序列數據庫，經過比對分析設計而成。所設計之引子可復制出涵蓋植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域之部分的序列、轉錄間隔區I (ITSl)的序列、轉錄5.8S核糖體RNA區域之序列、轉錄間隔區2 (ITS2)之序列及/或轉錄28S核糖體RNA區域之部分的序列，或涵蓋轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間可供辨識的部份序列。
[0252]然后以不同組合，篩選出最有效率且可穩定復制出大部份藥材的DNA片段以供高解析雙股分離動力分析(high-resolution melting analysis, HRMA)圖譜數據庫建置的引子對。
[0253]3.聚合酶鏈鎖反應(polymerase chain reaction, PCR):
[0254]將所設計引子不同組合以市售聚合酶套組PhireR Plant Direct PCR Kit (F-130)對各植物藥材之DNA樣本進行聚合酶鏈鎖反應。
[0255]15yL反應液中包括1.5yL DNA(IOng-1mg)、7.5 μ L2 X聚合酶鏈鎖反應反應緩沖液、順向及逆向引子(10μΜ)0.75μ L,0.15yL(5units/μ L)TaqDNA 聚合酶(Phire)、
0.5 μ L DMS0> 1.5 μ L LCGreen plus+ (Idaho)及 2.35 μ L 無菌水。
[0256]聚合酶鏈鎖反應之反應條件如下:[0257]步驟1:98 °C，2 分鐘；
[0258]步驟2:下列(I)至⑶進行34次循環:
[0259](1)98°C，5 秒;
[0260](2)66°C，5 秒；
[0261](3) 72 °C，10 秒;
[0262]步驟3:72 °C，I 分鐘。
[0263]4.高解析雙股分離動力分析分析:
[0264]將上述聚合酶鏈鎖反應之產物進行高解析雙股分離動力分析。取聚合酶鏈鎖反應產物10 μ L加入毛細管(Roche)中，再放入LS32樣品孔中(LightScanner32, IdahoTechnology Inc.)。預熔解溫度設定如下:99°C,30 秒；40°C, 30秒。溶解溫度設定范圍如下:65°C至99°C，溫度變化速度0.30C /s。偵測上述溫度范圍中的突光變化，最后再以軟件LightScamierw 32software releasel.0.0.23進行分析獲得各
植物藥材特定的辨識圖譜。
[0265]5.電泳分析:
[0266]取3μ L上述 其與3 μ LlOObp分子量標準品(ladder marker)分別加載
1.2% 洋菜糖膠體(Agarose gel, Invitrogen),并于 I XTAE(0.04M Tris, 0.04M 醋酸鹽(acetate), 0.0OlM EDTA)緩沖液中進行電泳(150Volts，20分鐘)。電泳完成后，將膠體置于含溴化乙錠(ethidium bromide)的水溶液10分鐘后置于UV燈下照相紀錄。
[0267]C.實施例1
[0268]植物用引子對最優化:
[0269]根據植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的序列，設計出12條引子，如表1所示。
[0270]表1、本發明實施例之引子
[0271]
【權利要求】
1.一種鑒別一植物藥材種類的方法，包括: (a)獲得一待測植物藥材之DNA樣本； (b)將該待測植物藥材之DNA樣本以至少一引子對進行一聚合酶鏈鎖反應以獲得一聚合酶鏈鎖反應產物； (c)將該聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得該待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜；以及 (d)將待測植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜與一已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜進行比對。
2.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法其中該至少一引子對系根據在植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的序列所設計。
3.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法，其中該至少一引子對包括至少一順向引子與至少一逆向引子的組合， 其中該至少一順向引子系擇自由下列所組成之群組: 序列辨識號:1之引子、序列辨識號:2之引子、序列辨識號:3之引子、序列辨識號:4之引子、序列辨識號: 5之引子、序列辨識號:6之引子及與序列辨識號:1、序列辨識號:2、序列辨識號:3、序列辨識號:4、序列辨識號:5或序列辨識號:6具70%以上序列相似度之引子， 且其中該至少一逆向引子系擇自由下列所組成之群組: 序列辨識號:7之引子、序列辨識號:8之引子、序列辨識號:9之引子、序列辨識號:10之引子、序列辨識號:11之引子、序列辨識號:12之引子及與序列辨識號:7、序列辨識號:8、序列辨識號:9、序列辨識號:10、序列辨識號:11或序列辨識號:12具70%以上序列相似度之引子。
4.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法,其中該至少一引子對包括:序列辨識號:I之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號-J之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合。
5.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法，其中該至少一引子對為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。
6.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法，其中該至少一引子對為序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合。
7.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法，其中該已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜系獲自一數據庫，其中該數據庫系由至少一種已知植物藥材之DNA分別根據該相同之至少一引子而產生的聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析所分別獲得的高解析雙股分離動力分析圖譜所組成。
8.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法，其中該步驟(b)更包括，同時將該已知植物藥材之DNA樣本以該相同之至少一引子對進行另一聚合酶鏈鎖反應以獲得該已知植物藥材之一聚合酶鏈鎖反應產物，又該步驟(C)更包括，將該已知植物藥材之聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得該已知植物藥材的高解析雙股分離動力分析圖譜。
9.權利要求1所述之一植物藥材種類的方法，其中適用于該鑒別植物藥材的方法之植物藥材的科別包括十字花科、三白草科、大戟科、小蘗科、山茱萸科、川續斷科、五加科、天南星科、木通科、木犀科、木蘭科、毛茛科、水龍骨科、冬青科、玄參科、山柑科、禾本科、列當科、百合科、忍冬科、杜仲科、豆科、車前草科、防己科、防已科、使君子科、蕓香科、虎耳草科、金粟蘭科、金絲桃科、柳葉菜科、苦木科、茄科、香蒲科、唇形科、桔?？?、桑科、桑寄生科、胡麻科、馬兜鈴科、馬錢科、馬鞭草科、茜草科、商陸科、旋花科、莎草科、莧科、蛇菰科、無患子科、紫金?？啤⒆喜菘?、紫董科、菊科、瑞香科、葫蘆科、葡萄科、鼠李科、睡蓮科、遠志科、鳶尾科、蒺藜科、蝶形花科、衛矛科、寥科、澤灣科、錦葵科、錦葵科、爵床科、姜科、薔薇科、傘形科、罌粟科、獼猴桃科、蘭科、蘿摩科、茶茱萸科、雨久花科、柿樹科、桃金娘科、龍腦香科、木麻黃科、景天科、夾竹桃科、石蒜科、楊梅科、松蘿科、菠蘿科、漆樹科、梧桐科、清風藤科、槭樹科、懸鈴木科、番荔枝科、七葉樹科、胡桃科、旅人蕉科或龍舌蘭科。
10.一種建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法，包括: (a)獲得至少一種已知植物藥材之DNA樣本； (b)將該至少一種已知植物藥材之DNA樣本以相同之至少一引子對分別進行聚合酶鏈鎖反應以獲得分別之聚合酶鏈鎖反應產物； (c)將該分別之聚合酶鏈鎖反應產物進行高解析雙股分離動力分析以獲得該至少一種已知植物藥材之分別的高解析雙股分離動力分析圖譜；以及 (d)將該至少一種已知植物藥材之分別的高解析雙股分離動力分析圖譜集合成一數據庫。
11.權利要求10所述之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法，其中該至少一引子對系根據在植物基因體DNA序列之轉錄18S核糖體RNA區域至轉錄28S區域核糖體RNA區域之間的序列所設計。
12.權利要求10所述之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法，其中該至少一引子對包括至少一順向引子與至少一逆向引子的組合， 其中該至少一順向引子系擇自由下列所組成之群組: 序列辨識號:1之引子、序列辨識號:2之引子、序列辨識號:3之引子、序列辨識號:4之引子、序列辨識號:5之引子、序列辨識號:6之引子及與序列辨識號:1、序列辨識號:2、序列辨識號:3、序列辨識號:4、序列辨識號:5或序列辨識號:6具70%以上序列相似度之引子， 且其中該至少一逆向引子系擇自由下列所組成之群組: 序列辨識號:7之引子、序列辨識號:8之引子、序列辨識號:9之引子、序列辨識號:10之引子、序列辨識號:11之引子、序列辨識號:12之引子及與序列辨識號:7、序列辨識號:8、序列辨識號:9、序列辨識號:10、序列辨識號:11或序列辨識號:12具70%以上序列相似度之引子。
13.權利要求10所述之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法，其中該至少一引子對包括:序列辨識號:1之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合。
14.權利要求10所述之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法，其中該至少一引子對為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。
15.權利要求10所述之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法，其中該至少一引子對為序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合。
16.一種用于鑒別一植物藥材種類的數據庫，其系根據權利要求10所述之建構用于鑒別一植物藥材種類之數據庫的方法來建構。
17.權利要求16所述之用于鑒別一植物藥材種類的數據庫，其中該至少一引子對包括:序列辨識號:1之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合。
18.權利要求16所述之用于鑒別一植物藥材種類的數據庫，其中該至少一引子對為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。
19.權利要求16所述之用于鑒別一植物藥材種類之數據庫，其中該至少一引子對為序列辨識號:4之引子與序列辨識號-J之引子的組合。
20.權利要求16所述之用于鑒別一植物藥材種類的數據庫，其中適用該用于鑒別一植物藥材種類之數據庫來進行鑒別之植物藥材的科別包括十字花科、三白草科、大戟科、小蘗科、山茱萸科、川續斷科、五加科、天南星科、木通科、木犀科、木蘭科、毛茛科、水龍骨科、冬青科、玄參科、山柑科、禾本科、列當科、百合科、忍冬科、杜仲科、豆科、車前草科、防己科、防已科、使君子科、蕓香科、虎耳草科、金粟蘭科、金絲桃科、柳葉菜科、苦木科、茄科、香蒲科、唇形科、桔?？?、?？?、桑寄生科、胡麻科、馬兜鈴科、馬錢科、馬鞭草科、茜草科、商陸科、旋花科、莎草科、莧科、蛇菰科、無患子科、紫金牛科、紫草科、紫董科、菊科、瑞香科、葫蘆科、葡萄科、鼠李科、睡蓮科、遠志科、鳶尾科、蒺藜科、蝶形花科、衛矛科、寥科、澤瀉科、錦葵科、錦葵科、爵床科、姜科、薔薇科、傘形科、罌粟科、獼猴桃科、蘭科、蘿摩科、茶茱萸科、雨久花科、柿樹科、桃金娘科、龍腦香科、木麻黃科、景天科、夾竹桃科、石蒜科、楊梅科、松蘿科、菠蘿科、漆樹科、梧桐科、清風藤科、槭樹科、懸鈴木科、番荔枝科、七葉樹科、胡桃科、旅人蕉科或龍舌蘭科。
21.一種用于鑒別一植物藥材種類的引子對，包括: 一順向引子與一逆向引子的組合， 其中該順向引子系擇自由下列所組成之群組: 序列辨識號:1之引子、序列辨識號:2之引子、序列辨識號:3之引子、序列辨識號:4之引子、序列辨識號:5之引子、序列辨識號:6之引子及與序列辨識號:1、序列辨識號:2、序列辨識號:3、序列辨識號:4、序列辨識號:5或序列辨識號:6具70%以上序列相似度之引子， 且其中該逆向引子系擇自由下列所組成之群組: 序列辨識號:7之引子、序 列辨識號:8之引子、序列辨識號:9之引子、序列辨識號:10之引子、序列辨識號:11之引子、序列辨識號:12之引子及與序列辨識號:7、序列辨識號:8、序列辨識號:9、序列辨識號:10、序列辨識號:11或序列辨識號:12具70%以上序列相似度之引子。
22.權利要求21所述之用于鑒別一植物藥材種類的引子對，其中該引子對包括:序列辨識號:1之引子與序列辨識號:9之引子的組合、序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合、序列辨識號:1與序列辨識號:12之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:2之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:7之引子的組合、序列辨識號:3之引子與序列辨識號:8之引子的組合、序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合及/或序列辨識號:4之引子與序列辨識號:8之引子的組合。
23.權利要求21所述之用于鑒別一植物藥材種類的引子對，其中該引子對為序列辨識號:1之引子與序列辨識號:10之引子的組合。
24.權利要求21所述之用于鑒別一植物藥材種類的引子對，其中該引子對為序列辨識號:4之引子與序列辨識號:7之引子的組合。
【文檔編號】C12Q1/68GK103898204SQ201210590190
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2012年12月28日 優先權日:2012年12月28日
【發明者】邱淑嬌, 陳惠玲, 唐瑞霜, 李承榆, 魏培萱 申請人:財團法人工業技術研究院