一種用堿裂解大量提取質粒的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用堿裂解大量提取質粒的方法。步驟如下：首先準備適當?shù)囊略澹粚⑵渚恨D移到已經(jīng)過高溫滅菌的離心管中；棄上清；菌體中加入預熱的溶液，渦旋振蕩，搖晃均勻；靜置5-8分鐘；用上部將其中的沉淀過濾到新的離心管中；加入2-2.5倍提及的一乙醇胺；混合均勻后再次靜置；了乙醇洗滌，沉淀；室溫晾干即可；所述衣藻，要求已至其生長中后期，使用前24小時，需要將其置于離心管中，高速離心運轉，取其上清，涂膜至瓊脂平板，光照23攝氏度的條件下，持續(xù)48小時；其中晾干后所得質粒需要加入異丙醇，質量分數(shù)為65%。本發(fā)明的有益效果是：操作簡單，成本較低，實驗條件要求不高，可以用于反復性操作，獲得預期效果。
【專利說明】一種用堿裂解大量提取質粒的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生化實驗領域，具體涉及一種用堿裂解大量提取質粒的方法。
【背景技術】
[0002]堿裂解法是提取質粒的最常用也最有效的方法，是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異達到分離目的。其利用原理是:高pH使質粒DNA和染色體DNA變性，同時沉淀蛋白質。再將pH值調至中性，質粒DNA較小，很容易復性成雙鏈。而染色體DNA較大，不會復性，纏結成網(wǎng)狀不溶物質，從而可以通過離心除去。堿裂解法是較常用的提取的方法。其優(yōu)點是收獲率高，適于多數(shù)的菌株，所得產(chǎn)物經(jīng)純化后可滿足多數(shù)的DNA重組操作。十二烷基磺進行質粒的小量制備。十二烷基磺酸鈉(SDS)是一種陰離子表面活性劑，它既能使細菌細胞裂解，又能使一些蛋白質變性。用SDS處理細菌后，會導致細菌細胞破裂，釋放出質粒DNA和染色體DNA，兩種DNA在強堿環(huán)境都會變件。由于質粒和主染色體的拓撲結抱不同，變性時前者雖然兩條鏈分離，卻仍然纏繞在一起不分開；但后者完全變性分甚至出現(xiàn)斷裂，因此，當加入PH4.8的酸件乙酸鉀降低溶液pH值，使溶液pH值恢復較低的近中性水平時，質粒的兩條小分子單鏈可迅速復性恢復雙鏈結構，但是主染色體DNA則難以復性。在離心時，大部分主染色體與細胞碎片，雜質等纏繞一起被沉淀，而可溶性的質粒DNA留在上清夜中。再由異丙醇沉淀、乙醇洗滌，可得到純化的質粒DNA。
【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明要解決的技術問題在于，針對現(xiàn)有技術缺陷，提供一種技術方案:
一種用堿裂解大量提取質粒的方法，步驟如下:首先準備適當?shù)囊略澹粚⑵渚恨D移
到已經(jīng)過高溫滅菌的離心管中；棄上清；菌體中加入預熱的溶液，渦旋振蕩，搖晃均勻；靜置5-8分鐘；用上部將其中的沉淀過濾到新的離心管中；加入2-2.5倍提及的一乙醇胺；混合均勻后再次靜置；了乙醇洗滌，沉淀；室溫晾干即可。
[0004]本發(fā)明中，所述衣藻，要求已至其生長中后期，使用前24小時，需要將其置于離心管中，高速離心運轉，取其上清，涂膜至瓊脂平板，光照23攝氏度的條件下，持續(xù)48小時。
[0005]本發(fā)明中，其中晾干后所得質粒需要加入異丙醇，質量分數(shù)為65%。
[0006]本發(fā)明的有益效果是:操作簡單，成本較低，實驗條件要求不高，可以用于反復性操作，獲得預期效果。
【具體實施方式】
[0007]—種用堿裂解大量提取質粒的方法，步驟如下:首先準備適當?shù)囊略澹粚⑵渚恨D移到已經(jīng)過高溫滅菌的離心管中；棄上清；菌體中加入預熱的溶液，渦旋振蕩，搖晃均勻；靜置5-8分鐘；用上部將其中的沉淀過濾到新的離心管中；加入2-2.5倍提及的一乙醇胺；混合均勻后再次靜置；了乙醇洗滌，沉淀；室溫晾干即可。所述衣藻，要求已至其生長中后期，使用前24小時，需要將其置于離心管中，高速離心運轉，取其上清，涂膜至瓊脂平板，光照23攝氏度的條件下，持續(xù)48小時；其中晾干后所得質粒需要加入異丙醇，質量分數(shù)為65%。
[0008]以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發(fā)明披露的技術范圍內，根據(jù)本發(fā)明的技術方案及其發(fā)明構思加以等 同替換或改變，都應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種用堿裂解大量提取質粒的方法，其特征在于，步驟如下:首先準備適當?shù)囊略澹粚⑵渚恨D移到已經(jīng)過高溫滅菌的離心管中；棄上清；菌體中加入預熱的溶液，渦旋振蕩，搖晃均勻；靜置5-8分鐘；用上部將其中的沉淀過濾到新的離心管中；加入2-2.5倍提及的一乙醇胺；混合均勻后再次靜置；了乙醇洗滌，沉淀；室溫晾干即可。
2.如權利要求1所述的一種用堿裂解大量提取質粒的方法，其特征在于，所述衣藻，要求已至其生長中后期，使用前24小時，需要將其置于離心管中，高速離心運轉，取其上清，涂膜至瓊脂平板，光照23攝氏度的條件下，持續(xù)48小時。
3.如權利要求1所述的一種用堿裂解大量提取質粒的方法，其特征在于，其中晾干后所得質粒需要加入異丙醇 ，質量分數(shù)為65%。
【文檔編號】C12N15/10GK103614362SQ201310536448
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權日:2013年11月4日
【發(fā)明者】辛竹 申請人:辛竹