一種酶催化法合成3-O-β-D-半乳糖基甘油酯的方法
【專利摘要】本發明公開了一種酶法制備3-O-β-D半乳糖基甘油脂肪酸酯的方法，該方法以脂肪酶為催化劑，在有機溶劑體系中進行3-O-β-D半乳糖基甘油和脂肪酸的酯化反應，經分離精制后可獲得3-O-β-D半乳糖基甘油單酯和二酯。本發明具有反應條件溫和、反應選擇性較強、所用反應介質較安全、工藝簡單、成本低等優點。
【專利說明】一種酶催化法合成3-0- β -D-半乳糖基甘油酯的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物催化【技術領域】，具體涉及酶法制備3-0-β -D半乳糖基甘油酯(單酯和二酯)的方法。
【背景技術】
[0002]半乳糖基甘油糖脂是半乳糖通過其還原末端以α -或β -糖苷鍵與親脂性的長鏈單脂酰基或二脂酰基甘油相連接起來的一類化合物。半乳糖基甘油糖脂具有表面活性、抗病毒、抗腫瘤、抗菌、抗炎、抗氧化等作用，尤其是抗腫瘤活性引起了人們的高度關注。另外半乳糖基甘油糖脂在細菌的耐熱性方面以及植物實現光合作用方面的活性也有相關的研究報道。這些研究肯定了半乳糖基甘油糖酯的潛在食藥用價值和生物學研究意義。
[0003]根據制備方法的不同，甘油糖脂可以分為天然甘油糖脂和合成甘油糖脂。天然甘油糖脂是從植物或藻類中經過分離提取獲得的。由于天然植物或藻類中甘油糖脂的含量很低，且多以混合物的形式存在，分離純化困難，因此天然甘油糖脂生產成本高，不能滿足市場需求。Sigma商品目錄中顯示純度95%單半乳糖甘油二酯(提取自面粉)，Img的售價為3580.2元。因此，人工合成甘油糖脂是最有效的解決辦法。根據文獻報道，半乳糖基甘油酯的制備方法有很多，如:
[0004]Morinoto et al., Tetrahedron 1995，51 (23):6443-6450
[0005]
【權利要求】
1.一種酶催化法合成3-0-β -D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是，包括以下步驟: 酶促酯化反應:脂肪酶加入到含有3-0-β -D半乳糖基甘油和脂肪酸的有機溶劑中，進行酶促水解反應，然后加入分子篩繼續反應； 過濾去除脂肪酶； 對3-0-β -D半乳糖基甘油酯進行分離純化，即得。
2.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:所述的脂肪酸是己酸、癸酸、月桂酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸或亞麻酸中的一種。
3.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:所述的有機溶劑是丙酮、叔丁醇、乙腈、叔戊醇或二氯甲烷中的一種。
4.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:所述的脂肪酶是Novozyme 435脂肪酶、洋蔥假單胞菌脂肪酶或Lipozyme RMIM脂肪酶中的一種。
5.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:3-0-β-D半乳糖基甘油和脂肪酸的摩爾濃度比為1:8~1:20，脂肪酶的加入量為10~30mg/ml,分子篩的加入量為70~80mg/ml。
6.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步驟(1)所述的分子篩為4Α分子篩，在酶促水解反應后的第三小時加入。
7.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步驟(1)的酶促酯化反應在水浴搖床中進行，搖床轉速為15(Tl70rpm，反應時間為5~15h，反應溫度為40~55°C。
8.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步驟(2)中分離脂肪酶采用過濾的方式。
9.根據權利要求1所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步驟(3)的分離純化依次為真空旋轉和硅膠柱層析。
10.根據權利要求9所述的酶催化法合成3-0-β-D半乳糖基甘油酯的方法，其特征是:步驟(3)在真空旋轉之后、硅膠柱層析之前用氯仿-水萃取。
【文檔編號】C12P19/44GK103667397SQ201310537737
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月4日 優先權日:2013年11月4日
【發明者】趙海珍, 陸兆新, 魏微, 齊丹萍, 張充, 呂鳳霞, 別小妹 申請人:南京農業大學