一種顯色觸酶反應液及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種顯色觸酶反應液，其含有以下組分：過氧化氫、氣泡保護劑和顏色指示劑。本發明的顯色觸酶反應液具有以下優點：1）穩定性高，產品有效期從傳統時間的一個星期延長至1年；2）可產生顯色反應，相對于傳統的無色氣泡更加方便肉眼觀察結果，提高了實驗的準確性及靈敏度；3）反應產生的氣泡量大，氣泡保存時間長，與傳統方法相比提高了檢測的靈敏度；4）生物安全性能得到大大的提高。
【專利說明】一種顯色觸酶反應液及其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于檢測試劑領域，，具體涉及一種變色觸酶反應試劑及其應用。
【背景技術】
[0002]自然界和人體存在的微生物種類繁多，且新的微生物不斷涌現，這給從事微生物檢測的工作者帶來了很大的困難與挑戰，而且通過空氣傳染的微生物也在不斷增多，給臨床操作者的人身安全帶來很大的威脅。如何將感染人類的病原微生物快速準確地鑒定，同時減少生物安全的傳染，最大限度保證臨床操作者的人身安全。這兩方面內容是擺在臨床微生物研究人員及診斷試劑廠家面前的一個非常重要的課題。
[0003]觸酶又稱過氧化氫酶，具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫成為水和原子態氧，繼而形成氧分子，出現氣泡。大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶，可通過觸酶反應進行檢測。但傳統的觸酶反應有一定的局限性，主要表現為:1、靈敏度不高，產生氣泡少；
2、產生的氣泡消失快，影響結果的判讀，經常誤判；3、產生的氣泡無色透明，對臨床操作者的經驗提出了較高的要求，主觀因素較大；4、氣體放量過快，氣溶膠給操作者的人身安全帶來很大的威脅；5、試劑穩定性差，放置室溫一個星期就失效需要從新配制。
[0004]針對上述不足，本發明旨在對傳統觸酶反應作出改進。

【發明內容】

[0005]本發明的目的在于提供一種可以顯色的觸酶反應液，及其在檢測產過氧化氫酶細菌上的應用。
`[0006]本發明所采取的技術方案是:
一種顯色觸酶反應液，其含有以下組分:過氧化氫、氣泡保護劑和顏色指示劑。
[0007]所述氣泡保護劑為油基二羥乙基氧化胺。
[0008]所述顏色指示劑為pH指示劑、氧化還原指示劑或有色染料。
[0009]作為優選的，所述pH指示劑包括:溴氯酚藍、溴甲酚綠、溴酚藍等中的任一種； 所述氧化還原指示劑包括:亞甲基藍、二苯胺磺酸鈉中的任一種；
所述有色染料包括:結晶紫、復紅中的任一種。
[0010]作為優選的，反應液中各組分的濃度為:過氧化氫2%~10%，氣泡保護劑5%~20%，顏色指示劑0.005%~0.01%，溶劑為水。
[0011]作為優選的，所述反應液中還可以含有焦磷酸鈉和EDTA，可提高反應液的穩定性。
[0012]作為優選的，反應液中各組分的濃度為:過氧化氫2%~10%，焦磷酸鈉0.001%~
0.01%,氣泡保護劑5%~20%, EDTA0.001%~0.05%,顏色指示劑0.005%~0.01%,溶劑為水。
[0013]一種顯色觸酶反應試劑盒，其含有以上所述的顯色觸酶反應液。
[0014]所述試劑盒中的顯色觸酶反應液裝于黑色滴瓶或其它避光材料的瓶子中。
[0015]一種產過氧化氫酶細菌的檢測方法，包括將以上所述的顯色觸酶反應液滴加于待檢樣品上，根據是否出現氣泡和顏色變化來判斷樣品中是否含有產過氧化氫酶的細菌。
[0016]本發明的有益效果是:
本發明顯色觸酶反應液的檢測原理是:產過氧化氫酶的細菌能催化由氫離子和氫氧根組成的過氧化氫成為水和原子態氧，繼而形成氧分子，出現氣泡，由于氫離子的減小和氧氣的產生導致顏色指示劑發生顏色的改變。油基二羥乙基氧化胺加強了氣泡膜上的粘度從而起到保護氣泡的作用。本發明的顯色觸酶反應液具有以下優點:
(1)穩定性高，產品有效期從傳統的一個星期延長至I年；
(2)可產生顯色反應，相對于傳統的無色氣泡更加方便肉眼觀察結果，提高了實驗的準確性及靈敏度；
(3)反應產生的氣泡量大，氣泡保存時間長，與傳統方法相比提高了檢測的靈敏度；
(4)生物安全性能得到大大的提高，原因是傳統觸酶產生的氣泡快速破裂造成氣溶膠的污染，本專利產品中有氣光保護劑就是防止氣泡快速破裂造成氣溶膠的污染。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為本發明產品與傳統觸酶試劑的比較；
圖2為本發明產品的檢測結果示意圖；
圖3為本發明實施例1~3顯色觸酶反應液的檢測結果圖。
【具體實施方式】
[0018]下面結合實施例對本發明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0019]實施例1
一種顯色觸酶反應液，其組分為:過氧化氫3.5%，油基二羥乙基氧化胺10%，溴氯酚藍
0.005%，溶劑為水。
[0020]實施例2
一種顯色觸酶反應液，其組分為:過氧化氫3%，焦磷酸鈉0.008%，油基二羥乙基氧化胺15%，EDTA0.005%,溴氯酚藍0.005%,溶劑為水。
[0021]實施例3
一種顯色觸酶反應液，其組分為:過氧化氫3.5%，焦磷酸鈉0.008%，油基二羥乙基氧化胺15%, EDTA0.005%，亞甲基藍0.005%，溶劑為水。
[0022]實施例4
一種顯色觸酶反應液，其組分為:過氧化氫2%，焦磷酸鈉0.01%,油基二羥乙基氧化胺20%, EDTA0.001%,溴酚藍 0.01%,溶劑為水。
[0023]利用本反應液進行觸酶反應，未發生反應時為黃色澄清液體，出現藍色氣泡時為陽性。
[0024]實施例5
一種顯色觸酶反應液，其組分為:過氧化氫10%，焦磷酸鈉0.001%，油基二羥乙基氧化胺5%, EDTA0.05%,復紅0.01%,溶劑為水。
[0025]利用本反應液進行觸酶反應，未發生反應時為紅色澄清液體，出現紅白色氣泡時為陽性。[0026]應用例:
用上述實施例1~3的顯色觸酶反應液分別檢測過氧化氫酶陽性菌(金色葡萄球菌)和過氧化氫酶陰性菌(鏈球菌)，實驗結果見圖3。檢測結果表明，本發明的檢測方法相對于傳統的觸酶方法更加方便肉眼觀察結果，且實驗的準確性及靈敏度高。
[0027]將本發明實施例1的顯色觸酶反應液置于避光材料瓶子內常溫可保存12個月。
[0028]實施例2~5的顯色觸酶反應液置于避光材料瓶子內常溫可保存18個月，保質期內檢測結果無異，由此可見，本發明的顯色觸酶反應液穩定性高，可長期保存不變質。
[0029]以上實施例僅為介紹本發明的優選案例，對于本領域技術人員來說，在不背離本發明精神的范圍內所進行的任何顯而易見的變化和改進，都應被視為本發明的一部分。
【權利要求】
1.一種顯色觸酶反應液，其含有以下組分：過氧化氫、氣泡保護劑和顏色指示劑。
2.根據權利要求1所述的反應液，其特征在于，所述氣泡保護劑為油基二羥乙基氧化胺。
3.根據權利要求1所述的反應液，其特征在于，所述顏色指示劑為pH指示劑、氧化還原指示劑或有色染料。
4.根據權利要求3所述的反應液，其特征在于，所述pH指示劑包括：溴氯酚藍、溴甲酚綠、溴酚藍等中的任一種； 所述氧化還原指示劑包括：亞甲基藍、二苯胺磺酸鈉中的任一種； 所述有色染料包括：結晶紫、復紅中的任一種。
5.根據權利要求1~4任一項所述的反應液，其特征在于，反應液中各組分的濃度為：過氧化氫2%~10%，氣泡保護劑5%~20%，顏色指示劑0.005%~0.01%，溶劑為水。
6.根據權利要求1所述的顯色觸酶反應液，其特征在于，所述反應液中還含有焦磷酸鈉和EDTA。
7.根據權利要求6所述的反應液，其特征在于，反應液中各組分的濃度為：過氧化氫2%~10%,焦磷酸鈉0.001%~0.01%,氣泡保護劑5%~20%, EDTA0. 001%~0.05%,顏色指示劑0.005%~0.01%，溶劑為水。
8.—種顯色觸酶反應試劑盒，其含有權利要求1~7任一項所述的顯色觸酶反應液。
9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于顯色觸酶反應液裝于黑色滴瓶或其它避光材料的瓶子中。
10.一種產過氧化氫酶細菌的檢測方法，包括將權利要求1~7任一項的顯色觸酶反應液滴加于待檢樣品上，根據是否出現氣泡和顏色變化來判斷樣品中是否含有產過氧化氫酶的細菌。
【文檔編號】C12Q1/04GK103602717SQ201310576566
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月18日 優先權日:2013年11月18日
【發明者】林華青, 蔡桂林 申請人:珠海迪爾生物工程有限公司