具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及救必應(yīng)為冬青科植物鐵冬青Ilex?roundda?Thunb.的干燥樹皮或根皮，具體涉及具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物及其應(yīng)用。本發(fā)明在救必應(yīng)傳統(tǒng)功效的研究基礎(chǔ)上，制備其活性提取物，和現(xiàn)有技術(shù)相比，提出了救必應(yīng)提取物可以對(duì)抗H22荷瘤小鼠的腫瘤增殖，且提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)抗氧化作用，表明該活性提取物對(duì)腫瘤增長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。
【專利說(shuō)明】具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥用植物鐵冬青樹皮(The bark of Ilex rotunda Thumb)-救必
應(yīng)，具體涉及具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤是是世界范圍內(nèi)多發(fā)的疾病之一，大多數(shù)患者確診時(shí)已屬癌癥晚期，目前治療手段以手術(shù)化療及放療相結(jié)合的綜合立體療法，以期減少腫瘤的多藥耐藥的發(fā)生。目前抗腫瘤藥物對(duì)正常癌細(xì)胞殺傷同時(shí)也破壞機(jī)體免疫功能，帶來(lái)嚴(yán)重的副作用。
[0003]救必應(yīng)為冬青科植物鐵冬青Ilex roundda Thunb.的干燥樹皮或根皮，味苦性寒，具清熱解毒、消腫止痛、祛風(fēng)利濕、跌打損傷等功效，始載于《嶺南采藥錄》，為我國(guó)南方地區(qū)民間常用草藥。常生于低中海拔的溫濕肥沃的疏林中、海邊溪旁或丘陵地帶。又名白木香、羊不吃、觀音柴等。救必應(yīng)作為傳統(tǒng)民間藥，被廣泛用于少數(shù)民族地區(qū)，其具顯著的“清熱解毒”作用。
[0004]救必應(yīng)的現(xiàn)代藥理學(xué)對(duì)其藥理活性研究鮮有報(bào)道。到目前為止，未見以救必應(yīng)為原料制備活 性提取物的制備技術(shù)，也未見以救必應(yīng)為主要組成組分應(yīng)用抗腫瘤藥品或保健品的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物及其應(yīng)用。
[0006]具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物，其制備方法具有以下特征:具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物，其制備方法具有以下特征:將救必應(yīng)粉碎至細(xì)粉，乙醇提取3次，濾過(guò)，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物。
[0007]所述細(xì)粉為過(guò)80篩，所述乙醇提取為采用乙醇為溶劑超聲輔助提取。
[0008]所述超聲輔助提取為1/20的固液比，40KHz的工作頻率，溫度為40°C，時(shí)間30min。
[0009]本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種上述的方法制備得到的具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物在制備抗腫瘤藥物或抗腫瘤保健品中的應(yīng)用。該提取物對(duì)H22荷瘤小鼠具有明顯的抗腫瘤作用，具有提高機(jī)體免疫力的作用。
[0010]所述藥物或保健品為片劑、注射劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、薇丸、滴丸劑、湯劑、糖
漿劑、合劑、煎膏劑或浸膏劑或其他藥學(xué)上可接受的載體。
[0011]救必應(yīng)提取物制成膠囊劑時(shí)把救必應(yīng)提取物和載體乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，然后裝膠囊制成膠囊劑。
[0012]救必應(yīng)制成片劑時(shí)，把救必應(yīng)提取物和載體乳糖或玉米淀粉，需要時(shí)加入潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。
[0013]救必應(yīng)提取物制成顆粒劑時(shí)，把救必應(yīng)提取物和稀釋劑乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成顆粒劑。
[0014]救必應(yīng)提取物制成其他劑型時(shí)，可按藥學(xué)常規(guī)方法制備得到，這里不一一贅述。[0015]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明在救必應(yīng)原有化學(xué)成分和傳統(tǒng)功效的研究基礎(chǔ)上，同時(shí)制備其活性提取物，和現(xiàn)有技術(shù)相比，提出了救必應(yīng)提取物可以對(duì)抗H22荷瘤小鼠的腫瘤增殖，且提高機(jī)體免疫力，表明該活性提取物對(duì)腫瘤增長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。因此，救必應(yīng)提取物有望開發(fā)成為新一代安全有效，用于抗腫瘤的藥物或保健品。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)發(fā)明做出進(jìn)一步說(shuō)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不限制本發(fā)明的范圍，在閱讀本發(fā)明后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本發(fā)明所附權(quán)利要求限定的范圍。
[0017]實(shí)施例1
[0018]具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物，其通過(guò)以下方法制備得到:
[0019]將救必應(yīng)粉碎至細(xì)粉，乙醇提取3次，濾過(guò)，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物。
[0020]實(shí)施例2
[0021]具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物，其通過(guò)以下方法制備得到:
[0022]將救必應(yīng)粉碎至過(guò)80目的細(xì)粉，20倍量65%乙醇溶劑超聲輔助提取提取3次，濾過(guò)，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物；所述超聲輔助提取為40KHz的工作頻率，溫度為40°C，時(shí)間30min。
[0023]實(shí)施例3
[0024]救必應(yīng)活性提取物抗·腫瘤實(shí)驗(yàn)研究
[0025]1.實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備
[0026]1.1實(shí)驗(yàn)材料及試劑
[0027]受試藥:使用實(shí)施例1或?qū)嵤├?制備的救必應(yīng)提取物；陽(yáng)性藥:環(huán)磷酰胺，購(gòu)于吉林省腫瘤醫(yī)院；羧甲基纖維素鈉(食品級(jí));生理鹽水等。組織固定液，來(lái)自北京化工廠；組織勻漿機(jī)，江蘇省金壇市恒豐儀器制造有限公司；ALT和AST試劑盒，南京建成生物工程有限公司；TNF-a試劑盒，武漢華美生物工程有限公司；白介素12 (IL-12)試劑盒，武漢華美生物工程有限公司；腫瘤壞死因子(TNF-α )試劑盒，武漢華美生物工程有限公司；小鼠維持飼料，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0028]1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0029]C57小鼠(22_25g),雄性,購(gòu)于吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,進(jìn)行試驗(yàn)。
[0030]1.3 儀器
[0031]鑷子；剪刀；注射器；灌胃針等。電子分析天平(SHIMADZU-AUY220型，日本)；全波長(zhǎng)掃描酶標(biāo)儀，美國(guó)Bio-tek公司。
[0032]2實(shí)驗(yàn)方法
[0033]2.1動(dòng)物分組
[0034]C57小鼠腋下接種H22腫瘤造模成功后共分為6組，灌胃方式為灌胃，如下:對(duì)照組:生理鹽水(CON)陽(yáng)性藥組:環(huán)磷酰胺組(CTX，腹腔注射)。受試藥組:救必應(yīng)低劑量組50mg/Kg (IRE-L)，救必應(yīng)中劑量組 100mg/Kg (IRE-M)，救必應(yīng)高劑量組 200mg/Kg (IRE-H)[0035]2.2藥物的配制
[0036]陽(yáng)性藥:環(huán)磷酰胺20mg/kg，生理鹽水溶解，待腹腔注射；空白給藥組(陰性對(duì)照組):注射用生理鹽水，灌胃給藥；受試藥:灌胃(口服)給藥。
[0037]2.3H22腹水瘤鼠的制備
[0038]取3只普通ICR小鼠，正常飼養(yǎng)I周，用于實(shí)驗(yàn)。于液氮罐中取凍存的H22細(xì)胞，37度復(fù)蘇后，棄去細(xì)胞保存液，用生理鹽水混懸，注射到3只ICR小鼠腹腔中，三天后每天稱重，接種5-7天后，待腹部隆起，接種成功。
[0039]2.4腫瘤鼠的制備
[0040]取接種5-7天的ICR鼠腹水癌細(xì)胞，用生理鹽水制成細(xì)胞個(gè)數(shù)為I X 106/ml的細(xì)胞懸液，以每鼠0.1ml接種于小鼠右腋皮下腫瘤細(xì)胞移植以后，次日，腫瘤小鼠被隨機(jī)分成不同的給藥組，每組12只，開始給藥試驗(yàn)。
[0041]對(duì)照組只給生理鹽水。給藥組救必應(yīng)用生理鹽水配置不同給藥濃度，如救必應(yīng)低劑量組50mg/Kg (IRE-L)，救必應(yīng)中劑量組100mg/Kg (IRE-M)，救必應(yīng)高劑量組200mg/Kg(IRE-H)等，灌胃方式給藥，給藥劑量為0.2ml/10g。陽(yáng)性藥環(huán)磷酰胺，用生理鹽水配置，腹腔注射給藥。[0042]給藥14天(2周)后，小鼠摘眼球取血處死，血清靜置2小時(shí)，離心，取血清測(cè)各種生化指標(biāo)。待測(cè)TNF-α (腫瘤壞死因子)和IL-2 (白介素_2)含量。TNF-α和IL-2測(cè)定采用ELISA酶聯(lián)免疫檢測(cè)法，操作步驟按試劑盒給定說(shuō)明書程序進(jìn)行。
[0043]小心剝?nèi)×鰤K、胸腺和脾臟，分別稱重，計(jì)算數(shù)值。
[0044]2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理
[0045]C57小鼠腫瘤抑制率的計(jì)算:抑制率=(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重X 100%。
[0046]胸腺指數(shù)為每克體重胸腺的毫克數(shù)，脾指數(shù)為每克體重中脾臟的毫克數(shù)，所有的數(shù)據(jù)均進(jìn)行均值和方差處理，參數(shù)值用均值土標(biāo)準(zhǔn)差(Mean土SD)表示，組間比較采用了 T檢驗(yàn)，p〈0.05為有顯著性差異。給藥組間差異顯著性比較，顯著性差異*p〈0.05。
[0047]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0048]3.1對(duì)C57小鼠體重的影響
[0049]試驗(yàn)開始后，隔日計(jì)算小鼠體重變化，確定給藥劑量，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果我們可以看出給藥組與空白對(duì)照組體重相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)?？瞻讓?duì)照組、環(huán)磷酰胺給藥組組、救必應(yīng)高劑量組體重呈下降趨勢(shì)，而其各組增加明顯，但各組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。一般來(lái)說(shuō)，小鼠腫瘤模型造模成功后，各組對(duì)體重?zé)o顯著影響。
[0050]3.2對(duì)C57小鼠H22荷瘤的抑制作用
[0051]統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表5-2。從統(tǒng)計(jì)結(jié)果中我們可以看出，與陰性對(duì)照組相比，陽(yáng)性組(CTX)與其具有顯著性差異(p〈0.01 )，給藥14天后，顯著抑制腫瘤的增值，受試藥中救必應(yīng)IRE-L組，抑制腫瘤增長(zhǎng)不明顯，高劑量IRE-H和中劑量IRE-M組抑制腫瘤增殖明顯，均具有顯著性差異(P〈0.01 )，各組抑制率見下表。
[0052]各組的抑瘤率統(tǒng)計(jì)結(jié)果
[0053]Tab Statistical results of ant1-tumor rate for each group
[0054]
【權(quán)利要求】
1.具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物，其制備方法具有以下特征:將救必應(yīng)草粉碎至細(xì)粉，乙醇提取3次，濾過(guò)，合并提取液，濃縮提取液至得浸膏；真空干燥，既得具有抗腫瘤作用的救必應(yīng)提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其特征在于:所述細(xì)粉為過(guò)80篩，所述乙醇提取為采用乙醇為溶劑超聲輔助提取。
3.如權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物，其特征在于:所述超聲輔助提取為1/20的固液比，40KHz的工作頻率，溫度為40°C，時(shí)間30min。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法制備得到的具有抗腫瘤作用的銅錘玉帶草提取物在制備抗腫瘤藥物或抗腫瘤保健品中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物或保健品為片劑、注射劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、薇丸、滴丸劑、湯劑、糖漿劑、合劑、煎膏劑或浸膏劑或其他藥學(xué)上可接受的載體。`
【文檔編號(hào)】A23L1/29GK103845372SQ201410054590
【公開日】2014年6月11日 申請(qǐng)日期:2014年2月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月18日
【發(fā)明者】趙立春 申請(qǐng)人:廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院