細胞分離裝置制造方法
【專利摘要】本發明公開了一種細胞分離裝置，包括浮動式隔板，離心管及分離液組成，可用于分離淋巴細胞，白細胞，單核細胞，精子等分離試驗，可用于細胞治療和臨床檢驗和科研試驗領域，操作簡單，細胞純度高，安全性高。本發明涉及的細胞分離裝置，安全性高，成本低，適合在臨床和科研領域大量推廣。
【專利說明】細胞分離裝置【技術領域】
[0001]本發明涉及一種浮動隔板式細胞分離裝置，屬于生物學領域，適用于淋巴細胞，白細胞，干細胞等生物細胞的分離，特別適用于細胞治療等高風險、大批量樣本處理的醫療【技術領域】。
【背景技術】
[0002]細胞治療是近幾年興起的疾病治療新技術，是指利用某些具有特定功能的細胞的特性，采用生物工程方法獲取和/或通過體外擴增、特殊培養等處理后，使這些細胞具有增強免疫、殺死病原體和腫瘤細胞、促進組織器官再生和機體康復等治療功效，從而達到治療疾病的目的，細胞治療技術在腫瘤治療中得到廣泛應用，并取得了卓著的成果。隨著該技術的不斷成熟，大批量高效的淋巴細胞分離是其中的一個關鍵環節。目前，普遍采用的是淋巴細胞分離液通過密度梯度法實現細胞分離，但是分離過程中，特別是大批量樣本處理時，血液樣品加入和淋巴細胞分離液時，二者界面很容易發生混合，造成分離效果差，效率低。針對這種情況，美國的BD公司，greinerBio公司,Axis Shield公司以及深圳市達科為生物工程有限公司先后開發了淋巴細胞分離管產品，并申請了專利保護。前面三家公司是采用普通分離管，中間粘上了一層濾網，從而把分離管分成兩個空間，避免血樣與分離液的混合。深圳市達科為生物工程有限公司是采用一種醫用半固體組織，將普通離心管分割成3個空間，分離液，半固體組織與分離液的吸附物和上部空間，從而避免了血樣與分離液的混合。以上技術對于淋巴細胞分 離技術進行了改進，并有效提高了分離效率。但是仍有一定的局限性。
[0003]第一:國外公司采用的隔網式技術，要求技術含量高，成本昂貴，僅有幾家公司可以生產。
[0004]第二:這幾家公司采用的膠水或者半固體組織需要做到無毒，無滲出，基本沒有可能，因為該技術用于分離得到的淋巴細胞經過培養，再次輸入人體，微量的滲出物可能造成嚴重的影響或潛在的危害。
[0005]第三:長時間放置后，分離液體積揮發減少，造成隔板下或半固體組織表面存在氣泡，影響分離效果。
[0006]分離后，自下而上形成了紅細胞，分離液，隔板或半固體組織，分離液，淋巴細胞，血漿幾個分層，再吸取淋巴細胞的同時，很容易把血漿和分離液一并吸出，造成分離純度和得率不高，并且后續洗滌過程中需要加入較多的清洗液，才能把分離物的密度降下來，造成工作量的增加。這也是以上幾家公司的產品同時存在的問題。

【發明內容】

[0007]為了解決以上存在的問題和缺陷，本發明提供了一種應用更廣泛，特別是更加安全，高效，高得率，與目前國內外產品相比更加適合于細胞治療領域的細胞分離管。
[0008]本發明提供以下技術方案:本發明的基礎是采用密度梯度法進行細胞分離，分離管由以下三個部分組成:
通用離心管(15ml或50ml )，微孔板(孔徑0.2~0.8mm,厚度2mm，直徑)，細胞分離液(密度1.0774，滲透壓285)
淋巴細胞分離方法:
1.離心管中加入分離液，放入隔板；
2.將血液樣品(15ml分離管加3~8ml，50ml分離管加3(T40ml)倒入分離罐內，旋緊蓋
子；
3.放入離心機，設置離心力為lOOOg，時間為20min，離心；
4.取出分離管，吸去最上層血清；
5.倒出淋巴細胞層；
6.清洗，離心；
7.染色，計數。
[0009]本方案操作時間最短，加血樣時，直接倒入分離管中，不用擔心二者混合，分離完成后，微孔板隨著管中密度梯度的變化上浮，接近淋巴細胞層的位置。吸去上層血清，最后倒出來的就只有淋巴細胞層，保證了細胞的回收率和純度。傳統的吸取方法速度慢，容易造成溶液各層的混合，影響回收率和純度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1淋巴細胞分離過程示意圖 具體是實施方式
[0011]本發明的淋巴細胞分離管包括通用離心管和微孔隔板兩部分組成，采用通用離心管是增加該技術的通用性，無需專用設備。微孔隔板的直徑比離心管的直徑小0，2 _，邊緣高度5mm，在使用時，可以預先把分離液加入分離管，離心，隔板自然漂浮于分離液液面之上，也可以在使用前加入分離液，離心，然后加入血樣。隔板不需固定在管壁上。I隔板直徑切面的對角線大于離心管直徑，保證隔板不會再分離管中翻轉；2隔板與離心管直徑間隙適中，不能太松或太緊；3在往外倒出淋巴細胞時，由于毛細作用，不會使下層的分離液和紅細胞漏出；4隔板的材料為安全無毒的塑料制品，理化穩定性好，無滲出；5隔板的密度為1.03^1.07之間，確保比血清比重大，比分離液比重小。
[0012]按照上述方法進行離心時，紅細胞透過隔板進入下層，分離液被置換到中層，隔板隨著浮力作用上浮至血清層附近，分離過程見附圖1:1分離管中加入分離液和隔板；2加入血樣；3離心后，離心管的各層分布。
[0013]通過本發明的分離管進行分離試驗，與國內外幾家公司的產品進行對照，結果證明，分離效果非常好，分層條帶清晰，其細胞得率和進口固定隔網式分離管和半固體分離管產品相當，在細胞純度，操作簡便性方面具有顯著的優勢。
[0014]表一:淋巴 細胞得率的比較(單位:106)
Iffl胞得率I普通分離法I固定隔網分離管 I半固體分離管I浮動隔板分離管
15ml 規格 4.12_^80_^96_5.90_
50ml 規格 |29.30!35.86!35.48!35.81
以上四種方法米用同一個血樣，15ml規格加3ml分離液，5ml抗凝血血樣,50ml加15ml分離液，30ml抗凝血血樣。普通分離方法分離之后，用移液槍吸出淋巴細胞層，后面三種方法，吸出上層血清后，采用直接傾倒法。每個品種做3個平行，分離樣品采用細胞計數板計數,求平均值,計算細胞總數。
[0015]以上實驗結果顯示后面三種方法細胞得率沒有顯著差異，較普通方法得率有一定提聞。
[0016]表二:淋巴細胞純度的比較(單位％)
【權利要求】
1.一種細胞分離裝置，包括離心管和隔離板，其特征在于隔離板可以通過浮力作用，在分離管中發生位置移動，可以避免樣本與分離液混合，同時可以避免分離的目標細胞層與相鄰層的混合。
2.細胞分離裝置中隔離板，其特征在于所選用材料的密度在血清與分離液之間。
3.權利要求2中所述的隔離板，其特征在于材料為理化性能穩定，生物兼容性好，不影響分離細胞的生理生化性能。
4.權利要求2中所述的隔離板，其特征在于隔板上均勻布滿小孔，可以使不同大小的細胞透過隔離板小孔。
【文檔編號】C12M1/12GK103952295SQ201410183838
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2014年5月4日 優先權日:2014年5月4日
【發明者】李文強 申請人:李文強