一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法
【專利摘要】本發明公開一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于,包括如下步驟：提取樣品DNA溶液；獲取樣品DNA條形碼序列：DNA溶液按照預定的PCR體系在預定的循環程序下，進行PCR擴增，得到樣品的DNA條形碼序列；將PCR擴增產物采用1.5％瓊脂糖凝膠電泳分離，目標條帶回收，進行測序，將測序所得到的ABI序列文件用DNAMAN軟件進行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列。將樣品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列與參照序列進行對比，判別樣品所屬。采用本發明的設計方案，使用DNA鑒定技術對蕨麻和鵝絨委陵菜在分子水平進行鑒定，準確率高，結果可靠。
【專利說明】一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物【技術領域】，特別涉及一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法。
【背景技術】
[0002] 蕨麻是鵝絨委陵菜（Potentilla anserina L.)的變種的塊根。蕨麻富含淀粉、蛋 白質、礦質元素、皂苷、總黃酮等營養成分和活性物質，具有較好的營養和藥用價值，質糯， 味甜，口感佳，是我國醫典中記載的藥食兼用的民族食品；鵝絨委陵菜地下部分不膨大，常 常作為飼料和地被植物使用，不能食用。兩者的用途差異大，表型形態卻非常接近，差別不 明顯，還有較多過渡種。鵝絨委陵菜和蕨麻一直是從形態水平上進行分類的，難以區別，經 常造成分類困難，因此，利用分子技術對其進行分類具有重要的現實意義。
【發明內容】
[0003] 為了解決上述區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法的缺點，本發明公開一種區分蕨麻和 鵝絨委陵菜的方法，本發明采用如下技術方案來解決上述技術問題：
[0004] 一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，包括如下步驟：
[0005] a.提取樣品DNA溶液：采用快捷型植物基因組DNA提取試劑盒進行DNA提取，得 到樣品DNA溶液；
[0006] b.獲取樣品DNA條形碼序列：以步驟a提取的DNA溶液為模板，按照預定的 PCR體系在預定的循環程序下，ITS序列采用正向引物（5' -CGTAACAAGGTTTCCGTAGGT-3'） 和反向引物（5' -TGGTTCACGGGATTCTGC-3'）進行PCR擴增；Trn-L序列采用正向引物 (5,-CGAAATCGGTAGACGCTACG-3'），和反向引物（5,-GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3'）進行 PCR擴增；Matk序列采用采用正向引物（5' -TAATTTACGATCAATTCATTC-3'）和反向引物 (5' -GTTCTAGCACAAGAAAGTCG-3'）進行PCR擴增，即得到樣品的DNA條形碼序列；將PCR擴 增產物采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離，目標條帶回收，進行測序，將測序所得到的ABI序 列文件用DNAMAN軟件進行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列。
[0007] c.將樣品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列與參照序列進行對比，判別樣品所 屬。
[0008] 優選的，在上述的一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法中，所述步驟b的PCR體系 為：
[0009]
【權利要求】
1. 一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，包括如下步驟： a. 提取樣品DNA溶液：采用快捷型植物基因組DNA提取試劑盒進行DNA提取，得到樣 品DNA溶液； b. 獲取樣品DNA條形碼序列：以步驟a提取的DNA溶液為模板，按照預定的PCR體系 在預定的循環程序下，ITS序列采用正向引物 (5, -CGTAACAAGGTTTCCGTAGGT-3'）和反向引物 (5' -TGGTTCACGGGATTCTGC-3'）進行PCR擴增；Trn-L序列采用正向引物 (5, -CGAAATCGGTAGACGCTACG-3'），和反向引物 (5' -GGGGATAGAGGGACTTGAAC-3'）進行PCR擴增；Matk序列采用采用正向引物 (5, -TAATTTACGATCAATTCATTC-3'）和反向引物 (5' -GTTCTAGCACAAGAAAGTCG-3'）進行PCR擴增，即得到樣品的DNA條形碼序列；將PCR 擴增產物采用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分離，目標條帶回收，進行測序，將測序所得到的ABI 序列文件用DNAMAN軟件進行拼接和人工校正，得到ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列； c. 將樣品的ITS、Trn-L和Matk的核苷酸序列與參照序列進行對比，判別樣品所屬。
2. 根據權利要求1所述的一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，所述步驟b 的PCR體系為：
3. 根據權利要求1所述的一種區分蕨麻和鵝絨委陵菜的方法，其特征在于，所述步驟 b的循環程序為：①95°C預變性5min ;②95°C變性30s，55/50°C復性30s(ITS/Trn基因擴增 采用551：，]\^1(基因采用50°〇,721：延伸458,30個循環 ；@721：延伸101^11。產物41： 冰箱短期保存或_20°C冰箱長期保存。4.根據權利要求1所述的一種區分蕨麻和鵝絨委陵 菜的方法，其特征在于，在步驟b前還包括DNA質量和濃度檢測步驟b Q : 取2 μ L DNA溶液，加入2 μ L 6 X Loading buf f er和6 μ L ddH20混勻，上樣；電泳緩沖 液1XTBE、1%瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測，電泳結束后，在凝膠成像分析系統上，觀察、拍 昭. 將待檢樣本總DNA溶液，按一定的比例稀釋，用UV-2800紫外分光光度計，測定樣本總 DNA在紫外波長為260和280nm處的吸收值；依據0D26Q和0D28Q值，判斷待檢樣本總DNA的純 度；待檢樣本總 DNA 的純度（μ g .mL-1) = 0D26Q/0. 02XLX 稀釋倍數=0D26QX50y g .ml^X 稀釋倍數，其中L為比色皿光經lcm，0D26Q為260nm波長處的光吸收值，0· 02為每mL溶液內
【文檔編號】C12Q1/68GK104099426SQ201410380396
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年8月4日 優先權日:2014年8月4日
【發明者】李軍喬, 富貴, 白世俊, 韋梅琴, 包錦淵, 閆淑艷 申請人:青海民族大學