以人尿為氮源培養湛江球等鞭金藻的培養基及培養方法
【專利摘要】本發明公開了一種以人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻方法，屬水產養殖領域。湛江球等鞭金藻營養豐富，是對蝦、扇貝、海參、海膽的優質餌料，傳統上采用f/2培養液且采用敞口水泥池培養，培養液成分單調，生長慢，易污染，成本高，效益低，操作費力，現在我采用封閉式光生物反應器充氣培養，以人尿為主要氮源并在培養基中添加了適量生長素貯液，碳酸氫鈉，吲哚乙酸，乙酸鈉，苯甲酸鈉，海藻酸丙二醇酯，β-胡蘿卜素，α-萘乙酸，鈦溶液等成分，不僅變廢為寶，還可獲得有重要餌料價值的海洋微藻，一舉多得，營養更全面、均衡，操作方便，可實現工廠化生產，成本低，效益高，產量提高180％。
【專利說明】以人尿為氮源培養湛江球等鞭金藻的培養基及培養方法

【技術領域】
[0001]本發明屬于水產養殖領域，尤其涉及一種用人尿培養湛江球等鞭金藻的方法。

【背景技術】
[0002]人尿是一種極好的有機肥，特別是尿液儲存了六個月之后堪比金坷垃。尿液主要成分是:水95%,蛋白質0%,葡萄糖0%,尿素1.8%,尿酸0.05%,無機鹽1.1 %。據實驗，1000公斤人尿肥效相當于5公斤純尿素,4000公斤人尿肥效相當于100公斤硫酸銨。人尿作為優質有機肥，具有來源廣、養分全面、肥效持久、成本低廉、保護土壤和環境等優點，深受廣大農民喜愛。科學地施用人糞尿，能收到事半功倍的效果。100公斤人尿中加入0.5公斤硫酸亞鐵，可使人尿中的碳酸及時轉化成性能穩定的硫酸銨，既能保肥除臭，又能防止氮素揮發。100公斤人尿中加入5公斤過磷酸鈣，攪勻后存放一周，能使人尿中極易揮發的碳酸銨轉化成性能穩定的磷酸銨，增加人糞尿中的磷元素，達到以磷保氮的目的。研究表明，人尿是唯一可以替代化肥的速效有機肥并保護土壤。如果一個人一生的尿液全部用于種植，可以生產2噸西紅柿或3噸小麥。
[0003]另外，現代中醫認為，尿“可滋陰降火，止血消瘀。治陰虛發熱，勞傷咳血，吐血，衄血，產后血瘀，血暈，跌打損傷，血瘀作痛”。《唐本草》曰，尿“主卒血攻心,被打內有瘀血,煎服之，一服一升。又主癥積腹滿，諸藥不差者服之皆下血片肉塊。亦主久嗽上氣失聲”。《本草拾遺》曰，尿“主明目益聲，潤肌膚，利大腸，推陳致新，去咳嗽肺痿，唐病”。《日華子本草》記載，尿“止勞渴，嗽，潤心肺，療血悶熱狂，撲損瘀血運絕及困乏。揩灑皮膚治皸裂，能潤澤人。蛇犬等咬，以熱尿淋患處。難產及胞衣不下，即取一升，用姜、蔥各一分煎三、兩沸，乘熱飲，便下。吐血，鼻洪，和生姜一分，絞汁，乘熱頓飲瘥”。《醫林纂要》認為，尿“通利三焦，降熱去瘀，滋補心血，降瀉腎邪。”
[0004]雖然人尿在作物、蔬菜、果樹種植和醫藥上得到了廣泛應用，但在海洋微藻特別是餌料微藻的培養上應用極少，這限制了人尿的進一步開發利用，而我的實驗研究表明，人尿對餌料微藻湛江球等鞭金藻的生長發育、產量提高效果極好，這不僅為人尿開發應用開辟了新途徑，而且還能使人尿發揮出更大的經濟價值。
[0005]湛江球等鞭金藻Isochrysis galbana隸屬金藻門chrysophyta,金藻綱chrysophyceae,等鞭金藻目Isochrysidales,等鞭金藻科Isochrysidaceae,等鞭金藻屬Isochrysis Parke，為裸露的單細胞運動個體。細胞橢圓形，幼細胞略扁平，有背腹之分，側面為長橢圓形；具2根等長鞭毛，為細胞體長1-2倍；色素體2個，側生，大而伸長，形狀和位置常隨細胞體變化而變化；胞內有I小而暗紅色眼點；儲藏物為油滴和白糖素，隨細胞老化，白糖素體積漸大直至充滿細胞后部；細胞金褐色。在海洋中營浮游生活，屬低溫品系，在-8°C冰凍后，還能復蘇，適宜生長水溫0-27°C，最適為13-18°C ;適宜生長鹽度10-35，最適15-30 ;適宜光照度3000-30000Iux ;最適pH6_10。營二分裂法無性繁殖，縱裂。正常情況5小時分裂I次；環境不良時形成孢子囊，內生孢子。該藻營養極豐富，含大量蛋白質、不飽和脂肪酸、糖類和維生素，大小適口，細胞壁薄，易消化，是對蝦、扇貝、貽貝、梭子蟹、舌鰨、金槍魚、大黃魚、鯧魚、帶魚、海參、海膽優質開口餌料,有重要培養價值。
[0006]湛江球等鞭金藻傳統上采用f/2培養液且采用敞口開放水泥池培養，培養液成分單調，生長慢，易污染，成本高，效益低，操作費力，工作量大，現在我采用封閉式平板光生物反應器充氣培養，以人尿為主要氮源并在培養基中添加了適量生長素貯液，碳酸氫鈉，蘋果酸鈉，檸檬酸鐵，P1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸鈉，谷氨酸鈉，苯甲酸鈉，海藻酸丙二醇酯，β-胡蘿卜素，α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液，磷酸二氫鉀，麥飯石粉，牛糞浸出液，920植物生長刺激素，鈦溶液等營養成分，不僅可以廢物利用，變廢為寶，而且可獲得有重要餌料價值的微藻，一舉多得。有機肥和無機肥混合使用，營養更加全面、均衡，操作方便，靈活掌握，可實現自動化、工廠化、程序化、規模化生產，成本低，效益高，湛江球等鞭金藻生長速度和產量大幅提高，培養周期縮短，產量提高180%。


【發明內容】

[0007]為了克服湛江球等鞭金藻傳統培養方法的缺點，本發明提供了一種以人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，配方如下:
[0008]人尿65暈升，生長素I&液1.5暈升,碳酸氫鈉180暈克,蘋果酸鈉3暈克,梓檬酸鐵4毫克，P1微量元素溶液2毫升，吲哚乙酸1.5毫克，乙酸鈉3.5毫克，谷氨酸鈉8毫克，苯甲酸鈉3毫克，海藻酸丙二醇酯6毫克，胡蘿卜素10毫克，α-萘乙酸0.1毫克，土壤浸出液1.5暈升，海泥浸出液I暈升，磷酸二氫鉀8暈克，麥飯石粉7暈克,牛糞浸出液3暈升,920植物生長刺激素6國際單位，鈦溶液I暈升，次氯酸鈉消毒后的純凈海水1000暈升;
[0009]其中，生長素貯液配方:生物素I毫克，維生素B110毫克，煙酸0.1毫克，對氨基苯甲酸10毫克，蒸餾水1000毫升；Pi微量元素溶液配方:乙二胺四乙酸1000毫克，氯化鈷I毫克，氯化鋅5毫克，氯化銅40微克，氯化錳40毫克，氯化鐵10毫克，蒸餾水1000毫升；
[0010]一種利用人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，具體步驟如下:
[0011 ] 培養容器為自制的平板式光生物反應器，長方體，玻璃制成，長100厘米，高90厘米，寬25厘米，玻璃膠粘合而成，玻璃厚度4毫米。最上一塊玻璃不用粘合，可以隨意取下，相當于蓋子。上面打上4個孔，其中兩個穿過電源導線，導線末端各連著一個40瓦節能燈，還有一個孔插入充氣管，另一孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑6毫米。將反應器先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘,然后用冷開海水沖洗3遍，裝入所述的培養基至水深65厘米，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的湛江球等鞭金藻接種，接種密度8X 10 4CelVmL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，50厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石的作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)；另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細；用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定；長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: 1% ;連續充氣，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可；室外培養，太陽光照射，反應器面積最大的一面對著太陽，以接受最多陽光，有利于藻的光合作用，最佳溫度20±2°C，最佳光照強度4000-15000LUX ;夜間打開節能燈進行照明。培養的前6天，反應器上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-8000Lux，避免強烈陽光對細胞造成光傷害；第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成；培養至第8天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基10升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第10天，湛江球等鞭金藻密度增加至1000X 104cell/mL，停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將光生物反應器用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養；
[0012]所述消毒液由以下重量比的物質組成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份、輔料3-5份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小時,200篩絹過濾,將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2: I: I ;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
[0013]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0014]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。
[0015]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
[0016]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
[0017]有益結果
[0018]湛江球等鞭金藻傳統上采用f/2培養液且采用敞口的開放水泥池培養，培養液成分單調，生長慢，易污染，成本高，效益低，操作費力，工作量大，現在我采用封閉式光生物反應器充氣培養，以人尿為主要氮源并在培養基中添加了適量的生長素貯液，碳酸氫鈉，蘋果酸鈉，檸檬酸鐵，P1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸鈉，谷氨酸鈉，苯甲酸鈉，海藻酸丙二醇酯，β-胡蘿卜素，α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液，磷酸二氫鉀，麥飯石粉，牛糞浸出液，920植物生長刺激素，鈦溶液等營養成分，不僅可以廢物利用，變廢為寶，而且可獲得有重要餌料價值的微藻，一舉多得。有機肥和無機肥混合使用，營養更加全面、均衡，操作方便，靈活掌握，可實現自動化、工廠化、程序化、規模化生產，成本低，效益高，湛江球等鞭金藻生長速度和產量大幅提高，培養周期縮短，產量提高180%。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為湛江球等鞭金藻形態結構圖；
[0020]其中附圖標記為:1鞭毛，2色素體，3細胞核，4白糖素。
[0021]圖2為利用人尿培養湛江球等鞭金藻方法圖；
[0022]其中附圖標記為:5平板式光生物反應器，6散氣石，7水龍頭，8藻液，9節能燈，10充氣管，11排氣管。

【具體實施方式】
[0023]人尿預處理:人尿使用前需經處理，具體做法是:將人尿置于敞口光生物反應器陽光下自然發酵48小時，后轉入黑色塑料桶密閉發酵72小時，倒出，加熱并煮沸30分鐘，殺死其中細菌、病毒等微生物，冷卻、靜置、沉淀24小時，取上清液，倒入磨口塞玻璃瓶密封保存，備用。
[0024]光生物反應器消毒方法:光生物反應器先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘，然后用冷開海水沖洗3遍。
[0025]土壤浸出液制備方法:取樹林中松散、富含有機質的上層土壤I公斤，加純水2000毫升，煮沸30分鐘，在暗處放置2天，過濾，濾液600毫升加純水400毫升使用。
[0026]因檸檬酸鐵(FeC6H5O7.5Η20)較難溶解，可加少量自來水在火爐上微熱至80-90°C，并不斷攪拌至全部融化。
[0027]海泥抽取液制備方法:取比較肥沃又不於黑的海泥，以I份泥加2份淡水，充分攪拌均勻，靜置1-2分鐘，取上層泥漿于鋁鍋中，按每1000毫升泥漿加I克NaOH的量加入NaOH，煮沸25分鐘。煮時需不斷攪拌均勻，煮后靜置24小時取上清液，密封，置于4°C冰箱或冷庫備用。
[0028]牛糞浸出液制備方法:取新鮮牛糞50公斤，加入麩皮3公斤，玉米面I公斤，自來水4升，充分攪拌，堆成圓錐狀，自然發酵15天，后攤成薄層，陽光下暴曬3天，后取3公斤放入水桶中，加入10升蒸餾水，充分攪勻，靜置，48小時后100目篩絹過濾，取濾液加熱，煮沸45分鐘，殺死其中的細菌、霉菌、病毒等，冷卻，沉淀24小時，取上清液，即得牛糞浸出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰箱或冷庫備用。
[0029]麥飯石粉是麥飯石粉制品，由麥飯石原礦經過篩選，粉碎，加工成面粉狀，顆粒大小可以通過200目篩絹即可。
[0030]920植物生長刺激素為白色結晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(一般每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小時以上)，再按所需濃度兌水稀釋。
[0031]次氯酸鈉消毒海水方法:取海水，脫脂棉過濾，按I立方米海水中加入漂白粉75克的量加入漂白粉，使海水中有效氯含量達到20mg/L，用空氣壓縮機充氣12小時后，用硫代硫酸鈉中和余氯。硫代硫酸鈉量由余氯的多少來確定，直到滴入淀粉碘化鉀液不變色為止。
[0032]鈦溶液配法:把736.6毫克草酸鈦，溶解于100毫升蒸餾水中，加入5克氫氧化銨，使之成堿性，發生沉淀，用離心法將沉淀集中，用20毫升0.05mol/L的硫酸溶解即得。
[0033]接種用的湛江球等鞭金藻預先進行提純(本領域常規方法，只要可實現提純即可，例如凱氏提取法)，以確保接種時藻種處于生長旺盛的指數生長期。
[0034]各種營養鹽要按配方中提供的順序加入，以免發生化學反應。
[0035]各種無機營養鹽和維生素需預先配成母液且置于4°C冰箱或冷庫冷藏保存備用，放置時間不要超過30天。
[0036]所用化學藥品純度均需化學純級別。
[0037]一種以人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的培養基，配方如下:
[0038]人尿65暈升，生長素忙液1.5暈升,碳酸氫鈉180暈克,蘋果酸鈉3暈克,朽1檬酸鐵4毫克，P1微量元素溶液2毫升，吲哚乙酸1.5毫克，乙酸鈉3.5毫克，谷氨酸鈉8毫克，苯甲酸鈉3毫克，海藻酸丙二醇酯6毫克，β-胡蘿卜素10毫克，α-萘乙酸0.1毫克，土壤浸出液1.5暈升，海泥浸出液I暈升，磷酸二氫鉀8暈克，麥飯石粉7暈克,牛糞浸出液3暈升,920植物生長刺激素6國際單位，鈦溶液I暈升，次氯酸鈉消毒后的純凈海水1000暈升;
[0039]其中，生長素貯液配方:生物素I毫克，維生素B110毫克，煙酸0.1毫克，對氨基苯甲酸10毫克，蒸餾水1000毫升；Pi微量元素溶液配方:乙二胺四乙酸1000毫克，氯化鈷I暈克，氣化鋒5暈克，氣化銅40微克，氣化猛40暈克，氣化鐵10暈克，蒸懼水1000暈升。
[0040]一種利用人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，具體步驟如下:
[0041]培養容器為自制的平板式光生物反應器5，如圖2所示，長方體，玻璃制成，長100厘米，高90厘米，寬25厘米，玻璃膠粘合而成，玻璃厚度4毫米，最上一塊玻璃不用粘合，可以隨意取下，相當于蓋子，上面打上4個孔，其中兩個穿過電源導線，導線末端各連著一個40瓦節能燈，還有一個孔插入充氣管，另一孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑6毫米，將反應器先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘，然后用冷開海水沖洗3遍，裝入所述的培養基至水深65厘米，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的湛江球等鞭金藻接種，接種密度8 X 104cell/mL，蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，50厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石的作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，兩根玻璃管同樣粗細，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: I連續充氣，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，反應器面積最大的一面對著太陽，以接受最多陽光，有利于藻的光合作用，最佳溫度20 ± 2°C，最佳光照強度4000-15000LUX，夜間打開節能燈進行照明，培養的前6天，反應器上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-8000LUX，避免強烈陽光對細胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第8天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基10升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第10天，湛江球等鞭金藻密度增加至1000 X 104cell/mL,停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將光生物反應器用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養；
[0042]所述消毒液由以下重量比的物質組成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮30份、杠板歸15份、黃柏15份、苦參5份、艾葉5份、輔料3份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30份、杠板歸15份、黃柏15份、苦參5份、艾葉5份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2: I: I ;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
[0043]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10分鐘。
[0044]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5分鐘。
[0045]優選地，對選用的光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5分鐘。
[0046]優選地，對選用的光生物反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
[0047]實施例2
[0048]其他步驟同于實施例1，區別在于所述消毒液由以下重量比的物質組成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮40份、杠板歸20份、黃柏20份、苦參10份、艾葉10份、輔料4份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于65°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮40份、杠板歸20份、黃柏20份、苦參10份、艾葉10份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料4份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2:1:1;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
[0049]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒15分鐘。
[0050]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒7.5分鐘。
[0051]優選地，對選用的光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5.5分鐘。
[0052]優選地，對選用的光生物反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2.5分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2.5分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
[0053]實施例3
[0054]其他步驟同于實施例1，區別在于所述消毒液由以下重量比的物質組成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮50份、杠板歸25份、黃柏25份、苦參15份、艾葉15份、輔料5份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮50份、杠板歸25份、黃柏25份、苦參15份、艾葉15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2:1:1;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
[0055]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒20分鐘。
[0056]優選地，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒10分鐘。
[0057]優選地，對選用的光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒6分鐘。
[0058]優選地，對選用的光生物反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
[0059]最后應說明的是:以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解:其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明實施例技術方案的精神和范圍。
【權利要求】
1.一種以人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的培養基，其特征在于配方如下: 人尿65暈升，生長素忙液1.5暈升,碳酸氫鈉180暈克,蘋果酸鈉3暈克,朽1檬酸鐵4毫克，P1微量元素溶液2毫升，吲哚乙酸1.5毫克，乙酸鈉3.5毫克，谷氨酸鈉8毫克，苯甲酸鈉3毫克，海藻酸丙二醇酯6毫克，β-胡蘿卜素10毫克，α-萘乙酸0.1毫克，土壤浸出液1.5暈升,海泥浸出液I暈升，磷酸二氫鉀8暈克,麥飯石粉7暈克,牛糞浸出液3暈升，920植物生長刺激素6國際單位，鈦溶液I毫升，次氯酸鈉消毒后的純凈海水1000毫升；其中，生長素貯液配方:生物素I毫克，維生素B110毫克，煙酸0.1毫克，對氨基苯甲酸10毫克，蒸餾水1000毫升；Pi微量元素溶液配方:乙二胺四乙酸1000毫克，氯化鈷I毫克，氯化鋅5毫克，氯化銅40微克，氯化錳40毫克，氯化鐵10毫克，蒸餾水1000毫升。
2.一種利用人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于具體步驟如下: 培養容器為自制的平板式光生物反應器，長方體，玻璃制成，長100厘米，高90厘米，寬25厘米，玻璃膠粘合而成，玻璃厚度4毫米，最上一塊玻璃不用粘合，可以隨意取下，相當于蓋子，上面打上4個孔，其中兩個穿過電源導線，導線末端各連著一個40瓦節能燈，還有一個孔插入充氣管，另一孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑6毫米，將反應器先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘,然后用冷開海水沖洗3遍,裝入權利要求1所述的培養基至水深65厘米，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的湛江球等鞭金藻接種，接種密度8 X 104cell/mL，蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，50厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石的作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，兩根玻璃管同樣粗細，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:甲烷=92%: 6%: 1%: 1% ;連續充氣，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，反應器面積最大的一面對著太陽，以接受最多陽光，有利于藻的光合作用，最佳溫度20±2°C，最佳光照強度4000-15000LUX，夜間打開節能燈進行照明，培養的前6天，反應器上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-8000LUX，避免強烈陽光對細胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第8天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基10升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第10天，湛江球等鞭金藻密度增加至1000X 104cell/mL，停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將光生物反應器用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養； 所述消毒液由以下重量比的物質組成:每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份、輔料3-5份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小時,200篩絹過濾,將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2: I: I ;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
3.根據權利要求2所述的一種利用人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
4.根據權利要求2所述的一種利用人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。
5.根據權利要求2所述的一種利用人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
6.根據權利要求2所述的一種利用人尿為主要氮源培養湛江球等鞭金藻的方法，其特征在于，對選用的所述光生物反應器，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
【文檔編號】C12N1/12GK104232491SQ201410436474
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月1日 優先權日:2014年9月1日
【發明者】王培磊 申請人:臨沂大學