一種穩定性強的單試劑血清甘油三酯檢測試劑的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種穩定性強的單試劑血清甘油三酯檢測試劑，屬于臨床體外檢測【技術領域】。該試劑采用4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）-谷氨酸鈉緩沖體系，使體系具有良好的緩沖能力；試劑中還添加了十二烷基硫酸三乙醇胺、輔酶FAD和聚乙烯醇 AH-26等物質，均有效的提高了試劑的穩定性。本發明與常規單試劑檢測甘油三酯試劑相比具有更加優異的穩定性，更有利于臨床推廣使用。
【專利說明】一種穩定性強的單試劑血清甘油三酯檢測試劑

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種穩定性強的單試劑血清甘油三酯檢測試劑，屬于臨床體外檢測技 術領域。

【背景技術】
[0002] 甘油三酯（TG)是血脂的主要組成部分，是機體重要的供能物質。食物中的甘油三 酯在腸道經胰脂酶消化分解，吸收后重新酯化為甘油三酯，經淋巴系統進入血液。肝臟是合 成甘油三酯的主要場所，脂肪組織是最大的甘油三酯儲存庫。在病理條件下，各種組織細胞 合成和儲集的甘油三酯顯著增加。定量檢測血液和組織細胞中甘油三酯含量，是臨床、臨床 基礎、基礎醫學生物學研宄常用的生化指標。
[0003] 目前血清TG檢測方法眾多，一般可分為化學法、酶法和色譜法3大類。化學法是 用有機溶劑抽提標本中的TG，去除抽提液中磷脂等干擾物后，用堿水解（皂化）TG，以過 碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用顯色反應測甲醛。比較準確的是二氯甲烷硅酸變色酸法 (VanHande-Caslson法），但是操作比較復雜，技術要求高，不適于臨床常規分析中應用；而 色譜法對儀器和操作人員的要求非常的高，且分析成本昂貴，因此化學法和色譜法不利于 臨床推廣。
[0004] 國內幾乎所有的臨床檢測主要采用酶法檢測血清中TG含量，其主要工作原理如 下：脂肪酶分解血清中甘油三酯為甘油與脂肪酸。在ATP存在下，甘油激酶將甘油磷酸化生 成3-磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫。過氧化氫與 過氧化物酶、4-氨基比林進行顯色反應，生成有色苯醌亞胺，在480~550 nm處吸光度值與 甘油三酯濃度成正比。此法具有簡便快速、微量、精密度高的優點，且特異性強，易于達到終 點，線性范圍寬，有利于臨床推廣。市面上一般比較多的是雙試劑的TG檢測試劑，而單試劑 的TG檢測試劑由于其穩定性較差，并且試劑極其容易受到環境的污染而不為市場所接受。


【發明內容】

[0005] 為解決現有技術中存在的問題，本發明提供了一種穩定性強的單試劑血清甘油三 脂檢測試劑。
[0006] 本發明采用以下技術方案： 一種穩定性強的單試劑血清甘油三脂檢測試劑，其特征在于，所述試劑包括： 50-60mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、l-5g/L牛血清白蛋白、 0. Ι-lg/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. Ι-lg/L過苯甲酸鈉、l-2g/L輔酶FAD、0. Ι-lg/L聚 乙烯醇 AH-26、10-100mmol/L 乙二胺四乙酸二鈉、3. 5-5mmol/L 膽酸鈉、17. 5-20. 5mo/Ll 七水合硫酸鎂、l-3mmol/L 4-氨基安替比林、3.5-5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. I-Ig/ L TritonX-100、l-3KU/L脂蛋白脂肪酶、0. 25-500KU/L甘油激酶、1-3KU/L過氧化物酶、 1-3KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. Ι-lg/L疊氮鈉。
[0007] 作為本發明的一種優選，所述試劑中包括：50mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨 酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、3g/L牛血清白蛋白、0. 5g/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 5g/L過苯甲 酸鈉、I. 5g/L輔酶FAD、0. 5g/L聚乙烯醇AH-26、50mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、4mmol/L膽 酸鈉、18mol/L七水合硫酸鎂、2mmol/L 4-氨基安替比林、4. 5mmol /L N，N-二甲基苯胺、 0. 5g/L TritonX-100、2KU/L脂蛋白脂肪酶、300KU/L甘油激酶、2KU/L過氧化物酶、2KU/L甘 油-3-磷酸氧化酶、0. 5g/L疊氮鈉。
[0008] 本發明試劑的制備方法是將各組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0009] 本發明的有益效果是： 1)本發明選擇了 4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)-谷氨酸鈉緩沖液，本緩沖體系在pH值 為6. 8-8. 2范圍內具有良好的緩沖能力，使整個配方處于一種極其穩定的狀態，提高了試 劑的穩定性。
[0010] 2)本發明試劑中分別添加十二烷基硫酸三乙醇胺，它能有效的保護脂蛋白脂 肪酶的穩定性；此外，試劑中加入了輔酶FAD和聚乙烯醇AH-26,它們能夠有效地保護甘 油-3-磷酸氧化酶中酶的活性基團使酶不易失活，從而提高酶的穩定性。
[0011] 4)本發明中選取穩定性較強，不易分解的N，N-二甲基苯胺作為色原，替代原有 4_氯苯酚，有效的減緩試劑空白升高的弊病，從而保證了試劑的穩定性。
[0012] 5)本發明中還在試劑中加入了具有弱氧化性質的過苯甲酸鈉，能夠有效地去除抗 壞血酸、膽紅素等還原性物質對生化試劑還原性物質的干擾，從而提高試劑的抗干擾能力 和穩定性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013] 圖1是本發明實施例1-3與對照組7天37°C熱穩定性試驗結果圖； 圖2是本發明實施例1-3與對照組15天試劑開瓶穩定性試驗結果圖； 圖3是本發明實施例1-3與對照組7天37°C熱穩定性試劑空白檢測結果圖； 圖4是本發明實施例1-3與對照組15天試劑開瓶穩定性試劑空白檢測結果圖。

【具體實施方式】
[0014] 下面結合具體實施例對本發明做進一步的詳細說明。
[0015] 實施例1 一種穩定性強的單試劑血清甘油三脂檢測試劑，所述試劑包括：50mmol/L 4-羥乙基 哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、lg/L牛血清白蛋白、0. lg/L十二烷基硫酸三乙醇 胺、0. lg/L過苯甲酸鈉、lg/L輔酶FAD、0. lg/L聚乙烯醇AH-26、10mmol/L乙二胺四乙酸二 鈉、3. 5mmol/L膽酸鈉、17. 5mo/Ll七水合硫酸鎂、lmmol/L 4-氨基安替比林、3. 5mmol /L N， N-二甲基苯胺、0. lg/L TritonX-100、lKU/L脂蛋白脂肪酶、0. 25KU/L甘油激酶、1KU/L過氧 化物酶、1KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. lg/L疊氮鈉。
[0016] 將上述各組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0017] 實施例2 一種穩定性強的單試劑血清甘油三酯檢測試劑，所述試劑包括：60mmol/L 4-羥乙基 哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、5g/L牛血清白蛋白、lg/L十二烷基硫酸三乙醇 胺、lg/L過苯甲酸鈉、2g/L輔酶FAD、lg/L聚乙烯醇AH-26、100mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、 5mmol/L膽酸鈉、20. 5mo/Ll七水合硫酸鎂、3mmol/L 4-氨基安替比林、5mmol /L N，N_二 甲基苯胺、lg/L TritonX-100、3KU/L脂蛋白脂肪酶、500KU/L甘油激酶、3KU/L過氧化物酶、 3KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、lg/L疊氮鈉。
[0018] 將上述各組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0019] 實施例3 一種穩定性強的單試劑血清甘油三酯檢測試劑，所述試劑包括： 50mmoI/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4 )、3g/L牛血清白蛋白、 0. 5g/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 5g/L過苯甲酸鈉、I. 5g/L輔酶FAD、0. 5g/L聚乙烯醇 AH_26、50mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、4mmol/L膽酸鈉、18mol/L七水合硫酸鎂、2mmol/L 4-氨基安替比林、4. 5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. 5g/L TritonX-100、2KU/L脂蛋白脂肪 酶、300KU/L甘油激酶、2KU/L過氧化物酶、2KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. 5g/L疊氮鈉。
[0020] 將上述組分依次溶于IL蒸餾水中制備完成。
[0021] 將本發明實施例1-3所制得的試劑進行穩定性試驗驗證。試驗分為15天開瓶穩 定性驗證和7天37 °C熱穩定性驗證試驗。
[0022] 試驗所用校準品和質控品分別為： 校準品：朗道復合標準（848UN)其中TG的含量為I. 14mmol/L 質控品：朗道復合高值質控：620UE(TG靶值：2. 86mmol/L，靶值范圍：2. 41-3. 31mmol/ U ;朗道復合低值質控：897UN(TG靶值：1. 09mmol/L，靶值范圍：0. 92-1. 26mmol/L)。
[0023] 試劑穩定性驗證試驗的具體操作方法： 將本發明實施例1-3中所得檢測試劑作為試驗組，取一種市售某公司生產的單試劑血 清甘油三酯檢測試劑作為對照組，試驗組與對照組試劑每組各自取相同的兩份，一份做15 天開瓶穩定性試驗，將試劑開瓶放置在儀器的2-8°C冷藏箱中（15天不取出），作為15天開 瓶穩定性檢測；另一份做37°C熱穩定性檢測試驗，封閉放置在37°C恒溫水浴鍋中（每天僅 在檢測的時候取出，檢測完畢后，依然封口放回37°C水浴鍋中，連續7天)，作為7天37°C熱 穩定性驗證。將試劑同時在東芝-120全自動生化分析儀器上，按照如下表1方法進行檢測， 并在儀器上建立標準曲線。分別取朗道的高、低值凍干粉質控品，溶解均勻后，各自平均分 成15份，-20°C儲存，每天高、低值質控各取一個，并且跟蹤檢測結果，其跟蹤監測趨勢如圖 1和圖2。每天檢測各組試劑的試劑空白，檢測結果如圖3,圖4。
[0024] 表ITG (甘油三酯）檢測試劑檢測方法

【權利要求】
1. 一種穩定性強的單試劑血清甘油三脂檢測試劑，其特征在于，所述試劑包括： 50-60mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、l-5g/L牛血清白蛋白、 0. 1-lg/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 1-lg/L過苯甲酸鈉、l-2g/L輔酶FAD、0. 1-lg/L聚 乙烯醇 AH-26、10-100mmol/L 乙二胺四乙酸二鈉、3. 5-5mmol/L 膽酸鈉、17. 5-20. 5mo/Ll 七水合硫酸鎂、l-3mmol/L 4-氨基安替比林、3.5-5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. 1-lg/ L TritonX-100、l-3KU/L脂蛋白脂肪酶、0. 25-500KU/L甘油激酶、1-3KU/L過氧化物酶、 1-3KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. 1-lg/L疊氮鈉。
2. 根據權利要求1所述的單試劑血清甘油三酯檢測試劑，其特征在于，所述試劑中 包括：50mmol/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸-谷氨酸鈉緩沖液（pH=7. 4)、3g/L牛血清白蛋白、 0. 5g/L十二烷基硫酸三乙醇胺、0. 5g/L過苯甲酸鈉、1. 5g/L輔酶FAD、0. 5g/L聚乙烯醇 AH_26、50mmol/L乙二胺四乙酸二鈉、4mmol/L膽酸鈉、18mol/L七水合硫酸鎂、2mmol/L 4_氨基安替比林、4. 5mmol /L N，N-二甲基苯胺、0. 5g/L TritonX-100、2KU/L脂蛋白脂肪 酶、300KU/L甘油激酶、2KU/L過氧化物酶、2KU/L甘油-3-磷酸氧化酶、0. 5g/L疊氮鈉。
【文檔編號】C12Q1/61GK104498586SQ201410697066
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月28日 優先權日:2014年11月28日
【發明者】楊君莉, 羅維曉, 甘宜梧, 譚柏清, 李靜, 王綺, 謝清華 申請人:山東博科生物產業有限公司