一種基于微流控芯片的多功能集成分析多孔細胞培養芯片的制作方法
【專利摘要】一種基于微流控芯片的多功能集成分析多孔細胞培養芯片屬細胞培養分析【技術領域】。該細胞培養芯片主要由細胞培養池、小皿組成；細胞培養池位于小皿內底部，與小皿可逆封接而成；細胞培養池上有2～6個孔室。所述細胞培養池的材料為可透光透氣的PDMS聚合物，所述孔室由打孔器制出。所述細胞培養池為厚度為1mm～5mm。本實用新型細胞培養芯片具操作簡便，成本低廉，試劑及細胞消耗量低，顯微觀察視野無明顯的明暗影響，加液換液時細胞不易被沖起，細胞接種時密度更均一等優點，能夠實現特定的實驗目的，在細胞培養與分析評價方面有廣泛的應用價值。
【專利說明】一種基于微流控芯片的多功能集成分析多孔細胞培養芯片

【技術領域】
[0001]本實用新型涉及細胞培養分析的【技術領域】，具體涉及一種基于微流控芯片的多功能集成分析多孔細胞培養芯片。

【背景技術】
[0002]市場上的各類細胞培養孔板以及細胞培養皿進行細胞接種密度不均，細胞容易聚集，且邊緣視野不清，只能在中間區域才易于觀察。進行免疫染色相關實驗試劑比較昂貴，如12孔板、24孔板進行免疫染色時浪費試劑較多，加液換液時，底部細胞容易被沖起；而96孔板雖然相對節省，但視野不清基本無法進行清晰的顯微觀察，加液時也容易將細胞沖起，并且如果不是一次做大量的樣本，還會造成多余孔的浪費。常見細胞培養孔板及細胞培養皿也僅能進行常規的細胞實驗，無法觀察多種細胞相互作用或多種因素的分批刺激，不能滿足如細胞共培養這樣特殊的實驗需求。
[0003]微流控芯片技術作為一門迅速發展起來的科學技術，已經在生物醫學領域展現了其獨特的優勢，更因其同細胞尺寸匹配、環境同生理環境相近、在時間和空間維度上能夠提供更為精確的操控，易于通過靈活設計實現多種細胞功能研宄等特點而成為新一代生物仿生和細胞研宄的重要平臺。現有階段的基于微流控芯片的細胞分析平臺大多是利用同生物相容性好的PDMS硅膠材料作為芯片材料，具有很好的生物相容性，透光透氣，實現芯片內的細胞培養和各種生物物理、生物化學刺激以便得到在不同細胞外微環境下細胞的行為變化，諸如存活、增殖、凋亡、分化等。PDMS芯片經無水乙醇處理后可逆封接的性質，保證封接時密閉不漏液，還可以隨時根據實驗需求揭下PDMS整體芯片。利用PDMS材料制作適合顯微觀察、免疫染色的細胞培養池進行細胞分析以及如細胞共培養等特定實驗還處于空白階段。


【發明內容】

[0004]本實用新型的目的是提供一種基于微流控芯片制作技術的細胞培養芯片，該細胞培養芯片應用于細胞在顯微觀察、免疫染色及細胞共培養等特定實驗的研宄。
[0005]本實用新型一種基于微流控芯片的多功能集成分析多孔細胞培養芯片，該細胞培養芯片主要由細胞培養池、小皿組成；細胞培養池位于小皿內底部，與小皿可逆封接；細胞培養池上有2?6個孔室。
[0006]所述細胞培養池(I)的材料為可透光透氣的PDMS聚合物，所述孔室由打孔器制出。
[0007]所述細胞培養池為厚度為Imm?5mm。
[0008]細胞培養池先經無水乙醇浸泡12小時，80°C烘干后與小皿可逆封接
[0009]本實用新型提供的細胞培養芯片，因為細胞培養池材料透光性好，且高度較低，在顯微鏡下觀察細胞培養區受培養池壁的影響較小，視野里沒有明顯的明暗影響。
[0010]本實用新型提供的細胞培養芯片，因為體積小，所需細胞接種液量小，細胞接種時密度更均一，加液換液時微升級的操作對細胞影響很小，不易將細胞沖起。
[0011]本實用新型提供的細胞培養芯片，可以在細胞培養池不同孔室中接種不同細胞，細胞生長良好時，在小皿中加培養液沒過細胞培養池，觀察不同細胞分泌的因子對其他細胞的相關影響。
[0012]本實用新型提供的細胞培養芯片，可以在細胞培養池不同孔室中接種不同細胞，待細胞生長良好時，可以將細胞培養池揭下，在小皿中加培養液繼續培養，觀察不同細胞間是否有促進相互迀移或排斥的作用。
[0013]使用本實用新型的細胞培養芯片進行細胞的接種與培養時:細胞密度為5X 105cells/mL，加液量為 30 μ L-150 μ L0
[0014]本實用新型提供的基于細胞培養芯片的細胞培養、免疫染色顯微觀察方法，可采用生物學上常用的細胞培養、檢測手段對細胞培養芯片的細胞進行培養、檢測。
[0015]本實用新型細胞培養芯片具操作簡便，成本低廉，試劑及細胞消耗量低，顯微觀察視野無明顯的明暗影響，加液換液時細胞不易被沖起，細胞接種時密度更均一等優點，能夠實現特定的實驗目的，在細胞培養與分析評價方面有廣泛的應用價值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1本實用新型細胞培養芯片整體結構示意圖；其中I為小皿，2為細胞培養池，3為孔室。

【具體實施方式】
[0017]下面的實施例將對本實用新型予以進一步的說明，但并不因此而限制本實用新型。
[0018]一種基于微流控芯片的多功能集成分析多孔細胞培養芯片，該細胞培養芯片主要由細胞培養池1、小皿2組成；細胞培養池I位于小皿2內底部，與小皿2可逆封接而成；細胞培養池上有2?6個孔室3。
[0019]所述細胞培養池I的材料為可透光透氣的PDMS聚合物，所述孔室3由打孔器制出。
[0020]所述細胞培養池I為厚度為Imm?5mm。
[0021]本實用新型提供的細胞培養芯片，可以在細胞培養池I不同孔室3中接種不同細胞，細胞生長良好時，在小皿2中加培養液沒過細胞培養池1，觀察不同細胞分泌的因子對其他細胞的相關影響。
[0022]本實用新型提供的細胞培養芯片，可以在細胞培養池I不同孔室3中接種不同細胞，待細胞生長良好時，可以將細胞培養池I揭下，在小皿2中加培養液繼續培養，觀察不同細胞間是否有促進相互迀移或排斥的作用。
[0023]本實用新型細胞培養芯片的建立方法為:
[0024]使用75mm規格玻片進行圍片，澆灌PDMS單體:引發劑(V:V) = 12:1的PDMS，高度為2臟，真空除氣泡，80°C凝膠I小時，取出放涼，將固化PDMS板切割成20mmX 20mm的細胞培養池小單元，使用打孔器在其上制出5個直徑為6mm的孔室，將細胞培養池經無水乙醇浸泡過夜后與小皿可逆封接，紫外照射過夜滅菌后即可使用，結構如圖1所示。
[0025]利用實驗室自行制作的細胞培養芯片，將細胞消化后，稀釋成濃度為5 X 15ceIlsAiL的細胞懸液，50 μ L加入細胞培養池，培養池周圍滴加PBS溶液增加濕度減少試劑揮干，移入二氧化碳培養箱中繼續培養，細胞貼壁并均勻鋪展于細胞培養池底面后，進行相關免疫染色處理。
【權利要求】
1.一種基于微流控芯片的多功能集成分析多孔細胞培養芯片，其特征在于:該細胞培養芯片主要由細胞培養池(I)、小皿(2)組成；細胞培養池(I)位于小皿(2)內底部，與小皿(2)可逆封接而成；細胞培養池上有2?6個孔室(3)。
2.按照權利要求1所述的細胞培養芯片，其特征在于:所述細胞培養池(I)的材料為可透光透氣的PDMS聚合物，所述孔室(3)由打孔器制出。
3.按照權利要求1所述的細胞培養芯片，其特征在于所述細胞培養池(I)厚度為1mm ?5mm。
4.按照權利要求1所述的細胞培養芯片，其特征在于所述孔室(3)的直徑為:5mm?1mm0
【文檔編號】C12M3/00GK204198745SQ201420543019
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年9月22日 優先權日:2014年9月22日
【發明者】秦建華, 許慧, 李中玉 申請人:中國科學院大連化學物理研究所