本發明涉及飼料添加劑，尤其涉及豬用抗霉菌毒素飼料添加劑，本發明還涉及所述豬用抗霉菌毒素飼料添加劑的制備方法及其在脫除豬用飼料中霉菌毒素的應用，屬于豬用抗霉菌毒素飼料添加劑的制備領域。
背景技術：
在世界范圍內，谷物和飼料都存在著嚴重的霉菌毒素污染。霉菌毒素是由霉菌或者真菌產生的有毒有害物質，在谷物的生長過程、飼料的制造、貯存及運輸過程中都可以產生。霉菌毒素不僅會導致畜禽的免疫能力下降、繁殖性能障礙、采食量降低及疾病發生率上升，甚至可能造成畜禽動物的死亡，還會通過食物鏈從動物轉移到人體中，給畜牧業帶來巨大的經濟損失。
目前，控制飼料中霉菌毒素的方法有很多，包括采用一些物理脫毒方法、化學脫毒方法及吸附劑吸附法，其中最常用的方法是使用霉菌毒素吸附劑。在畜禽的消化道內，通過霉菌毒素吸附劑來降低霉菌毒素濃度而減少其進入血液和靶器官的機會，從而起到有效防止霉菌毒素產生毒害作用。
但是，現有的多種霉菌毒素吸附劑存在吸附作用的選擇性強，僅對單一的霉菌毒素有吸附作用等缺陷。因此，開發一種高效、安全的、對多種霉菌毒素均具有吸附作用的豬用抗霉菌毒素飼料添加劑，對養豬業和食品安全具有非常重要的意義和應用價值。
技術實現要素：
本發明所要解決的技術問題是提供一種豬用抗霉菌毒素飼料添加劑，該豬用抗霉菌毒素飼料添加劑能夠有效吸附飼料中的多種霉菌毒素，防止豬只因食用霉菌毒素污染的飼料而引發的各種疾病。
為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：
本發明首先公開了一種豬用抗霉菌毒素飼料添加劑，包括以下各組分：鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)菌劑、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)菌劑和沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)菌劑；各組分的重量份為：鼠李糖乳桿菌菌劑1-20份、嗜酸乳桿菌菌劑1-10份、沼澤紅假單胞菌菌劑1-5份；優選的，各組分的重量份為：鼠李糖乳桿菌菌劑5份、嗜酸乳桿菌菌劑3份、沼澤紅假單胞菌菌劑1份。
本發明所述鼠李糖乳桿菌的保藏編號為ATCC 53103；所述嗜酸乳桿菌的保藏編號為ACCC11073；所述沼澤紅假單胞菌的保藏編號為CGMCC1.8929。本發明對鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌或沼澤紅假單胞菌的具體菌株沒有特殊限制，所述的鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌可以是市售商品，也可以通過培養獲得，不影響本發明豬用抗霉菌毒素飼料添加劑的實施；但為更好的達到本發明的效果，所述鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌或沼澤紅假單胞菌的活菌數均要求在200億個/克以上。
本發明進一步公開了一種所述的豬用抗霉菌毒素飼料添加劑的制備方法，包括以下步驟：將鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌混合均勻，即得。
本發明所述的豬用抗霉菌毒素飼料添加劑能夠應用于脫除豬飼料中的霉菌毒素。其中，所述豬用抗霉菌毒素飼料添加劑的添加量為豬飼料質量的0.1-1％，優選為0.3％。
本發明所述霉菌毒素包括但不限于：玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、黃曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、煙曲霉毒素、伏馬毒素B1或T-2毒素中的任意一種或多種。
本發明通過將鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌等多種不同的益生菌進行組合，制備豬用抗霉菌毒素飼料添加劑，考察不同菌種組成的添加劑對玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B1(AFB1)、嘔吐毒素等霉菌毒素的脫毒效果，結果表明由鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌制備的豬用抗霉菌毒素飼料添加劑對玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1、AFB1、嘔吐毒素和T-2毒素的吸附率顯著優于其他菌種組合，不同霉菌毒素的吸附率提高了15個百分點以上，而且與毒素結合緊密，能夠很好的吸附霉菌毒素，解吸效果顯著低于其他菌種組合。
本發明進一步對鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌的用量進行優化，結果表明，鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌按照質量比5:3:1制備的添加劑對霉菌毒素的脫除效果明顯優于其他比例，不同霉菌毒素的吸附率提高了8個百分點以上，而且與毒素結合更緊密，解吸率顯著降低，脫毒更為徹底。
本發明所述豬用抗霉菌毒素飼料添加劑能夠用于受霉菌毒素污染的玉米、谷物等原料及配合飼料等的脫毒，防止畜禽因食霉菌毒素污染飼料引起的各種疾病的發生。另外，本發明所述豬用抗霉菌毒素飼料添加劑不吸附營養元素，不影響豬只的正常生長，而且能夠調節腸道內微生態的菌群平衡。
本發明在添加玉米赤霉烯酮的基礎日糧中，添加本發明豬用抗霉菌毒素飼料添加劑飼喂仔豬，腹瀉率僅2.5％，仔豬的平均日增重、料重比與空白對照組差異不顯著，證明本發明豬用抗霉菌毒素飼料添加劑能夠有效脫除飼料中的玉米赤霉烯酮，從而有效降低其對仔豬生長性能的危害。而僅飼喂添加玉米赤霉烯酮的基礎日糧，仔豬腹瀉率達52.5％，而且仔豬的生長性能指標顯著低于空白對照組，料重比顯著高于空白對照組。
本發明所用到的微生物菌種均可從市場購買得到，也可購自中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心等保藏機構。
本發明技術方案與現有技術相比，具有以下有益效果：
本發明豬用抗霉菌毒素飼料添加劑采用鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌及合理的比例，能夠有效地吸附飼料中的霉菌毒素如黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素、T-2毒素、煙曲霉毒素和赫曲霉毒素等，同時還能抑制霉菌的生長，防止霉菌毒素的產生，消除霉菌毒素對動物生理的影響，提高飼料報酬。另外，本發明豬用抗霉菌毒素飼料添加劑的制備方法簡單，無毒副作用，符合畜牧業發展的需要，具有良好的應用前景。
具體實施方式
下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但是應理解所述實施例僅是范例性的，不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改或替換均落入本發明的保護范圍。
1、菌種
鼠李糖乳桿菌，菌株保藏編號為ATCC 53103；
嗜酸乳桿菌，菌株保藏編號為ACCC11073；
沼澤紅假單胞菌，菌株保藏編號為CGMCC 1.8929；
產朊假絲酵母(Candida utilis)，保藏編號為CGMCC 2.1641；
凝結芽孢桿菌(Bacillus coagulans)，保藏編號為CGMCC 1.3220；
熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)，保藏編號為ACCC20004；
地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)，菌株保藏編號為ACCC01198；
枯草芽孢桿菌(產品規格：200億個/克)，購自北海群林生物工程有限公司；糞腸球菌(200億個/g)，購自無錫拜弗德生物科技有限公司。
實施例1豬用抗霉菌毒素飼料添加劑
分別按照購買菌種所給出的培養方法培養制備鼠李糖乳桿菌菌劑、嗜酸乳桿菌菌劑和沼澤紅假單胞菌菌劑，要求活菌數均在200億個/克或以上。
按照以下比例稱取各組分(Kg)：鼠李糖乳桿菌菌劑1、嗜酸乳桿菌菌劑1、沼澤紅假單胞菌菌劑1，混合均勻，即得。
實施例2豬用抗霉菌毒素飼料添加劑
分別按照購買菌種所給出的培養方法培養制備鼠李糖乳桿菌菌劑、嗜酸乳桿菌菌劑和沼澤紅假單胞菌菌劑，要求活菌數均在200億個/克或以上。
按照以下比例稱取各組分(Kg)：鼠李糖乳桿菌菌劑20、嗜酸乳桿菌菌劑10、沼澤紅假單胞菌菌劑5，混合均勻，即得。
實施例3豬用抗霉菌毒素飼料添加劑
分別按照購買菌種所給出的培養方法培養制備鼠李糖乳桿菌菌劑、嗜酸乳桿菌菌劑和沼澤紅假單胞菌菌劑，要求活菌數均在200億個/克或以上。
按照以下比例稱取各組分(Kg)：鼠李糖乳桿菌菌劑5、嗜酸乳桿菌菌劑3、沼澤紅假單胞菌菌劑1，混合均勻，即得。
試驗例1豬用抗霉菌毒素飼料添加劑脫除霉菌毒素的效果觀察
1、菌種篩選
1.1實驗方法
分別培養以下添加劑1-10中的各菌，或者購買各菌的市售商品，要求各菌的活菌數均在200億個/克或以上。
按照以下組合分別制備豬用抗霉菌毒素飼料添加劑(質量比)：
添加劑1，鼠李糖乳桿菌：嗜酸乳桿菌：釀酒酵母＝2:1:1；
添加劑2，鼠李糖乳桿菌：嗜酸乳桿菌：糞腸球菌＝2:1:1；
添加劑3，鼠李糖乳桿菌：嗜酸乳桿菌：枯草芽孢桿菌＝2:1:1；
添加劑4，鼠李糖乳桿菌：嗜酸乳桿菌：沼澤紅假單胞菌＝2:1:1；
添加劑5，鼠李糖乳桿菌：沼澤紅假單胞菌：熱帶假絲酵母＝2:1:1；
添加劑6，鼠李糖乳桿菌：沼澤紅假單胞菌：植物乳桿菌＝2:1:1；
添加劑7，鼠李糖乳桿菌：沼澤紅假單胞菌：地衣芽孢桿菌＝2:1:1；
添加劑8，鼠李糖乳桿菌：凝結芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌＝2:1:1；
添加劑9，枯草芽孢桿菌：地衣芽孢桿菌：乳酸乳桿菌＝2:1:1；
添加劑10，嗜酸乳桿菌：產骯假絲酵母：植物乳桿菌＝2:1:1。
各添加劑的制備方法同實施例3。對以上10組添加劑分別進行霉菌毒素的脫毒效果試驗。霉菌毒素分別為玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B1(AFB1)、嘔吐毒素、T-2毒素、伏馬毒素B1，取離心管加入l0ml上述霉菌毒素標準溶液(具體見表1)，再在離心管中分別加入上述10組添加劑樣品25mg，使添加劑樣品在溶液中的濃度為2.5mg/ml。同時設置空白組(未添加任何脫毒劑)，所有樣品設2個重復。所有樣品于37℃恒溫水浴振蕩器中以150r/min振蕩吸附2h。而后，以3000r/min離心l0min，收集上清液，測定上清液中各霉菌毒素的含量并計算各霉菌毒素的吸附率Y(％)，Y＝100×(C0-C1)/C0；
然后在離心后的沉淀中加入l0ml pH 7.0的PBS緩沖溶液，于37℃，150r/min的恒溫振蕩水浴鍋中振蕩解吸30min，3000r/min離心l0min，收集上清液，同上法測定上清液中各霉菌毒素的含量并計算解吸率R(％)，R＝C2/(C0-C1)×100％；
其中，C0為吸附前各霉菌毒素的濃度(ng/ml)；C1為吸附后各霉菌毒素的濃度(ng/ml)；C2為解吸后各霉菌毒素的濃度(ng/ml)。
1.2實驗結果
不同菌種組合的添加劑對霉菌毒素的脫毒效果見表1。
表1不同添加劑對霉菌毒素的脫毒效果
結果表明，由鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌制備的豬用抗霉菌毒素飼料添加劑對玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1、AFB1、嘔吐毒素和T-2毒素的吸附率分別達到88.35％、87.90％、95.70％、89.74％和88.55％，顯著優于其他菌種組合的添加劑，不同霉菌毒素的吸附率提高了15個百分點以上，而且與毒素結合緊密，能夠很好的吸附霉菌毒素，解吸效果顯著低于其他菌種組合的添加劑。
2、菌種用量篩選
2.1實驗方法
在篩選出由鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌制備豬用抗霉菌毒素飼料添加劑的基礎上，進一步對鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌的用量進行優化。
分別按照以下比例制備豬用抗霉菌毒素飼料添加劑(質量比)：鼠李糖乳桿菌：嗜酸乳桿菌：沼澤紅假單胞菌分別為5:1:1、1:5:1、1:1:5、5:2:1、1:5:2、2:1:5、5:3:1、1:5:3、3:1:5和5:4:1；各添加劑的制備方法同實施例3。
對不同比例制備的添加劑進行霉菌毒素的脫毒效果試驗，具體操作同1.1實驗方法，比較不同比例制備的添加劑對霉菌毒素的脫除效果。
2.2實驗結果
鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌按照不同比例制備的添加劑對霉菌毒素的脫毒效果見表2。
表2不同比例的添加劑對霉菌毒素的脫毒效果
結果表明，鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌和沼澤紅假單胞菌按照質量比5:3:1制備的添加劑對霉菌毒素的脫除效果明顯優于其他比例，對玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B1、AFB1、嘔吐毒素和T-2毒素的吸附率分別達到98.55％、97.30％、98.95％、97.44％和98.05％，不同霉菌毒素的吸附率提高了8個百分點以上，而且與毒素結合更緊密，解吸率顯著降低，脫毒更為徹底。
試驗例2豬用抗霉菌毒素飼料添加劑對仔豬增重的影響
選擇40日齡、體重相近的健康仔豬120頭，均隨機分成3組(空白對照組、實驗1和2組)，空白對照組飼喂基礎日糧，不添加任何添加劑；實驗1組在基礎日糧中添加玉米赤霉烯酮700mg/t(sigma公司購買)；實驗2組在基礎日糧中添加玉米赤霉烯酮700mg/t，并添加本發明實施例3制備的豬用抗霉菌毒素飼料添加劑，添加量為0.3％(質量比)；各組的其他飼養條件均相同，連續飼喂20天，對實驗豬進行日常觀察和檢測。實驗結果見表3。
表3豬用抗霉菌毒素飼料添加劑對仔豬生長性能的影響
注：同列數據肩標不同小寫字母表示差異顯著(p＜0.05)。
結果表明，空白對照組仔豬無腹瀉；實驗1組仔豬腹瀉率最高，達52.5％，而且實驗1組仔豬的生長性能指標顯著低于空白對照組，料重比顯著高于空白對照組，說明玉米赤霉烯酮對仔豬生長性能有害。而實驗2組添加本發明豬用抗霉菌毒素飼料添加劑，仔豬腹瀉率僅2.5％，仔豬的平均日增重、料重比與空白對照組差異不顯著，證明本發明豬用抗霉菌毒素飼料添加劑能夠有效脫除飼料中的玉米赤霉烯酮，從而有效降低其對仔豬生長性能的危害。