本發明涉及一種大鯢蛋白肽粉產品及其制備方法，屬于食品加工技術領域。
背景技術：
大鯢是現存個體最大的兩棲動物，屬國家二類保護動物。在我國廣泛分布，主要產于長江、黃河及珠江中上游支流的山溪河流中，尤以四川、湖北、湖南、貴州、陜西等省為多。大鯢營養價值高，含有優質蛋白質和豐富的氨基酸、微量元素。其機體中含有50多種天然生物活性物。這些生物活性物在食用、藥物、化妝品、健康食品等方面具有獨特的研發價值。有文獻報道從大鯢體表黏液中制備出大鯢低聚糖肽，通過小鼠抗疲勞實驗，發現其具有抗疲勞功能。大鯢低聚糖肽還具有良好的吸濕性和較強的抗紫外線活性。
大鯢低聚糖肽中所含的18種氨基酸中除色氨酸未測出外，人體其它7種必需氨基酸(蘇氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸)和組氨酸(嬰兒所必需的氨基酸)的含量均較高。其中必需氨基酸中蘇氨酸含量最為豐富，高達13.1％。其次是天冬氨酸/酰胺(asx)和谷氨酸/酰胺(glx)分別為11.2％和12.5％。而絲氨酸含量最低為0.2％。
桑葉是植物之王，有“人參熱補，桑葉清補”之美譽，富含人體17種氨基酸，粗蛋白，粗脂肪，是國家衛生部確認的“藥食同源”植物，被國際食品衛生組織列入“人類21世紀十大保健食品之一”，成為人類綠色新食品源。目前大部分地區將桑作為飼用栽培，每年除了桑葉飼養桑蠶外，很多桑葉都沒得到有效利用。盡管許多研究已經報道桑有多種藥理作用，抗過敏作用的研究也有報道。桑葉內含有1-脫氧野尻霉素(dnj)，是一種α-糖苷酶的抑制劑，僅存在于桑葉中，其含量約為100mg/100g。桑葉中不僅含有dnj，而且含有豐富的γ-氨基丁酸和植物淳，其含量是綠茶的3～4倍，具有降血糖、降血壓、降血脂、延緩衰老等多種保健功效，對糖尿病、高血壓、高血脂患者都有輔助治療作用。
公開號為cn101812116a的中國公開了一種大鯢低聚糖肽、制備方法，按如下步驟進行：a.將大鯢黏液在0～10℃時進行勻漿；b.向勻漿中加入1～3倍體積ph7～8的0.01～0.1m磷酸緩沖液及與勻漿質量比為0.1～1％的復合酶，酶解12～48h；所述復合酶為將海洋堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶按活力單位比為3∶3∶2∶2比例混合；c.離心取上清，采用截留分子量為4000da以下的超濾膜分離器分離，取透過超濾膜的液體；d.通過sephadexlh-20分子篩層析柱，收集od280nm吸收峰；e.將所收集的液體通過大孔吸附樹脂及活性炭后冷凍干燥，制得大鯢低聚糖肽。
公開號為cn101991038a的中國公開了一種大鯢低聚糖肽保健食品，按質量百分比計有效成份為：大鯢低聚糖肽10～80％、牡蠣多糖1～50％、貽貝多糖1～50％、維生素c1～50％和牛磺酸1～50％，其中大鯢黏液在0～10℃時進行勻漿，向勻漿中加入1～3倍體積ph7～8的0.01～0.1m磷酸緩沖液及與勻漿質量比為0.1～1％的復合酶，酶解12～48h，離心取上清，采用截留分子量為4000da以下的超濾膜分離器分離，取透過超濾膜的液體，通過sephadexlh-20分子篩層析柱，收集od280nm吸收峰，將所收集的液體通過大孔吸附樹脂及活性炭后冷凍干燥，制得大鯢低聚糖肽。
公開號為cn102676622a的中國公開了一種大鯢納米肽及大鯢酒，按如下步驟制備：a.將宰殺后的大鯢洗凈，取大鯢肉冷凍干燥至水分小于1％，將凍干的大鯢肉超微粉碎成500～5000目的超微粉；b.將大鯢超微粉球磨成50～200nm的大鯢納米粉；c.向大鯢納米粉中加入ph7～8的0.01～0.1m磷酸緩沖液及復合酶，酶解12～48h，所述大鯢納米粉與0.01～0.1m磷酸緩沖液的質量比為1：1～10，所述復合酶添加量為10～25活力單位/大鯢納米粉(g)，所述復合酶為將海洋酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶按活力單位比為3：3：4比例混合；d.離心取上清，采用截留分子量為4000da以下的超濾膜分離器分離，取透過超濾膜的液體，將所收集的液體通過大孔吸附樹脂及活性炭后冷凍干燥，制得大鯢納米肽。
公開號為cn103609832a的中國公開了一種大鯢活性蛋白粉及其制備方法，由包括以下步驟的方法制成：(1)將大鯢原料制成肉糜，加入大鯢原料重量3.5～4.5倍的水，攪拌均勻，所述大鯢原料為大鯢肉和大鯢混合原料，所述大鯢混合原料為大鯢皮、大鯢肝、大鯢分泌物、大鯢血、大鯢胃、大鯢骨的一種或多種，大鯢肉與大鯢混合原料的重量配比為90～98％：2～10％；(2)加入大鯢原料重量0.3～0.5％復合蛋白酶，在溫度45℃～55℃，ph6～7下酶解反應3-5h，水解液煮沸滅酶5-10min，過濾即可得到大鯢活性蛋白水解液，所述復合蛋白酶為堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、風味蛋白酶的混合物；(3)將鯢活性蛋白水解液在80-100℃滅酶、過濾，濃縮干燥，得大鯢蛋白粉；步驟(1)中，所述大鯢原料中大鯢肉與大鯢皮、大鯢肝、大鯢分泌物、大鯢血、大鯢胃、大鯢骨的重量配比為100：0.5～2:0.5～1：0.1～0.5:0.5～1:0.5～1:0.5～2。
公開號為cn104206641a的中國公開了一種大鯢蛋白多肽粉及其制備方法，是將大鯢肉糜與水以固液比1∶2～1∶5的比例混合，加入肉糜質量0.1％～0.55％的檸檬酸鉀、肉糜質量0.1％～1％的中性蛋白酶或風味蛋白酶進行酶解，酶解ph為6.5～7.5，溫度為40～60℃，酶解時間1～3h；再加入大鯢肉糜質量0.1％～5％的復合蛋白酶，維持溫度在40～60℃，繼續酶解2～3h。酶解后產物加熱至100℃，維持10～15min，過濾得蛋白多肽水解液，加入大鯢肉糜質量0.1％～3％的活性炭，過濾，得蛋白多肽水解液，進行減壓真空濃縮，真空冷凍干燥，得大鯢蛋白多肽粉。
公開號為cn104432083a的中國公開了一種大鯢多肽抗氧化口服液的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：1)選取人工飼養大鯢肉為原料，剔除油脂及雜質，洗凈瀝干后，加入質量為大鯢肉2倍的純凈水進行勻漿處理；2)按質量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯢肉，再加入復合酶進行酶解，復合酶用量為瀝干大鯢肉質量的0.5％-2％，酶解溫度為50-60℃，酶解時間為5-7h，酶解完畢加熱酶解液到90℃以上滅酶10-20min，得大鯢酶解多肽液；3)微濾：將步驟2)所得大鯢酶解多肽液經0.45μm微濾膜進行微濾，取濾液；4)超濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進行超濾，得大鯢多肽液，備用；5)先將大鯢多肽液、白砂糖、蘋果汁、檸檬酸、β-環狀糊精和水混合均勻，再加入黃原膠溶液，并混合均勻，按質量百分數計，各組分的比例為：大鯢多肽液20-50％、白砂糖8-12％、蘋果汁3-5％、檸檬酸0.01-0.03％、β-環狀糊精0.5-1％、黃原膠0.05-0.15％，余量為純凈水；6)將步驟5)所得物采用500目濾布過濾，然后進行灌裝；7)將步驟6)所得物進行高溫高壓殺菌，殺菌方式為：升溫10min，于110-115℃、0.07mpa殺菌15-40min，分級冷卻10min，冷卻至中心溫度小于40℃，即得大鯢多肽抗氧化口服液成品；所述復合酶，按質量比計，由以下酶組成：中性蛋白酶:木瓜蛋白酶:風味蛋白酶＝2:1:1。
公開號為cn104988199a的中國公開了一種大鯢黏液蛋白肽的制備方法，1)電擊刺激法采集大鯢粘液，凍干得粘液凍干粉；2)將所得粘液凍干粉加入50～120倍質量的蒸餾水中，再加入黏液凍干粉質量10％-30％的堿性蛋白酶，調節ph至9～9.5，在40～60℃溫度條件下酶解1～3h，再將混合液煮沸1～2min，冷卻至19～25℃；3)將步驟2)處理完成的混合液在3000-4500r/min條件下，離心10～20min，取清液，調節清液ph值為4～5，在40～45℃溫度條件下，加入1％～2％活性碳，攪拌45～60min進行脫色脫腥，然后在3000-4500r/min條件下，離心10-15min，過0.45μm濾膜得濾液；4)將步驟3)處理完成的濾液在30℃-60℃溫度條件下旋轉蒸發濃縮至原樣1/7～1/8，將濃縮液用塑料袋密封，在溫度19～25℃，壓力150-250mpa條件下，殺菌1-5min，在潔凈環境下，真空冷凍干燥、粉碎得到粘液蛋白肽粉。
公開號為cn105018555a的中國公開了一種大鯢皮膠原蛋白肽的制備方法，將大鯢皮脫脂并進行脫腥，再用堿液去黑皮及雜蛋白，然后在溫度20～25℃，壓力150-300mpa條件下保壓10～60min，調節超高壓處理過的大鯢皮ph至8～10，加入皮料重量2％～3％的堿性蛋白酶，在溫度45～50℃條件下，持續攪拌酶解3～6小時，再將混料煮沸1～2min，冷卻至40℃，再調節混料ph至4～5，加入混料質量1％的活性炭，攪拌脫色；將處理完成的混料在轉速3000-4500r/min條件下，離心10～15min，再依次經0.45μm的濾膜微濾、截留分子量為4～5kd的超濾膜超濾、截留分子量為2-3kd的納濾膜納濾得濾液，再將濾液濃縮至原樣的二分之一，將濃縮液凍干并粉碎即得大鯢皮膠原蛋白肽粉。本發明制備膠原蛋白肽分子量小，90％以上分子量小于1000道爾頓。
公開號為cn105399815a的中國公開了一種大鯢膠原糖肽，按如下方法制備：a.以大鯢皮為原料，制得大鯢皮酸溶性膠原蛋白；b.以大鯢皮酸溶性膠原蛋白為原料，制得大鯢皮膠原蛋白肽；c.將10g牡蠣多糖加入到100ml0.01mol/lph6.5的磷酸鈉緩沖液中，攪拌2h，加入5g大鯢膠原蛋白肽及10g牡蠣多糖，繼續攪拌2h，4℃靜置過夜，再60℃攪拌4h，冷卻至室溫，9000r/min離心30min，得上清液，冷凍干燥上清液即得到大鯢膠原糖肽。
公開號為cn106107397a的中國公開了一種大鯢蛋白肽粉固體飲料的制備方法，包括以下步驟：(1)、將大鯢蛋白肽粉2-5％、菊粉5-15％、火龍果10-20％、茶多酚2-5％、水蘇糖2-4％、蜂蜜粉5-15％、風味調和劑35-75％加入混合器內混合均勻，得到混合物；(2)、將步驟(1)得到的混合物進行紫外線殺菌后裝袋既得。
盡管大鯢蛋白含量相當豐富，營養成分更優于其它動物性產品，但從上述文獻資料表明在糖肽方面研究較多，相關其它功能性成份開發相當薄弱，并且在加工過程中營養成份損失嚴重，產品的開發附加值低，導致大鯢附加值低，制約了大鯢產業發展。
技術實現要素：
本發明所要解決的技術問題是：針對現有大鯢加工過程中營養損失嚴重的窘境，提供一種工藝合理、操作簡單、工藝周期短、大鯢糖肽等營養成分流失少、營養價值高的大鯢蛋白肽粉的制備方法。
本發明提供一種大鯢蛋白肽粉產品及其制備方法，包括下述步驟：
(1)取新鮮大鯢或大鯢下腳料加水進行磨漿，加入水的體積與大鯢的重量比為5～10l∶1kg，再加入兩至四倍體積的石油醚進行脫脂，靜置20～30min去除上層石油醚溶液，下層溶液在20～30℃保溫攪拌30～60min，三層紗布過濾1次，微濾1次，得大鯢濾液ⅰ和濾渣ⅰ；
(2)桑葉加水在70～90℃高溫攪拌提取60～120min，加入水的體積與桑葉的重量比為5～10l∶1kg，三層紗布過濾1次，微濾1次，得桑葉濾液和桑葉濾渣，桑葉濾液經薄膜蒸發濃縮儀進行濃縮至干，得桑葉提取物；
(3)濾液ⅰ加入兩至五倍體積的乙醇，靜置20～25min，4000～8000rpm離心20～30min，得到沉淀ⅱ和上清液ⅱ；
(4)沉淀ⅱ加入水進行溶解，4000～8000rpm離心20～30min，得到上清液ⅲ和沉淀ⅲ，其中加入水的體積與沉淀ⅱ的重量比為0.5～2l∶1kg；
(5)沉淀ⅲ加入水進行懸浮，再加入胰蛋白酶在35～45℃下水解4～4.5h，其中胰蛋白酶的終濃度達到300u/l以上，得酶解液ⅰ，其中加入水的體積與沉淀ⅲ的重量比為3～6l∶1kg；
(6)上清液ⅱ進行減壓濃縮去除乙醇，再加入到濾渣ⅰ中，其中加入體積與濾渣ⅰ的重量比為100l∶30～45kg，再加入桑葉濾渣，90～110℃高溫處理20～30min，冷卻后加入中性蛋白酶在35～45℃下水解4～4.5h，其中中性蛋白酶的終濃度達到100u/l以上，得酶解液ⅱ,其中加入桑葉濾渣與濾渣ⅰ的重量比為20～35kg∶100kg；
(7)將酶解液加熱到85～90℃，充分攪拌下保溫15～18min，4000～8000rpm離心20～30min，得到上清液ⅳ；
(8)將上清液ⅲ、上清液ⅳ進行混合，并在60～75℃、薄膜蒸發濃縮儀上濃縮至干，再粉碎即可獲得大鯢提取物，其中上清液ⅲ與上清液ⅳ混合比例為1l：0.1～3l；
(9)桑葉提取物再與大鯢提取物進行混合得大鯢蛋白肽粉產品，其中大鯢提取物與桑葉提取物重量比為2～6kg∶1kg。
在一個具體實施方案中，其中步驟(4)所獲得上清液ⅲ可以直接口服，或做為面膜等護膚材料使用。
在一個具體實施方案中，其中步驟(5)所獲得酶解液ⅰ可以直接作為小肽口服液使用，也可以直接濃縮至干使用或添加到其它保健品中。
在一個具體實施方案中，其中步驟(6)所獲得酶解液ⅱ可以直接作為小肽口服液使用，也可以直接濃縮至干使用或添加到其它保健品中。
在一個具體實施方案中，其中步驟(7)所述酶解液是指酶解液ⅰ和酶解液ⅱ。
在一個具體實施方案中，其中步驟(7)所述酶解液ⅰ與酶解液ⅱ的混合比例為1l：0.5～8l。
在一個具體實施方案中，其中步驟(8)所述獲得產品，可以直接使用，也可以加水配制成口服液食用，也可以添加到其它保健品中。
上述所獲得各種產品可以應用在制備清除自由基產品中，也可以應用在制備提高機體免疫力產品中，還可以應用在制備促進皮膚纖維原細胞增殖產品中。
技術效果
1、本發明充分利用了大鯢中蛋白質和多糖以及黃酮類物質，又克服了傳統工藝過程中大鯢產生的魚腥味，非常適合糖尿病人食用。
2、該方法避免了大鯢蛋白營養成分的流失，將大鯢經過高溫處理、酶解等深加工處理，實現大鯢的綜合加工，過程易控制，便于工業化生產，也增加了大鯢加工附加值。
3、該法能避免高溫和酸堿處理下多糖的降解，又能根據不同需求調節產品中多糖含量，又通過蛋白質先變性再水解方式以提高了小肽產率。
具體實施方式
以下用本發明的實施例來進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限制本發明。
實施例1
取新鮮的大鯢加700l水進行磨漿，再加入兩至四倍體積的石油醚進行脫脂，靜置20～30min去除上層石油醚溶液，下層溶液在25℃保溫攪拌60min，三層紗布過濾1次，網篩為100目微濾機進行微濾1次，得740l大鯢濾液ⅰ和50kg濾渣ⅰ。
100kg桑葉加600l水在85℃高溫攪拌提取120min，三層紗布過濾1次，微濾1次，得約530l桑葉濾液和桑葉濾渣，桑葉濾液經薄膜蒸發濃縮儀進行濃縮至干，得桑葉提取物。
濾液ⅰ加入乙醇1600l，靜置25min，7000rpm離心24min，得到24.6kg沉淀ⅱ和2280l上清液ⅱ。沉淀ⅱ加入20l水進行溶解，8000rpm離心20min，得到23l上清液ⅲ和22.4kg沉淀ⅲ；沉淀ⅲ加入80l水進行懸浮，再加入胰蛋白酶在40℃下水解4h，其中胰蛋白酶的終濃度達到400u/l左右，得酶解液ⅰ；上清液ⅱ進行減壓濃縮去除乙醇得450l濃縮液，再將450l濃縮液加入到180kg濾渣ⅰ中，再加入40kg桑葉濾渣，100℃高溫處理25min，冷卻后加入中性蛋白酶在40℃下水解4.5h，其中中性蛋白酶的終濃度達到150u/l，得酶解液ⅱ。
將30l酶解液ⅰ和30l酶解液ⅱ合并，加熱到90℃，充分攪拌下保溫15min，6000rpm離心30min，得到上清液ⅳ；將10l上清液ⅲ與20l上清液ⅳ進行混合，并在75℃，用型號為dsl5薄膜蒸發濃縮儀濃縮至干，再粉碎即可獲得大鯢提取物。取10kg桑葉提取物，再與55kg大鯢提取物進行混合，得大鯢蛋白肽粉產品。
實施例2
取新鮮的大鯢加900l水進行磨漿，再加入兩至四倍體積的石油醚進行脫脂，靜置20～30min去除上層石油醚溶液，下層溶液在30℃保溫攪拌60min，三層紗布過濾1次，網篩為150目微濾機進行微濾1次，得980l大鯢濾液ⅰ和60kg濾渣ⅰ。
150kg桑葉加900l水在90℃高溫攪拌提取100min，三層紗布過濾1次，微濾1次，得約800l桑葉濾液和桑葉濾渣，桑葉濾液經薄膜蒸發濃縮儀進行濃縮至干，得桑葉提取物。濾液ⅰ加入乙醇2000l，靜置25min，8000rpm離心25min，得到38.5kg沉淀ⅱ和2850l上清液ⅱ。
沉淀ⅱ加入40l水進行溶解，8000rpm離心20min，得到45l上清液ⅲ和34.5kg沉淀ⅲ；沉淀ⅲ加入120l水進行懸浮，再加入中性蛋白酶在45℃下水解4.5h，其中胰蛋白酶的終濃度達到450u/l，得酶解液ⅰ；上清液ⅱ進行減壓濃縮去除乙醇得750l濃縮液，再將750l濃縮液再加入到300kg濾渣ⅰ中，再加入70kg桑葉濾渣，110℃高溫處理20min，冷卻后加入中性蛋白酶在45℃下水解4.5h，其中中性蛋白酶的終濃度達到250u/l，得酶解液ⅱ。
將30l酶解液ⅰ和30l酶解液ⅱ合并，加熱到90℃，充分攪拌下保溫18min，8000rpm離心20min，得到上清液ⅳ；將10l上清液ⅲ與20l上清液ⅳ進行混合，并在70℃，用型號為dsl5薄膜蒸發濃縮儀濃縮至干，再粉碎即可獲得大鯢提取物。15kg桑葉提取物，再與65kg大鯢提取物進行混合，得大鯢蛋白肽粉產品。