專(zhuān)利名稱(chēng)：一種煙葉人工醇化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及煙葉發(fā)酵，特別涉及一種人工煙葉發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
煙葉收割烘烤后，為了去掉煙葉的青雜味和改善香吃味等品質(zhì)，按要求對(duì)煙葉必須進(jìn)行醇化。煙葉醇化方法較多，有人工醇化、自然醇化等。將調(diào)制后的原煙進(jìn)行包裝并存放在特點(diǎn)的場(chǎng)所在自然氣候條件下進(jìn)行I 3年的醇化，隨著季節(jié)和環(huán)境的變化煙葉的內(nèi)在成分發(fā)生變化，品質(zhì)中的優(yōu)點(diǎn)得到顯現(xiàn)，品質(zhì)將逐漸得到改善，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)作煙葉的自然醇化。自然醇化也稱(chēng)為“自然發(fā)酵”、“陳化”，是一種緩慢的發(fā)酵方法。
煙葉發(fā)酵機(jī)理從國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果來(lái)看，研究者對(duì)煙葉發(fā)酵機(jī)理結(jié)論頗不一致，大致可分三種觀點(diǎn)微生物作用原理、酶催化原理和氧化化學(xué)變化原理。但究竟哪種作用在發(fā)酵中起著關(guān)鍵作用，以及三種作用間關(guān)系如何，目前仍不清楚，也尚無(wú)定論。Koller首先對(duì)煙草發(fā)酵機(jī)理進(jìn)行了探索，指出煙葉發(fā)酵在某些方面類(lèi)似于乙醇發(fā)酵。Suchsland首先對(duì)雪茄煙中的微生物區(qū)系進(jìn)行了研究，提出發(fā)酵是由微生物活動(dòng)引起的。而后，Reid也發(fā)現(xiàn)在雪茄煙發(fā)酵過(guò)程中，微生物數(shù)量增加了 10 100倍，且與一些酶的活性變化呈正相關(guān)，因而認(rèn)為發(fā)酵是由微生物引起的。Jesen的研究也表明，煙葉發(fā)酵過(guò)程中微生物數(shù)量增加，因而認(rèn)為微生物在煙葉發(fā)酵中起重要作用。Johnson則認(rèn)為微生物的作用只是增加了煙葉中酶的含量，對(duì)發(fā)酵未起關(guān)鍵性作用。目前，自然醇化的不足主要有一是因煙葉富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及長(zhǎng)期與外部環(huán)境密切接觸，煙葉很容易生蟲(chóng)；二是在春夏秋冬四季變化過(guò)程中，因?yàn)闇囟取穸茸兓螅瑹熑~很容易產(chǎn)生霉變；三是因煙葉長(zhǎng)期與過(guò)量空氣接觸，煙葉顏色很容易變褐、變深，所以自然醇化時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，一般不能超過(guò)3年。自然醇化由于存在長(zhǎng)蟲(chóng)、霉變等原因一方面給煙葉造成嚴(yán)重的損失，據(jù)了解煙葉醇化后的損失達(dá)O. 8%，一個(gè)中型卷煙廠年造成的直接經(jīng)濟(jì)損失達(dá)2000多萬(wàn)元。另一方面還嚴(yán)重影響煙葉的內(nèi)外在品質(zhì),影響煙葉深加工產(chǎn)品的質(zhì)量。因此有必要進(jìn)行對(duì)煙葉發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行革新，從目前煙葉發(fā)酵技術(shù)的使用情況來(lái)看，大多數(shù)煙葉發(fā)酵技術(shù)還處于實(shí)驗(yàn)室摸索階段，尚未形成一套系統(tǒng)而行之有效適用工業(yè)化大生產(chǎn)的煙葉發(fā)酵技術(shù)。現(xiàn)有的煙葉醇化技術(shù)要么對(duì)反應(yīng)條件要求苛刻，要么有其他副作用，限制了其在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的
本發(fā)明的目的是提供一種人工煙葉發(fā)酵方法，可以應(yīng)用工業(yè)大生產(chǎn)，同時(shí)縮短了發(fā)酵時(shí)間，節(jié)約了成本，并保證煙葉質(zhì)量。
技術(shù)方案
一種煙葉人工醇化方法，其特征在于
A、將發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉分別用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體，獲得菌體；
B、將發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉分別用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體，獲得菌體；
C、分別將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1-3 :1-3 :1-6合并菌體；
D、分別將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1-3 :1-3 :1-6合并菌體；
E、將上述獲得菌體再次合并后加入沒(méi)有發(fā)酵的煙葉上進(jìn)行發(fā)酵。 作為一種優(yōu)化方式步驟C中將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1: 3 :6合并。作為一種優(yōu)化方式步驟D中將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1: 3 :6合并。所述步驟A所述的培養(yǎng)條件為37°C，Id。所述步驟B所述的培養(yǎng)條件PDB培養(yǎng)基，28°C，3d搖床培養(yǎng)。所述步驟E所述的發(fā)酵條件為置于培養(yǎng)架上室溫發(fā)酵，共發(fā)酵30d。
本發(fā)明原理1、微生物加速煙葉純化的機(jī)制微生物的生長(zhǎng)周期較短，在生長(zhǎng)過(guò)程中能產(chǎn)生多種酶類(lèi)物質(zhì)誘導(dǎo)或刺激煙葉內(nèi)多種酶系統(tǒng)，進(jìn)而促使煙葉中的底物充分降解轉(zhuǎn)變?yōu)樾》肿酉銡馕镔|(zhì)；并且微生物自身代謝過(guò)程中也可以產(chǎn)生多種小分子致香物質(zhì),從而促進(jìn)煙葉的醇化。本發(fā)明巧妙采用不同年份煙葉提取菌體，然后在未發(fā)酵煙葉上發(fā)酵，模擬自然發(fā)酵過(guò)程。不同年份的煙葉所含菌種類(lèi)不同，其相互發(fā)生反應(yīng)，誘導(dǎo)或刺激煙葉中酶類(lèi)系統(tǒng)，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看來(lái)是有效的。有益效果1、本發(fā)明采用兩種培養(yǎng)基分別培養(yǎng)細(xì)菌和真菌，并將不同年份的煙葉上的菌體進(jìn)行收集，最主要的發(fā)明點(diǎn)在于，采用優(yōu)化比例合并，經(jīng)實(shí)驗(yàn)考察認(rèn)為其可以模擬自然發(fā)酵的過(guò)程，但過(guò)程縮短，品質(zhì)基本相似。結(jié)果表明經(jīng)過(guò)30d處理后煙葉可以與發(fā)酵兩年煙葉品質(zhì)相當(dāng)。2、本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，適合工業(yè)生產(chǎn)，能縮短發(fā)酵時(shí)間，降低生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
試驗(yàn)材料
未發(fā)酵的煙葉，分別發(fā)酵1、2、3年的本地?zé)熑~(均產(chǎn)自云南)，無(wú)菌水，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，PDB培養(yǎng)基。方法1、將I年發(fā)酵煙葉進(jìn)行表面消毒后搗碎，用無(wú)菌水稀釋分別倒入以上營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37°C，ld ;PDB培養(yǎng)基，28°C，3d搖床培養(yǎng)。2年發(fā)酵煙葉和3年發(fā)酵煙葉處理同上； 2、分別將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1:1 I合并菌體；
3、分別將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1:1 1合并菌體；
4、將步驟(3)和(4)獲得菌體再次合并后加入沒(méi)有發(fā)酵的煙葉上進(jìn)行發(fā)酵。具體方法為將將步驟(4)培養(yǎng)后的菌體菌種的混合將菌液直接離心后得到菌泥，以脫脂牛奶作為凍干保護(hù)劑進(jìn)行冷凍干燥后得到粉末狀的微生物制劑，噴灑到紫外燈照射滅菌后的未發(fā)酵煙葉上。置于培養(yǎng)架上室溫發(fā)酵，每隔2天抽查并記錄發(fā)酵情況(煙葉顏色、氣味的變化及有無(wú)霉變)，共發(fā)酵30d。實(shí)施例2 試驗(yàn)材料
未發(fā)酵的煙葉，分別發(fā)酵1、2、3年的本地?zé)熑~(產(chǎn)自云南)，無(wú)菌水，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，PDB培養(yǎng)基。方法
1、將I年發(fā)酵煙葉進(jìn)行表面消毒后搗碎，用無(wú)菌水稀釋分別倒入以上營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，370C，Id ；PDB培養(yǎng)基，28°C，3d搖床培養(yǎng)。2年發(fā)酵煙葉和3年發(fā)酵煙葉處理同上；
2、分別將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1:2 5合并菌體；
3、分別將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1:2 5合并菌體；
4、將將步驟(3)和(4)獲得菌體再次合并后加入沒(méi)有發(fā)酵的煙葉上進(jìn)行發(fā)酵。具體方法為將將步驟(4)培養(yǎng)后的菌體菌種的混合將菌液直接離心后得到菌泥，以脫脂牛奶作為凍干保護(hù)劑進(jìn)行冷凍干燥后得到粉末狀的微生物制劑，噴灑到紫外燈照射滅菌后的未發(fā)酵煙葉上。置于培養(yǎng)架上室溫發(fā)酵，每隔2天抽查并記錄發(fā)酵情況(煙葉顏色、氣味的變化及有無(wú)霉變)，共發(fā)酵30d。實(shí)施例3 試驗(yàn)材料
未發(fā)酵的煙葉，分別發(fā)酵1、2、3年的本地?zé)熑~(產(chǎn)自云南)，無(wú)菌水，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，PDB培養(yǎng)基。方法
1、將I年發(fā)酵煙葉進(jìn)行表面消毒后搗碎，用無(wú)菌水稀釋分別倒入以上營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，37°C，ld ;PDB培養(yǎng)基，28°C，3d搖床培養(yǎng)。2年發(fā)酵煙葉和3年發(fā)酵煙葉處理同上；
2、分別將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1:3 :6合并菌體；
3、分別將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1:3 6合并菌體；
4、將將步驟(3)和(4)獲得菌體再次合并后加入沒(méi)有發(fā)酵的煙葉上進(jìn)行發(fā)酵。具體方法為將將步驟(4)培養(yǎng)后的菌體菌種的混合將菌液直接離心后得到菌泥，以脫脂牛奶作為凍干保護(hù)劑進(jìn)行冷凍干燥后得到粉末狀的微生物制劑，噴灑到紫外燈照射滅菌后的未發(fā)酵煙葉上。置于培養(yǎng)架上室溫發(fā)酵，每隔2天抽查并記錄發(fā)酵情況(煙葉顏色、氣味的變化及有無(wú)霉變)，共發(fā)酵30d。實(shí)施例4
以未發(fā)酵的煙葉作為原始樣，發(fā)酵2年的煙葉為對(duì)照樣，添加實(shí)施例1-3獲得微生物制劑進(jìn)行人工醇化30天后的煙葉為添加樣進(jìn)行化學(xué)成分檢測(cè)及評(píng)吸結(jié)果的對(duì)比。化學(xué)成分檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種煙葉人工醇化方法，其特征在于 A、將發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉分別用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體，獲得菌體； B、將發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉分別用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體，獲得菌體； C、分別將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1-3 :1-3 :1-6合并菌體； D、分別將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1-3 :1-3 :1-6合并菌體； E、將步驟C和D獲得菌體再次合并后加入沒(méi)有發(fā)酵的煙葉上進(jìn)行發(fā)酵。
2.根據(jù)權(quán)利要求1一種煙葉人工醇化方法，其特征在于所述步驟C中將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1: 3 :6合并菌體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1一種煙葉人工醇化方法，其特征在于步驟D中將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1: 3 :6合并菌體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1一種煙葉人工醇化方法，其特征在于所述步驟A所述的培養(yǎng)條件為37。。，Id。
5.根據(jù)權(quán)利要求1一種煙葉人工醇化方法，其特征在于所述步驟B所述的培養(yǎng)條件28。。，3d。
6.根據(jù)權(quán)利要求1一種煙葉人工醇化方法，其特征在于所述步驟E所述的發(fā)酵條件為置于培養(yǎng)架上室溫發(fā)酵，共發(fā)酵30d。
全文摘要
本發(fā)明涉及煙葉發(fā)酵，特別涉及一種人工煙葉發(fā)酵方法。一種煙葉人工醇化方法，其特征在于將發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉分別用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體，獲得菌體；將發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉分別用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌體，獲得菌體；分別將用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1-31-31-6合并菌體；分別將用PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)菌養(yǎng)獲得發(fā)酵一年，兩年，三年的煙葉菌體按質(zhì)量比1-31-31-6合并菌體；將上述獲得菌體再次合并后加入沒(méi)有發(fā)酵的煙葉上進(jìn)行發(fā)酵。本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)考察認(rèn)為其可以模擬自然發(fā)酵的過(guò)程，但過(guò)程縮短，品質(zhì)基本相似。
文檔編號(hào)A24B15/20GK103005697SQ201310018759
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月18日
發(fā)明者路易斯伊格納羅, 張娟, 葉亞?wèn)|, 滕凌, 朱文華, 全利, 潘鸝, 胡娟, 肖慧, 葉汝章, 楊紫俊, 張俊, 李永忠, 霍世元 申請(qǐng)人:常州亞當(dāng)生物技術(shù)有限公司