專利名稱：桑枝提取物及其提取方法和新用途的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及天然植物提取物及其提取工藝和新用途，特別是將桑枝提取物制備成預防高尿酸血癥和痛風疾病的保健食品和治療高尿酸血癥和痛風疾病的藥物。
背景技術(shù)：
痛風是一組嘌呤代謝紊亂的慢性終身性疾病，其發(fā)病機理復雜，臨床特點為高尿酸血癥及由此引起的痛風性關節(jié)炎反復發(fā)作、痛風石沉積、痛風性慢性關節(jié)炎和關節(jié)畸形，常累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和形成尿酸腎結(jié)石。
高尿酸血癥是指血中尿酸超過正常的一種狀態(tài)，它是痛風的前奏，也是痛風的重要臨床表現(xiàn)。痛風性關節(jié)炎是過多的尿酸鹽沉積在關節(jié)組織，刺激關節(jié)組織并引起一系列的炎性反應而造成的，可分為急性和慢性兩種。急性痛風性關節(jié)炎以發(fā)作性的關節(jié)紅、腫、熱、痛及活動障礙為突出表現(xiàn)，經(jīng)過幾天后可逐漸消退，關節(jié)功能亦恢復正常，不留關節(jié)損害。慢性痛風性關節(jié)炎是指在急性關節(jié)炎反復發(fā)作的基礎上，導致關節(jié)結(jié)構(gòu)及軟組織的破壞，關節(jié)出現(xiàn)不同程度的畸形和活動受限，有的出現(xiàn)痛風石。慢性痛風性關節(jié)炎一旦形成后，往往是不可恢復的，在慢性的基礎上仍可有反復發(fā)作的急性發(fā)作，使關節(jié)損害更加明顯。
隨著人類物質(zhì)文明的進步和飲食結(jié)構(gòu)的顯著變化，痛風在歐洲、北美、日本、非洲等地區(qū)和國家越來越普遍。如在美國，所有人群中痛風發(fā)病率接近1％，并且發(fā)病率隨著年齡的增長而增高，65歲以上男性發(fā)病率已超過5％；在歐洲，痛風已侵犯13％的成年男性和5％的成年女性。女性絕經(jīng)后痛風發(fā)病率更高，有報道國內(nèi)為69.2％，國外達91％。痛風已成為當今世界性常見病、疑難病之一。
我國痛風發(fā)病率增高趨勢很明顯，一些大中城市痛風發(fā)病率已與發(fā)達國家相近。有專家預測，痛風在我國可能成為僅次于糖尿病的第二號代謝性疾病。
和其他疾病不同，痛風的危害性往往沒有引起足夠的注意。不論是原發(fā)性痛風還是部分繼發(fā)性痛風，都是終身罹患性疾病，其病程長，極易反復發(fā)作，病患者常痛苦不堪。根據(jù)臨床資料分析顯示，41％痛風患者有顯著腎功能損害，25％痛風患者死于腎功能衰竭。此外，痛風患者常伴發(fā)心腦血管疾病(如高血壓、冠心病、動脈粥樣硬化)、高血脂癥、肥胖癥、糖尿病等老齡病和代謝病。因此，痛風極其嚴重的危害性應當引起我們高度重視。
高尿酸血癥動物模型是國際上普遍用于評價抗高尿酸血癥和痛風藥物作用的實驗模型。該模型以一種尿酸酶抑制劑---氧嗪酸鉀鹽作為化學誘導劑，抑制尿酸分解，增加體內(nèi)血清尿酸水平。
現(xiàn)有西藥治療藥物針對痛風患者在不同時期所表現(xiàn)的癥狀具有選擇性應用療效。如抗炎鎮(zhèn)痛藥物秋水仙堿和消炎痛用于痛風急性發(fā)作治療，排泄尿酸藥物如丙磺舒、苯溴馬龍用于間隙期及慢性期治療，黃嘌呤氧化酶抑制劑藥物別嘌呤醇(唯一在臨床上使用)抑制尿酸合成。但由于上述藥物毒副作用大，患者往往不能堅持長期服用，難以控制病情。如秋水仙堿和消炎痛具有胃腸道刺激作用，前者還產(chǎn)生白細胞降低和脫發(fā)等副作用；丙磺舒、苯溴馬龍具有胃腸道反應、腎絞痛及激發(fā)痛風急性發(fā)作等副作用；別嘌呤醇有致變態(tài)反應(發(fā)生率高達10-15％)、超敏Stevena-Johnson綜合癥(可導致27.5％出現(xiàn)斑丘疹患者死亡)、骨髓抑制(雖較少見，但后果嚴重)等嚴重的毒副作用。
現(xiàn)代醫(yī)學的痛風歸屬于中醫(yī)“歷節(jié)痛”、“黃汗”、“痛風”、“白虎歷節(jié)”或“腳氣病”范疇，也有籠統(tǒng)貫之以“痹證”。中醫(yī)藥根據(jù)辨證施治、辨病用藥的原則，治療痛風已取得較好的效果，且副作用少，易被患者接受，從而達到長期用藥，最終根治疾病的目的。風寒濕痹者以溫經(jīng)散寒、除濕通絡為主，可用薏以仁湯加減或者防己茯苓湯加減治療；風濕熱痹者以清熱解毒利濕、活血化瘀止痛為主，可用白虎桂枝湯或四妙丸加減治療；痰瘀痹阻者以宣壅理氣為主，可用桃紅飲加味治療；陰血不足者，應以養(yǎng)血活血為主，兼以疏風祛濕，可用四物湯加味治療。根據(jù)辨病用藥的原則，土茯苓、蠶砂、虎杖等具有增加尿酸排泄，降低血尿酸水平的作用，可用于治療高尿酸血癥；海風藤、威靈仙、白芥子、玄參等，可用于治療關節(jié)變形僵硬、痛風結(jié)節(jié)；金錢草、海金砂等用于治療尿結(jié)石。
中國專利局先后公開了多個治療痛風的中藥復方制品，如在1997年3月12日公開了“痛風靈藥酒及其制備工藝”[公開號CN 1144676A，申請?zhí)?61028513]，在1998年4月15日公開了“治療痛風的藥酒”[公開號CN 1178689，申請?zhí)?7107775.4]，在1999年9月29日公開了“復方三痹痛風藥酒”[公開號CN 1229658，申請?zhí)?8111903.4]，在1994年1月19日公開了“一種治療坐骨神經(jīng)痛和痛風病的中藥”[公開號CN1080868A，申請?zhí)?3111076.9]，在1996年2月14日公開了“一種治療坐骨神經(jīng)痛和痛風病的中藥”[公開號CN 1116528，申請?zhí)?4109349.2]，在1998年8月5日公開了“治療痛風病的中藥”[公開號CN 1189374A，申請?zhí)?8110667.6]，在2000年4月5日公開了“一種治療痛風病的中藥”[公開號CN 1249192A，申請?zhí)?8121618.8]，在2000年4月19日公開了“一種治療痛風病的中藥”[公開號CN 1250664A，申請?zhí)?91187725]。上述各種抗痛風中藥復方，所含中藥味數(shù)較多，并為粗制劑，其中主要藥物和有效部位及成分沒有突出或者不明，不具有科學的質(zhì)量標準。部分專利產(chǎn)品系酒制品，而現(xiàn)代研究表明，各種酒類和酒制食物均可引起痛風發(fā)作，其原因有酒中的乙醇可直接加快體內(nèi)嘌呤合成速度，使嘌呤產(chǎn)量增加，并能刺激人體內(nèi)乳酸合成，而乳酸可抑制腎臟排泄尿酸的功能，容易引起泌尿系統(tǒng)結(jié)石；某些酒類，尤其是啤酒在發(fā)酵過程中可產(chǎn)生大量嘌呤。因此從現(xiàn)代科學角度上講，上述涉及藥酒治療痛風的專利中藥不適宜為痛風患者或孕婦患者，或伴有心臟病、高血壓等患者服用。
桑枝為桑科植物Morus alba L.的嫩枝，系藥食兩用常用中藥。桑枝能祛風濕、利關節(jié)、行水氣，治風寒濕痹，四肢拘攣，腳氣浮腫，肌體風癢，可用于治療臂痛、水氣腳氣、高血壓、紫癜風。桑枝含鞣質(zhì)、糖類和多羥基生物堿等，并含有大量的黃酮類化合物，如蘆丁(Rutin)、槲皮素(Quercetin)和桑色素(Morin)等。臨床上桑枝復方制劑主要用于治療中風后遺癥、II型糖尿病等疾病，但未見有治療高尿酸血癥和痛風的相關報道。中國專利局曾在1998年9月16日公開了“治療痛風病的中藥”[公開號CN 1192916，申請?zhí)?7107394.5]，該中藥復方系含由桑枝炒炙品以及其它22種中草藥，現(xiàn)代研究證實桑枝經(jīng)炒制后，主要成分總黃酮含量明顯降低，另外，該復方有效部位及有效成分均不明確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了解決上述問題，提出一種桑枝提取物及其提取工藝和藥物新用途，該新用途是桑枝提取物在防治高尿酸血癥和痛風疾病的保健食品制備中的應用以及在治療高尿酸血癥和痛風藥物制備中的應用。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案之一是桑枝提取物，系由單味藥材桑枝用0～95％乙醇水溶液或氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等有機溶劑或它們的組合為提取溶媒在10-100℃溫度條件下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶劑即得。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案之二是桑枝提取物的提取方法，單味藥材桑枝用0～95％乙醇水溶液、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶劑或它們的組合為提取溶媒在10-100℃溫度下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶劑即得。
所得提取物可用下列方法進一步純化①所得提取液用氫氧化鈉等堿性物質(zhì)調(diào)pH至7.5-9.5，靜置，離心后上清液用鹽酸調(diào)pH至4-6，靜置，取沉淀，水洗至中性，干燥即得，總黃酮含量為10-60％；②所得提取液用石油醚或汽油等脫脂后，濃縮、干燥即得，總黃酮含量為1-5％；③所得提取液用石油醚或汽油等脫脂后，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分別或順次提取，各提取液分別濃縮、干燥即得，總黃酮含量依次為5-20％、10-30％、5-30％、1-10％、1-10％；④所得提取液用大孔樹脂吸附，以10～95％乙醇解吸附，解析液濃縮，干燥即得，總黃酮含量為20-80％；⑤所得提取液進一步經(jīng)硅藻土、氧化鋁等吸附劑吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有機溶劑洗脫后，回收溶劑，濃縮干燥，即得，總黃酮含量為10-80％；⑥以聚酰胺、硅膠、離子交換樹脂為填料，用柱層析分離，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有機溶劑或水為洗脫劑，洗脫液濃縮，干燥即得，總黃酮含量為10-80％；⑦以上純化方法可單用或采用幾種方法的組合，桑枝提取物中總黃酮含量為0.5-80％，其中含有蘆丁、槲皮素和桑色素等。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案之三是桑枝提取物及以桑枝提取物為有效組分制成的藥物(包括口服、注射制劑及外用制劑)以及保健食品在預防和治療高尿酸血癥和痛風等疾病中的應用。
本發(fā)明的優(yōu)點是，彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種藥食兩用，具有預防或治療高尿酸血癥和痛風作用的新型中藥制劑或保健食品。
本發(fā)明所得的桑枝提取物對正常血清尿酸水平無影響，具有很好的安全性，適于不同年齡層次和各類型高尿酸血癥和痛風患者以及伴發(fā)心血管和糖尿病等疾病的患者使用。
本發(fā)明在高尿酸血癥模型上科學地評價并確定桑枝提取物治療高尿酸血癥和痛風的有效性，并以總黃酮和蘆丁、槲皮素、桑色素的含量為指標，建立科學的質(zhì)量標準，藥效可靠穩(wěn)定，工藝流程可控性強。
由本發(fā)明獲得的治療高尿酸血癥和痛風病的藥物來源單一，主要藥效成分明確。
本發(fā)明采用不同溶劑系統(tǒng)提取或經(jīng)大孔吸附樹脂富集獲得具有治療高尿酸血癥和痛風藥效提取物，工藝合理，操作性強，便于工業(yè)生產(chǎn)。
隨著社會發(fā)展、飲食結(jié)構(gòu)的改變和人類壽命的延長，痛風發(fā)病率逐年升高，已成為當今世界性常見病、疑難病之一。其危害性日趨嚴重，國際范圍內(nèi)對防治痛風藥品的需求量猛增，本發(fā)明解決了目前國內(nèi)外藥品市場上缺少高效、質(zhì)優(yōu)、安全、可控的抗痛風中藥的問題，獲得的產(chǎn)品具有療效好、安全可靠、質(zhì)量可控，易于產(chǎn)業(yè)化，且易于服用、價格低廉等多種西藥不可比擬的優(yōu)點，可使國內(nèi)外眾多患者擺脫病痛，提高生活質(zhì)量，具有廣闊的市場前景。
本發(fā)明的實驗研究充分證明，臨床上唯一使用的黃嘌呤氧化酶抑制劑藥物別嘌呤醇，雖能很顯著的抑制尿酸的合成，降低高尿酸血癥動物血清尿酸水平，但同時對正常動物血清水平也有顯著降低作用。桑枝提取物具有降低高尿酸血癥小鼠和大鼠血清尿酸水平的作用，但對正常動物的尿酸水平無顯著影響。而且桑枝提取物能顯著抑制大鼠尿酸鈉引起的痛風性關節(jié)腫脹，降低炎癥組織中K+含量和外周神經(jīng)遞質(zhì)，保護炎癥組織，減輕膠原纖維斷裂狀況。因此，與別嘌呤醇相比，由桑枝提取物制備獲得的中藥新制劑具有安全性高、有效性佳的優(yōu)點。
以本發(fā)明獲得的桑枝各提取物作為主要有效成分的藥物，可以用于治療高尿酸血癥和痛風等疾病。桑枝各提取物配以適當藥用輔料，可制成片劑、顆粒劑、膠囊劑或注射劑等制劑。這些劑型是按照本領域的技術(shù)人員所熟知的方法制備的。用于制造片劑、顆粒劑、膠囊劑等成型工藝的輔料是常用的助劑，例如淀粉、明膠、阿拉伯膠、聚乙二醇，等等，表面活性劑、潤滑劑、崩解劑、防腐劑、矯味劑、色素，等等。用于制造注射劑的溶劑是常用的注射用水、注射用油、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺等，制劑中還含有其它附加劑，例如增溶劑、濕潤劑、乳化劑、緩沖劑和混懸劑等。
具體實施例方式
以下實施例僅作為進一步闡述發(fā)明之用，不能用來限制本發(fā)明。
實施例1桑枝提取物WE對高尿酸血癥和正常小鼠和大鼠血清尿酸水平和大鼠尿酸鈉引起的痛風性關節(jié)炎的影響取干燥的桑枝飲片，分別用10倍、8倍、6倍量水煎煮三次，每次1小時。合并煎煮液，減壓濃縮、干燥，即得WE，得率為11.52％，總黃酮含量為1.1％。
WE對高尿酸血癥和正常小鼠和大鼠尿酸水平的影響結(jié)果分別見表1和表2。在此實驗條件下，WE高、中、低劑量組均非常顯著地降低高尿酸血癥小鼠和大鼠血清尿酸水平，其中WE高、中劑量組可將高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平恢復至正常；WE中、低劑量和高劑量組均可將高尿酸血癥大鼠血清尿酸水平恢復至正常，WE高劑量組作用強度與陽性藥物別嘌呤醇相近。
WE高、中、低劑量組對正常小鼠和大鼠血清尿酸水平無顯著性影響，而別嘌呤醇組可顯著地降低正常小鼠和大鼠血清尿酸水平。表1桑枝提取物WE對高尿酸血癥小鼠和大鼠尿酸水平的影響(x±s)組別 劑量(mg/kg) 血清尿酸水平(mg/100ml)小鼠 大鼠生理鹽水組 -8.87±0.17 10.26±0.27模型空白組 -12.39±0.28 12.58±0.28WE組 26 9.64±0.19*10.26±0.18**52 8.72±0.12**10.53±0.12***104 8.62±0.10***9.63±0.28***別嘌呤醇組 10 7.62±0.17***9.36±0.17***與模型空白組比較P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.005表2 桑枝提取物WE對正常動物血清尿酸水平的影響(x±s)組別 劑量 血清尿酸水平(mg/100ml)mg/kg 小鼠 大鼠生理鹽水組 -3.52±0.12 3.40±0.26WE 26 3.38±0.15 3.54±0.3452 3.16±0.16 3.37±0.12104 2.91±0.19 3.20±0.29別嘌呤醇 10 1.99±0.16***2.21±0.16***與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001桑枝提取物WE對大鼠尿酸鈉引起痛風性關節(jié)炎模型的影響結(jié)果顯示，WE顯著地抑制尿酸鈉引起的大鼠痛風性關節(jié)炎腫脹，，作用與秋水仙堿相當(如下見表3)。受試關節(jié)周圍軟組織組織學研究表明，WE和秋水仙堿組能保護炎癥組織，減輕膠原纖維斷裂狀況。WE能顯著地降低炎癥組織中K+含量(P＜0.001)和5-HT含量，作用強度與秋水仙堿相當(如下見表3)。而對受試關節(jié)周圍軟組織中NE、DA的含量有一定降低作用，但無顯著性影響(數(shù)據(jù)略)。表3 桑枝提取物WE對大鼠尿酸鈉引起痛風性關節(jié)炎腫脹程度的影響(x±s)劑量踝關節(jié)周徑 K+含量5-HT含量(mg/kg) (cm) (mol/mg) (g/g)生理鹽水組- 2.22±0.08 2.10±0.02 382±2.14模型空白組- 3.28±0.12 7.42±0.06 723±9.45WE組 52 2.76±0.09 3.02±0.04*395±4.54*秋水仙堿組12.52.56±0.14 3.72±0.03*401±5.12*與模型空白組比較*P＜0.001實施例2桑枝提取物AE-PH對高尿酸血癥和正常小鼠血清尿酸水平的影響取干燥的桑枝飲片，分別用8倍、8倍、6倍量80％乙醇水溶液熱回流提取三次，每次2小時。提取液合并，減壓回收乙醇，用10％NaOH調(diào)pH8.5，充分靜置后離心，上清液用鹽酸調(diào)至pH為4-6，靜置，取沉淀，用蒸餾水洗滌至中性，干燥后即得AE-PH，得率為0.5％，總黃酮含量為23％。
AE-PH可顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，具有良好的量效關系(表4)，而對正常小鼠血清尿酸水平無顯著影響(數(shù)據(jù)略)。表4 桑枝提取物AE-PH對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響(x±s)組別 劑量(mg/kg)血清尿酸水平(mg/100m1)生理鹽水組 - 8.30±1.25模型空白組 - 12.01±1.19AE-PH 687.97±1.05***348.17±2.64***1710.44±2.01*別嘌呤醇組 107.01±0.13***與模型空白組比較P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001實施例3桑枝提取物AE1、AE1-PE及AE1-1～AE1-4對高尿酸血癥和正常小鼠血清尿酸水平的影響取干燥的桑枝飲片，分別用8倍、8倍、6倍量80％乙醇水溶液熱回流提取三次，每次2小時。提取液合并，減壓濃縮，干燥后即得AE1，得率為4.18％，總黃酮含量為2.0％。
AE1與硅藻土拌和后，采用索氏回流法，經(jīng)石油醚脫脂后，干燥即得AE1-PE，得率為3.2％，總黃酮含量為3.5％。
AE1與硅藻土拌和后，采用索氏回流法，經(jīng)石油醚脫脂后，依次用氯仿、乙酸乙酯、甲醇和水提取至無色，各提取液分別濃縮、干燥，即得AE1-1、AE1-2、AE1-3和AE1-4，得率分別為3.16％、9.85％、64.17％、0.7％，總黃酮含量分別為10.1％、12.7％、6.0％和5.6％。
AE1、AE-1-PE及AE1-1～AE1-4均可顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平(表5)，而對正常小鼠血清尿酸水平均無顯著影響(數(shù)據(jù)略)。表5 桑枝提取物AE1、AE-1-PE及AE1-1～AE1-4對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響(x±s)組別 劑量(mg/kg)血清尿酸水平(mg/100ml)生理鹽水組 - 8.10±1.45模型空白組 - 11.70±1.09AE1 550 8.02±1.15***AE-1-PE 360 7.81±1.10***AE1-117 7.87±2.94***AE1-254 10.24±4.04*AE1-3350 8.09±2.25***AE1-44.5 8.70±1.92***別嘌呤醇組 10 7.21±0.16***與模型空白組比較P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
實施例4桑枝提取物AE2～AE6對高尿酸血癥和正常小鼠尿酸水平的影響取干燥的桑枝飲片，以4倍體積20％乙醇水溶液，熱回流三次，每次2小時，提取液合并，減壓濃縮，干燥即得AE2，得率為8.8％，總黃酮含量為2.3％；取干燥的桑枝飲片，以4倍體積40％乙醇水溶液，熱回流三次，每次2小時，提取液合并，減壓濃縮，干燥即得AE3，得率為5.8％，總黃酮含量為3.3％；桑枝飲片，以4倍體積60％乙醇水溶液，熱回流2次，每次1小時，提取液合并，減壓濃縮，干燥即得AE4，得率為4.8％，總黃酮含量為3.2％；桑枝飲片，以4倍體積70％乙醇水溶液，熱回流1次，每次1.5小時，提取液合并，減壓濃縮，干燥即得AE5，得率為2.7％，總黃酮含量為2.5％；桑枝飲片，以4倍體積95％乙醇水溶液，熱回流1次，每次1.5小時，提取液合并，減壓濃縮，干燥即得AE6，得率為2.1％，總黃酮含量為2.4％。
桑枝提取物AE2～AE6均非常顯著地降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平，并恢復至正常(表6)，而對正常小鼠血清尿酸水平無顯著影響(數(shù)據(jù)略)。表6 桑枝提取物AE2～AE6對高尿酸血癥小鼠尿酸水平的影響(x±s)組別 劑量(mg/kg)血清尿酸水平(mg/100ml)生理鹽水組 - 7.78±1.39模型空白組 - 9.77±7.55AE2712 8.15±0.19**AE3605 7.05±0.19**AE4500 7.18±0.45**AE5283 7.15±0.66**AE6240 7.25±0.66**別嘌呤醇組 5 5.90±1.20***10 5.31±2.34***與模型空白組比較P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.005實施例5桑枝提取物AE7～AE10對高尿酸血癥和正常小鼠尿酸水平的影響取干燥的桑枝飲片，以7倍體積60％乙醇水溶液，熱回流三次，每次2小時。提取液合并，減壓濃縮，除去乙醇后經(jīng)由大孔吸附樹脂吸附，依次用20％、40％、60％、80％乙醇解析，解析液分別濃縮，干燥后即得AE7、AE8、AE9、AE10，得率分別為1.3％、0.91％、0.57％、0.34％，總黃酮含量分別為27.6％、54.2％、60.0％、67.9％。
AE7～AE10能顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平(表7)，但對正常小鼠血清尿酸水平均無顯著性影響(數(shù)據(jù)略)。
表7 桑枝提取物AE7～AE10對高尿酸血癥小鼠尿酸水平的影響(x±s)組別 劑量(mg/kg) 血清尿酸水平(mg/100ml)生理鹽水組 -4.85±0.04模型空白組 -5.70±0.06AE794 5.37±0.03*AE867 4.34±0.02***AE939 4.92±0.06***AE10 24 5.13±0.05**別嘌呤醇組 54.97±0.05**10 4.01±0.06***與模型空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001實施例6桑枝提取物AE11～AE13對高尿酸血癥和正常小鼠尿酸水平的影響取干燥的桑枝飲片，以7倍體積60％乙醇水溶液，熱回流三次，每次2小時。提取液合并，減壓濃縮，除去乙醇后經(jīng)硅藻土吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、甲醇等有機溶劑依次洗脫，分別回收溶劑，濃縮干燥，即得AE11～AE13，得率分別為1.3％、5.69％、2.57％，總黃酮含量分別為10.6％、54.2％、36.0％。
AE11～AE13能顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平(表8)，但對正常小鼠血清尿酸水平均無顯著性影響(數(shù)據(jù)略)。表8 桑枝提取物AE11～AE13對高尿酸血癥小鼠尿酸水平的影響(x±s)組別 劑量(mg/kg)血清尿酸水平(mg/100ml)生理鹽水組- 6.85±0.03模型空白組- 8.70±0.02AE11 44 7.37±0.05*AE12 192 6.98±0.03***AE13 87 7.45±0.05***別嘌呤醇組5 6.98±0.04**10 5.59±0.07***與模型空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
實施例7桑枝提取物AE14～AE17對高尿酸血癥和正常小鼠尿酸水平的影響取干燥的桑枝飲片，以7倍體積60％乙醇水溶液，熱回流三次，每次2小時。提取液合并，減壓濃縮，除去乙醇后經(jīng)聚酰胺柱層析，用水、30％乙醇、60％乙醇和80％乙醇依次洗脫，分別回收溶劑，濃縮干燥，即得AE14～AE17，得率分別為2.52％、8.48％、7.67％、8.88％，總黃酮含量分別為1.1％、48.5％、63.6％、21.3％。
AE14～AE17能顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平(表9)，但對正常小鼠血清尿酸水平均無顯著性影響(數(shù)據(jù)略)。表9 桑枝提取物AE14～AE17對高尿酸血癥小鼠尿酸水平的影響(x±s)組別劑量(mg/kg)血清尿酸水平(mg/100ml)生理鹽水組 - 5.85±0.04模型空白組 - 7.87±0.02AE1456 7.47±0.02AE15188 6.68±0.03*AE16170 5.75±0.06***AE17197 6.80±0.05*別嘌呤醇組 5 5.98±0.03**10 5.07±0.05***與模型空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001實施例8成型制劑的制備取上述桑枝提取物1000g，加入500-5000g淀粉或糊精，混合均勻，制粒，壓片，制得片劑；取上述桑枝提取物1000g，加入500-5000g淀粉，混合均勻，裝膠囊，即得膠囊劑；取上述桑枝提取物1000g，加入1000-10000g植物油或聚乙二醇等高分子輔料，混合均勻，制成軟膠囊。
取上述桑枝提取物1000g，加入1000-10000g糖粉或乳糖或可溶性淀粉等，混合均勻，制粒，得顆粒劑。取上述桑枝提取物1000g，加水及適量增溶劑溶解，分裝，滅菌，制成口服液取上述桑枝提取物1000g，加注射用添加劑和注射用水至1000ml，溶解，過濾，濾液調(diào)pH 5.0-9.0，滅菌，即得注射劑。
取上述桑枝提取物1000g，用乙醇溶解，制備成擦劑或噴霧劑；取上述桑枝提取物1000g，用乙醇溶解，加入拋射劑后制成氣霧劑。
取上述桑枝提取物1000g，與適量水溶性基質(zhì)或橡膠等輔料混勻，涂布，制成巴布劑或橡膠劑。
權(quán)利要求
1.一種中藥桑枝提取物，其特征在于該提取物是用下述方法提取獲得桑枝提取用溶媒可用以下數(shù)種溶媒中的一種或幾種的組合0～95％乙醇水溶液、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶劑，用以上溶媒在10-100℃溫度下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶劑即得，桑枝提取物中總黃酮含量為0.5-80％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑枝提取物，其特征在于所述的提取方法中，提取液可用以下方法進一步純化①所得提取液用氫氧化鈉等堿性物質(zhì)調(diào)pH至7.5-9.5，靜置，離心后上清液用鹽酸調(diào)pH至4-6，靜置，取沉淀，水洗至中性，干燥即得，總黃酮含量為10-60％；②所得提取液用石油醚或汽油等脫脂后，濃縮、干燥即得，總黃酮含量為1-5％；③所得提取液用石油醚或汽油等脫脂后，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分別或順次提取，各提取液分別濃縮、干燥即得，總黃酮含量依次為5-20％、10-30％、5-30％、1-10％、1-10％；④所得提取液用大孔樹脂吸附，以10～95％乙醇解吸附，解析液濃縮，干燥即得，總黃酮含量為20-80％；⑤所得提取液進一步經(jīng)硅藻土、氧化鋁等吸附劑吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有機溶劑洗脫后，回收溶劑，濃縮、干燥即得，總黃酮含量為10-80％；⑥以聚酰胺、硅膠、離子交換樹脂為填料，用柱層析分離，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有機溶劑或水為洗脫劑，洗脫液濃縮，干燥即得，總黃酮含量為10-80％；⑦以上純化方法可單用或采用幾種方法的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑枝提取物，其特征在于其中含有黃酮類成分，包括蘆丁、槲皮素、桑色素等，用總黃酮、蘆丁、槲皮素、桑色素作為質(zhì)量控制的指標。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于桑枝提取物可制成包括口服制劑、注射制劑或外用制劑等在內(nèi)的藥物或保健食品。
5.一種中藥桑枝提取物的提取方法，其特征在于該方法采用的提取用溶媒可單用以下數(shù)種溶媒中的一種或幾種的組合0～95％乙醇水溶液、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等有機溶劑，用以上溶媒在10-100℃溫度下提取1次或1次以上，合并提取液，回收溶劑即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述桑枝提取物的提取方法，其特征在于所述的提取方法中，提取液可用以下方法進一步純化①所得提取液用氫氧化鈉等堿性物質(zhì)調(diào)pH至7.5-9.5，靜置，離心后上清液用鹽酸調(diào)pH至4-6，靜置，取沉淀，水洗至中性，干燥即得，總黃酮含量為10-60％；②所得提取液用石油醚或汽油等脫脂后，濃縮、干燥即得，總黃酮含量為1-5％；③所得提取液用石油醚或汽油等脫脂后，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分別或順次提取，各提取液分別濃縮、干燥即得，總黃酮含量依次為5-20％、10-30％、5-30％、1-10％、1-10％；④所得提取液用大孔樹脂吸附，以10～95％乙醇解吸附，解析液濃縮，干燥即得，總黃酮含量為20-80％；⑤所得提取液進一步經(jīng)硅藻土、氧化鋁等吸附劑吸附后，用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有機溶劑洗脫后，分別回收溶劑，濃縮、干燥即得，總黃酮含量為10-80％；⑥以聚酰胺、硅膠、離子交換樹脂等為填料，用柱層析分離，以氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等有機溶劑或水為洗脫劑，洗脫液濃縮，干燥即得，總黃酮含量為10-80％；⑦以上純化方法可單用或采用幾種方法的組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述桑枝提取物的提取方法，其特征在于采用該方法提取所得的提取物中含有黃酮類成分，包括蘆丁、槲皮素、桑色素等，所得提取物可以總黃酮、蘆丁、槲皮素、桑色素等作為質(zhì)量控制的指標。
8.一種桑枝提取物的新用途，其特征在于以上述提取的桑枝提取物為有效成分制備成預防或治療高尿酸血癥和痛風的藥物或保健食品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的桑枝提取物的新用途，其特征在于桑枝提取物在制備以下相關用途的藥物或保健食品中的應用①制備降低高尿酸血癥血清尿酸水平的藥物或保健食品中的應用；②制備預防或治療痛風性關節(jié)炎藥物或保健食品中的應用；③制備保護痛風性關節(jié)炎的炎癥組織，減輕膠原纖維斷裂狀況的藥物或保健食品中的應用；④制備降低痛風性關節(jié)炎的炎癥組織中K+含量和外周神經(jīng)遞質(zhì)的藥物或保健食品中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及桑枝提取物制備成預防高尿酸血癥和痛風疾病的保健食品和治療高尿酸血癥和痛風疾病的藥物。該桑枝提取物由單味藥材桑枝用0～95%乙醇水溶液或氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇等溶劑或它們的組合在10－100℃溫度條件下提取1次或1次以上,合并提取液,回收溶劑即得;或用下列方法進一步純化:提取液調(diào)pH為7.5－9.5,離心后上清液調(diào)pH為4－6,沉淀水洗至中性,干燥即得;提取液經(jīng)石油醚或汽油脫脂而得;提取液經(jīng)石油醚或汽油脫脂后,用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇或水分別或依次提取而得;提取液經(jīng)大孔吸附樹脂吸附后,用10－95%乙醇水溶液解吸附而得;提取液經(jīng)硅藻土、氧化鋁等吸附后,用氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇等溶劑洗脫后,濃縮干燥而得;提取液經(jīng)聚酰胺、硅膠或離子交換樹脂等柱層析分離。以上純化方法可單用或采用幾種方法的組合。所得的桑枝提取物中含有大量黃酮類成分,包括蘆丁、槲皮素、桑色素等。
文檔編號A61P19/06GK1382478SQ0211300
公開日2002年12月4日 申請日期2002年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2002年5月14日
發(fā)明者孔令東, 楊澄, 鮑建偉, 張金龍, 王業(yè)民, 朱繼孝, 王穎, 朱綱 申請人:南京大學, 浙江康恩貝集團養(yǎng)顏堂制藥有限公司