專利名稱：苦參總堿及其制劑在獸藥的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從植物中提取的生物總堿在治療禽畜細菌感染的藥物的應用。
背景技術：
現代養殖業日益趨向于規模化、集約化。為防止和治療集中飼養的禽畜因細菌感染致病，現階段普遍做法是在禽畜飼料中大量使用抗生素類藥物，或采用其它合成類的抗菌藥物。例如中國發明專利99111531.7公開的一種適用于禽畜類流行性疾患的獸藥，就是用含有廣譜抗生素和抗病毒的藥物，按一定比例組配，產生綜合的抗菌、消炎、抗病毒作用，用于細菌、病毒混合感染的禽畜類治療。但由于多年大量使用抗生素的原因，使許多的致病菌產生耐藥性，而致防病、治病的效果變劣，同時大量使用抗生素的做法會在動物體內產生抗生素殘留，殘留于禽畜體內的抗生素又會通過食品鏈轉入人體內富集，既可能直接對人體健康造成負面影響，也可能通過環境和食物鏈的作用間接對人體或環境，造成潛在危害。因此，現階段各國在食品進口時檢疫、分析的一個主要項目就是檢查食品中抗生素的含量。
為解決動物食品中抗生素殘留的問題，選擇生物制品，特別是由植物中提取的生物堿作為禽畜使用的藥物是獸藥發展的趨勢。
中國發明專利申請00136883.4公開了一種用豆科植物中的苦豆子籽經水煮、發酵后得到的液體和固體以及其混合物作為治療牲畜因細菌感染至病的獸藥。從該專利文件公開的內容來看，其藥物生產周期過長，生產工藝可能較難控制，其藥物成份中的雜質難以去除，而且所制藥物的穩定性較差，且保存時間過短，估計其保存條件相對可能會較為復雜。另外該專利申請僅以苦豆子的果實作為原料，這使其應用受到一定的限制，并帶來資源的浪費。

發明內容
本發明是提供一種新的從植物中提取的總堿作為治療禽畜類細菌感染的炎癥的藥物，在本發明中同時提供了這種新獸藥的制備方法。
本發明的藥物是從豆科植物中的苦參(民間俗稱為苦豆子)的根、莖或籽中用醇提取的總生物堿，根據相關的分析表明，在總生物堿中苦參總堿占80％以上(以苦參堿C12H24N2O計)，此外還有一些其它的生物堿成份，如氧化苦參堿、槐胺堿、槐果堿、槐定堿、苦豆堿等。
本發明的制備方法是將干燥的苦參根或莖或籽粉碎為粗粉，再將此粗粉置入乙醇中浸泡提取苦參堿，所得液體經過濾后進行蒸餾或減壓蒸餾，在蒸餾產物中加入鹽酸，調其pH值為3～4，再將其用乙醚進行洗滌，經洗滌的產物中加入碳酸鈉，調其pH值為7左右后，再用氯仿進行萃取，所得產物中加入乙醇進行重結晶，再將結晶體烘干提苦參總堿。
本發明可以為注射用針劑，也可以為拌飼的粉劑，還可以做成水溶液作為灌注藥物。
由于本發明采用醇提、洗滌、萃取等工藝，使其制品的純度得以提高，這種高純度的制品既便于后期的藥物生產，而且也可大大延長其穩定性。經試驗表明，本發明所用苦參總堿結晶品化學性質穩定，經常規放置二年后，其結構和藥效未發生改變。
經相應的體外試驗、毒性試驗和臨床藥效試驗表明，本發明對金葡球菌、大腸埃希菌、銅綠假單細胞菌、類炭疽桿菌等均有抑制作用，對有些細菌的抑菌效果更為顯著，特別是防治雞白痢的效果明顯。
本發明是將一種植物中的有效成分應用于禽畜病的治療，安全可靠且有不易產生耐藥性的特點，同時因苦參堿在動物體內代謝較快，不會產生在動物體內殘留的不足。由于本發明所用的原料既可以是果實，也可以是植物的根、或莖，因此來源較為廣泛，而且可以充分利用資源。
具體實施例方式
以下對本發明進行詳細解說本發明的制備方法將豆科植物苦參的干燥根或工莖或籽粉碎成粗粉(一般粉碎到數十目即可)，將粗粉在常溫下用98％乙醇浸泡18小時，然后過濾，濾液減壓蒸餾回收乙醇，殘余物用2％HCl調節pH3～4，乙醚洗滌兩次后，用5％碳酸鈉調節為pH7，再用氯仿進行提取，提取液進行蒸餾處理，回收氯仿，殘余物再用98％乙醇重結晶，將結晶體烘干，得到成品，再將成品經過滅菌、分裝待用。
本發明的成品晶體作為獸藥使用時可以將其溶于水中作為肌肉注射液，也可以將其做成粉末拌飼喂服，也可以將其溶于水中直接喂服，還可以將其的水溶液作為灌注藥物，對牛、豬、羊等進行子宮、腸道或乳房進行灌注治療。
以下提供本發明相關實驗數據及試驗結果(一)穩定性試驗選取重結晶、干燥好的苦參總堿白色粉末六個批號，進行穩定性試驗。采用常規分析試劑和高效液相色譜分別測定。常規分析試劑按苦參總堿質量控制標準操作，高效液相色譜儀為北京分析儀器廠生產。現測苦參總堿含量與兩年后的試驗結果見表1。
結果表明，苦參總堿結晶化學性質穩定，放置二年，結構未改變，其藥效也未發生變化。
(二)體外抗菌試驗采用瓊脂平皿稀釋法測定最低抑菌濃度(MIC)。將苦參總堿和慶大霉素以不同濃度分別加入平皿中，傾入定量溶化的瓊脂，與藥物混勻。苦參總堿的終濃度分別為40、30、20、15、10、5、2.5mg/ml，慶大霉素終濃度分別為32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml，慶大霉素MIC≥8μg/ml為耐藥，≤4μg/ml為敏感。
試驗菌用營養肉湯稀釋成0.5麥氏濃度(約1.5億/ml)，接種量約105/點，接種后置35℃培養18h，觀察結果。以無菌生長平皿的最小藥物濃度為最低抑菌濃度。并采用試管肉湯稀釋法測定pH、細菌接種量和血清濃度對MIC的影響。實驗所用臨床分離的致病菌203株和污染食品中分離的類炭疽病菌3株，經臨床藥敏實驗證明，絕大數菌株對兩種以上的抗生素耐藥。從慶大霉素的MIC結果也可以看出，絕大數試驗菌對慶大霉素耐藥。苦參總堿及其對照藥物慶大霉素對試驗菌的MIC試驗結果見表2。

上述試驗結果表明，本發明對上述試驗菌均有體外抑制作用，20mg/mL濃度時對上述試驗菌的抑制率為79.6％。
最低殺菌濃度(MBC)采用試管肉湯稀釋法和活菌計數法檢測。選用一定出MIC的金葡球菌、大腸埃希菌、銅綠假單細胞菌、福氏志賀菌各4株，類炭疽桿菌2株作為試驗菌。將未見細菌生長各管的培養液分別吸取0.1mL種入不含藥的瓊脂平皿中，35℃培養18h觀察結果。平皿上菌落數＜5個的最低藥物濃度為最低殺菌濃度。試驗結果顯示，本發明對金葡球菌、大腸埃希菌、福氏志賀菌、銅綠假單細胞菌及類炭疽桿菌的MBC分別為100、100、100、＞150、30mg/mL。當PH為9時，本發明對大腸埃希菌ATCC的MIC降至5mg/mL。類炭疽桿菌接種量增大，MIC也隨之增大。金葡球菌、大腸埃希菌和銅綠假單細胞菌的接種量對MIC的影響不顯著。培養基中含人血清濃度對MIC影響不明顯。
(三)小白鼠毒性試驗經對昆明系小白鼠進行的相關毒性試驗表明，苦參堿對小鼠的致死量在97mg/kg(最小致死劑量)～180mg/kg(最大致死劑量)。這表明苦參總堿是一種低毒性藥物。
有關的試驗和文獻介紹表明苦參堿是一種具有強親水性和脂溶性的高分子物質，經注射進入動物體內后主要分布于內臟器官，在動物的肝、脾的腎臟中分布濃度較高，而在腦組織、脂肪和肌肉中檢查不出來，其消除半衰期為76分鐘，組織吸收和代謝過程很快，經注射后苦參堿在24小時從尿液中排出。這說明苦參總堿在動物體內不大容易殘留。
(四)臨床藥效研究對300只患雞白痢的雛雞以0.8％本發明的水溶液作飲水治療，治療一天后治理，第二天繼續治療一天，治愈率為93.9％。對200只患雞白痢的雛雞以拌飼0.3％濃度治療，治愈率為93.3％。預防雞白痢則以0.1％濃度本發明拌于飼料中喂至15日齡。統計死亡率，計算保護率，同時選出部分雞做對比試驗，對300只雞做雞白痢檢出試驗。結果預防率達96％以上，其中預防組保護率96％，對照組72％，保護率提高24％，設100只雞以痢特靈作對照，預防組比對照組的保護率高2.8％。對300只試驗雞用雞白痢檢查液檢查，雞白痢檢出雞31只，雞白痢檢出率10.3％試驗結果表明本發明用于防治雞白痢效果顯著。
在對家畜進行的相關試驗結果表明與前述的家禽試驗結果類似。
權利要求
1.一種用苦參總堿作為主要成份的獸藥。
2.根據權利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為注射的針劑。
3.根據權利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為口服的粉劑。
4.根據權利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為口服的水溶劑。
5.根據權利要求1所述的獸藥，其特征是藥物的劑型為灌注的水溶劑。
6.作為獸藥的苦參總堿的提取方法，將苦參的根或莖或籽粉碎為粗粉，再將粗粉置入乙醇中浸泡提取，所得液體經過濾后進行蒸餾或減壓蒸餾，在蒸餾產物中加入鹽酸調其pH值為3～4，再將其用乙醚進行洗滌，經洗滌的產物中加入碳酸鈉調其pH值為7左右后，再用氯仿進行萃取，所得產物中加入乙醇進行重結晶，再將結晶體烘干得苦參總堿。
全文摘要
本發明涉及從豆科植物的苦參中提取的苦參總堿在治療禽畜細菌感染的藥物的應用。
文檔編號A61K31/4353GK1579397SQ0314397
公開日2005年2月16日 申請日期2003年8月6日 優先權日2003年8月6日
發明者陸樹林, 梁劍平, 蘇建華 申請人:甘肅綠舟生態科技有限責任公司