專利名稱：驅蟲斑鳩菊有效部位及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種植物有效部位，具體來說，是驅蟲斑鳩菊的有效部位，本發明也涉及該有效部位的制備方法和制藥用途。
背景技術：
白癜風是常見的一種局限性色素減退性皮膚病，發病率為0.5-2.0％，由于致病原因和發病機理目前尚未明確，國際上至今仍處于易診難治的狀況。該病被世界醫學界列為疑難病癥之一。目前白癜風的藥物治療方法有補骨脂素聯合UVA治療、皮質激素療法、凱林聯合UVA療法、金屬元素配合PUVA療法、苯丙氨酸配合UVA療法以及中藥療法。
驅蟲斑鳩菊為菊科植物驅蟲斑鳩菊Vernonia anthelmintica Willd的瘦果。于夏秋果實成熟時割??；或分別割取成熟果枝，打下果實，存于陰涼干燥處。原產于印度、巴基斯坦，中國新疆已有長約四百年的栽培歷史。主要分布于新疆阿克蘇地區。是新疆維吾爾民間治療白癜風的藥物，在70年代新疆藥學研究人員將其制成醫院制劑，應用于臨床治療白癜風，治愈率為7-20％，有效率大于90％，并且未見毒副作用。但是至今對驅蟲斑鳩菊中的有效成分尚不清楚。為此，本發明人進行了進一步的篩選分離工作，發現了驅蟲斑鳩菊治療色素代謝疾病如白癜風的有效部位，從而完成了本發明。
發明目的本發明的目的是提供一種驅蟲斑鳩菊有效部位。
本發明的另外一個目的是提供該驅蟲斑鳩菊有效部位的制備方法。
本發明的又外一個目的是提供該驅蟲斑鳩菊有效部位在制備色素代謝疾病如白癜風的藥物的用途。

發明內容
本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位可以由下列方法但不是唯一方法獲得將驅蟲斑鳩菊成熟果實用中等極性到強極性溶劑加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調pH為2-10，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位。
所述的中等到強極性溶劑優選為乙酸乙酯、乙醇或水，最優選0-60％乙醇。我們對提取溶劑的不同選擇測定驅蟲斑鳩菊有效部位的得率，見下表1。
表1

所述的pH值優選為7-10，驅蟲斑鳩菊有效部位含量最高。
本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位可以與藥學上可接受的輔料制備成各種內服或外用劑型。
驅蟲斑鳩菊有效部位可使黑色素細胞增殖，酪氨酸的活性提高，黑色素含量增高，驅蟲斑鳩菊有效部位對細胞免疫、體液免疫具有抑制作用。驅蟲斑鳩菊有效部位對黑色素瘤細胞系SKMel-19，SKMel-23，Mel-2A，MeWo，Bro.表現出了抑制作用。
附圖簡介

圖1---驅蟲斑鳩菊有效部位在體外對黑色素細胞增殖的影響圖2---驅蟲斑鳩菊有效部位在體外對黑色素含量的影響圖3---驅蟲斑鳩菊有效部位在體外對黑色素細胞內酪氨酸酶活性的影響。
圖4---不同藥物對豚鼠皮膚黑色素細胞的影響圖5---驅蟲斑鳩菊在外用氫醌后對豚鼠皮膚黑色素細胞的影響圖6---驅蟲斑鳩菊有效部位給藥前后豚鼠皮膚黑色素細胞的變化圖7---驅蟲斑鳩菊有效部位在體內對小鼠T淋巴細胞增殖反應的影響圖8---驅蟲斑鳩菊有效部位在體內對小鼠B淋巴細胞增殖反應的影響圖9---驅蟲斑鳩菊有效部位對SRBC致敏小鼠抗體生成的影響圖10---驅蟲斑鳩菊有效部位對小鼠皮膚遲發型變態反應的影響具體的實施方案實施例1將驅蟲斑鳩菊成熟果實用60％乙醇加熱回流，得到乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，調pH為8，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位。
實施例2將驅蟲斑鳩菊成熟果實用水煎煮，得到提取液，濃縮，得到濃縮液，調pH為7，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位。
實施例3將驅蟲斑鳩菊成熟果實用95％乙醇加熱回流，得到乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，調pH為10，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位。
實施例4將驅蟲斑鳩菊成熟果實用30％乙醇加熱回流，得到乙醇提取液，減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，調pH為5，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位。
實施例5將驅蟲斑鳩菊成熟果實用乙酸乙酯加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調pH為2，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉，就是本發明所述的驅蟲斑鳩菊有效部位。
試驗例1 驅蟲斑鳩菊有效部位的體外藥效學研究因白癜風患者皮損區的色素細胞及其功能受損，我們研究了驅蟲斑鳩菊原料藥對體外培養的人體黑色素細胞的影響。
因白癜風患者皮損區的色素細胞及其功能受損，我們研究了紫鉚素對體外培養的人體黑色素細胞的影響。
1.1.實驗方案1.1.1篩選模型正常人黑色素細胞；1.1.2.來源兒童包皮環切手術的多余包皮，無感染。
1.1.3.培養條件取正常兒童包皮胰酶消化后獲得黑色素細胞，在DMEM培養基中添加bFGF，CT，TPA，FCS，雙抗等各種因子，5％CO2，37℃條件下培養7天后進行傳代，傳代細胞在上述條件下培養48小時后加入不同濃度的藥物和對照，測定相關分析指標。
1.1.4.測定方法細胞增值用MTT法；酪氨酸酶活性測定用多巴染色法；黑色素含量用堿消化法。
1.2.結果結果表明驅蟲斑鳩菊可使黑色素細胞增殖，酪氨酸的活性提高，黑色素含量增高。見圖1-3。
實驗例2.驅蟲斑鳩菊有效部位的體內藥效學研究通過灌胃給藥和外擦給藥兩種方式觀察驅蟲斑鳩菊制制對棕色豚鼠體內黑色素細胞在基底層所含比例及顯微結構的影響。
2.1.實驗方案實驗動物英國短毛豚鼠，新疆實驗動物中心提供。
受試藥物設置驅蟲斑鳩菊有效部位(按驅蟲斑鳩菊黃酮計)高濃度組288.21mg/kg(按最大耐受量的1/25計算)中濃度組144.11mg/kg(按最大耐受量的1/50計算)低濃度組72.05mg/kg(按最大耐受量的1/100計算)陽性對照組補骨脂注射液(河南醫科大學制藥廠，豫衛藥準字(1985)第270002號)批號000405陰性對照組2.5％氫醌空白對照組；生理鹽水2.2.動物模型的建立先外用氫醌和補骨脂，觀察氫醌、補骨脂注射液對有色豚鼠皮膚基底層黑色素細胞的影響外用氫醌后，可使有色豚鼠皮膚基底層增厚，使黑色素生成減少這一結果與有關文獻相符；使用補骨脂注射液后，可使有色豚鼠皮膚基底層黑色素細胞增加。確定模型成立。見圖4。
2.3.不同劑量的驅蟲斑鳩菊有效部位對氫醌的拮抗作用外用氫醌，同時灌服不同劑量的驅蟲斑鳩菊有效部位觀察不同劑量的驅蟲斑鳩菊對氫醌的拮抗作用，來間接反映驅蟲斑鳩菊對有色豚鼠皮膚基底層黑色素細胞的影響高、中、低劑量的驅蟲斑鳩菊組可以拮抗氫醌的作用，使用藥前后有色豚鼠皮膚基底層黑色素細胞無顯著性變化(P＞0.05)；但比單用氫醌組有顯著性變化(P＜0.01)，其中高、中、低劑量的驅蟲斑鳩菊組之問無顯著性變化(P＞0.05)。見圖5。
2.4.觀察不同劑量驅蟲斑鳩菊有效部位對有色豚鼠皮膚基底層黑色素細胞的影響使用高、中、低劑量的驅蟲斑鳩菊組前后有色豚鼠皮膚基底層黑色素細胞有顯著性變化(P＜0.05)；高、中、低劑量的驅蟲斑鳩菊組之間無顯著性差異(P＞0.05)；但在數值上有變化，其中中劑量組對有色豚鼠皮膚基底層黑色素細胞的影響較大；高、中、低劑量的驅蟲斑鳩菊組與陽性組比無顯著性差異(P＞0.05)。見圖6。
實驗例3.驅蟲斑鳩菊有效部位對小鼠免疫系統的影響3.1.實驗方案3.1.1.實驗模型培養昆明系小鼠。
3.1.2.動物來源新疆實驗動物中心提供。
3.1.3.受試藥物設置驅蟲斑鳩菊有效部位(按驅蟲斑鳩菊黃酮計)高濃度組288.21mg/kg(按最大耐受量的1/25計算)中濃度組144.11mg/kg(按最大耐受量的1/50計算)低濃度組72.05mg/kg(按最大耐受量的1/100計算)陽性對照組補骨脂注射液(河南醫科大學制藥廠，豫衛藥準字(1985)第270002號)批號000405陰性對照組生理鹽水3.2.結果由于目前病因研究多支持白癜風的發病與免疫系統有關，發現白癜風患者體內有特異性抗體存在。進行驅蟲斑鳩菊有效部位對小鼠免疫系統影響的研究，結果顯示驅蟲斑鳩菊對免疫系統具有抑制作用。見圖7--10。
實驗例4驅蟲斑鳩菊有效部位在體外對黑色素瘤細胞的影響由于驅蟲斑鳩菊有效部位可使黑色素細胞增殖，我們考察了其在體外對黑色素瘤細胞系的影響。
4.1.篩選模型黑色素瘤細胞系SKMel-19，SKMel-23，Mel-2A，MeWo，Bro；4.2.來源德國柏林自由大學本杰明·富蘭克林醫學研究中心。
4.3.培養條件在DMEM培養基中添加FCS，雙抗等各種因子，5％CO2，37℃條件下培養24小時后加入不同濃度的藥物和對照，測定相關分析指標。
4.4.測定方法細胞增值用MTT法。
4.5.結果驅蟲斑鳩菊有效部位可對黑色素瘤細胞系SKMel-19，SKMel-23，Mel-2A，MeWo，Bro表現出了不同程度的抑制作用。
實驗例5驅蟲斑鳩菊有效部位一般藥理學實驗資料的研究，對給藥后小鼠的心、肝、脾、腎、腸進行了病理分析，并觀察其活動，未見明顯異常。對麻醉貓的血壓、呼吸頻率、心率均無明顯影響。
急性毒性實驗表明給藥劑量相當于臨床擬用藥量120倍，昆明普系小鼠末出現明顯異常反應，觀察7天，動物末見死亡。最大耐受量實驗表明給藥劑量相當于臨床擬用藥量360倍，觀察7天仍未見死亡，小鼠出現自發活動減少等癥狀。病理學檢查顯示小鼠肝臟細胞出現腫脹，可見多處灶性壞死，分裂相增多，脾竇內可見散在多核巨細胞浸潤。小鼠口服驅蟲斑鳩菊有效部位MTD＞19.23g/kg。
權利要求
1.驅蟲斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得將驅蟲斑鳩菊成熟果實用中等極性到強極性溶劑加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調pH為2～10，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液濃縮干燥得到浸膏粉。
2.根據權利要求1所述的驅蟲斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得，其中中等極性到強極性溶劑為乙酸乙酯、乙醇或水。
3.根據權利要求2所述的驅蟲斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得，其中0-60％的乙醇。
4根據權利要求1～3中任何一個所述的驅蟲斑鳩菊有效部位，它可以由下列方法獲得，其中pH為7～10。
5.驅蟲斑鳩菊有效部位的制備方法，它包括下列步驟將驅蟲斑鳩菊成熟果實用中等極性到強極性溶劑加熱回流，得到提取液，減壓回收，濃縮，得到濃縮液，調pH為2～10，離心分離，得到上清液，將上清液通過大孔吸附樹脂依次用水和乙醇溶液洗脫，將乙醇洗脫液減壓回收乙醇，濃縮，得到濃縮液，用石油醚脫脂，分離醚層和水層，將水溶液干燥得到浸膏粉。
6.根據權利要求5所述的驅蟲斑鳩菊有效部位制備方法，其中中等極性到強極性溶劑為乙酸乙酯、乙醇或水。
7.根據權利要求6所述的驅蟲斑鳩菊有效部位制備方法，其中0-60％的乙醇。
8.根據權利要求5～7中任何一個所述的驅蟲斑鳩菊有效部位制備方法，其中pH為7～10。
9.權利要求1～4中任何一個所述的驅蟲斑鳩菊有效部位在制備增殖黑色素細胞、提高酪氨酸酶的活性和增高黑色素含量藥物的用途。
10.根據權利要求9所述的用途，其中所述的藥物為治療色素代謝疾病的藥物。
11.根據權利要求10所述的用途，其中所述的藥物為治療白癜風的藥物。
12.根據權利要求10所述的用途，其中所述的藥物為治療白發的藥物。
13.權利要求1～4中任何一個所述的驅蟲斑鳩菊有效部位在制備抑制免疫系統作用藥物的用途。
14.權利要求1～4中任何一個所述的驅蟲斑鳩菊有效部位在制備抑制黑色素瘤藥物的用途。
全文摘要
本發明公開了一種驅蟲斑鳩菊有效部位，它是從驅蟲斑鳩菊成熟果實用中等極性到強極性溶劑提取得到的。它可使黑色素細胞增殖，酪氨酸酶的活性提高和黑色素含量增高；對免疫系統具有抑制作用；對黑色素瘤有抑制作用。本發明也涉及該驅蟲斑鳩菊有效部位的制備方法以及在制備治療色素代謝疾病如白癜風或白發的藥物的用途；在制備抑制免疫系統作用藥物的用途和在制備抑制黑色素瘤藥物的用途。
文檔編號A61P17/00GK1778324SQ20041009149
公開日2006年5月31日 申請日期2004年11月26日 優先權日2004年11月26日
發明者尚靖, 徐建國, 于魯海, 孫力, 李紅健, 朱衛江, 劉文麗, 曹麗蒙 申請人:烏魯木齊瑞普藥物研究開發有限公司, 新疆維吾爾自治區人民醫院, 尚靖