專利名稱：尼莫司汀腦部緩釋植入劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及新型藥物劑型，尤其是一種治療惡性腦膠質瘤的尼莫司汀腦部緩釋植入劑及其制備方法。
背景技術：
惡性腦腫瘤是導致死亡的主要癌癥之一。原發性腦腫瘤的半數是膠質瘤，它是腦腫瘤中最富挑戰性的腫瘤之一。近30年來，惡性膠質瘤的治療效果未能得到明顯改善，由于其呈浸潤性生長，與正常腦組織分界不清，手術不可能徹底切除，術后常有復發，根據美國腦瘤共同研究組的統計，惡性膠質瘤的單純手術治療的中位生存期(MTS)僅為14周，而手術后輔以放療平均生存期不超過一年。因此，提高腦腫瘤特別是膠質瘤的治療效果，仍然是擺在我們面前的艱巨任務。
惡性腦膠質瘤綜合治療方法為手術十全身化療十放療。有報道根據實驗發現測算，認為即使手術和放射治療殺死了99.9％的膠質瘤細胞，殘余腫瘤也可以在78天恢復到原有腫瘤大小。因此，在腫瘤緩解期采用維持治療以鞏固療效是極為重要的。維持治療的方法，如化療、放療及免疫治療等有許多種，其中，化學藥物治療已成為惡性腦膠質瘤綜合治療的重要環節。
盡管這些年來不斷開發各種新藥，或嘗試采用多種藥物聯合應用的各種方案，來應用于惡性腦膠質瘤的化學藥物治療，但亞硝脲類藥物(如ACNU、BCNU)由于最易透過血腦屏障而一直居于主導地位。過去常用有卡氮芥(BCNU)，環己亞硝脲(CCNU)和甲基環己亞硝脲(MECCNU)。但這些藥物，都會產生骨髓抑制和對肝腎功能的毒害以及強烈的胃腸道反應，而且彼此間還存在交叉耐藥性。為此我們選用這一新的亞硝基脲類藥——尼莫司汀(Nimustine ACNU)。尼莫司汀又名鹽酸嘧啶亞硝脲，屬烷化劑的亞硝脲類抗癌藥。主要作用是使細胞內DNA烷化而使DNA低分子化，從而阻礙DNA的合成，抑制腫瘤細胞的生長。
血腦屏障的存在，使很多藥物不能進入腦部，限制了腦部疾病的治療，為此研究了許多腦給藥系統的技術。20世紀90年代以來，藥物劑型和制劑研究已進入藥物釋放系統時代，新型藥物釋放系統已成為藥學領域的重要發展方向。新型給藥系統中腦給藥的一些新方法也已形成，其中腦內植入將全合成的、生物相容性好、可生物降解的高分子材料與藥物制成小丸，圓片，微球植入腦內。使腦瘤局部控緩釋藥物間質化療成為可能。
腦瘤局部控緩釋藥物間質化療解決了傳統的全身化療藥物具有難以通過血腦屏障、藥物局部濃度低、全身反應嚴重、作用腫瘤時間短而影響療效等缺點和不足，它避開血腦屏障，直接增加局部藥物濃度，同時延長了化療藥物的作用時間，亦減少了藥物的全身毒副作用，且這種給藥方法也符合腦膠質瘤幾乎無轉移，局部復發多在原腫瘤2cm范圍內的特點。

發明內容
本發明在于提供一種治療惡性腦膠質瘤的尼莫司汀腦部緩釋植入劑，它由尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，通過病變部位局部植入，發揮長期高效的腦膠質瘤抑制作用。
本發明的另一目的在于提供該尼莫司汀腦部緩釋植入劑的制備方法。
為了解決上述技術問題，本發明的技術方案如下一種尼莫司汀腦部緩釋植入劑，由尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，其特征在于尼莫司汀與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)的重量比例為1∶100至40∶100，采用復乳化-溶劑揮發法制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，制成尼莫司汀腦部緩釋植入劑，用于治療惡性腦膠質瘤及其他腦部腫瘤。
尼莫司汀腦部緩釋植入劑的制備采用復乳化-溶劑揮發法，將尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)按1∶100至40∶100的重量比例，其最佳重量比例為5∶100至20∶100，在完全避光的條件下，將尼莫司汀溶解在一定濃度的明膠水溶液中，作為內水相；PLGA用二氯甲烷完全溶解，作為油相；將油相加至內水相中，渦旋混勻，超聲乳化得初乳；初乳快速冷卻后滴加到濃度為4％聚乙烯醇(PVA)水溶液中，高速攪拌得復乳；復乳加至0.1％PVA溶液中，低速攪拌揮干有機溶劑，離心收集微球，用蒸餾水洗滌；冷凍干燥后真空干燥制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得成品尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
尼莫司汀腦部緩釋植入劑植入患者腦部腫瘤切除后的殘腔內，發揮長期高效抑制腦膠質瘤的作用。


圖1.尼莫司汀腦部緩釋植入劑體內釋放曲線圖2.荷瘤大鼠存活時間具體實施方式
以下通過試驗例來進一步闡明本發明所述藥物的有益效果。
試驗例1.體內藥物釋放測定實驗動物Wistar大鼠，雌雄各半，鼠齡4-6周，體重175-200g，數量36只，由第二軍醫大學實驗動物中心提供。
測定方法36只大鼠隨機分成6組，每組6只。戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，將大鼠頭部固定，碘酒、乙醇消毒，于矢狀縫左2mm、冠狀縫后3mm處切開皮膚，鉆孔，將植入劑量為6mg的尼莫司汀腦部緩釋植入劑植于額葉腦皮質下1mm處，骨蠟封閉骨孔，縫合皮膚。分別于術后1、7、14、21、28、35天6個時間點處死動物，取大腦植入部位組織制成勻漿，測定其中尼莫司汀含量，結果見圖1。體內實驗表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑具有明顯的緩釋作用，體內作用可達到一個月。
試驗例2.荷瘤大鼠存活時間觀察實驗動物Wistar大鼠，雌雄各半，鼠齡4-6周，體重175-200g，數量40只，由第二軍醫大學實驗動物中心提供。
實驗方法1、選大鼠右側腦尾狀核為靶點，坐標為前囪前1.0mm，矢狀縫右旁開3.0-3.5mm，硬膜下6.0mm。2、接種方法大鼠經2％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后固定，手術暴露顱骨標志，按坐標定位牙鉆鉆孔，孔徑1.2mm暴露硬膜。將微量注射器固定于立體定向儀，進針深度為硬膜下6.0mm。將C6細胞懸液注入靶區，緩慢拔針后以骨蠟封閉骨孔縫合皮膚。一周后將大鼠分兩組，一組植入劑量為6mg的尼莫司汀腦部緩釋植入劑，另一組注射劑量為6mg的尼莫司汀注射劑。觀察大鼠存活時間，記錄如圖2所示。實驗結果表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑較尼莫司汀普通注射劑可明顯延長大鼠存活時間。
試驗例3.尼莫司汀腦部緩釋植入劑對C6細胞的抑制作用采用細胞計數法檢測細胞增殖，流式細胞儀分析細胞周期和凋亡，觀察尼莫司汀腦部緩釋植入劑及注射劑對C6細胞的增殖抑制和誘導凋亡作用，結果見表1。
表1尼莫司汀腦部緩釋植入劑對C6細胞的抑制作用(n＝3)

實驗結果表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑對C6細胞的抑制作用較普通注射劑更為明顯。
試驗例4.尼莫司汀腦部緩釋植入劑及注射劑對腦膠質瘤的抑制作用比較尼莫司汀腦部緩釋植入劑及注射劑對腦膠質瘤的抑制作用，將荷瘤大鼠分為兩組，一組植入尼莫司汀腦部緩釋植入劑，另一組注射注射劑，一定時間后處死大鼠，獲取腦腫瘤標本，稱重，結果見表2。
表2尼莫司汀腦部緩釋植入劑對腦膠質瘤的抑制作用(n＝3)

實驗結果表明，尼莫司汀腦部緩釋植入劑對腦腦膠質瘤的抑制作用較普通注射劑更為明顯。
通過上述試驗可得如下結論尼莫司汀腦部緩釋植入劑能夠有效釋放達一個月，直接延長了藥物的作用時間，使荷瘤大鼠存活時間得以有效延長，表現了更好的對C6細胞及腦膠質瘤的抑制作用，具有廣闊的治療前景。
下面通過實施例進一步說明本發明。應該理解的是，本發明的實施例是用于說明本發明而不是對本發明的限制。根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。
采用復乳化-溶劑揮發法，在完全避光的條件下，將尼莫司汀溶解在明膠水溶液中，作為內水相；PLGA用二氯甲烷完全溶解，作為油相；將油相加至內水相中，渦旋混勻，超聲乳化得初乳；初乳快速冷卻后滴加到濃度為4％聚乙烯醇水溶液中，高速攪拌得復乳；復乳加至0.1％PVA溶液中，低速攪拌3小時揮干有機溶劑，離心收集微球，用蒸餾水洗滌；冷凍干燥后真空干燥制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得成品尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
現結合實施例，對本發明尼莫司汀腦部緩釋植入劑制備作詳細描述。
實施例1.
尼莫司汀與PLGA重量比為20∶100。
緩釋聚合物采用濃度為60％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。
制備步驟采用W/O/W復乳化-溶劑揮發法(1)精密稱取20mg尼莫司汀置1.5ml塑料離心管中，加入20μl濃度為16％的明膠水溶液，60℃水浴加熱，使藥物溶解完全，作為內水相。
(2)精密稱取PLGA0.1g置1.5ml塑料離心管中，加入167μl二氯甲烷，使PLGA溶解完全，作為油相。
(3)用移液槍將油相加至內水相中，旋渦混勻，60℃水浴加熱，超聲乳化得初乳。
(4)初乳至冰水浴中冷卻至18℃，然后加至40ml 4％聚乙烯醇1788水溶液中，8000轉/分鐘攪拌2分鐘得復乳。
(5)復乳加至80ml 0.1％PVA水溶液中，200轉/分鐘攪拌3小時，揮干有機溶劑，2500轉/分鐘離心收集微球，蒸餾水洗滌3次，加水混懸為2ml，冷凍干燥得微球。
(6)取微球100mg壓片得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實施例2.
尼莫司汀與PLGA重量比為2∶100，緩釋聚合物采用濃度為5％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實施例3.
尼莫司汀與PLGA重量比為5∶100，緩釋聚合物采用濃度為10％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實施例4.
尼莫司汀與PLGA重量比為10∶100，緩釋聚合物采用濃度為20％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實施例5.
尼莫司汀與PLGA重量比為15∶100，緩釋聚合物采用濃度為40％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實施例6.
尼莫司汀與PLGA重量比為25∶100，緩釋聚合物采用濃度為40％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實施例7.
尼莫司汀與PLGA重量比為30∶100，緩釋聚合物采用濃度為60％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
實施例8.
尼莫司汀與PLGA重量比為38∶100，緩釋聚合物采用濃度為60％的PLGA(75∶25)與二氯甲烷溶液的混合物。制備步驟如實施例1，制得尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
臨床有效的抗癌藥必須在腫瘤內達到足夠的藥物濃度而對身體其它系統無或僅有可以耐受的毒性作用。系統給藥化療使全身所有組織器官都暴露于抗癌藥，特別是治療腦腫瘤，往往需要加大劑量才能在中樞神經系統達到有效藥物濃度。因此，使得治療劑量接近甚至超過病人的最大耐受劑量，有些病人因嚴重全身毒副作用而無法接受化療。局部給藥可以用較小的劑量達到最大治療濃度，而身體其它部位的抗癌藥物濃度極低，可以明顯提高局部藥物濃度而減少全身毒副作用。直接作用于腫瘤部位，避開了血腦屏障，大大增加了腦瘤化療藥物選擇范圍。膠質瘤幾乎沒有轉移，向顱外的遠方轉移更是罕見。膠質瘤常為局部復發，且80％均在原發腫瘤的2cm范圍內，這就使尼莫司汀腦部緩釋植入劑非常適合進行局部緩釋化療。
權利要求
1.一種尼莫司汀腦部緩釋植入劑，由尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，其特征在于尼莫司汀與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)的重量比例為1∶100至40∶100，采用復乳化-溶劑揮發法制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，制成尼莫司汀腦部緩釋植入劑，用于治療惡性腦膠質瘤及其他腦部腫瘤，通過病變部位局部植入，發揮長期高效抑制腦膠質瘤的作用。
2.一種按照權利要求1所述的尼莫司汀腦部緩釋植入劑的制備方法，其特征在于采用復乳化-溶劑揮發法，將尼莫司汀和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)按1∶100至40∶100的重量比例，在完全避光的條件下，將尼莫司汀溶解在一定濃度的明膠水溶液中，作為內水相；PLGA用一定量的二氯甲烷完全溶解，作為油相；將油相加至內水相中，渦旋混勻，超聲乳化得初乳；初乳快速冷卻后滴加到濃度為4％聚乙烯醇水溶液中，高速攪拌得復乳；復乳加至0.1％PVA溶液中，低速攪拌揮干有機溶劑，離心收集微球，用蒸餾水洗滌；冷凍干燥后真空干燥制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得成品尼莫司汀腦部緩釋植入劑。
3.一種按照權利要求1或2所述的尼莫司汀腦部緩釋植入劑，其特征在于尼莫司汀與聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)的最佳重量比例為5∶100至20∶100。
全文摘要
一種尼莫司汀腦部緩釋植入劑，由尼莫司汀和聚乳酸－羥基乙酸共聚物(PLGA)組成，尼莫司汀與PLGA的重量比例為1∶100至40∶100，采用復乳化－溶劑揮發法，制成尼莫司汀緩釋微球，將緩釋微球壓片，滅菌得尼莫司汀腦部緩釋植入劑，通過病變部位局部植入，發揮長期高效的腦膠質瘤抑制作用，解決了傳統的全身化療藥物具有難以通過血腦屏障、藥物局部濃度低、全身反應嚴重、作用腫瘤時間短而影響療效等缺點和不足，它避開血腦屏障，直接增加局部藥物濃度，同時延長了化療藥物的作用時間，亦減少了藥物的全身毒副作用，用于惡性腦膠質瘤及其他腦部腫瘤的治療。
文檔編號A61K31/506GK1686134SQ20051002495
公開日2005年10月26日 申請日期2005年4月7日 優先權日2005年4月7日
發明者張翮, 高申, 陳建明, 鄒豪, 管斐, 李國棟, 丁雪鷹, 俞媛 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學