專利名稱：一種從三瓣木蘭植物中提取的活性成分及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從三瓣木蘭植物中提取的活性成分及其應(yīng)用，屬生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
淡紫擬青霉[Paecilomyces lilacinus(Thom.)Samson]屬半知菌綱絲孢菌目、絲孢菌科真菌。它廣泛腐生于土壤、植物根際等，從耕作土壤，如小麥、玉米、棉花、馬鈴薯田間，到非耕作土壤，如松柏林、草原，甚至荒蕪?fù)寥馈⑸城稹⒌V井中都發(fā)現(xiàn)其存在，是一類典型的土壤腐生真菌。條件適宜時，可以寄生一些植物線蟲的卵、幼蟲、成蟲及胞囊，具有功效高、寄主廣、易培養(yǎng)等優(yōu)點，在控制植物病原線蟲方面功效卓著。但是研究表明，部分?jǐn)M青霉屬(Paecilomyces)的真菌是人體的病原菌，能引起人的眼內(nèi)炎，眼眶蜂窩織炎，人工瓣膜置換后心膜炎，皮膚和肺感染等多種人體疾病。近年的研究表明，淡紫擬青霉能引起人的全竇炎，首例兒童全竇炎就是由該菌引起的(Nayak，D.R.et al.，2000)。這種由廣泛存在的真菌引起的人的疾病受到廣泛關(guān)注。
迄今已發(fā)現(xiàn)的抗生素主要來源于植物和微生物，其中許多已廣泛用于治療各種微生物感染性疾病。近年來由于病原真菌及病原細(xì)菌的抗性，原有的醫(yī)用抗菌素使用受到限制。急需不斷開發(fā)新的抗生素，特別是由的新病原菌引起的人類疾病更是受到重視。
木蘭科(Magnoliaceae)植物是雙子葉植物最原始的科。我國資源豐富，有約10個屬73個種，均為喬木或灌木。木蘭科樹種能在各種環(huán)境下吸收各種對人體有害的的物質(zhì)，部分樹皮、葉、花是中醫(yī)的常用藥。同時，內(nèi)含芳香物質(zhì)，可提取植物香精和制浸膏，種子含油量高，可供工業(yè)用，該科植物在園林觀賞，綠化，凈化空氣，保護(hù)環(huán)境及促進(jìn)醫(yī)藥，香料，油料等方面的有廣闊的發(fā)展前景。三瓣木蘭[Magnolia tripetala Linn(Okt)]屬木蘭科植物，原產(chǎn)地北美，用途觀賞，目前未見三瓣木蘭具有抗真菌活性的報道和專利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從植物產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物中，篩選出對人體病原真菌淡紫擬青霉(P.lilacinus)具有強(qiáng)烈抑制作用的活性成分，作為制備醫(yī)用抗生素的應(yīng)用。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的
1、活性成分的制備本發(fā)明所用的三瓣木蘭(M.tripetala)采自中國科學(xué)院昆明植物研究所植物園內(nèi)。
將三瓣木蘭的枝用水洗干凈后，在烘箱中于60℃下烘干。將20克烘干后的枝切碎，放入三角瓶內(nèi)，用80％的乙醇浸泡，在40℃的水浴鍋上提取。第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的時間分別為4和8小時。將三次浸提的提取液合并后，低壓濃縮至溶劑蒸發(fā)后，得1.419克浸膏。該浸膏用甲醇溶解，制備成濃度為5mg/ml抗菌活性成分，即本發(fā)明使用的活性成分。三瓣木蘭的葉洗凈烘干后，取20克也用同樣的方法處理，得到2.476克浸膏，同樣用甲醇溶解制備成濃度為5mg/ml備用。
本發(fā)明所述的從植物三瓣木蘭中提取抑制病原真菌活性成分的方法系常規(guī)方法，用常用的有機(jī)溶劑乙醇提取。且在該植物的不同部位包括枝和葉都能提取到活性成分。
2、制備試驗用的病原真菌將淡紫擬青霉(P.lilacinus)接種于常用的PDA(馬鈴薯培養(yǎng)基，馬鈴薯200克加水1000ml后煮沸過濾，用水補足1000ml后加蔗糖20g、瓊脂18g)上，于28℃下培養(yǎng)10天。用無菌水將孢子洗下后，加入到PDA培養(yǎng)基中，調(diào)整孢子濃度為104，將含有淡紫擬青霉孢子的PDA培養(yǎng)基倒入9cm的平板中，待培養(yǎng)基凝固后即可。
3.、實驗方法采用紙片擴(kuò)散法。在無菌操作臺上用微量注射器將樣品注入紙片(做三個劑量，0.5mg/disc，0.1mg/disc，0.05mg/disc)，用電吹風(fēng)將紙片吹干待溶劑揮發(fā)后，置于含有淡紫擬青霉孢子的PDA平板上，28℃下培養(yǎng)48小時后，觀察抑菌結(jié)果，測量抑菌圈的大小(含紙片的直徑0.6cm)。
同時在紙片上加入提取過程中使用過的溶劑80％乙醇和甲醇作為對照，同時還做空白紙片對照。整個實驗重復(fù)3次，取3次實驗結(jié)果的平均值。
將實驗獲得的活性浸膏在80℃水浴加熱1小時后，用甲醇溶解，用同樣的方法做抑菌實驗。
具體實施例方式實施例一將三瓣木蘭的枝用水洗干凈后，在烘箱中60℃溫度下烘干；將烘干后的枝或葉切碎，放入三角瓶內(nèi)，用80％的乙醇浸泡，在40℃的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的時間分別為4和8小時；將三次浸提的提取液合并后，在低壓0.07MPa下濃縮至溶劑蒸發(fā)后得1.419克浸膏；將浸膏用甲醇溶解，制備成濃度為5mg/ml的活性成分。同時按前述實驗方法設(shè)置對照，結(jié)果見表1。
表1三瓣木蘭枝的80％乙醇提取物對淡紫擬青霉(P.lilacinus)的抑菌作用

-沒有抑菌圈出現(xiàn)結(jié)果表明本發(fā)明提取的活性成分對人體病原真菌淡紫擬青霉(P.lilacinus)有明顯的抑菌活性，提取物在0.1mg時就出現(xiàn)強(qiáng)的抑菌活性，抑菌圈的大小為1.2cm，0.05mg時也出現(xiàn)抑菌活性，但活性較弱，抑菌圈的大小為0.7cm。
本發(fā)明具有強(qiáng)的抑制病原菌的作用，可作為制備抑制人體病原真菌淡紫擬青霉(P.lilacinus)制劑的應(yīng)用，開發(fā)為新的抗菌劑。
實施例二基本同實施例一，不同之處是材料采用三瓣木蘭的葉。20克葉提取得到2.476克浸膏，用甲醇溶解，制備成濃度為5mg/ml，用于做活性測定。同時做對照，結(jié)果見表2。
表2 三瓣木蘭葉的提取物對淡紫擬青霉(P.lilacinus)的抑菌作用

-沒有抑菌圈出現(xiàn)與枝的提取物相比，葉的提取物的量較大，但抑菌活性較枝的提取物的弱些，可能是葉的成分復(fù)雜，提取物較多，活性化合物的含量相對較低，因此活性較弱，也有可能是在枝和葉中存在不同的活性成分，因而活性強(qiáng)弱不同。但葉的提取物的抑菌活性也具有明顯的抑菌作用，0.5mg時抑菌圈的大小為1.2cm。
實施例三基本同實施例一，不同之處是提取的浸膏在80℃水浴加熱1小時后，用甲醇溶解，制備成濃度為5mg/ml做活性。結(jié)果見表3。
表3 三瓣木蘭枝的提取物經(jīng)高溫處理后對淡紫擬青霉(P.lilacinus)的抑菌作用

-沒有抑菌圈出現(xiàn)結(jié)果表明，經(jīng)過高溫處理后的樣品與未經(jīng)高溫處理的樣品具有同樣的抑菌活性，說明該成分對熱穩(wěn)定。
本發(fā)明對人體病原菌有抑菌作用，具有高效、熱穩(wěn)定等優(yōu)點，可開發(fā)為新的抗生素。
權(quán)利要求
1.一種從三瓣木蘭植物中提取的活性成分，其特征在于該活性成分經(jīng)如下步驟得到a.將三瓣木蘭的枝或葉用水洗干凈后，在烘箱中60℃溫度下烘干；b.將烘干后的枝或葉切碎，放入三角瓶內(nèi)，用80％的乙醇浸泡，在40℃的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的時間分別為4和8小時；c.將三次浸提的提取液合并后，在低壓0.07MPa下濃縮至溶劑蒸發(fā)后得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，制備成濃度為5mg/ml的活性成分。
2.權(quán)利要求1所說的活性成分的應(yīng)用，其特征在于該活性成分對人體病原真菌淡紫擬青霉具有抑制作用，作為制備抑制人體病原真菌淡紫擬青霉制劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從三瓣木蘭植物中提取的抗真菌活性成分及其應(yīng)用，屬生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的活性成分經(jīng)如下步驟得到a.將三瓣木蘭的枝或葉用水洗干凈后，在烘箱中于60℃溫度下烘干；b.將烘干后的枝或葉切碎，放入三角瓶內(nèi)，用80％的乙醇浸泡，在40℃的水浴鍋上提取，第一次浸泡提取的時間為2小時，第二次和第三次的時間分別為4和8小時；c.將三次浸提的提取液合并后，在低壓0.07MPa下濃縮至溶劑蒸發(fā)后得浸膏；d.將浸膏用甲醇溶解，制備成濃度為5mg/ml的活性成分。本發(fā)明的活性成分具有對人體病原真菌淡紫擬青霉有抑制作用、高效、熱穩(wěn)定等優(yōu)點，可作為制備抑制人體病原真菌淡紫擬青霉制劑的應(yīng)用。
文檔編號A61K135/00GK1843411SQ20061001068
公開日2006年10月11日 申請日期2006年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月14日
發(fā)明者李國紅, 張克勤 申請人:云南大學(xué)