專利名稱：回折模擬物及其相關的方法
技術領域：
本發(fā)明總地涉及回折(reverse-turn)模擬結構及其相關的化學文庫。本發(fā)明還涉及在癌癥疾病治療中的應用和包含它們的藥物組合物。
背景技術：
隨機篩選分子作為治療劑的可能活性已存在多年，并導致許多重要的藥物發(fā)現。雖然分子生物學和計算化學的發(fā)展已導致增加對稱為“理性藥物設計”的興趣，但已證明這種技術并不如最初預測的那樣快速或可靠。因此，近年來的興趣發(fā)生了更新并返回到隨機藥物篩選。為此目的，已在基于組合化學文庫的開發(fā)和對這種文庫進行尋找生物活性成員的篩選的新技術方面取得具體的進步。
一般來說，組合化學文庫僅僅是一種分子的收集。這種文庫隨庫內的化學物質種類以及用于產生文庫成員和鑒定與有用的生物靶體相互作用的成員的方法而改變。雖然這個領域仍然處于發(fā)展初期，但產生和篩選文庫的方法已變得相當繁多和復雜。例如，一篇最近的關于不同組合化學文庫的綜述已確定了多種這樣的技術(Dolle，J.Com.Chem.，2(3)383-433，2000)，包括使用標記和非標記的文庫成員(Janda，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9110779-10785，1994)。
最初，組合化學文庫一般限于肽或核苷酸來源的成員。為此目的，Houghten等人的技術例示了稱為“雙定義迭代”的方法用于通過分裂合成技術裝配可溶性組合肽文庫(Nature(London)35484-86，1991；Biotechniques 13412-421，1992；Bioorg.Med.Chem.Lett.3405-412，1993)。通過這種技術，已獲得含有數千萬成員的可溶性肽文庫。已表明這種文庫有效地鑒定類阿片肽，如甲硫氨酸-和亮氨酸-腦啡肽(Dooley和Houghten，Life Sci.52，1509-1517，1993)，而N-酰基化肽文庫已用于鑒定作為有效的類阿片拮抗劑的乙酰基腦啡肽(Dooley等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9010811-10815，1993.更為最近地，已構建全D-氨基酸類阿片肽文庫，并對其進行針對mu(″μ″)阿片樣物質受體的止痛活性的篩選(Dooley等人，Science 2662019-2022，1994)。
雖然含有來源于肽和核苷酸的成員的組合文庫具有重要的價值，但本領域中仍需要含有不同來源的成員的文庫。例如，傳統(tǒng)的肽文庫在很大程度上僅改變氨基酸序列來產生文庫成員。雖然公認肽的二級結構對于生物活性來說是重要的，但這種肽文庫并沒有賦予它的文庫成員受限制的二級結構。
為此目的，某些研究者已嘗試用二硫鍵環(huán)化肽以提供更加限制的二級結構(Tumelty等人，J.Chem.Soc.1067-68，1994；Eichler等人，Peptide Res.7300-306，1994)。但是，這種環(huán)化肽一般而言仍相當具有柔性，且生物利用度差，因而取得的成功有限。
更為最近地，已開發(fā)出更加接近地模擬生物活性蛋白質或肽中發(fā)現的回折二級結構的非肽化合物。例如，Kahn的美國專利5,440,013和Kahn的公開的PCT WO94/03494、PCT WO01/00210A1和PCTWO01/16135A2，這些文獻公開了模擬回折三維結構的構象限制的非肽化合物。
雖然在構象限制的回折模擬物的合成及鑒定方面取得了顯著的進展，但本領域中仍需要模擬肽的二級結構的小分子。本領域中還需要含有這種成員的文庫，以及用于合成和篩選針對感興趣的靶體，特別是生物靶體的庫成員的技術，以鑒定生物活性庫成員。例如Kahn的美國專利5,929,237及其部分繼續(xù)美國專利6,013,458還公開了模擬生物活性肽和蛋白質的回折區(qū)的二級結構的構象限制的化合物。Obrecht充分綜述了構象限制的回折模擬物的合成和鑒定及它們在疾病中的應用(Advances in Med.Chem.，4，1-68，1999)。
本發(fā)明也滿足這些要求，并通過提供模擬生物活性肽和蛋白質的回折區(qū)的二級結構的構象限制的化合物而提供進一步相關的優(yōu)點。
Wnt信號途徑調節(jié)多種不同的過程，包括細胞生長、腫瘤發(fā)生和發(fā)育(Moon等人，1997，Trends Genet.13，157-162；Miller等人，1999，Oncogene 18，7860-7872；Nusse和Varmus，1992，Cell 69，1073-1087；Cadigan和Nusse，1997，Genes Dev.11，3286-3305；Peifer和Polais，2000 Science 287，1606-1609；Polakis 2000，Genes Dev.14，1837-1851)。Wnt信號途徑已在多種不同的生物體中作了充分研究。已發(fā)現Wnt信號轉導引起的TCF4/β-連環(huán)蛋白介導的轉錄的活化在它的生物功能中起重要的作用(Molenaar等人，1996，Cell 86，391-399Gat等人，1998 Cell 95，605-614；Orford等人，1999J.Cell.Biol.146，855-868)。
在不存在Wnt信號的情況下，腫瘤抑制基因腺瘤樣息肉及結腸癌基因(APC)同時與絲氨酸激酶糖原合酶激酶(GSK)-3β和β-連環(huán)蛋白相互作用(Su等人，1993，Science 262，1734-1737；Yost等人，1996 GenesDev.10，1443-1454；Hayashi等人，1997，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94，242-247；Sakanaka等人，1998，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95，3020-3023；Sakanaka和William，1999，J.Biol.Chem 274，14090-14093)。GSK-3β導致的APC的磷酸化調節(jié)APC與β-連環(huán)蛋白的相互作用，從而可以調節(jié)β-連環(huán)蛋白的信號功能(B.Rubinfeld等人，Science 272，1023，1996)。Wnt信號作用穩(wěn)定β-連環(huán)蛋白，使其轉移到核，在那里它與轉錄因子的淋巴細胞增強子因子(LEF1)/T-細胞因子(TCF4)家族的成員相互作用(Behrens等人，1996Nature 382，638-642；Hsu等人，1998，Mol.Cell.Biol.18，4807-4818Roose等人，1999Science 285，1923-1926)。
最近已表明一種已知的致癌基因c-myc是β-連環(huán)蛋白/TCF4介導的轉錄的靶基因(He等人，1998 Science 281 1509-1512；Kolligs等人，1999 Mol.Cell.Biol.19，5696-5706)。許多其它重要的基因，包括也參與腫瘤發(fā)生的細胞周期蛋白D1和金屬蛋白酶，已確定受TCF4/β-連環(huán)蛋白轉錄途徑的調節(jié)(Crawford等人，1999，Oncogene18，2883-2891；Shtutman等人，1999，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，11，5522-5527；Tetsu和McCormick，1999 Nature，398，422-426)。
而且，已發(fā)現Wnt信號作用的數種下游介質的超表達調節(jié)凋亡(Moris等人，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93，7950-7954；He等人，1999，Cell 99，335-345；Orford等人，1999J.Cell.Biol.，146，855-868；Strovel和Sussman，1999，Exp.Cell.Res.，253，637-648)。APC在人結腸直腸癌細胞中的超表達誘導凋亡s(Moris等人，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.，93，7950-7954)，β-連環(huán)蛋白的異位表達抑制與細胞外基質吸附的喪失有關的凋亡(Orford等人，1999，J.Cell Biol.146，855-868)。TCF4的顯性失活突變體表達導致的TCF4/β-連環(huán)蛋白轉錄的抑制阻斷Wnt-1-介導的細胞存活，并使細胞對凋亡刺激物如抗癌藥具有敏感性(Shaoqiong Chen等人，2001，J.Cell Biol.，152，1，87-96)，而APC突變通過允許構成性survivin表達(一種已知的抗凋亡蛋白質)而抑制凋亡(Tao Zhang等人，2001，Cancer Research，62，8664-8667)。
雖然在人癌中沒有發(fā)現Wnt基因的突變，但在大部分的結腸直腸腫瘤中發(fā)生的APC或β-連環(huán)蛋白的突變導致不適當地活化TCF4，超表達c-myc和產生腫瘤生長(Bubinfeld等人，1997，Science，275，1790-1792；Morin等人，1997，Science，275，1787-1790；Casa等人，1999，Cell.Growth.Differ.10，369-376)。在85％的結腸直腸癌和多種其它的癌癥中腫瘤抑制基因(APC)丟失或失活(Kinzler和Vogelstein，1996，Cell 87，159-170)，APC的主要作用是Wnt信號轉導級聯(lián)的負調節(jié)劑的作用。這種途徑的核心特征涉及通過與包括APC在內的基于Axin的大復合體相互作用而調節(jié)β-連環(huán)蛋白的胞質庫的穩(wěn)定性和定位。這種相互作用導致β-連環(huán)蛋白的磷酸化，從而瞄準其以進行降解。
最初在蛋白質相互作用試驗中鑒定了CREB結合蛋白質(CBP)/p300，起先通過與轉錄因子CREB的結合(Chrivia等人，1993，Nature，365，855-859)，后來通過其與腺病毒轉化蛋白E1A的相互作用(Stein等人，1990，J.Viol.，64，4421-4427；Eckner等人，1994，Genes.Dev.，8，869-884)。CBP具有參與多種細胞功能包括轉錄輔激活物功能的潛能(Shikama等人，1997，Trends.Cell.Biol.，7，230-236；Janknecht和Hunter，1996，Nature，383，22-23)。CBP/p300加強β-連環(huán)蛋白介導的siamois啟動子(一種已知的Wnt靶體)的活化(Hecht等人，2000，EMBO J.19，8，1839-1850)。β-連環(huán)蛋白直接與CBP的CREB結合域相互作用，并且β-連環(huán)蛋白與CBP協(xié)同以刺激TCF4/β-連環(huán)蛋白的轉錄活化(Ken-Ichi Takemaru和Randall T.Moon，2000J.Cell.Biol.，149，2，249-254)。
根據這種背景知識，Wnt途徑的TCF4/β-連環(huán)蛋白和CBP復合體可以被認為是調節(jié)細胞生長、腫瘤發(fā)生和細胞凋亡等的靶分子。也就是說，需要通過抑制CBP而阻斷TCF4/β-連環(huán)蛋白轉錄途徑從而可以用于治療癌癥特別是結腸直腸癌的化合物。
附圖的簡要說明

圖1顯示關于本發(fā)明的化合物對于SW480細胞的IC50測定的圖，其中在不同濃度的實施例4制備的化合物的情況下測定對SW480細胞的細胞生長抑制作用以得到IC50值。具體而言，測定該試驗化合物對螢火蟲和renilla螢光素酶活性的抑制程度。結果發(fā)現該試驗化合物抗SW480細胞生長的IC50如表4公開。詳細的方法與實施例6公開的方法相同。

發(fā)明內容
本發(fā)明涉及模擬生物肽和蛋白質回折區(qū)的二級結構的構象限制的化合物(這里還稱為“回折模擬物”及其相關的化學文庫)。本發(fā)明還公開包含這種化合物的文庫及其合成和篩選方法。
本發(fā)明的回折模擬結構可用作生物活性劑，包括(但不限于)用作診斷、預防和/或治療劑。本發(fā)明的回折模擬結構文庫可用于鑒定這種生物活性劑。在本發(fā)明的實施過程中，所述文庫可以包含數十至數百至數千(或更多)的單獨的回折結構(這里還稱為“成員”)。
本發(fā)明的化合物具有以下通式(I)
其中A為-(CHR3)-或-(C＝O)-，B為-(CHR4)-或-(C＝O)-，D為-(CHR5)-或-(C＝O)-，E為-(ZR6-或-(C＝O)-，G為-(XR7)n-、-(CHR7)-(NR8)-、-(C＝O)-(XR9)-或-(C＝O)-，W 為-Y(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(SO2)-或不存在，Y為氧或硫，X和Z獨立地為氮或CH，n＝0或1；而R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9相同或不同并獨立地選自氨基酸側鏈部分或其衍生物、所述分子的殘余物、連接物和固體載體，以及它們的立體異構體。
在其中的A為-(CHR3)-，B為-(C＝O)-，D為-(CHR5)-， E is-(C＝O)-，而G為-(XR7)n-的實施方案中，本發(fā)明的化合物具有下式(II) 其中W、Y和n如以上定義，而R1、R2、R3、R5和R7如在以下詳細描述中定義。
在其中的A為-(C＝O)-，B為-(CHRR4)-，D為-(C＝O)-，E為-(ZR6)-，而G為-(C＝O)-(XR9)-的實施方案中，本發(fā)明的化合物具有下式(III) 其中W、Y和n如以上定義，Z為氮或CH(如果Z為CH，則X為氮)，而R1、R2、R4、R6和R9如以下詳細描述中定義。
在其中的A為-(C＝O)-，B為-(CHR4)-，D為-(C＝O)-，E為-(ZR6)-，而G為(XR7)n-的實施方案中，本發(fā)明的化合物具有以下通式(IV) 其中W、Y和n如以上定義，Z為氮或CH(如果Z為氮，則n為0，而如果Z為CH，則X為氮而n不為0)，而R1、R2、R4、R6和R7如在以下詳細描述中定義。
本發(fā)明還涉及包含以上式(I)的化合物的文庫，以及用于合成這種文庫的方法和用于篩選所述文庫以鑒定生物活性化合物的方法。還公開了包含本發(fā)明的化合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑相組合的組合物。
具體而言，本發(fā)明涉及包含這些化合物的藥物組合物，用于治療與Wnt信號途徑有關的包括癌癥在內的疾病。本發(fā)明還涉及用于治療與Wnt信號途徑有關的包括癌癥在內的疾病的方法。
參照附圖和以下的詳述描述將更清楚地看到本發(fā)明的這些和其它方面。為此目的，這里引述各種參考資料，它們更為詳細地描述某些方法、化合物和/或組合物，并被全部引用作為參考。
以下將更為詳細地例示本發(fā)明。
在本發(fā)明的一個方面，公開了具有下式(I)的回折模擬結構 其中A為-(CHR3)-或-(C＝O)-，B為-(CHR4)-或-(C＝O)-，D為-(CHR5)-或-(C＝O)-，E為-(ZR6)-或-(C＝O)-，G 為-(XR7)n-、-(CHR7)-(NR8)-、-(C＝O)-(XR9)-或-(C＝O)-，W 為-Y(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(SO2)-或不存在，Y為氧或硫，X和Z獨立地為氮或CH，n＝0或1；而R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9相同或不同并獨立地選自氨基酸側鏈部分或其衍生物、所述分子的殘余物、連接物和固體載體，以及它們的立體異構體。
更為具體而言，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9獨立地選自氨基C2-5烷基，胍C2-5烷基、C1-4烷基胍基C2-5烷基、二C1-4烷基胍基-C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-4烷基脒基C2-5烷基、二C1-4烷基脒基C2-5烷基、C1-3烷氧基、苯基、取代的苯基(其中所述取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、芐基、取代的芐基(其中芐基上的取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、萘基、取代的萘基(其中所述取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、雙苯基甲基、取代的雙苯基甲基(其中所述取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、吡啶基、取代的吡啶基(其中所述取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中所述吡啶取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中所述嘧啶取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、三嗪-2-基-C1-4烷基、取代的三嗪-2-基-C1-4烷基(其中所述三嗪取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、咪唑C1-4烷基、取代的咪唑C1-4烷基(其中所述咪唑取代基獨立地選自一個或多個氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基)、咪唑啉基C1-4烷基、N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基、羥基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、羥基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、C1-5二烷基氨基C2-5烷基、N-脒基哌啶基C1-4烷基和4-氨基環(huán)已基C0-2烷基。
在一個實施方案中，R1、R2、E的R6和G的R7、R8、R9相同或不同，并代表化合物的殘余物，而A的R3、B的R4或D的R5選自氨基酸側鏈部分或其衍生物。這里所用的術語“化合物的殘余物”意指在R1、R2、R5、R6、R7、R8和/或R9位置與回折模擬結構共價連接的任何部分、試劑、化合物、載體、分子、連接物、氨基酸、肽或蛋白質。此術語還包括氨基酸側鏈部分及其衍生物。
這里所用的術語“氨基酸側鏈部分”代表在天然存在的蛋白質中存在的任何氨基酸側鏈部分，包括(但不限于)表1確定的天然存在的氨基酸側鏈部分。本發(fā)明的其它天然存在的氨基酸側鏈部分包括(但不限于)3，5-二溴酪氨酸、3，5-二碘酪氨酸、羥基賴氨酸、γ-羧基谷氨酸、磷酸酪氨酸和磷酸絲氨酸的側鏈部分。此外，糖基化氨基酸側鏈也可以用于實施本發(fā)明，包括(但不限于)糖基化蘇氨酸、絲氨酸和天冬酰胺。
表1
除了天然存在的氨基酸側鏈部分之外，本發(fā)明的氨基酸側鏈部分還包括其多種衍生物。這里所用的氨基酸側鏈部分的“衍生物”包括對天然存在的氨基酸側鏈部分的修飾和/或改變。例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和苯丙氨酸的氨基酸側鏈部分一般可以歸類為低級鏈烷基、芳基或芳基烷基部分。氨基酸側鏈部分的衍生物包括其它直鏈或支鏈的、環(huán)狀或非環(huán)狀的、取代或未取代的、飽和或不飽和的低級鏈烷基、芳基或芳基烷基部分。
這里所用的“低級鏈烷基部分”包含1-12個碳原子，“低級鏈芳基部分”包含6-12個碳原子，而“低級鏈芳烷基部分”包含7-12個碳原子。因此，在一個實施方案中，氨基酸側鏈衍生物選自C1-12烷基、C6-12芳基和C7-12芳基烷基，而在更優(yōu)選的實施方案中，選自C1-7烷基、C6-10芳基和C7-11芳基烷基。
本發(fā)明的氨基酸側鏈衍生物還包括低級鏈烷基、芳基和芳基烷基部分的取代的衍生物，其中所述取代基選自(但不限于)一個或多個以下化學部分-OH、-OR、-COOH、-COOR、-CONH2、-NH2、-NHR、-NRR、-SH、-SR、-SO2R、-SO2H、-SOR和鹵素(包括F、Cl、Br和I)，其中各種情況下的R獨立地選自直鏈或支鏈的、環(huán)狀或非環(huán)狀的、取代或未取代的、飽和或不飽和的低級鏈烷基、芳基或芳烷基部分。而且，本發(fā)明的環(huán)狀低級鏈烷基、芳基和芳基烷基部分包括萘，以及雜環(huán)化合物如噻吩、吡咯、呋喃、咪唑、唑、噻唑、吡唑、3-吡咯啉、吡咯烷、吡啶、嘧啶、嘌呤、喹啉、異喹啉和咔唑。氨基酸側鏈衍生物還包括低級鏈烷基和芳烷基部分的烷基部分的雜烷基衍生物，包括(但不限于)烷基和芳烷基膦酸酯和硅烷。
代表性的R1、R2、R5、R6、R7、R8和R9部分具體包括(但不限于)-OH、-OR、-COR、-COOR、-CONH2、-CONR、-CONRR、-NH2、-NHR、-NRR、-SO2R和-COSR，其中各種情況下的R為如以上定義。
在另一個實施方案中，除了作為氨基酸側鏈部分或其衍生物(或R1、R2、R5、R6、R7、R8和R9情況下的化合物的剩余物)之外，R1、R2、R5、R6、R7、R8或R9可以是利于化合物與另一部分或化合物連接的連接物。例如，本發(fā)明的化合物可以與一種或多種已知的化合物如生物素連接，用于診斷或篩選分析。而且，R1、R2、R5、R6、R7、R8或R9可以是將化合物連接到固體載體(如用于固相肽合成的載體)上的連接物，或者可選擇地可以是載體本身。在此實施方案中，與另一部分或化合物或者與固體載體的連接優(yōu)選在R1、R2、R7或R8位，并更優(yōu)選在R1或R2位。
在其中的A為-(CHR3)-，B為-(C＝O)-，D為-(CHR5)-，E為-(C＝O)-，G為-(XR7)n-的實施方案中，本發(fā)明的回折模擬化合物具有下式(II) 其中R1、R2、R3、R5、R7、W、X和n如以上定義。在一個優(yōu)選的實施方案中，R1、R2和R7代表化合物的剩余物，而R3或R5選自氨基酸側鏈部分。
在其中的A為-(C＝O)-，B為-(CHR4)-，D為-(C＝O)-，E為-(ZR6)-，G為-(C＝O)-(XR9)-的實施方案中，本發(fā)明的回折模擬化合物具有下式(III) 其中R1、R2、R4、R6、R9、W和X如以上定義，Z為氮或CH(如果Z為CH，則X為氮)。在一個優(yōu)選的實施方案中，R1、R2、R6和R9代表化合物的剩余物，而R4選自氨基酸側鏈部分。在其中的A為-(C＝O)-，B為-(CHR4)-，D為-(C＝O)-，E為-(ZR6)-，G為(XR7)n-的更具體的實施方案中，本發(fā)明的回折模擬化合物具有下式(IV) 其中R1、R2、R4、R6、R7、W、X和n如以上定義，而Z為氮或CH(如果Z為氮則n為0，而如果Z為CH則X為氮而n不為0)。在一個優(yōu)選的實施方案中，R1、R2、R6和R7代表化合物的剩余物，而R4選自氨基酸側鏈部分。在這種情況下，如果Z和X分別為CH，則R6或R7可以選自氨基酸側鏈部分。
本發(fā)明的回折模擬結構可以通過使用合適的起始組成分子(以下稱為“組成部件”)制備。簡言之，在具有式(II)的回折模擬結構的合成中，將第一和第二組成部件偶合形成組合的第一-第二中間產物，如果需要的話，將第三和/或第四組成部件偶合以形成組合的第三-第四中間產物(或者如果可以商購得到的話，可以使用單一的第三中間產物)，然后將組合的第一-第二中間產物和第三-第四中間產物(或第三中間產物)偶合得到第一-第二-第三-第四中間產物(或第一-第二-第三中間產物)，將該產物環(huán)化得到本發(fā)明的回折模擬結構。可選擇地，式(II)的回折模擬結構可以通過在溶液中分步地依次偶合各單獨的組成部件或通過在固相肽合成中常用的固相合成依次偶合各單獨的組成部件而制備。
在本發(fā)明的上下文中，“第一組成部件”具有下式S1 其中R2如以上定義，且R為適用于肽合成的保護基。適宜的R基團包括烷基，且在優(yōu)選的實施方案中，R為甲基。這些第一組成部件可以容易地由CH(OR)2-CHO或CH(OR)2-CH2-Hal(其中Hal意指鹵原子)通過還原胺化或置換H2N-R2的取代反應而合成。
本發(fā)明的“第二組成部件”具有下式S2 其中L1為羧基活化基團如鹵原子，R4如以上定義，而P為適用于肽合成的氨基保護基。優(yōu)選的保護基包括叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁氧基羰基(BOC)、甲氧基羰基(MOC)、9H-芴基甲氧基羰基(FMOC)和烯丙氧基羰基(Alloc)。如果L為-C(O)NHR，則-NHR可以為羧基保護基。N-保護的氨基酸可以商購得到。例如，FMOC氨基酸可以從多種來源獲得。這些化合物至本發(fā)明的第二組成部件的轉化可以容易地通過將N-保護的氨基酸的羧酸基團活化而實現。適宜的活化的羧酸基團包括其中的X為鹵化物如氯化物或溴化物的酰基鹵，其中的X為酰基如乙酰基的酸酐，反應性酯如N-羥基琥珀酰亞胺酯和五氟代苯基酯，以及其它活化中間產物如在使用碳化二亞胺如二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)的偶合反應中形成的活性中間產物。
在氨基酸的疊氮基衍生物用作第二組成部件的情況下，這種化合物可以由對應的氨基酸，通過Zaloom等人(J.Org Chem.465173-76，1981)公開的反應而制備。
可選擇地，本發(fā)明的第一部件可以具有下式S1′
其中R如以上定義，而L2為離去基團如鹵原子或甲苯磺酰基，而本發(fā)明的第二部件可以具有下式S2′ 其中R2、R3和P如以上定義。
本發(fā)明的“第三組成部件”具有下式S3a或S3b 其中G、E、L1和L2如以上定義。適宜的第三組成部件可從多種來源商購得到，或者可以通過任何已知的有機化學方法制備。
更為具體而言，可以通過以下方法合成式(II)的本發(fā)明的回折模擬結構使第一組成部件與第二組成部件反應得到組合的第一-第二中間產物，然后使組合的第一-第二中間產物依次與第三組成部件反應得到組合的第一-第二-第三-第四中間產物，然后將此中間產物環(huán)化得到回折模擬結構。
具有結構I′的回折的一般合成可以通過以下技術合成。通過使用偶合試劑如光氣將第一組成部件1與第二組成部件2偶合而在N-脫保護后得到如以下例示的組合的第一-第二中間產物1-2 其中R1、R2、R4、R7、Fmoc、Moc和X如以上定義，而Pol代表聚合載體。
本發(fā)明的代表性的組成部件的合成如在制備實施例和工作實施例中所述。
式(III)和(IV)的回折模擬結構可以由類似于以上公開的模型組分合成的技術制得，但其中對組成部件進行適當的修飾。
如上述，Kahn等人的USP 6,013,458的回折模擬物可用作生物活性劑，例如診斷、預防和治療劑。在該USP 6,013,458的實施例9中呈現了代表性回折模擬物的阿片劑受體結合活性，其中發(fā)現該發(fā)明的回折模擬物有效地抑制放射性標記的腦啡肽衍生物與δ和μ阿片劑受體的結合，其中的數據表明這些回折模擬物作為受體激動劑和潛在的止痛劑的應用。
本發(fā)明的回折模擬結構將可用作生物活性劑，例如診斷、預防和治療劑。
因此，由于根據本發(fā)明的化合物具有回折模擬結構，它可以用于調節(jié)溫血動物中細胞信號傳導轉錄因子相關肽，包括給該動物施用有效量的式(I)的化合物。
而且，本發(fā)明的回折模擬結構還可以有效地用于抑制溫血動物中肽與PTB域結合；用于調節(jié)溫血動物中G蛋白質偶聯(lián)受體(GPCR)和離子通道；用于調節(jié)溫血動物的細胞因子。
同時，已發(fā)現式(I)的化合物特別是式(VI)的化合物有效地抑制或治療由Wnt信號途徑調節(jié)的疾病，例如癌癥，特別是結腸直腸癌。
其中Ra為具有8-11個環(huán)成員的二環(huán)芳基，它可以具有1-3個選自氮、氧或硫的雜原子；Rb為具有5-7個環(huán)成員的單環(huán)芳基，它可以具有1-2個選自氮、氧或硫的雜原子；并且化合物中的芳環(huán)可以具有一個或多個選自鹵化物、羥基、氰基、低級烷基和低級烷氧基的取代基。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種包含安全和有效量的具有通式(VI)的化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物，所述組合物可以用于治療由Wnt信號途徑特別是TCF4-β-連環(huán)蛋白-CBP復合體調節(jié)的疾病。
而且，本發(fā)明提供一種通過使用上述本發(fā)明的組合物而抑制腫瘤細胞生長的方法；一種通過使用上述本發(fā)明的組合物而誘導腫瘤細胞凋亡的方法；一種通過使用上述本發(fā)明的組合物而治療由TCF4-β-連環(huán)蛋白-CBP復合體調節(jié)的疾病的方法；和一種通過施用本發(fā)明的組合物以及其它抗癌藥如5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇、順鉑、絲裂霉素C、替加氟、雷替曲塞、卡培他濱和伊立替康等而治療癌癥如結腸直腸癌的方法。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物具有如下的(6S，10R)-構型 其中Ra和Rb具有與以上的定義相同的含義。
在本發(fā)明的另一方面，公開了包含本發(fā)明的回折模擬結構的文庫。本發(fā)明的文庫一旦被組配，則可以篩選鑒定具有生物活性的個體成員。例如，這種對生物活性成員的文庫篩選可以包括例如評價庫成員的結合活性或評價庫成員對功能分析的作用。篩選一般通過使庫成員(或庫成員的子集)與感興趣靶體如抗體、酶、受體或細胞系接觸來完成。這里將能夠與感興趣靶體相互作用的庫成員稱為“生物活性庫成員”或“生物活性模擬物”。例如，生物活性模擬物可以是能夠與抗體或受體結合的庫成員，能夠抑制酶的庫成員，或者能夠引發(fā)或拮抗例如與細胞系有關的功能反應的庫成員。換句話說，對本發(fā)明的文庫的篩選確定哪些庫成員能夠與一種或多種感興趣的生物靶體相互作用。而且，如果發(fā)生相互作用，則可以從庫成員中鑒定生物活性模擬物。從文庫中鑒定單一(或有限數量)的生物活性模擬物得到本身具有生物活性的回折模擬結構，從而用作診斷、預防或治療劑，并還可以進一步用于顯著促進對在這些領域中先導化合物的鑒定。
本發(fā)明的文庫的肽模擬物的合成可以通過使用已知的肽合成技術，聯(lián)合本發(fā)明的第一、第二和第三組成部件而完成。更為具體而言，可以將任何氨基酸序列加到構象限制的回折模擬物的N-末端和/或C-末端。為此目的，可以在固體載體(如PAM樹脂)上通過已知技術(例如參見John M.Stewart和Janis D.Young，Solid Phase PeptideSynthesis，1984，Pierce Chemical Comp.，Rockford，Ill)，或者在甲硅烷基連接的樹脂上通過醇添加(參見Randolph等人，J Am Chem.Soc.1175712-14，1995)而合成模擬物。
此外，溶液和固相合成技術的組合可以用于合成本發(fā)明的肽模擬物。例如，可以將固體載體用于合成線性肽序列，直至將構象限制的回折加入序列的那一點。然后可以將先前通過溶液合成技術合成的適宜的構象限制的回折模擬結構作為下一個“氨基酸”加到固相合成(即具有N-末端和C-末端的構象限制的回折模擬物可以用作有待加到線性肽上的下一個氨基酸)。在將構象限制的回折模擬物結構引入序列后，可以接著加入另外的氨基酸以完成與固體載體結合的肽。可選擇地，線性N-末端和C-末端保護的肽序列可以在固體載體上合成，從載體上移除，然后使用已知的溶液偶合技術在溶液中與構象限制的回折模擬結構偶合。
在本發(fā)明的另一方面，公開了用于構建所述文庫的方法。傳統(tǒng)的組合化學技術(例如參見Gallop等人，J.Med.Chem.371233-1251，1994)允許通過連續(xù)地將試劑組合到基本分子骨架而快速地制備大量的化合物。組合技術已用于構建來源于天然存在的氨基酸的肽文庫。例如，通過獲得20個被適宜保護的和不同的氨基酸的20種混合物，并使每一種與20個氨基酸之一偶合，建立400個(即202)二肽的文庫。重復此過程7次導致制備包含大約260億(即208)個八肽的肽文庫。
具體而言，本發(fā)明文庫的肽模擬物的合成可以使用已知的肽合成技術而完成，例如以下[4，4，0]回折模擬物文庫的一般路線 本發(fā)明文庫的肽模擬物的合成使用具有96孔平板的FlexChemReactor Block通過已知技術完成。在以上路線中，′Pol′代表一種溴乙縮醛樹脂(Advanced ChemTech)，而詳述的過程如以下例示。
步驟1將溴乙縮醛樹脂(37mg，0.98mmol/g)和在DMSO中的R2-胺的溶液(1.4mL)置于具有96孔平板的Robbins block(FlexChem)。將反應混合物于60℃下使用旋轉烘箱[Robbins Scientific]振蕩12小時。用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。
步驟2將在DMF中的可商購得到的Fmoc氨基酸(4當量)、PyBob(4當量)、HOAt(4當量)和DIEA(12當量)的溶液加到樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩12小時后，用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。
步驟3往反應前通過DMF溶脹的樹脂中加入在DMF中的25％哌啶，并將反應混合物于室溫下振蕩30分鐘。再次重復此脫保護步驟，并用DMF、甲醇洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。將在DMF中的肼酸(hydrazine acid)(4當量)、HOBt(4當量)和DIC(4當量)的溶液加到樹脂，并將反應混合物于室溫下振蕩12小時。用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。
步驟4a(其中肼酸為MOC氨基甲酸酯)室溫下用甲酸(1.2mL每孔)將步驟3得到的樹脂處理18小時。在過濾除去樹脂之后，使用SpeedVac[SAVANT]減壓濃縮濾液得到產物，為油。用50％水/乙腈稀釋產物，然后在冷凍后凍干。
步驟4b(其中Fmoc肼酸用于通過異氰酸酯制備脲)往反應前通過DMF溶脹的樹脂加入在DMF中的25％哌啶，并將反應混合物于室溫下振蕩30分鐘。再次重復此脫保護步驟，并用DMF、甲醇洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。往在反應前通過DCM溶脹的樹脂中加入在DCM中的異氰酸酯(5當量)。室溫下將反應混合物振蕩12小時后，用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。用甲酸(1.2mL每孔)于室溫下將樹脂處理18小時。在過濾除去樹脂后，用SpeedVac[SAVANT]減壓濃縮濾液得到產物，為油。用50％水/乙腈稀釋產物，然后在冷凍后凍干。
步驟4c(其中Fmoc-肼酸用于通過活性氨基甲酸酯制備脲)往反應前通過DMF溶脹的樹脂中加入在DMF中的25％哌啶，并將反應混合物于室溫下振蕩30分鐘。再次重復此脫保護步驟，用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。往在反應前通過DCM溶脹的樹脂中加入在DCM中的氯甲酸對硝基苯基酯(5當量)和二異丙基乙胺(5當量)。在將反應混合物于室溫下振蕩12小時后，用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。往樹脂中加入在DCM中的伯胺，在室溫下保持12小時，并用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。反應后在室溫下用甲酸(1.2mL每孔)將樹脂處理18小時。過濾除去樹脂后，用SpeedVac[SAVANT]減壓濃縮濾液得到產物，為油。用50％水/乙腈稀釋產物，然后在冷凍后凍干。
為產生這些構件文庫，根據制備實施例例示的方法合成關鍵的中間產物肼酸。
表2顯示了可以根據本發(fā)明制備的[4，4，0]回折模擬物文庫，其代表性的制備如實施例4給出。
[4，4，0]回折模擬物文庫
























此外，本發(fā)明的文庫的肽模擬物的合成可以采用如下的[4，3，0]回折模擬物文庫的一般路線完成。

本發(fā)明的二環(huán)模板文庫的肽模擬物的合成使用具有96孔平板的FlexChem Reactor Block通過已知技術完成。在以上的路線中，′Pol′代表溴乙縮醛樹脂(Advanced ChemTech)，而詳細的過程如下述。
步驟1將溴乙縮醛樹脂(1.6mmol/g)和在DMSO中的R1胺的溶液(2M溶液)置于96孔Robbins block(FlexChem)。將反應混合物于60℃下使用旋轉烘箱[Robbins Scientific]振蕩12小時。用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。
步驟2將在DMF中的可商購得到的Fmoc氨基酸(4當量)、PyBob(4當量)、HOAt(4當量)和DIEA(12當量)的溶液加到樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩12小時后，用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。
步驟3往反應前通過DMF溶脹的樹脂中加入在DMF中的25％哌啶。在將反應混合物于室溫下振蕩30分鐘后，再次重復此脫保護步驟，然后用DMF、甲醇洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。將在DMF中的肼氨基甲酰氯(4當量)、HOBt(4當量)和DIC(4當量)的溶液加到樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩12小時后，用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。
步驟4往反應前通過DMF溶脹的樹脂中加入在DMF中的25％哌啶。在將反應混合物于室溫下振蕩30分鐘后，再次重復此脫保護步驟，然后用DMF、甲醇洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。將在DCM中的R1-異氰酸酯(5當量)加到反應前通過DCM溶脹的樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩12小時后，用DMF、MeOH洗滌樹脂，然后用DCM洗滌。
步驟5室溫下用甲酸(1.2mL每孔)將樹脂處理18小時。在過濾除去樹脂之后，使用SpeedVac[SAVANT]減壓濃縮濾液得到產物，為油。用50％水/乙腈稀釋產物，然后在冷凍后凍干。
表3顯示了可以根據本發(fā)明制備的[4，3，0]回折模擬物文庫，其代表性的制備如實施例5給出。
[4，3，0]回折模擬物文庫






在本發(fā)明進一步的另一方面，公開了篩選文庫的生物活性和分離生物活性文庫成員的方法。對本發(fā)明的文庫通過多種技術和方法篩選生物活性。一般地，篩選分析可以如下進行(1)使文庫的模擬物與感興趣的生物靶體如受體接觸，以使文庫的模擬物和靶體之間發(fā)生結合，和(2)通過適宜的分析如Lam等人(Nature 35482-84，1991)或Griminski等人(Biotechnology 121008-1011，1994)(這里引用這二者作為參考)所公開的量熱分析來檢測結合事件。在一個優(yōu)選的實施方案中，文庫成員在溶液中而靶體固定在固相上。可選擇地，文庫可以固定在固相，并可以通過使其與溶液中的靶體接觸而進行探測。
下表4顯示從本發(fā)明的文庫中選擇的用于生物活性試驗的化合物及其IC50值，所述IC50值是通過實施例6所述的報道基因分析測定的。
所選擇的文庫化合物的IC50(μM)







在本發(fā)明中發(fā)現通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物由于其特異性結合CBP而可以抑制CBP介導的癌細胞的轉錄活化，并且它得到SW480細胞的CBP與本發(fā)明的化合物發(fā)生免疫沉淀的支持。
本發(fā)明的化合物還可以抑制SW480細胞內的survivin表達，從而抑制癌細胞的致癌活性。本發(fā)明的化合物可以用于抑制癌細胞，因而可以用于調節(jié)細胞生長。支持這些結果的是，本發(fā)明的化合物還進一步顯示它可以在SW480細胞內誘導caspase-3活化，從而在細胞中誘導凋亡活性。本發(fā)明的化合物還可以有利地用于誘導細胞的凋亡。
為證明癌細胞的致癌活性，通過以下方法進行體外MTS細胞毒性分析試驗。
細胞毒性試驗將SW480或HCT116細胞置于96孔微平板(104細胞/孔)，并在37℃下培養(yǎng)24小時。用不同濃度的TCF4化合物對細胞處理24小時。將20μl MTS溶液(Promega)加到每孔，并在37℃下培養(yǎng)2小時。通過使用微平板讀板器(Molecular Device)讀取在490nm下的吸光率來測定細胞生存力，并計算每種濃度化合物的細胞毒性。
生長抑制分析將SW480或HCT116細胞置于96孔微平板(104細胞/孔)，并在37℃下培養(yǎng)24小時。將20μl的[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑，內鹽](MTS)溶液(Promega)加到每孔，并在37℃下培養(yǎng)2小時后讀取吸光率(陰性對照)，然后用不同濃度的TCF4化合物對細胞處理48小時。將20μl MTS溶液(Promega)加到每孔，并在37℃下培養(yǎng)2小時。通過使用微平板讀板器(Molecular Device)在490nm下讀取吸光率來測定細胞生存力，并計算每種濃度化合物的細胞毒性。
所選擇的文庫化合物的致癌活性的結果如表5所示。
通過對所選擇的文庫化合物進行MTS或硫羅丹明B(sulforhodamine B)分析而得到的致癌活性




在本發(fā)明的另一方面，公開了一種包含具有通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物的藥物組合物。對于含有本發(fā)明化合物的藥物組合物的制備，本領域技術人員可以使用相關領域中已知的公知知識和技術。公知的多種載體和其它添加劑可以用于制備本發(fā)明的組合物。本發(fā)明的藥物組合物可以標準方式給藥以用于待治療的病癥，例如通過口服、直腸給藥或腸胃外給藥。
對于這些目的，本發(fā)明的化合物可以通過本領域中已知的方法制成諸如以下的形式片劑、膠囊、水溶液或油溶液或懸浮液、(脂質)乳液、可分散粉末、栓劑、藥膏、乳霜、滴劑和無菌注射水溶液或油溶液或懸浮液。
適宜的本發(fā)明的藥物組合物是適于以單元劑型口服的藥物組合物，如含有大約1mg至大約1g本發(fā)明化合物的片劑或膠囊。
另一方面，本發(fā)明的藥物組合物是適于靜脈內、皮下或肌內注射的藥物組合物。例如患者可以接受大約1μg/kg至大約1g/kg靜脈內、皮下或肌內劑量的本發(fā)明化合物。可以通過推注的方式施用靜脈內、皮下和肌內劑量。可選擇地，可以通過在一段時間內連續(xù)輸注來施用靜脈內劑量。
可選擇地，患者接受大約等于每日腸胃外劑量的日口服劑量，每天施用組合物1-4次。
下表例示在人類中進行治療或預防應用的包含化合物或其藥學上可接受的鹽的代表性藥物劑型





包含通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物的藥物組合物可以用于治療由Wnt信號途徑調節(jié)的疾病，特別是癌癥，更具體是結腸直腸癌。
在本發(fā)明的另一方面，公開了一種用于抑制受試者腫瘤細胞生長的方法，所述方法包括向細腫瘤細胞施用安全和有效量的本發(fā)明的化合物。包含這種化合物的組合物還可以用于抑制腫瘤細胞。因此，這種方法可以用于治療哺乳動物受試者的癌癥。它可以有利地用于治療結腸直腸癌。
在本發(fā)明的另一方面，公開了一種用于治療由Wnt信號途徑調節(jié)的疾病的方法，其中所述方法包括給患者施用安全和有效量的具有通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物。包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物也可以用于此目的。在這一點上，在本發(fā)明中發(fā)現具有通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物或包含它的藥物組合物可以用于治療由TCF4-β連環(huán)蛋白-CBP復合體調節(jié)的疾病，所述復合體被認為負責引發(fā)與Wnt信號途徑有關的癌細胞的超表達。因此，本發(fā)明的另一方面提供一種使用具有通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物治療由TCF4-β連環(huán)蛋白-CBP復合體調節(jié)的疾病的方法。
而且，由于癌癥的治療還與誘導受試者癌細胞發(fā)生凋亡密切相關，因此本發(fā)明還涉及一種使用通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物誘導癌細胞凋亡的方法。
根據現有技術已知5-FU[氟尿嘧啶；5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮]可以誘導培養(yǎng)的口癌細胞發(fā)生凋亡(D.Tong等人，Oral Oncology36，2000236-241)。而且還已知結腸癌對5-FU有敏感性(D.Arango等人，Cancer Research 61，2001 4910-4915)。因此在本發(fā)明中，制備具有確定的抗癌活性的5-FU與本發(fā)明的式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物的組合，并針對SW480細胞系進行試驗。結果發(fā)現5-FU與本發(fā)明化合物，特別是TCF4化合物的組合對抑制癌細胞生長如SW480細胞有顯著的作用。
因此，本發(fā)明的另一方面是提供一種治療癌癥的方法，所述方法包括給受試者施用安全和有效量的權利要求1的具有通式(I)的化合物，特別是通式(VI)的化合物，以及其它抗癌劑如5-Fu。
已表明本發(fā)明的化合物抑制survivin的表達。Blanc-Brude等人，Nat.Medicine 8987(2002)已表明survivin是平滑肌細胞凋亡的關鍵調節(jié)劑，它在病理性管壁重塑中起重要作用。因此，本發(fā)明另一方面提供一種治療或預防與血管成形術有關的再狹窄的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用安全和有效量的本發(fā)明的回折模擬物。在一個實施方案中，本發(fā)明治療再狹窄，即給患有再狹窄的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現再狹窄的嚴重性、范圍或程度等的減輕。在另一個實施方案中，本發(fā)明預防再狹窄，即給預期會發(fā)生新的或額外的再狹窄的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現再狹窄的預期嚴重性、范圍或程度等的減輕。任選所述受試者為哺乳動物受試者。
已表明本發(fā)明的化合物抑制TCF/B-連環(huán)蛋白轉錄。Rodova等人，J.Biol.Chem.27729577(2002)已表明PKD-1啟動子是B-連環(huán)蛋白/TCF途徑的靶體。因此，本發(fā)明另一方面提供一種治療或預防多囊性腎病的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用安全和有效量的本發(fā)明的回折模擬物。在一個實施方案中，本發(fā)明治療多囊性腎病，即給患有多囊性腎病的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現多囊性腎病的嚴重性、范圍或程度等的減輕。在另一個實施方案中，本發(fā)明預防多囊性腎病，即給預期會發(fā)生新的或額外的多囊性腎病的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現多囊性腎病的預期嚴重性、范圍或程度等的減輕。任選所述受試者為哺乳動物受試者。
已表明本發(fā)明的化合物抑制Wnt信號作用的表達。Hanai等人，JCell Bio.158529(2002)已表明一種已知的抗血管生成因子血管內皮抑素(endostatin)抑制Wnt信號作用。因此，本發(fā)明另一方面提供一種治療或預防異常血管生成疾病的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用安全和有效量的本發(fā)明的回折模擬物。在一個實施方案中，本發(fā)明治療異常血管生成疾病，即給患有異常血管生成疾病的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現異常血管生成疾病的嚴重性、范圍或程度等的減輕。在另一個實施方案中，本發(fā)明預防異常血管生成疾病，即給預期會發(fā)生新的或額外的異常血管生成疾病的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現異常血管生成疾病的預期嚴重性、范圍或程度等的減輕。任選所述受試者為哺乳動物受試者。
已表明本發(fā)明的化合的抑制Wnt信號作用的表達。Sen等人，P.N.A.S.(USA)972791(2000)已表明患類風濕性關節(jié)炎的哺乳動物表現出RA滑液組織中的Wnt和Fz表達增加。因此，本發(fā)明另一方面提供一種治療或預防類風濕性關節(jié)炎疾病的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用安全和有效量的本發(fā)明的回折模擬物。在一個實施方案中，本發(fā)明治療類風濕性關節(jié)炎疾病，即給患有類風濕性關節(jié)炎疾病的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現類風濕性關節(jié)炎疾病的嚴重性、范圍或程度等的減輕。在另一個實施方案中，本發(fā)明預防類風濕性關節(jié)炎疾病，即給預期會發(fā)生成新的或額外的類風濕性關節(jié)炎疾病的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現類風濕性關節(jié)炎疾病的預期嚴重性、范圍或程度等的減輕。任選所述受試者為哺乳動物受試者。
已表明本發(fā)明的化合物抑制Wnt信號作用的表達。Uthoff等人，Int.J.Oncol 19803(2001)已表明在潰瘍性結腸炎(與局限性回腸炎患者相比)中發(fā)生差別上調紊亂fz(Wnt途徑分子)。因此，本發(fā)明另一方面提供一種治療或預防潰瘍性結腸炎的方法，所述方法包括給有此需要的受試者施用安全和有效量的本發(fā)明的回折模擬物。在一個實施方案中，本發(fā)明治療潰瘍性結腸炎，即給患有潰瘍性結腸炎的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現潰瘍性結腸炎的嚴重性、范圍或程度等的減輕。在另一個實施方案中，本發(fā)明預防潰瘍性結腸炎，即給預期會發(fā)生新的或額外的潰瘍性結腸炎的受試者施用本發(fā)明的回折模擬物實現潰瘍性結腸炎的預期嚴重性、范圍或程度等的減輕。任選所述受試者為哺乳動物受試者。
本發(fā)明的最佳實施方式以下非限制性實施例例示本發(fā)明的化合物、組合物和應用方法。
實施例制備實施例1(N-Fmoc-N′-R3-肼基)-乙酸的制備(1)N-Fmoc-N’-甲基肼的制備 給2L、雙頸、圓底燒瓶配備一個玻璃塞和一個鈣管。加入在THF(300mL)中的硫酸甲基肼(20g，139mmol)溶液和加入在THF中的DiBoc(33g，153mmol)的溶液。在2小時內通過加液漏斗滴加飽和碳酸氫鈉水溶液(500mL)并劇烈攪拌。6小時后，緩慢加入在THF中的Fmoc-Cl(39g，153mmol)的溶液。將所得的懸浮液于0℃下攪拌6小時。用EA(500mL)萃取混合物，并保留有機層。用硫酸鈉干燥溶液并真空蒸發(fā)。不經純化繼續(xù)進行下一步驟。
給1L、雙頸、圓底燒瓶配備一個玻璃塞和一個鈣管。加入在MeOH(300mL)中的反應混合物的溶液，通過加液漏斗緩慢加入濃HCl(30mL，12N)并在冰水浴中磁力攪拌，并攪拌過夜。用EA(1000mL)萃取混合物，并保留有機層。用硫酸鈉干燥溶液，并真空蒸發(fā)。用正己烷和EA將殘余物結晶純化得到產物(32.2g，83％)。
1HNMR(DMSO-D6)δ7.90-7.88(d，J＝6Hz，2H，)，δ7.73-7.70(d，J＝9Hz，2H，)，7.44-7.31(m，4H)，4.52-4.50(d，J＝6Hz，2H)，4.31-4.26(t，J＝6Hz，1H)，2.69(s，1H)(2)(N-Fmoc-N′-甲基-肼基)-乙酸叔丁酯的制備
給1L、雙頸、圓底燒瓶配備一個玻璃塞和與一個鈣管連接的回流冷凝器。加入在甲苯(300mL)中的N-Fmoc-N′-甲基-肼(20g，75mmol)的溶液。緩慢加入在甲苯(50mL)中的叔丁基溴乙酸酯(22g，111mmol)的溶液。緩慢加入Cs2CO3(49g，149mmol)。緩慢加入NaI(11g，74mmol)，并劇烈攪拌。將反應混合物于回流溫度下攪拌1天。將混合物過濾，并用乙酸乙酯[EA](500mL)萃取有機層。用硫酸鈉干燥溶液，并真空蒸發(fā)。用己烷∶EA＝2∶1溶液將產物作色譜純化得到產物(19.8g，70％)。
1H-NMR(CDCl3-d)δ7.78-7.75(d，J＝9Hz，2H，)，δ7.61-7.59(d，J＝6Hz，2H，)，7.43-7.26(m，4H)，4.42-4.40(d，J＝6Hz，2H)，4.23(b，1H)，3.57(s，2H)，2.78(s，3H)，1.50(s，9H)(3)(N-Fmoc-N′-甲基-肼基)-乙酸的制備 給1L、雙頸、圓底燒瓶配備一個玻璃塞和一個與鈣管連接的回流冷凝器。加入(N-Fmoc-N′-甲基-肼基)-乙酸叔丁酯(20g，52mmol)。緩慢加入HCl溶液(150mL，4M在二烷中的溶液)并在冰水浴中劇烈攪拌。將反應混物于RT下攪拌1天。將溶液于40℃進行減壓完全濃縮。加入飽和NaHCO3水溶液(100mL)，并用二乙醚(100mL)洗滌水層。在0℃下緩慢滴加濃HCl(pH2-3)。萃取混合物，并保留有機層(500mL，MC)。用硫酸鈉干燥溶液并真空蒸發(fā)。用正己烷和乙酸乙酯將殘余物重結晶純化得到產物(12g，72％)。
1H-NMR(DMSO-d6)δ12.38(s，1H)，8.56(b，1H)，7.89-7.86(d，J＝9Hz，2H，)，δ7.70-7.67(d，J＝9Hz，2H，)，7.43-7.29(m，4H)，4.29-4.27(d，J＝6Hz，2H)，4.25-4.20(t，J＝6Hz，1H)，3.47(s，2H)，2.56(s，3H)
制備實施例2(N-Moc-N′-R7-肼基)-乙酸的制備(1)(N′-甲氧基羰基-肼基)-乙酸乙酯的制備 將肼基甲酸甲酯(50g，0.55mol)溶于DMF(300ml)，然后將溴乙酸乙酯(68ml，0.555mol)、碳酸鉀(77g，0.555mol)加到反應容器。將混合物加熱到50℃持續(xù)5小時。在反應完成后，將混合物過濾，用EtOAc稀釋，并用鹽水洗滌(3次)。用柱純化粗產物(洗脫劑Hex/EtOAc＝4/1)。
Pdt72g(無色油)(2)[N-R7-N′-甲氧基羰基-肼基]-乙酸乙酯 將乙酯(10g，0.05mol)、碳酸鉀(6.9g，0.05mol)和R3-溴化物(14.1g，0.06mol)溶于DMF(200ml)，并將混合物加熱至50℃持續(xù)5小時。反應完成后，將混合物過濾，用EA稀釋，并用鹽水洗滌(3次)。用色譜法(洗脫劑Hex/EtOAc＝4/1)純化粗產物。
(3)[N-R7-N′-甲氧基羰基-肼基]-乙酸 將烷基化乙酯(9.5g，0.03mol)溶于THF/水(1/1，ml)，并在0℃下加入2N NaOH(28.3ml)溶液。將混合物于RT下攪拌2小時。在用UV檢測不到原料酯后，用EA稀釋溶液，然后分離。用1N HCl將水層酸化至pH 3-4，并用DCM萃取化合物(3次)。用MgSO4干燥合并的有機層，并蒸發(fā)得到一種黃色固體。
實施例1(1)Nβ-Moc-Nα-芐基-肼基甘氨酸的制備
根據文獻方法制備此化合物。(Cheguillaume等人，Synlett 2000，3，331)(2)1-甲氧基羰基-2，8-二芐基-6-甲基-4，7-二氧代-六氫-吡嗪并[2，1-c][1，2，4]三嗪的制備 將溴乙縮醛樹脂(60mg，0.98mmol/g)和在DMSO中的芐基胺溶液(2.5ml，2M)放置在帶螺帽的小瓶中。在60℃下使用旋轉烘箱[RobbinsScientific]將反應混合物振蕩12小時。過濾收集樹脂，用DMF洗滌，然后用DCM洗滌。
將在NMP(Advanced ChemTech)中的Fmoc-丙氨酸(4當量)、HATU[PerSeptive Biosystems](4當量)和DIEA(4當量)的溶液加到樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩4小時后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
往樹脂中加入在DMF中的20％哌啶。在室溫下將反應混合物振蕩8分鐘后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
將在DMF中的Nβ-Moc-Nα-芐基-肼基甘氨酸(4當量)、HOBT[Advanced Chem Tech](4當量)和DIC(4當量)的溶液加到以上制備的樹脂。在室溫下將反應混合物振蕩3小時后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用MeOH洗滌。在室溫下真空干燥樹脂。
用甲酸(2.5ml)將樹脂于室溫下處理18小時。過濾除去樹脂之后，減壓濃縮濾液得到產物，為油。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；1.51(d，3H)，2.99(m，1H)，3.39(d，1H)，3.69(m，1H)，3.75(m，1H)，3.82(s，3H)，4.02(d，1H)，4.24(d，1H)，4.39(d，1H)，4.75(d，1H)，5.14(q，1H)，5.58(dd，1H)，7.10-7.38(m，10H)。
實施例2(1)N′-Fmoc-N-甲基-肼基羰基氯化物的制備 將在15ml CH2Cl2和15ml飽和NaHCO3水溶液中的N-甲基肼甲酸9H-芴-9-基甲酯(107mg，0.4mmol)的冰冷的二相混合物快速攪拌，并一次性加入在甲苯(1.03ml，2mmol)中的1.93M光氣。將反應混合物攪拌30分鐘，收集有機相，用CH2Cl2萃取水相。用MgSO4干燥合并的有機相，過濾并減壓濃縮得到128mg(97％)氨基甲酰氯，為一種泡沫固體。[注意光氣蒸氣是高毒性的。在通風罩中使用它]。將此產物不經進一步純化用于以下固相合成。
(2)2，5-二甲基-7-芐基-3，6-二氧代-六氫-[1，2，4]三唑并[4，5-a]吡嗪-1-甲酸芐基酰胺的制備
將溴乙縮醛樹脂(30mg，0.98mmol/g)和在DMSO中的芐基胺溶液(1.5ml，2M)放置在帶螺帽的小瓶中。在60℃下使用旋轉烘箱[RobbinsScientific]將反應混合物振蕩12小時。過濾收集樹脂，用DMF洗滌，然后用DCM洗滌。
將在NMP(Advanced ChemTech)中的Fmoc-丙氨酸(3當量)、HATU[PerSeptive Biosystems](3當量)和DIEA(3當量)的溶液加到樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩4小時后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
往樹脂中加入在DMF中的20％哌啶。在室溫下將反應混合物振蕩8分鐘后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
將在DCM中的以上步驟(1)得到的N’-Fmoc-N-甲基-肼基羰基氯化物(5當量)、DIEA(5當量)的溶液加到以上制備的樹脂。在室溫下將反應混合物振蕩4小時后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM和DMF洗滌。
往樹脂中加入在DMF中的20％哌啶(對于1g樹脂為10ml)。在室溫下將反應混合物振蕩8分鐘后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
室溫下用在DCM中的異氰酸芐基酯(4當量)和DIEA(4當量)的混合物將樹脂處理4小時。然后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用MeOH洗滌。室溫下將樹脂真空干燥。
室溫下用甲酸將樹脂處理14小時。過濾除去樹脂后，將濾液減壓濃縮得到產物，為一種油。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；1.48(d，3H)，2.98(s，3H)，3.18(m，1H)，3.46(m，1H)，4.37-4.74(m，5H)，5.66(dd，1H)，6.18(m，1H)，7.10-7.40(m，10H)。
實施例32，5，7-三甲基-3，6-二氧代-六氫-[1，2，4]三唑并[4，5-a]吡嗪-1-甲酸芐基酰胺根據與實施例2相同的方法制備標題化合物。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；1.48(d，3H)，2.99(s，3H)，3.03(s，3H)，3.38(m，1H)，3.53(dd，1H)，4.36(dd，1H)，4.52(q，1H)，4.59(dd，1H)，5.72(dd，1H)，6.19(br.t，1H)，7.10-7.38(m，5H)。
實施例42-甲基-5-(對羥基苯基甲基)-7-萘基甲基-3，6-二氧代-六氫-[1，2，4]三唑并[4，5-a]吡嗪-1-甲酸芐基酰胺的制備將溴乙縮醛樹脂(30mg，0.98mmol/g)和在DMSO中的萘基甲基胺溶液(1.5ml，2M)放置在帶螺帽的小瓶中。在60℃下使用旋轉烘箱[Robbins Scientific]將反應混合物振蕩12小時。過濾收集樹脂，用DMF洗滌，然后用DCM洗滌。
將在NMP(Advanced ChemTech)中的Fmoc-Tyr(OBut)-OH(3當量)、HATU[PerSeptive Biosystems](3當量)和DIEA(3當量)的溶液加到樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩4小時后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
往樹脂中加入在DMF中的20％哌啶。在室溫下將反應混合物振蕩8分鐘后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
將在DCM中的N’-Fmoc-N-甲基-肼基羰基氯化物(5當量)、DIEA(5當量)的溶液加到以上制備的樹脂。在室溫下將反應混合物振蕩4小時后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM和DMF洗滌。
往樹脂中加入在DMF中的20％哌啶(對于1g樹脂為10ml)。室溫下將反應混合物振蕩8分鐘后，過濾收集樹脂，用DMF、DCM洗滌樹脂，然后用DMF洗滌。
室溫下用在DCM中的異氰酸芐基酯(4當量)和DIEA(4當量)的混合物將樹脂處理4小時。然后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用MeOH洗滌。室溫下將樹脂真空干燥。
室溫下用甲酸將樹脂處理14小時。過濾除去樹脂后，將濾液減壓濃縮得到產物，為一種油。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm；2.80-2.98(m，5H)，3.21-3.37(m，2H)，4.22-4.52(m，2H)，4.59(t，1H)，4.71(d，1H)，5.02(dd，1H)，5.35(d，1H)，5.51(d，1H)，6.66(t，2H)，6.94(dd，2H)，7.21-8.21(m，12H).
實施例52-甲基-6-(對羥基苯基甲基)-8-萘基-4，7-二氧代-六氫-吡嗪并[2，1-c][1，2，4]三嗪-1-甲酸芐基酰胺的制備將溴乙縮醛樹脂(60mg，0.98mmol/g)和在DMSO中的萘基胺溶液(2.5ml，2M)放置在帶螺帽的小瓶中。在60℃下使用旋轉烘箱[RobbinsScientific]將反應混合物振蕩12小時。過濾收集樹脂，用DMF洗滌，然后用DCM洗滌。
將在NMP(Advanced ChemTech)中的Fmoc-Tyr(OBut)-OH(4當量)、HATU[PerSeptive Biosystems](4當量)和DIEA(4當量)的溶液加到樹脂。在將反應混合物于室溫下振蕩4小時后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
往樹脂中加入在DMF中的20％哌啶。在室溫下將反應混合物振蕩8分鐘后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
將在DMF中的Nβ-Fmoc-Nα-芐基-肼基甘氨酸(4當量)、HOBT[Advanced ChemTech](4當量)和DIC(4當量)的溶液加到以上制備的樹脂。室溫下將反應混合物振蕩3小時后，過濾收集樹脂，并用DMF洗滌，然后用DCM洗滌。往樹脂中加入在DMF中的20％哌啶(對于1g樹脂為10ml)。室溫下將反應混合物振蕩8分鐘后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用DMF洗滌。
室溫下用在DCM中的異氰酸芐基酯(4當量)和DIEA(4當量)的混合物將樹脂處理4小時。然后，過濾收集樹脂，并用DMF、DCM洗滌，然后用MeOH洗滌。室溫下將樹脂真空干燥后，室溫下用甲酸(2.5ml)將樹脂處理18小時。過濾除去樹脂，并減壓濃縮濾液得到產物，為一種油。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δppm2.73(s，3H)，3.13(d，1H)，3.21-3.38(m，3H)，3.55(d，1H)，3.75(t，1H)，4.22(dd，1H)，4.36(dd，1H)，4.79(d，1H)，5.22(t，1H)，5.47(m，2H)，6.68(d，2H)，6.99(d，2H)，7.21-8.21(m，12H)；MS(m/z，ESI)564.1(MH+)586.3(MNa+).
實施例6關于測定針對SW480細胞的IC50的生物分析和對細胞系的細胞毒性試驗通過以下方法進行試驗化合物已在實施例4中制備。
報道基因分析用SuperfectTM轉染試劑(Qiagen，301307)轉染SW480細胞。在轉染前1天簡單將細胞胰蛋白酶消化，并將其置于6孔平板(5×105細胞/孔)，從而使它們在轉染當天50-80％匯合。
在150μl不含血清的培養(yǎng)基中稀釋4微克(TOPFlash)和1微克(pRL-null)的DNA，并加入30μl SuperfectTM轉染試劑。在室溫下將DNA-Superfect混合物培養(yǎng)15分鐘，然后將1ml 10％FBS DMEM加到此復合體中進行另外3小時的培養(yǎng)。在形成復合體時，用不含抗生素的PBS將細胞洗滌二次。
將DNA-SuperfectTM轉染試劑復合體應用于細胞，然后在37℃和5％CO2中培養(yǎng)3小時。培養(yǎng)后，加入含10％FBS的恢復培養(yǎng)基，以使最終體積為1.18ml。進行3小時培養(yǎng)后，收獲細胞，并再接種到96孔平板(3×104細胞/孔)。在37℃和5％CO2中培養(yǎng)過夜后，用試驗化合物將細胞處理24小時。最后，通過熒光素酶分析(Promega，E1960)檢查活性。
圖1例示以上化合物對SW480細胞的IC50的測定結果。
硫羅丹明B(SRB)分析通過硫羅丹明B分析測定以上化合物對下列細胞的生長抑制作用。將在100μl培養(yǎng)基中的SW480細胞置于96孔平板的每孔，并使其附壁24小時。將化合物加到孔中以得到期望的最終濃度，并將平板于37℃下培養(yǎng)48小時。然后通過緩慢地將100μl冷的(4℃)10％三氯乙酸加到每孔，隨后在4℃下培養(yǎng)1小時而固定細胞。用去離子水將平板洗滌5次，并使其風干。然后通過將100μlSRB溶液(在1％乙酸(v/v)中的0.4％SRB(w/v))加至孔中15分鐘而將細胞染色。染色后，用1％乙酸快速洗滌平板5次以除去任何未結合的染料，并將其風干。用10mmol/L Tris堿(pH 10.5)將結合的染料溶解，然后對平板讀數。在讀板機上，在515nm的波長下，用Molecular Device讀取光密度(OD)。生長抑制表示為相對生存力(％對照)，并在log/概率轉化之后由濃度-反應曲線計算GI50。
實施例4得到的化合物的體外細胞毒性(SRB)分析


可以理解，雖然這里已為例示的目的描述了本發(fā)明的特定實施方案，但可以在不背離本發(fā)明的構思和范圍的情況下作出多種改型。因此，除所附的權利要求之外本發(fā)明不受限制。
工業(yè)實用性模擬生物活性肽和蛋白質的回折區(qū)的二級結構的本發(fā)明的化合物可以抑制survivin的表達、TCF/B-連環(huán)蛋白轉錄和Wnt信號作用的表達。因此，本發(fā)明可以提供一種用于抑制哺乳動物受試者腫瘤細胞生長，與其它抗腫瘤藥聯(lián)合治療癌癥，治療或預防疾病如與血管成形術有關的再狹窄、多囊性腎病、異常血管生成疾病、類風濕性關節(jié)炎疾病和潰瘍性結腸炎的藥物組合物和/或方法，以及一種鑒定生物活性化合物的方法，和化合物文庫。
權利要求
1.具有以下通式(I)的化合物 其中A為-(C＝O)-，B為-(CHR4)-，D為-(C＝O)-，E為-(ZR6)-，G為-(XR7)n-，W為-Y(C＝O)-、-(C＝O)NH-、-(SO2)-或不存在，Y為氧或硫，X和Z為CH，n＝1；而R1、R2、R4、R6和R7相同或不同并且獨立地選自氨基酸側鏈部分、氨基酸側鏈衍生物、連接物和固體載體。
2.權利要求1的化合物，其中R1、R2、R4、R6和R7獨立地選自氨基C2-5烷基、胍基C2-5烷基、C1-4烷基胍基C2-5烷基、二C1-4烷基胍基-C2-5烷基、脒基C2-5烷基、C1-4烷基脒基C2-5烷基、二C1-4烷基脒基C2-5烷基、C1-3烷氧基、苯基、取代的苯基(其中所述取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、芐基、取代的芐基(其中芐基上的取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、萘基、取代的萘基(其中所述取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、雙苯基甲基、取代的雙苯基甲基(其中所述取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、吡啶基、取代的吡啶基(其中所述取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、吡啶基C1-4烷基、取代的吡啶基C1-4烷基(其中所述吡啶取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、嘧啶基C1-4烷基、取代的嘧啶基C1-4烷基(其中所述嘧啶取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基或硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、三嗪-2-基-C1-4烷基、取代的三嗪-2-基-C1-4烷基(其中所述三嗪取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、咪唑C1-4烷基、取代的咪唑C1-4烷基(其中所述咪唑取代基獨立地選自氨基、脒基、胍基、肼基、氨基腙基、C1-4烷基氨基、C1-4二烷基氨基、鹵素、全氟代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-3烷氧基、硝基、羧基、氰基、磺酰基或羥基中的一個或多個)、咪唑啉基C1-4烷基、N-脒基哌嗪基-N-C0-4烷基、羥基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、羥基C2-5烷基、C1-5烷基氨基C2-5烷基、C1-5二烷基氨基C2-5烷基、N-脒基哌啶基C1-4烷基和4-氨基環(huán)己基C0-2烷基。
3.權利要求2的化合物，其中R1、R2、R4、R6或R7連接到固體載體或固體載體衍生物上。
4.一種藥物組合物，包含權利要求1-3中任一項的化合物和藥學上可接受的載體。
5.權利要求1-3之任一項的化合物在制備用于抑制哺乳動物受試者腫瘤細胞生長的藥物中的用途。
6.權利要求5的用途，其中所述腫瘤細胞為結腸直腸細胞。
7.權利要求1-3之任一項的化合物與其它抗腫瘤藥組合在制備治療癌癥的藥物中的用途。
8.權利要求7的用途，其中所述抗腫瘤藥選自5-FU、紫杉醇、順鉑、絲裂霉素C、替加氟、雷替曲塞、卡培他濱和伊立替康。
9.權利要求1-3之任一項的化合物在制備治療或預防與血管成形術有關的再狹窄的藥物中的用途。
10.權利要求1-3之任一項的化合物在制備治療或預防多囊性腎病的藥物中的用途。
11.權利要求1-3之任一項的化合物在制備治療或預防異常血管生成疾病的藥物中的用途。
12.權利要求1-3之任一項的化合物在制備治療或預防類風濕性關節(jié)炎疾病的藥物中的用途。
13.權利要求1-3之任一項的化合物在制備治療或預防潰瘍性結腸炎的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了模擬生物活性肽和蛋白質回折區(qū)的二級結構的構象限制的化合物。這種回折模擬結構具有廣泛的應用領域，包括用作診斷和治療劑。還公開了包含本發(fā)明的回折模擬結構的文庫以及用于篩選它們以鑒定生物活性成員的方法。本發(fā)明還涉及這種化合物用于抑制或治療由Wnt信號途徑調節(jié)的疾病例如癌癥特別是結腸直腸癌、與血管成形術有關的再狹窄、多囊性腎病、異常血管生成疾病、類風濕性關節(jié)炎疾病或潰瘍性結腸炎的應用。
文檔編號A61P13/00GK1872857SQ20061009378
公開日2006年12月6日 申請日期2002年10月11日 優(yōu)先權日2001年10月12日
發(fā)明者M·卡恩, M·江口, S－H.·文, J-U·鐘, S-C·李, K-W·鄭 申請人:中外藥品株式會社