專利名稱：預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)急慢性損傷中神經(jīng)變性的化合物,組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的水楊酸化合物，組合物，和方法，所述的化合物，組合物和方法是為了防止和預(yù)防伴隨著神經(jīng)元死亡的神經(jīng)性系統(tǒng)疾病。
背景技術(shù)：
興奮毒性和腦疾病過(guò)度活化對(duì)N-甲基-D-天冬氨酸鹽(NMDA受體)敏感的離子化谷氨酸鹽受體，會(huì)引起神經(jīng)元死亡，而且已知其介導(dǎo)多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病[Choi，Neuron 1623-634(1988)]。谷氨酸鹽是興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，它大量聚集在腦中，易受低氧缺血損傷，低氧缺血損傷活化離子化谷氨酸鹽受體，使之對(duì)鈣離子和鈉離子可滲透，隨后引起神經(jīng)元死亡[Choi和Rothman，Annu Rev Neurosci13171-182(1990)]。NMDA受體桔抗劑顯著降低了腦部損傷引起的低血糖，低氧，低氧缺血[Simon，Swan，Griffiths和Meldrum。Science 226850-852(1984)；Park，Nehls，Graham，Teasdale，和McCulloch，Ann Neurol 24543-551(1988).；Wieloch，Science230681-683(1985)；Kass，Chambers，和Cottrell，Exp.Neurol.103116-122(1989)；Weiss，Goldberg，和Choi，Brain Res.380186-190(1986)]。因此，NMDA受體桔抗劑具有使腦部免于低血糖，低氧，低氧缺血損傷的治療潛能。
興奮毒性似乎對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)后的神經(jīng)元變性有作用。喹啉酸是一種NMDA受體的內(nèi)源性激動(dòng)劑，它的水平在TBI患者體內(nèi)升高了5倍-50倍[E.H.Sinz，P.M.Kochanek，M.P.Heyes，S.R.Wisniewski，M.J.Bell，R.S.Clark，S.T.DeKosky，A.R.Blight，and D.W.Marion.]。喹啉酸在腦脊液中升高，并且與人TBI后的死亡率相關(guān)。[.J.Cereb.Blood Flow Metab.18610-615，(1998)]。在腦創(chuàng)傷動(dòng)物模型中，谷氨酸鹽和天冬氨酸鹽的水平顯著升高[Faden，Demediuk，Panter，和Vink，Science 244798-800(1989)]。在碰撞創(chuàng)傷后大鼠的脊髓中，也觀察到谷氨酸鹽釋放[Demediuk，Daly，和Faden.J Neurochem J.Neurochem.521529-1536(1989)]。NMDA受體桔抗劑降低腦創(chuàng)傷和脊髓損傷后的神經(jīng)元死亡[Faden，Lemke，Simon，和Noble.J.Neurotrauma.533-45(1988)；Okiyama，Smith，White，Richter，和McIntosh.J Neurotrauma.14211-222(1997)]。
谷氨酸鹽在癲癇發(fā)作的誘導(dǎo)和傳播中起著重要作用[Dingledine，McBain，和McNamara，Trends.Pharmacol.Sci.11334-338(1990)；Holmes.Cleve.Clin.J.Med.62240-247(1995)]。NMDA受體桔抗劑在各種癲癇模型中用作抗痙攣藥物和抗癲癇藥物[Anderson，Swartzwelder，和Wilson，JNeurophysiol571-21(1987)；Wong，Coulter，Choi，和Prince.Neurosci.Lett.85261-266(1988)；McNamara，Russell，Rigsbee，和Bonhaus，Neuropharmacology 27563-568(1988)]。
肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)伴隨著上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元全都變性，其特征為神經(jīng)原性肌萎縮，衰弱和自發(fā)性收縮。盡管ALS的發(fā)病機(jī)理還沒(méi)有解析，但是興奮毒性被認(rèn)為參與了ALS過(guò)程。尤其是，ALS患者表現(xiàn)出細(xì)胞外谷氨酸鹽水平增加和谷氨酸鹽運(yùn)輸缺陷。通過(guò)興奮毒素給藥模擬ALS患者脊髓的病理變化[Rothstein.Clin.Neurosci.3348-359(1995)；Ikononiidou，Qin，Labruyere，和Olney J.Neuropathol.Exp.Neurol.55211-224(1996)]。
NMDA受體桔抗劑似乎適用于治療帕金森氏病(PD)。幾種NMD受體桔抗劑保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元免受神經(jīng)毒素MPTP(1-甲基4-丙基-1，2，3，6-四氫嘧啶)的作用[Lange，Loschmann，Sofic，Burg，Horowski，Kalveram，Wachtel，和Riederer.Naunyn Schmiedebergs Arch.Pharmacol.348586-592(1993)；Brouillet and Beal.Neuroreport.4387-390(1993)]。NMDA受體桔抗劑也改善左旋多巴誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)障礙，因此可以提高左旋多巴的治療作用[Papa和Chase，Ann.Neurol.39574-578(1996)；Marin，Papa，Engber，Bonastre，Tolosa，和Chase，Brain Res.736202-205(1996)]。兩種NMDA受體桔抗劑，美金剛和右美沙芬，在對(duì)PD患者的治療中被證實(shí)有益[Verhagen，Del Dotto，Natte，van den Munckhof，和Chase，Neurology51203-206(1998)；Merello，Nouzeilles，Cammarota，and Leiguarda.Clin.Neuropharmacol.22273-276(1999)]。
杭廷頓氏舞蹈病(HD)是一種進(jìn)行性的神經(jīng)變性疾病，主要侵襲小型和中性的中間神經(jīng)元，但不傷害在紋狀體中含有生長(zhǎng)激素抑制劑和神經(jīng)肽的NADPH-黃遞酶神經(jīng)元。在喹啉酸內(nèi)紋狀體注射或培養(yǎng)的紋狀體與NMDA接觸后，在紋狀體組織中觀察到了HD的這些病理特征，這提高了NMDA受體介導(dǎo)的神經(jīng)毒性對(duì)HD中神經(jīng)元選擇性死亡起作用的可能[Koh，Peters，和Choi，Science 23473-76(1986)；.Beal，Kowall，Ellison，Mazurek，Swartz，和Martin，Nature 321168-171(1986)；Beal，F(xiàn)errante，Swartz，和KowallhJ.Neurosci.111649-1659(1991)]。
自由基和腦疾病低氧缺血或腦創(chuàng)傷和脊髓損傷引起自由基在變性腦區(qū)域產(chǎn)生[Hall和Braughler，F(xiàn)ree Radic.Biol.Med.6303-313(1989)；Anderson和Hall，Ann.Emerg.Med.22987-992(1993)；Siefjo和Siesjo，Eur.J.Anaesthesiol.13247-268(1996)；Love，Brain Pathol 9119-131(1999)]。抗氧化劑或清除自由基的操作減輕低氧缺血和創(chuàng)傷引起的腦損傷[Faden，Pharmacol.Toxicol.7812-17(1996)；Zeidman，Ling，Ducker，和Ellenbogen，J.Spinal.Disord.9367-380(1996)；Chan，Stroke 271124-1129(1996)；Hall，Neurosurg.Clin.N.Am.8195-206(1997)]。廣泛的證據(jù)支持在神經(jīng)變性疾病中受到變性的腦區(qū)域，可以產(chǎn)生自由基，這可能是由于在ALS中的銅/鋅過(guò)氧化物歧化酶發(fā)生點(diǎn)突變，在PD中谷胱甘肽減少和鐵增加，在AD中鐵積累，和在HD中線粒體功能障礙[Rosen，Siddique，Patterson，F(xiàn)iglewicz，Sapp，Hentati，Donaldson，Goto，O’Regan，和Deng.Nature 36259-62(1993)；Jenner和Olanow，Neurology 47S161-S170(1996)；Smith，Harris，Sayre，和Perry，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.949866-9868(1997)；Browne，F(xiàn)errante，和Beal，Brain Pathol.9147-163(1999)]。因此，抗氧化劑是這些神經(jīng)變性疾病的神經(jīng)保護(hù)劑。[Jenner，Pathol-Biol.(Paris.)4457-64(1996)；Beal，Ann.Neurol.38357-366(1995)；Prasad，Cole，和Kumar.JAm.Coll.Nutr.18413-423(1999)；Eisen and Weber，Drugs Aging 14173-196(1999)；Grundman，Am.J.Clin.Nutr.71630S.-636S(2000)].
鋅和腦疾病鋅離子介導(dǎo)著在癲癇發(fā)作、缺血、創(chuàng)傷和阿爾茨海默病(AD)中觀察到的神經(jīng)變性過(guò)程。紅藻氨酸鹽是一種誘導(dǎo)癲癇發(fā)作的興奮毒素，紅藻氨酸鹽的中央給藥，使鋅離子移位到幾個(gè)前腦區(qū)域的后突觸變性神經(jīng)元中[Frederickson，Hennandez，和McGinty.Brain Res.480317-321(1989)]。用鈣-EDTA阻斷鋅離子移位，會(huì)減輕短暫性前腦缺血或創(chuàng)傷性腦損傷引起的神經(jīng)元丟失[Koh，Suh，Gwag，He，Hsu和Choi，Science 2721013-1016(1996)；Suh，Chen，Motamedi，Bell，Listiak，Pons，Danscher，和Frederickson，Brain Res.852268-273(2000)]。在AD的細(xì)胞外斑塊和變性神經(jīng)元中，觀察到了鋅離子，它可能對(duì)AD中的神經(jīng)元變性起作用[Bush，Pettingell，Multhaup，Paradis，Vonsattel，Gusella，Beyreuther，Masters，和Tanzi，Science 2651464-1467(1994)；Suh，Jensen，Jensen，Silva，Kesslak，Danscher，和Frederickson.Brain Res.852274-278852(2000)]。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了以下面的化學(xué)式(I)表示的、新的5-苯甲基氨基水楊酸(BAS)及其衍生物， 其中，X是CO，SO2或(CH2)n(其中n是1-5的整數(shù)，包括1和5)；R1是氫，烷基或烷酰基；
R2是氫或烷基；R3是氫或一種乙酰基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被下列一種或多種基團(tuán)取代硝基，鹵素，鹵烷基，C1-C5的烷氧基；或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明還提供了一種方法，此方法使神經(jīng)元免受對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的急慢性損傷，方法包括對(duì)受到這種CNS傷害的患者或哺乳動(dòng)物給予治療學(xué)上適量的神經(jīng)保護(hù)化合物，該化合物用化學(xué)式(I)表示。
本發(fā)明還提供了一種組合物，此組合物使中樞神經(jīng)元免受對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急慢性損傷，組合物包括治療學(xué)上適量的神經(jīng)保護(hù)化合物，該化合物用化學(xué)式(I)表示。
本發(fā)明還提供了一種方法來(lái)治療和預(yù)防神經(jīng)系統(tǒng)疾病，所述的神經(jīng)系統(tǒng)疾病與NMDA神經(jīng)毒性，鋅離子神經(jīng)毒性或氧化應(yīng)激相關(guān)聯(lián)，該方法包括對(duì)患有這些疾病的患者和哺乳動(dòng)物給予治療學(xué)上有效劑量的化合物，該化合物用化學(xué)式(I)表示。
本發(fā)明還提供了化學(xué)式(I)的化合物在藥物制造中的用途，所述的藥物用來(lái)保護(hù)中間神經(jīng)元免受對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的急慢性的損傷。
從詳細(xì)描述中，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會(huì)明白本發(fā)明的上述和其它特征。
附圖簡(jiǎn)述

圖1.將單獨(dú)或者含有10-300微摩爾5-氨基水楊酸(AS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(1a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(1b)，或與300微摩爾鋅離子接觸30分鐘(1c)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基浴中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝9-12(la)，n＝4-8(lb)或n＝4(lc))，在24小時(shí)假洗(＝0)和持續(xù)接觸500微摩爾NMDA(＝100)后，用平均LDH流出值定標(biāo)。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖2.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-苯甲基氨基水楊酸(BAS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(2a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子(2b)或10毫摩爾的BSO(2c)持續(xù)接觸，或與300微摩爾鋅離子接觸30分鐘(2d)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝7-8(2a)，n＝3-6(2b)，n＝4(2c)或n＝4(2d))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖3.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-硝基苯甲基)氨基水楊酸(NBAS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(3a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(3b)，或與300微摩爾鋅離子接觸30分鐘(3c)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝7-8(3a)，n＝3-6(3b)或n＝4(3c))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖4.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-氯苯甲基)氨基水楊酸(CBAS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(4a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(4b)，或與300微摩爾鋅離子接觸30分鐘(4c)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝3-4(4a)，n＝3-12(4b)或n＝4(4c))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖5.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-三氟甲苯甲基)氨基水楊酸(TBAS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(5a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(5b)，或與300微摩爾鋅離子接觸30分鐘(5c)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝3-4(5a)，n＝3-11(5b)或n＝4(5c))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖6.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-氟苯甲基)氨基水楊酸(FBAS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(6a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(6b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝7-8(6a)或n＝4-8(6b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖7.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-甲氧苯甲基)氨基水楊酸(MBAS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(7a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(7b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝7-8(7a)或n＝4-8(7b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖8.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(五氟苯甲基)氨基水楊酸(PBAS)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(8a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子(8b)或10毫摩爾的BSO(8c)持續(xù)接觸，或與300微摩爾鋅離子接觸30分鐘(8d)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝11-16(8a)，n＝3-6(8b)，n＝4-11(8c)或n＝12(8d))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖9.將單獨(dú)或者含有指示劑量的乙基-5-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯(NAHE)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(9a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(9b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝10-12(9a)或n＝3-4(9b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖10.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-羥基苯甲酸乙酯(NNAHE)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(10a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(10b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝3-4(10a)或n＝3-4(10b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖11.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-乙酰氧基苯甲酸乙酯(NNAAE)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(11a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(11b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝10-12(11a)，n＝7-8(11b)或n＝4)。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖12.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-硝基苯甲酰基)氨基水楊酸(NBAA)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(12a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(12b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝7-8(12a)或n＝3-4(12b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖13.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-(4-硝基苯磺酰基)氨基水楊酸(NBSAA)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(13a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(13b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝3-4(13a)或n＝2-8(13b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖14.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-[2-(4-硝基苯基)-乙基]氨基水楊酸(NPAA)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(14a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(14b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平分析神經(jīng)元死亡，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝4(14a)或n＝4-8(14b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
圖15.將單獨(dú)或者含有指示劑量的5-[3-(4-硝基苯基)正丙基]氨基水楊酸(NPPAA)的小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物(DIV 12-14)與300微摩爾NMDA接觸10分鐘(15a)，與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸(15b)。24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量下面的值來(lái)分析神經(jīng)元死亡釋放到培養(yǎng)基中的LDH水平，平均值±SEM(每種情況的培養(yǎng)孔n＝4(15a)或n＝3-8(15b))。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與相關(guān)對(duì)照有明顯差別。
發(fā)明詳述我們已經(jīng)合成了5-苯甲基氨基水楊酸(BAS)及其衍生物，并且證明這些人造化合物有多重神經(jīng)保護(hù)作用。首先，BAS及其衍生物在100-1，000微摩爾的劑量減輕NMDA神經(jīng)毒性。其次，BAS及其衍生物是抗氧化劑，并且在1-300微摩爾的劑量阻斷自由基神經(jīng)毒性。最后，BAS及其衍生物減輕鋅離子神經(jīng)毒性。BSA及其衍生物的這些新的和復(fù)合的神經(jīng)保護(hù)作用，有益于治療中風(fēng)，腦創(chuàng)傷和脊髓損傷，癲癇，和伴隨興奮毒性，鋅離子神經(jīng)毒性和自由基毒性的神經(jīng)變性疾病。
BAS及其衍生物可以通過(guò)將5-氨基水楊酸與一種合適的化合物反應(yīng)而合成。下面的反應(yīng)示意解了BAS及其衍生物的合成。
反應(yīng)示意圖1 試劑(a)苯甲基溴，4-硝基苯甲基溴，4-氯苯甲基氯化物，4-(三氟甲基)苯甲基氯化物，4-氟苯甲基溴化物，4-甲氧基苯甲基氯化物，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，三乙胺，室溫，4小時(shí)。
化學(xué)式(I)中化合物的優(yōu)選類別包括那些化合物，它們中的X是CO，SO2或(CH2)n(其中n是1-5之間的整數(shù)，包括1和5)；R1是氫，C1-C5的烷基或C2-C5的烷酰基；R2是氫或C1-C5烷基；R3是氫或乙酰基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被下列一種或多種基團(tuán)取代硝基，鹵素，鹵烷基，C1-C5的烷氧基；或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
反應(yīng)示意圖2。
試劑(a)N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，三乙胺，室溫，4小時(shí)。
反應(yīng)示意圖3.
試劑(a)EtOH，H2SO4，分鎦，6小時(shí)。
(b)無(wú)水乙酸，MeOH，0℃，30分鐘。
(c)無(wú)水乙酸，H2SO4，0℃，30分鐘。
化學(xué)式(I)中化合物的更優(yōu)選類別包括那些化合物，它們中的X是CO，SO2或(CH2)n(其中n＝1，2，3)；R1是氫，C1-C3的烷基或C2-C3的烷酰基；R2是氫或C1-C3烷基；R3是氫或一種乙酰基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被下列一種或多種基團(tuán)取代硝基，鹵素，鹵(C1-C3)烷基，C1-C3的烷氧基；或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
實(shí)施例5.
試劑(a)N，N-甲基甲酰胺(DMF)，三乙胺，室溫，4小時(shí)。
化學(xué)式(I)中感興趣的具體化合物如下5-苯甲基氨基水楊酸5-(4-硝基苯甲基)氨基水楊酸(NBAS)5-(4-氯苯甲基)氨基水楊酸(CBAS)5-(4-三氟甲苯甲基)氨基水楊酸(TBAS)5-(4-氟苯甲基)氨基水楊酸(FBAS)
5-(4-甲氧苯甲基)氨基水楊酸(MBAS)5-(五氟苯甲基)氨基水楊酸(PBAS)5-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯(NAHE)5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-羥基苯甲酸乙酯(NNAHE)5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-乙酰氧基-苯甲酸乙酯(NNAAE)5-(4-硝基苯甲酰基)氨基水楊酸(NBAA)5-(4-硝基苯磺酰基)氨基水楊酸(NBSAA)5-[2-(4-硝基苯基)-乙基]氨基水楊酸(NPAA)5-[3-(4-硝基苯基)正丙基]氨基水楊酸(NPPAA)，或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”包括通常用來(lái)形成堿金屬的鹽和形成游離酸或游離堿的加成鹽。只要是藥學(xué)上可以接受的，鹽的性質(zhì)不重要，而且對(duì)于那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，用來(lái)形成這些鹽的酸和堿是眾所周知的。可以用來(lái)形成藥學(xué)上可以接受的酸加成鹽的酸，其實(shí)例包括無(wú)機(jī)酸如鹽酸，硫酸和磷酸；有機(jī)酸如馬來(lái)酸，琥珀酸和檸檬酸。其它的鹽包括堿金屬的鹽或堿土金屬的鹽，例如鈉，鉀，鈣和鎂，或者有機(jī)堿的鹽，例如二環(huán)己基胺。所有這些鹽可以通過(guò)常規(guī)方法由化學(xué)式(I)中的相應(yīng)化合物制備，通過(guò)反應(yīng)，例如，合適的酸或堿與化學(xué)式(I)中的化合物來(lái)制備。
合成實(shí)施例顯示了制備典型化合物的代表性的方法。
合成實(shí)施例15-苯甲基氨基水楊酸(BAS)的制備在室溫和氮保護(hù)氛圍下，在5-氨基水楊酸(2.0克，13毫摩爾，從美國(guó)Aldrich Chemical Company購(gòu)買)和三乙胺的干燥的DMF溶液(25毫升)中加入苯甲基溴(2.68克，1.90毫升，15.6毫摩爾)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪動(dòng)4小時(shí)。將冰片加入反應(yīng)混合物，而后在真空中去除掉溶劑。用水稀釋反應(yīng)混合物，而后用乙酸乙酯抽提。將有機(jī)層用水和鹽水沖洗，而后用無(wú)水硫酸鎂干燥。在蒸發(fā)掉溶劑后，用柱層析法純化剩余物，在甲醇/乙酸乙酯/己烷(1∶3∶1)中重結(jié)晶以得到3.6克(73％產(chǎn)量)白色固體-苯甲基氨基水楊酸。mp173.5-174.5℃(分解)。
對(duì)C14H13NO3的元素分析.

合成實(shí)施例25-(4-硝基苯甲基)氨基水楊酸(NBAS)的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(2.00克，13.0毫摩爾)和4-硝基苯甲基溴(3.38克，15.6毫摩爾)，得到了2.90克(79％產(chǎn)量)黃色固體5-(4-硝基苯甲基)氨基水楊酸。mp211-212℃(分解)。
對(duì)C14H13N2O5的元素分析.

合成實(shí)施例35-(4-氯苯甲基)氨基水楊酸(CBAS)的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和4-氯苯甲基氯化物(630毫克，3.91毫摩爾)，得到了480毫克(53％產(chǎn)量)白色固體5-(4-氯苯甲基)氨基水楊酸。mp227-228℃。
對(duì)C14H12ClNO3的元素分析.

合成實(shí)施例45-(4-三氟甲苯甲基)氨基水楊酸(TBAS)的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和4-三氟甲基苯甲基氯化物(760毫克，3.92毫摩爾)，得到了510毫克(50％產(chǎn)量)白色固體5-(4-三氟甲苯甲基)氨基水楊酸。mp＞188℃(分解)。
對(duì)C14H12F3NO3的元素分析.

合成實(shí)施例55-(4-氟苯甲基)氨基水楊酸(FBAS)的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和4-氟苯甲基溴化物(740毫克，3.92毫摩爾)，得到了480毫克(44％產(chǎn)量)白色固體5-(4-氟苯甲基)氨基水楊酸(FBAS)。mp＞210℃(分解)。
對(duì)C14H12FNO3的元素分析.

合成實(shí)施例65-(4-甲氧苯甲基)氨基水楊酸(MBAS)的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(1.00克，6.53毫摩爾)和4-甲氧基苯甲基氯化物(1.23克，7.84毫摩爾)，得到了890毫克(50％產(chǎn)量)白色固體5-(4-甲氧苯甲基)氨基水楊酸。mp＝205-206℃(分解)。
對(duì)C15H15NO4的元素分析.

合成實(shí)施例75-(五氟苯甲基)氨基水楊酸的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和五氟苯甲基溴化物(1.02克，3.92毫摩爾)，得到了650毫克(60％產(chǎn)量)白色固體5-(五氟苯甲基)氨基水楊酸。mp＞190℃(分解)。
對(duì)C14H8F5NO3的元素分析.

合成實(shí)施例85-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯的制備在0℃小心地向5-(4-硝基苯甲基)氨基水楊酸(1.0克，3.4毫摩爾)的乙醇溶液(35毫升)中加入Conc.H2SO4(3.5毫升)。在80℃攪動(dòng)反應(yīng)混合物6小時(shí)，冷卻到室溫。在真空中去除掉溶劑后，用乙酸乙酯抽提反應(yīng)混合物。將有機(jī)層用水，10％NaHCO3溶液，5％HCL溶液，和鹽水沖洗。在用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層之后，將其在真空中濃縮。用柱層析法純化剩余物，在乙酸乙酯/己烷(1∶2)中重結(jié)晶以得到500毫克(46％產(chǎn)量)的黃色固體-5-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯。mp106.5-107.5℃(分解)。
對(duì)C16H16N2O5的元素分析.

合成實(shí)施例95-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-羥基苯甲酸乙酯的制備在0℃和氮保護(hù)氛圍下，小心地向5-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯(500毫克，1.58毫摩爾)的干燥甲醇溶液(50毫升)中加入無(wú)水乙酸。在10℃攪動(dòng)反應(yīng)混合物2小時(shí)。在將冰片緩慢地加入到反應(yīng)混合物中后，真空中去除掉溶劑。用乙酸乙酯和水抽提反應(yīng)混合物，用水，10％NaHCO3(30毫升×3)溶液，5％HCL(30毫升×2)溶液，和鹽水沖洗有機(jī)層。用無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)層并且脫水。用柱層析法純化剩余物，在乙酸乙酯/己烷(1∶3)中重結(jié)晶以得到400毫克(70％產(chǎn)量)的淺黃色固體5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-羥基苯甲酸乙酯。mp105.5-106.0℃。
對(duì)C18H18N2O6的元素分析.

合成實(shí)施例105-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-乙酰氧基-苯甲酸乙酯的制備在0℃和氮保護(hù)氛圍下，小心地向5-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯(500毫克，1.58毫摩爾)的無(wú)水乙酸溶液(10毫升)中加入conc.H2SO4(0.5毫升)。在10℃攪動(dòng)反應(yīng)混合物30分鐘。在將冰片緩慢地加入到反應(yīng)混合物中后，真空中去除掉溶劑。用水稀釋反應(yīng)混合物并且用乙酸乙酯抽提反應(yīng)混合物。用水，10％NaHCO3(30毫升×3)溶液，5％HCL(30毫升×2)溶液，和鹽水沖洗有機(jī)層，而后用無(wú)水硫酸鎂干燥。蒸發(fā)掉溶劑后，用柱層析法純化剩余物以得到450毫克(71％產(chǎn)量)的淺黃色油5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-乙酰氧基-苯甲酸乙酯。
對(duì)C20H20N2O7的元素分析.

合成實(shí)施例115-(4-硝基苯甲酰基)氨基水楊酸的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和4-硝基苯甲酰基氯化物(700毫克，3.77毫摩爾)，得到了550毫克(56％產(chǎn)量)淺黃色固體5-(4-硝基苯甲酰基)氨基水楊酸。mp＝270-271℃。
對(duì)C14H10N2O6的元素分析.

合成實(shí)施例125-(4-硝基苯磺酰基)氨基水楊酸的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和4-硝基苯甲基磺酰基氯化物(720毫克，3.26毫摩爾)，得到了390毫克(35％產(chǎn)量)的黃色固體5-(4-硝基苯磺酰基)氨基水楊酸。mp＝239-240℃。
對(duì)C13H10N2O7S的元素分析.

合成實(shí)施例135-[2-(4-硝基苯基)-乙基]氨基水楊酸的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和4-硝基苯乙基溴化物(900毫克，3.92毫摩爾)，得到了890毫克(50％產(chǎn)量)淺黃色固體5-[2-(4-硝基苯基)-乙基]氨基水楊酸。mp＝234-236℃。
對(duì)C15H14N2O5的元素分析.

合成實(shí)施例145-[3-(4-硝基苯基)正丙基]氨基水楊酸的制備通過(guò)效仿合成實(shí)施例1中的類似步驟，通過(guò)使用5-氨基水楊酸(500毫克，3.26毫摩爾)和3-(4-硝基苯基)丙基溴化物(950毫克，3.92毫摩爾)，得到了520毫克(50％產(chǎn)量)淺黃色固體5-[3-(4-硝基苯基)正丙基]氨基水楊酸。mp＝229-231℃。
對(duì)C16H16N2O5的元素分析.

實(shí)驗(yàn)實(shí)施例制備來(lái)自胚胎小鼠的初級(jí)皮層細(xì)胞培養(yǎng)物，用來(lái)檢測(cè)化合物的神經(jīng)保護(hù)作用。小鼠皮層細(xì)胞培養(yǎng)物體系可以被廣泛地用來(lái)研究神經(jīng)性疾病中神經(jīng)元死亡的機(jī)制和藥物干預(yù)。簡(jiǎn)單的說(shuō)，依照我們動(dòng)物關(guān)心委員會(huì)機(jī)構(gòu)所認(rèn)可的草案，從15天齡的胎鼠的腦中取出大腦皮層。將新皮層輕柔地磨碎并鋪在預(yù)先涂布有10微克/毫升聚-D-賴氨酸和4微克/毫升昆布氨酸的24孔板(5半球/板)上。平板培養(yǎng)基是補(bǔ)充了5％馬血清，5％胎牛血清，2毫摩爾谷氨酰胺和21毫摩爾葡萄糖的Eagles最少基本物質(zhì)培養(yǎng)基(MEM，Earles鹽，無(wú)谷氨酰胺)。將培養(yǎng)物保存在37攝氏度，5％二氧化碳的潮濕氛圍中，體外培養(yǎng)7天以后(DIV 7)，將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到生長(zhǎng)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基除了缺少胎血清，其余成分與平板培養(yǎng)基性同。在分裂7-9次時(shí)，加入10毫摩爾的胞嘧啶阿拉伯呋喃糖苷以終止神經(jīng)膠質(zhì)的過(guò)度生長(zhǎng)。而后神經(jīng)膠質(zhì)和神經(jīng)元的混合培養(yǎng)物一周飼喂兩次。
為了引入由NMDA或鋅離子引起的神經(jīng)損傷，在由下列物質(zhì)組成的HEPES-緩沖調(diào)控鹽溶液(HCSS)中(以毫摩爾計(jì))120NaCl，5KCl，1.6MgCl2，2.3CaCl2，15葡萄糖，20HEPES和10NaOH，將皮層細(xì)胞培養(yǎng)物與NMDA的中毒劑量接觸10分鐘，或與鋅離子的中毒劑量接觸30分鐘。接觸后，將培養(yǎng)物清洗三次并且換到被調(diào)整為25毫摩爾葡萄糖和26.2摩爾碳酸氫鈉的MEM上，接下來(lái)的20-24小時(shí)在二氧化碳孵箱內(nèi)放置。為了引入自由基神經(jīng)毒性，將皮層細(xì)胞培養(yǎng)物放在調(diào)整為25毫摩爾葡萄糖和26.2摩爾碳酸氫鈉的MEM上，與二價(jià)鐵離子或BSO連續(xù)接觸20-24小時(shí)。
在相差光下顯微評(píng)價(jià)總體細(xì)胞損傷，或者如前述方法(Koh和Choi，JNeurosci Methods 2083-90，1987)，在神經(jīng)毒性損傷24小時(shí)后，通過(guò)測(cè)量釋放到培養(yǎng)基浴中的乳酸脫氫酶量(LDH)來(lái)顯微評(píng)價(jià)總體細(xì)胞損傷。神經(jīng)元死亡的百分比被標(biāo)準(zhǔn)化為連續(xù)與500微摩爾NMDA(＝100)接觸后或假對(duì)照(＝0)釋放的LDH平均值。
為了檢測(cè)抗氧化效果，將一種穩(wěn)定的自由基-DPPH(2，2-二苯基-1-苦基-偕腙肼自由基)溶于乙醇以形成100微摩爾的溶液。將化合物與DPPH或乙醇反應(yīng)。在培育30分鐘以后，用分光光度計(jì)測(cè)量517納米處DPPH吸收的相對(duì)降低。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例15-氨基水楊酸的抗氧化作用在初級(jí)皮質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)物中檢測(cè)5-氨基水楊酸(AS)的神經(jīng)保護(hù)作用。在24小時(shí)內(nèi)，含有10-300微摩爾的AS沒(méi)有減少與300微摩爾NMDA接觸10分鐘后引起的神經(jīng)元死亡(圖.1.a)。有趣的是，增加10-100微摩爾AS，劑量依賴性地防止了與二價(jià)鐵離子接觸24小時(shí)后引起的自由基神經(jīng)毒性(圖.1b)。在鋅離子處理過(guò)程中和處理以后，持續(xù)地加入AS并沒(méi)有降低24小時(shí)后的神經(jīng)元死亡，這些神經(jīng)元與300微摩爾鋅離子接觸了30分鐘。AS抗自由基神經(jīng)毒性的神經(jīng)保護(hù)作用，歸因于化合物AS的直接抗氧化劑性質(zhì)降低了DPPH(一種穩(wěn)定自由基)的水平。與trolox(一種膜可滲透型的維生素E)相比較，AS是一種弱氧化劑。
表1.AS的抗氧化劑性能

AS或trolox與溶于乙醇的100微摩爾DPPH反應(yīng)30分鐘。在減去乙醇背景值后，通過(guò)測(cè)量517納米處DPPH的水平變化分析其抗氧化劑性質(zhì)，平均值±SEM(每種情況n＝3實(shí)驗(yàn)試管)。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與只有DPPH時(shí)有明顯差別。
AS可以使神經(jīng)元免受自由基損傷，但對(duì)NMDA或鋅離子神經(jīng)毒性沒(méi)有好的對(duì)抗效果。然而，AS清除自由基的效果不如trolox。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例25-苯甲基氨基水楊酸及其衍生物的神經(jīng)保護(hù)作用1.5-苯甲基氨基水楊酸的神經(jīng)保護(hù)作用合成BAS并檢測(cè)其抗神經(jīng)損傷的能力，該神經(jīng)損傷是在皮層細(xì)胞培養(yǎng)物中誘導(dǎo)產(chǎn)生的。同時(shí)加入300微摩爾5苯甲基氨基水楊酸(BAS)大約能夠使NMDA誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡降低50％(圖.2a)。在1微摩爾BAS存在的情況下，與50微摩爾二價(jià)鐵離子(圖.2b)或10毫摩爾BSO接觸的(圖.2c)后引起的神經(jīng)元死亡有相當(dāng)大的降低，加入3微摩爾BAS，神經(jīng)元死亡基本上完全被阻斷。加入30-300微摩爾BAS，會(huì)在24小時(shí)中，劑量依賴性地降低與300微摩爾鋅離子接觸30分鐘后所引起的神經(jīng)元死亡。象AS或trolox一樣，BAS是一種直接抗氧化劑(表2)。BAS的抗氧化劑性質(zhì)在劑量為1微摩爾那么低的時(shí)候就可以觀察到。
表2.BAS的抗氧化劑性能

BAS與溶于乙醇的100微摩爾DPPH反應(yīng)30分鐘。在減去乙醇背景值后，通過(guò)測(cè)量517納米處DPPH的水平變化分析其抗氧化劑性質(zhì)，平均值±SEM(每種情況n＝3實(shí)驗(yàn)試管)。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與只有DPPH時(shí)([BAS]＝O)有明顯差別。
2.BAS衍生物BAS衍生物是通過(guò)在苯甲基氨基的對(duì)位用-NO2[5-(4-硝基苯甲基氨基)水楊酸，NBAS]，-Cl[5-(4-氯苯甲基氨基)水楊酸，CBAS]，-CF3[5-(4-三氟甲基苯甲基氨基)水楊酸，TBAS]取代-H來(lái)合成的。這種去電子基團(tuán)的取代并沒(méi)有降低BAS對(duì)NMDA，鋅離子或自由基神經(jīng)毒性的抗性(圖.3-5)。這些BAS衍生物在預(yù)防自由基毒性方面比BAS的更有效。
表3.NBAS的抗氧化劑性能

NBAS與溶于乙醇的100微摩爾DPPH反應(yīng)30分鐘。在減去乙醇背景值后，通過(guò)測(cè)量517納米處DPPH的水平變化分析其抗氧化劑性質(zhì)，平均值±SEM(每種情況n＝3實(shí)驗(yàn)試管)。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與只有DPPH時(shí)([反應(yīng)物]＝O)有明顯差別。
用-F或-OCH3替換-NO2結(jié)果導(dǎo)致對(duì)NMDA毒性的神經(jīng)保護(hù)作用降低，但是似乎對(duì)自由基損傷的神經(jīng)保護(hù)潛能上升。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例35-(五氟苯甲基)氨基水楊酸(PBAS)的神經(jīng)保護(hù)作用合成5-(五氟苯甲基)氨基水楊酸(PBAS)并檢測(cè)其抗神經(jīng)損傷的能力。同時(shí)加入100-1000微摩爾PBAS，會(huì)使NMDA誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡以劑量依賴的方式降低。用300微摩爾PBAS大約能夠使NMDA神經(jīng)毒性降低65％(圖.8a)。將PBAS的劑量加大到1毫摩爾，可以完全阻斷與300微摩爾NMDA接觸后引起的神經(jīng)元死亡。加入1微摩爾的PBAS會(huì)明顯降低連續(xù)與50微摩爾二價(jià)鐵離子持續(xù)接觸后所引起的神經(jīng)元死亡。在3微摩爾PBAS存在的情況下，神經(jīng)元死亡基本上完全被阻斷。通過(guò)加入1微摩爾的PBAS，與10毫摩爾BSO接觸而引起的自由基神經(jīng)毒性被阻斷。PBAS降低DPPH的水平(表4)，暗示PBAS作為一種直接氧化劑阻斷自由基神經(jīng)毒性。同時(shí)加入100-300微摩爾的PBAS降低鋅離子的神經(jīng)毒性(圖.8d)。
表4.PBAS的抗氧化劑性質(zhì)

PBAS與溶于乙醇的100微摩爾DPPH反應(yīng)30分鐘。在減去乙醇背景值后，通過(guò)測(cè)量517納米處DPPH的水平變化分析其抗氧化劑性質(zhì)，平均值±SEM(每種情況n＝3實(shí)驗(yàn)試管)。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與只有DPPH時(shí)([PBAS]＝O)有明顯差別。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例4NBAS衍生物(X＝CH2)的神經(jīng)保護(hù)作用幾種PBAS的衍生物例如5-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯(NAHE；R1＝H，R2＝CH2CH3，R3＝H)，5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-羥基苯甲酸乙酯(NNAHE；R1＝COCH3，R2＝CH2CH3，R3＝H)，和5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-乙酰氧基-苯甲酸乙酯(NNAAE；R1＝COCH3，R2＝CH2CH3，R3＝COCH3)被合成，并且在皮層細(xì)胞培養(yǎng)物中檢測(cè)它們的神經(jīng)保護(hù)作用。這些衍生物在300微摩爾的劑量降低了NMDA的神經(jīng)毒性(圖.9-11)。含有10微摩爾的NAHE，NNAHE，或NNAAE可以阻斷二價(jià)鐵離子誘導(dǎo)的自由基神經(jīng)毒性。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例5NBAS衍生物的神經(jīng)保護(hù)作用(X＝CO，SO2，CH2CH2或CH2CH2CH2)用CO[5-(4-硝基苯甲基)氨基水楊酸；NBAA]，SO2[5-(4-硝基苯磺酰基)氨基水楊酸；NBSAA]，CH2CH2[5-[2-(4-硝基苯基)-乙基]氨基水楊酸；NPAA]或CH2CH2CH2[5-[3-(4-硝基苯基)正丙基]氨基水楊酸；NPPAA]來(lái)取代NBAS的X(CH2)基團(tuán)。NBAA在劑量為30微摩爾時(shí)明顯降低NMDA的神經(jīng)毒性。然而，在劑量高達(dá)300微摩爾的時(shí)候卻沒(méi)有進(jìn)一步增加其對(duì)抗NMDA的保護(hù)作用(圖.12a)。有趣的是，含有劑量為30-300微摩爾的NBSAA，以劑量依賴的方式降低NMDA神經(jīng)毒性(圖.13a)。在含有300微摩爾NBSA時(shí)，明顯降低了與300微摩爾NMDA接觸后引起的90-100％的神經(jīng)元死亡。NBAA和NBSAA仍然對(duì)二價(jià)鐵離子損傷有神經(jīng)保護(hù)作用，但它們?cè)诮档妥杂苫窠?jīng)毒性作用上弱于NBAS(圖.12和13；表5)。
將X的CH2用CH2CH2或CH2CH2CH2替代，會(huì)降低NBAS對(duì)NMDA神經(jīng)毒性的保護(hù)潛能。加入300微摩爾的NPAA或NPPAA輕微地降低皮層神經(jīng)元中NMDA誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡(圖.14和15)。相反，研究發(fā)現(xiàn)NPAA或NPPAA在阻斷自由基神經(jīng)毒性上比NBAS更有效，在1微摩爾NPAA或NPPAA存在時(shí)，完全阻斷二價(jià)鐵離子誘導(dǎo)的神經(jīng)元死亡。
表5.NBAS的抗氧化劑性質(zhì)

NBAS衍生物(每種100微摩爾)與溶于乙醇的100微摩爾DPPH反應(yīng)30分鐘。在減去乙醇背景值后，通過(guò)測(cè)量517納米處DPPH的水平變化分析其抗氧化劑性質(zhì)，平均值±SEM(每種情況n＝3實(shí)驗(yàn)試管)。*表示使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls測(cè)試，p＜0.05時(shí)，與只有DPPH時(shí)有明顯差別。
上述結(jié)果顯示，化學(xué)式(I)的化合物可以有效地用于預(yù)防與興奮毒性、鋅離子神經(jīng)毒性和自由基神經(jīng)毒性相關(guān)的神經(jīng)變性疾病。
化學(xué)式(I)中化合物的對(duì)人給藥，可以使用任何能將化合物引入患者或哺乳動(dòng)物血流的技術(shù)，包括口服給藥，靜脈注射，肌肉注射和皮下注射。其中的哺乳動(dòng)物包括，但不限于貓，狗，家禽，家畜等等。
預(yù)防性治療所需化合物的每日給藥劑量，優(yōu)選從0.1毫克-20毫克每千克體重每天。更優(yōu)選的劑量為0.2毫克-10毫克每千克體重。最優(yōu)選的劑量是0.5毫克-5毫克每千克體重每天。適合的劑量可以以每天多個(gè)亞劑量給藥。這些亞劑可以以單位劑型給藥。典型地，劑量或亞劑量可以含有1毫克-100毫克活性化合物每單位劑型。更優(yōu)選的劑量含有2毫克-50毫克的活性化合物每單位劑型。最優(yōu)選的劑量型含有3毫克-25毫克活性化合物每單位劑量。
活性化合物通常以藥學(xué)上可接受的制劑給藥。這些制劑可以包括活性化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。其它治療劑也可以出現(xiàn)在該制劑中。藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑為活性物質(zhì)的運(yùn)輸提供了合適的運(yùn)載工具，而且不會(huì)引入不希望見(jiàn)到的副反應(yīng)。這些制劑中活性化合物的傳送，可以以如下不同的途徑實(shí)現(xiàn)，包括口服給藥，鼻吸入給藥，局部給藥，口腔和舌下給藥，或者腸胃外給藥，例如皮下途徑，肌肉內(nèi)途徑，靜脈內(nèi)途徑和真皮內(nèi)途徑。
口服給藥的制劑可以是膠囊的形式，該膠囊含有分散于粘合劑(例如明膠或羥基丙基甲基纖維素)的活性化合物，和一種或多種潤(rùn)滑劑，防腐劑，表面活性劑或分散劑。這些膠囊或片劑可以含有控-放制劑，例如可以提供在羥基丙基甲基纖維素中活性化合物的素因中。
腸胃外給藥的制劑可以是水性或非水性的等滲無(wú)菌注射溶液或懸浮液。這些溶液或懸浮液可以由含有一種或多種載體或稀釋劑的無(wú)菌粉末或顆粒制備，其中提到的載體或稀釋劑是口服給藥的制劑中所使用的載體或稀釋劑。
盡管對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方案給予了描述，但是這些發(fā)明方案的細(xì)節(jié)并非是限制。在不離開(kāi)本發(fā)明的精神和范圍下，可以制造出多種等價(jià)物，改變，和變型，應(yīng)該理解這些等價(jià)實(shí)施方案是本發(fā)明的一部分。
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權(quán)利要求
1.以下面的化學(xué)式(I)表示的化合物 其中，X是CO，SO2或(CH2)n(其中n是1-5的整數(shù)，包括1和5)；R1是氫，烷基或烷酰基；R2是氫或烷基；R3是氫或一種乙酸基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被選自下列的一種或多種基團(tuán)取代硝基，鹵素，鹵烷基和C1-C5的烷氧基；或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X是CO，SO2或(CH2)n(其中n是1-5的整數(shù)，包括1和5)；R1是氫，C1-C5的烷基或C2-C5的烷酰基；R2是氫或C1-C5烷基；R3是氫或一種乙酸基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被選自下列的一種或多種基團(tuán)取代硝基，鹵素，鹵烷基和C1-C5的烷氧基；或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中X是CO，SO2或(CH2)n(其中n是1-5的整數(shù)，包括1和5)；R1是氫，C1-C3的烷基或C2-C3的烷酰基；R2是氫或C1-C3烷基；R3是氫或一種乙酸基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被選自下列的一種或多種基團(tuán)取代硝基，鹵素，鹵(C1-C3)烷基和C1-C3的烷氧基；或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
4.權(quán)利要求1的化合物，該化合物選自下列物質(zhì)5-苯甲基氨基水楊酸(BAS)5-(4-硝基苯甲基)氨基水楊酸(NBAS)5-(4-氯苯甲基)氨基水楊酸(CBAS)5-(4-三氟甲苯甲基)氨基水楊酸(TBAS)5-(4-氟苯甲基)氨基水楊酸(FBAS)5-(4-甲氧苯甲基)氨基水楊酸(MBAS)5-(4-五氟苯甲基)氨基水楊酸(PBAS)5-(4-硝基苯甲基)氨基-2-羥基苯甲酸乙酯5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-乙酸基苯甲酸乙酯5-(4-硝基苯甲基)-N-乙酰胺基-2-乙酰氧基-苯甲酸乙酯5-(4-硝基苯甲酰基)氨基水楊酸5-(4-硝基苯磺酰基)氨基水楊酸5-(4-硝基苯乙基)氨基水楊酸5-[3-(4-硝基苯基)正丙基]氨基水楊酸，或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。
5.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的化合物在藥物制造上的用途，該藥物用來(lái)保護(hù)中間神經(jīng)元免受對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的急慢性損傷。
6.權(quán)利要求5的用途，其中所述的CNS損傷來(lái)自缺血，缺氧，低血糖，創(chuàng)傷性腦損傷，創(chuàng)傷性脊髓損傷，癲癇，杭廷頓氏舞蹈病，帕金森氏病，阿爾茨海默氏病，或肌萎縮性側(cè)索硬化癥。
7.權(quán)利要求5中的用途，其中所述的CNS損傷是由N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)谷氨酸鹽受體的活化，鋅離子的進(jìn)入和積累，或自由基所導(dǎo)致的。
8.權(quán)利要求5-7中任何一項(xiàng)所述的用途，其中所述的化合物作為直接抗氧化劑，降低NMDA神經(jīng)毒性，鋅離子神經(jīng)毒性，和阻斷自由基神經(jīng)毒性。
9.權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)中的化合物在藥物制造上的用途，該藥物用來(lái)治療或預(yù)防與NMDA神經(jīng)毒性，鋅離子神經(jīng)毒性或氧化應(yīng)激相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。
10.一種使中間神經(jīng)元免受對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)急慢性損傷的組合物，該組合物含有治療學(xué)上適量的權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)中的化合物。
11.由下式(I)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中，X是CO，SO2或(CH2)n(其中n是2-5的整數(shù)，包括2和5)；R1是氫，C1-C5烷基或C2-C5烷酰基；R2是氫或C1-C5烷基；R3是氫或乙酰基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)所取代硝基，鹵素，鹵代(C1-C3)烷基，和C1-C5烷氧基。
12.按照權(quán)利要求11的化合物，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
13.按照權(quán)利要求11的化合物，其中X是(CH2)n(其中n是2-5的整數(shù)，包括2和5)。
14.按照權(quán)利要求13的化合物，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
15.按照權(quán)利要求11的化合物，其中X是(CH2)n(其中n是2或3)。
16.按照權(quán)利要求15的化合物，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
17.按照權(quán)利要求16的化合物，其中n為2。
18.一種用來(lái)保護(hù)中樞神經(jīng)元免受對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的急慢性損傷的藥物組合物，該組合物含有用下式(I)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效組分 其中，X是CO，SO2或(CH2)n(其中n是1-5的整數(shù)，包括1和5)；R1是氫，C1-C5烷基或C2-C5烷酰基；R2是氫或C1-C5烷基；R3是氫或乙酰基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)所取代硝基，鹵素，鹵代(C1-C3)烷基，和C1-C5烷氧基。
19.按照權(quán)利要求18的藥物組合物，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)取代的苯基鹵素和鹵代(C1-C3)烷基。
20.按照權(quán)利要求19的藥物組合物，其中R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
21.按照權(quán)利要求18的藥物組合物，其中X是(CH2)n(其中n是1-5的整數(shù)，包括1和5)。
22.按照權(quán)利要求21的藥物組合物，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)取代的苯基鹵素和鹵代(C1-C3)烷基。
23.按照權(quán)利要求18的藥物組合物，其中X是(CH2)n(其中n是2-5的整數(shù)，包括2和5)。
24.按照權(quán)利要求23的藥物組合物，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
25.按照權(quán)利要求18的藥物組合物，其中X是(CH2)n(其中n是2或3)。
26.按照權(quán)利要求25的藥物組合物，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
27.按照權(quán)利要求26的藥物組合物，其中n為2。
28.按照權(quán)利要求18-27中任何一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的CNS損傷來(lái)自缺血，缺氧，低血糖，創(chuàng)傷性腦損傷，創(chuàng)傷性脊髓損傷，癲癇，亨廷頓舞蹈病，帕金森氏病，阿爾茨海默氏病，或肌萎縮性側(cè)索硬化癥。
29.按照權(quán)利要求28的藥物組合物，其中所述組合物作為直接抗氧化劑，降低N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)神經(jīng)毒性，Zn+2神經(jīng)毒性，或阻斷自由基神經(jīng)毒性。
30.按照權(quán)利要求18-27中任何一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述的CNS損傷是由N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)谷氨酸鹽受體的活化，Zn+2的進(jìn)入和積累，或自由基所導(dǎo)致的。
31.按照權(quán)利要求30的藥物組合物，其中所述組合物作為直接抗氧化劑，降低N-甲基-D-天冬氨酸鹽(NMDA)神經(jīng)毒性，Zn+2神經(jīng)毒性，或阻斷自由基神經(jīng)毒性。
32.下式(I)表示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于保護(hù)中樞神經(jīng)元免受對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的急慢性損傷 其中，X是(CH2)n(其中n是1-5的整數(shù)，包括1和5)；R1是氫，C1-C5烷基或C2-C5烷酰基；R2是氫或C1-C5烷基；R3是氫或乙酰基；和R4是苯基，該苯基沒(méi)有被取代或者被一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)所取代硝基，鹵素，鹵代(C1-C3)烷基，和C1-C5烷氧基。
33.按照權(quán)利要求32的應(yīng)用，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被一個(gè)或多個(gè)選自下組的基團(tuán)取代的苯基鹵素和鹵代(C1-C3)烷基。
34.按照權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
35.按照權(quán)利要求32的應(yīng)用，其中n為2-5。
36.按照權(quán)利要求35的應(yīng)用，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
37.按照權(quán)利要求32的應(yīng)用，其中n為2或3。
38.按照權(quán)利要求37的應(yīng)用，其中R1是氫；R2是氫；R3是氫；并且R4是被鹵代(C1-C3)烷基取代的苯基。
39.按照權(quán)利要求38的應(yīng)用，其中n為2。
40.按照權(quán)利要求32-39中任何一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述的CNS損傷來(lái)自缺血，缺氧，低血糖，創(chuàng)傷性腦損傷，創(chuàng)傷性脊髓損傷，癲癇，亨廷頓舞蹈病，帕金森氏病，阿爾茨海默氏病，或肌萎縮性側(cè)索硬化癥。
41.按照權(quán)利要求40的應(yīng)用，其中所述化合物作為直接抗氧化劑，降低N-甲基-D-天冬氨酸鹽(NMDA)神經(jīng)毒性，Zn+2神經(jīng)毒性，或阻斷自由基神經(jīng)毒性。
42.按照權(quán)利要求32-39中任何一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述的CNS損傷是由N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)谷氨酸鹽受體的活化、Zn+2的進(jìn)入和積累、或自由基所導(dǎo)致的。
43.按照權(quán)利要求42的應(yīng)用，其中所述化合物作為直接抗氧化劑，降低N-甲基-D-天冬氨酸鹽(NMDA)神經(jīng)毒性、Zn+2神經(jīng)毒性、或阻斷自由基神經(jīng)毒性。
全文摘要
本發(fā)明提供了防止和預(yù)防伴隨著神經(jīng)元死亡的神經(jīng)系統(tǒng)疾病的組合物和方法。發(fā)明包括5－苯甲基氨基水楊酸(BAS)及其衍生物的合成。BAS及其衍生物使皮質(zhì)神經(jīng)元免受N－甲基－D－天冬氨酸鹽，鋅離子，和活性氧簇的毒性傷害。因此，本發(fā)明提供了治療中風(fēng)，腦創(chuàng)傷和脊髓損傷，癲癇，和神經(jīng)變性疾病的組合物和方法，所述的神經(jīng)變性疾病伴隨有嚴(yán)重的神經(jīng)元丟失，這些神經(jīng)元丟失借助于興奮毒性，鋅離子神經(jīng)毒性，和自由基神經(jīng)毒性。
文檔編號(hào)A61K31/60GK1903835SQ20061009461
公開(kāi)日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2000年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月19日
發(fā)明者郭秉周, 李英愛(ài), 柳寶凜, 尹性和, 文鎬相 申請(qǐng)人:紐若泰克有限公司