專利名稱：：脫纖因子在制備治療和/或預(yù)防血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及脫纖因子的新醫(yī)藥用途，即脫纖因子在制備治療和/或預(yù)防血管疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：血管疾病是指涉及到血管方面的疾病，包括心腦血管病、周圍血管病等。血管疾病是臨床十分常見的危害人類健康的最大疾病，其死亡率高，并伴發(fā)嚴(yán)重并發(fā)癥，因此，展開對血管疾病的防治研究是當(dāng)今醫(yī)學(xué)和藥學(xué)中一項(xiàng)重大難題。急性冠脈綜合征屬于心血管疾病的范疇，包括不穩(wěn)定心絞痛和急性心肌梗塞。不穩(wěn)定心絞痛是心肌急劇的暫時(shí)的缺血與缺氧所引起的臨床癥狀。急性心肌梗塞是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、血栓形成或冠狀動(dòng)脈持續(xù)痙攣，導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈或分枝閉塞，造成心肌因持久缺血缺氧而發(fā)生壞死。腦梗塞(又稱"腦卒中")是腦血管病中的一種，其是管腔狹窄，或栓塞,甚或閉塞時(shí)出現(xiàn)的癥狀。腦梗塞包括腦血栓形成和腦栓塞，腦血栓是由于動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈內(nèi)膜炎以及血液粘稠度高，導(dǎo)致腦血管局部形成血栓，堵塞血管引起的癥狀。腦栓塞是血管其他部位的栓子如心臟病的附壁血栓，主動(dòng)脈、頸動(dòng)脈等的血栓呈動(dòng)脈硬化斑塊脫落，盆腔及下肢靜脈血栓脫落，骨折時(shí)脂肪栓子等運(yùn)行到腦部引起血栓塞時(shí)出現(xiàn)的癥狀，多發(fā)生于心臟病病人。當(dāng)腦部動(dòng)脈管腔狹窄或閉塞，導(dǎo)致急性腦供血不足，引起局部腦組織缺血、缺氧而發(fā)生壞死，出現(xiàn)一系列的臨床癥狀。外周動(dòng)脈疾病和深靜脈血栓形成是外圍血管疾病的兩種重要類型。外周動(dòng)脈疾病(PeripheralArteryDisease,PAD)是指除冠狀動(dòng)脈之外的主動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈的狹窄、閉塞或瘤樣擴(kuò)張疾病，如為下肢、足、腎和腸供血的動(dòng)脈。PAD最常見的病因是由于外周動(dòng)脈的動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致動(dòng)脈狹窄病變，使得流向下肢的血流減少。PAD可導(dǎo)致心肌梗死、腦卒中、心血管死亡、肢端的截肢、主動(dòng)脈瘤的破裂、嚴(yán)重髙血壓、腎衰等嚴(yán)重疾病。深靜脈血栓形成是發(fā)生于人體四肢深靜脈內(nèi)的病變，這些血管內(nèi)的血液因某些不良因素的影響而發(fā)生凝固，阻塞血管導(dǎo)致血液回流障礙，并引起相應(yīng)的臨床癥狀。臨床上多見于下肢，特別是左下肢。血栓形成原因主要有三大要素靜脈壁損傷、靜脈血流滯緩和血液高凝狀態(tài)。現(xiàn)有的心腦血管類的藥物如速效救心丸、地奧心血康、硝酸甘油等，在緩解癥狀、改善循環(huán)機(jī)能狀態(tài)等方面有一定的療效，但上述藥物療效單一，易產(chǎn)生耐藥性，不能長期持續(xù)使用藥，而且對病情嚴(yán)重的病人如腦血栓、心肌梗塞等療效差。有些西藥雖然有一定療效，但副作用大，不適宜臨床長期使用。總之，目前治療血管疾病的藥物雖多，但顯效的少，療效單一，副作用大，因此，在臨床上需要不斷研究開發(fā)副作用小、療效顯著的治療血管疾病的藥物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人經(jīng)過認(rèn)真研究和動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，從哺乳動(dòng)物組織中提取的脫纖因子對血管疾病有明顯的治療和/或預(yù)防作用，而且脫纖因子來自于天然源，對人體無副作用，其對血管疾病的治療和預(yù)防藥效顯著。因此，本發(fā)明的目的是提供脫纖因子在制備治療和/或預(yù)防血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一目的涉及脫纖因子的制備方法。本發(fā)明的脫纖因子是從哺乳動(dòng)物組織中提取得到的一種單鏈核苷酸混合物，其平均分子量約在1575kDa之間，優(yōu)選約在2050kDa之間，其具有以下分子式-P"5，(dAp)12-24，(dGp)10_20,(dTp)13墨26，(dCp)i0—20式中P為磷基dAp為脫氧腺苷酸的單體dGp為脫氧鳥苷酸的單體dTp為脫氧胸苷酸的單體dCp為脫氧胞苷酸的單體。該脫纖因子具有以下物理化學(xué)性質(zhì)電泳-均勻陽極的遷移率；消光系數(shù)，在260土lnm處的Elcm1%=220±10;消光比，E23()/E26o=0.45±0.04;摩爾消光系數(shù)(以磷表示)，e(P)=7.750±0.500;旋光度[a]D20=53°±6;在天然DNA中以％表示的可逆增色性，h=15±5。本發(fā)明的脫纖因子的可逆增色性(h)可由下列公式計(jì)算OD26o(熱或堿性pH)_h=-—1OD260(室溫或中和pH)分別測定脫纖因子在260nm溶液中被加熱然后冷卻，或使其呈堿性然后中和使其pH為5時(shí)的光密度(OD)值，由公式計(jì)算出可逆增色性。本發(fā)明的脫纖因子是從哺乳動(dòng)物組織中提取得到的，特別是牛、羊、豬或馬的肺、腸、肝臟、胸腺或粘膜組織。本發(fā)明所述的血管疾病包括急性冠脈綜合征如不穩(wěn)定心絞痛、急性心肌梗塞；腦梗塞；外周動(dòng)脈疾病，即除冠狀動(dòng)脈之外的主動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈的狹窄、閉塞或瘤樣擴(kuò)張疾病；深靜脈血栓等。本發(fā)明的脫纖因子的制備方法包括以下步驟-a)研磨哺乳動(dòng)物組織，在酸性pH條件下，加入蛋白酶，加熱使其蛋白水解；b)將物料加熱至沸騰，停止蛋白水解；C)過濾并濃縮溶解產(chǎn)物；d)在濃縮液中添加能夠沉淀磷酸鹽的陽離子鹽，調(diào)節(jié)pH值使其為酸性e)在沉淀懸浮液的恒容條件下過濾，以分離出存在于溶液中的多糖部分；f)在得到的核酸不溶性鹽的懸浮液中加入水溶性堿金屬鹽，以溶解核酸，在保持恒容的條件下，經(jīng)過濾從溶液中消除不能溶解的陽離子；或者將得到的核酸不溶性鹽的懸浮液進(jìn)行離子交換來除去不溶性陽離子；g)將濃縮液在濾膜上進(jìn)行切線流分離過濾，濃縮，添加水溶性堿金屬鹽使核酸溶液的陽離子強(qiáng)度達(dá)到至少1摩爾，然后調(diào)節(jié)溶液的pH值直至分光光度分析在260nm處顯示最大可逆增色反應(yīng)，即達(dá)到了最大可能的聚合反應(yīng)；h)將溶液加熱至60—90'C，進(jìn)行解聚，通過測量可逆增色性的變化值h來控制解聚過程，直到該值達(dá)到以天然DNA的百分?jǐn)?shù)表示是15土5時(shí)為止；i)通過冷卻，終止解聚反應(yīng)，調(diào)節(jié)PH至堿性；j)在高于解聚步驟的溫度條件下，加熱上一步得到的溶液，維持20_60分鐘，以穩(wěn)定核苷酸的結(jié)構(gòu)；k)熱過濾，透析除去溶液中的鹽雜質(zhì)，并盡可能地濃縮；1)用乙醇從濃縮液中沉淀出最終產(chǎn)物，用乙醇洗滌沉淀物，在真空下干燥即得。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟a)中，采用蛋白水解酶例如木瓜蛋白酶、tripsin等，將pH調(diào)整到4一6.5，在溫度10—9(TC條件下，進(jìn)行蛋白水解，時(shí)間為0.5-IO小時(shí)。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟b)中，將物料加熱至沸騰5—20分鐘，停止蛋白水解。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟c)中，采用切向流膜過濾，選用的切向流膜是截留分子量為50，000—100，000道爾頓的管式薄膜Romicon。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟d)中，所述的陽離子鹽例如鈣、鋅的鹵化物、硫酸鹽、碳酸氫鹽、乙酸鹽等，采用酸調(diào)節(jié)pH至2—5，在該步驟中，使核酸沉淀，從而保證多糖部分留在溶液中。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟e)中，沉淀懸浮液在恒容條件下通過孔徑為0.45um或更小的如Romincon管式膜進(jìn)行切向流過濾，除去多糖部分，切向流膜過濾中，采用與d)步驟中相同的陽離子鹽的水溶液，連續(xù)補(bǔ)充入懸浮液中，以保持恒容過濾，直至濾液中不存在多糖物質(zhì)。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟f)中，所述的水溶性堿金屬鹽為鈉、鉀的鹵化物或乙酸鹽，將懸浮液通過能截留分子量小于10000的濾膜Romicon進(jìn)行切向流過濾，向濃縮液中加入同樣的水溶性堿金屬鹽溶液，以保持恒容過濾，直至濾液中沒有不溶性陽離子存在。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟g)中，添加水溶性堿金屬鹽使核酸溶液的陽離子強(qiáng)度達(dá)到1一3摩爾，優(yōu)選3摩爾。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟h)中，將溶液加熱至60—9(TC，最好70—75'C進(jìn)行解聚。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟i)中，優(yōu)選冷卻至15—30'C來終止解聚反應(yīng)，調(diào)節(jié)pH大于7，優(yōu)選為8或更高。在本發(fā)明脫纖因子的制備方法的步驟j)中，加熱溫度至少要比解聚溫度高5°C，一般為65—100。C;本發(fā)明的脫纖因子一般以藥物組合物的形式使用，這種組合物含有治療有效量的作為活性成分的脫纖因子和藥用輔料，該藥物組合物一般可做成各種劑型，包括片劑、膠囊、軟膠囊、微丸、顆粒劑、口服液、注射液、凍干粉針劑等。藥用輔料包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、微精纖維素、海藻酸、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯垸酮、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、糖類、糊精、纖維素及其衍生物類、硬脂酸、石蠟、硬脂酸甘油酯、氫化植物油、半合成脂肪酸酯、乙烯類高分子、各種蠟類、硬脂酸、十八醇、聚乙二醇、蔗糖、淀粉、預(yù)膠化淀粉、明膠、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯垸酮、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚乙二醇、羥丙甲基纖維素、纖維素類、丙烯酸樹脂類和乙烯聚合物類、丙二醇、甘油、聚乙二醇、甘油三醋酸酯、乙酰單甘油酸酯、鄰苯二甲酸酯、蓖麻油、甘露醇、右旋糖苷、水解明膠、擰檬酸鈉、甘氨酸、氯化鈉、葡萄糖、檸檬酸三鈉、甲基對羥基苯甲酸，丙基對羥基苯甲酸中的一種或多種混合。本發(fā)明的含有脫纖因子的藥物組合物優(yōu)選制成以靜脈注射途徑給藥的形式，包括凍干粉針劑和注射液劑。本發(fā)明的含有脫纖因子的凍干粉針劑可以含有藥用輔料，特別是甘露醇、右旋糖苷、水解明膠、檸檬酸鈉、甘氨酸等。本發(fā)明的含有脫纖因子的注射液劑可以含有藥用輔料，特別是甘露醇、氯化鈉、葡萄糖、檸檬酸鈉、甲基對羥基苯甲酸，丙基對羥基苯甲酸等。本發(fā)明的含有脫纖因子的藥物組合物的劑量是根據(jù)病情的嚴(yán)重程度、治療時(shí)間而定，適于腸胃外給藥(如皮下注射或肌肉注射)的劑型，一般日劑量io—800mg脫纖因子/kg體重，口服給藥，日劑量為15—1600mg脫纖因子/kg體重。本發(fā)明制備的脫纖因子純度高、穩(wěn)定性好，生物利用度高，對于血管疾病的治療療效顯著，同時(shí)本發(fā)明的脫纖因子具有良好的安全性，對于治療周期比較長的疾病具有很大意義。因此本發(fā)明脫纖因子是一類具有良好開發(fā)前景的安全有效的藥物。具體實(shí)施例方式下面用具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例l制備脫纖因子a)將100kg冷凍牛肺洗凈，研磨，并分散于含有300g木瓜蛋白酶的60升飲用水中，用稀鹽酸調(diào)整pH至6.0，然后加熱至7(TC，進(jìn)行蛋白水解4小時(shí)；b)將物料加熱至沸騰，IO分鐘后停止蛋白水解；c)通過壓濾機(jī)過濾，除去分散液中的固體，將濾液在具有截留分子量為50000道爾頓的管式薄膜Romicon上采用切向流過濾并濃縮到25升體積；d)將濃縮液用180g的無水氯化鈣處理，調(diào)節(jié)溶液的pH至4;e)將懸浮液通過孔徑為0.45ym的Romicon管式膜進(jìn)行切向流過濾，并通過加入0.01M氯化鈣溶液保持濃縮液體積恒定，直至濾出液中不存在多糖物質(zhì)；f)向不溶性核酸鈣的懸浮液中加入25升3M氯化鈉，然后通過能截留分子量10000的濾膜Romicon進(jìn)行切向流過濾，向濃縮物中加入3摩爾氯化鈉溶液以保持恒容過濾，直至濾液中沒有不溶性鈣離子存在；g)將濃縮液在與f)步驟相同的濾膜Romicon上進(jìn)行切向流分離過濾，以進(jìn)一歩濃縮直至體積達(dá)到7.5升為止，添加氯化鈉，使核酸溶液的陽離子強(qiáng)度達(dá)到2摩爾，用鹽酸調(diào)節(jié)pH值直至分光光度分析在260nm處顯示最大可逆增色反應(yīng)；h)將溶液加熱至70°C，進(jìn)行解聚，直至溶液的可逆增色性h達(dá)到以天然DNA的百分?jǐn)?shù)表示是15土5時(shí)為止；i)將解聚的物質(zhì)冷卻到25。C，終止解聚，用3摩爾Na0H調(diào)節(jié)pH至8.5;j)將溫度升高到85'C，并維持30分鐘；k)熱過濾，透析除去溶液中的鹽雜質(zhì)，并采用切向流在濾膜Romicon上過濾，濃縮至6500毫升體積；l)用乙醇從濃縮液中沉淀出最終產(chǎn)物，用乙醇洗滌沉淀物，在60。C、真空下干燥即得。得到的產(chǎn)品的性質(zhì)如下消光系數(shù)，在260土l腿處的Eicm"二230;消光比，E23Q/E26o=0.48;摩爾消光系數(shù)(以磷表示)，e(p)=7.800;旋光度[Q]d2(^57G;在天然DNA中以%表示的可逆增色性，h=18。得到的脫纖因子的分子式為P3，(dAp)12,(dGp)u,(dTp)13,(dCp)n實(shí)施例2制備脫纖因于注射液取實(shí)施例1制備的脫纖因子200克，配以輔料二水合檸檬酸三鈉25克，甲基對羥基苯甲酸3克，丙基對羥基苯甲酸600毫克，加注射用水至2000毫升，無菌過濾，分裝1000個(gè)安瓿瓶中，即得每瓶200毫克。以下通過實(shí)驗(yàn)來說明脫纖因子的藥效-實(shí)驗(yàn)1:脫纖因子對犬抗心肌缺血作用實(shí)驗(yàn)方法健康犬30只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組對照組(生理鹽水)；硝酸甘油組(15ng/kg);脫纖因子組(200mg/kg)(實(shí)施例2制備的脫纖因子注射液)。各組動(dòng)物稱重后靜脈注射鹽酸氯胺酮注射液(6mg/kg)麻醉，用左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎方法制備心肌缺血模型。在心導(dǎo)管插管吸入麻醉下作股動(dòng)脈插管至主動(dòng)脈，接通多道生理儀；上下肢備皮，貼心電圖片，接心電監(jiān)護(hù)儀待各指標(biāo)數(shù)值穩(wěn)定后開始實(shí)驗(yàn)。靜脈注射生理鹽水或藥物后即刻以及6小時(shí)，用心電監(jiān)護(hù)儀測定動(dòng)物模型的ST抬高高度。并對動(dòng)物模型用藥前后抽血測量血清肌酸磷酸激酶(CPK)和乳酸脫氫酶(LDH)的濃度。計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x^檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果脫纖因子對犬抗心肌損傷的指標(biāo)檢測結(jié)果見表1。表1用藥前后犬心肌損傷的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*與給藥前比較，PO.01;A與對照組組比較，P<0.01。各組動(dòng)物結(jié)扎后，心肌缺血使ST抬高高度增大，且缺血時(shí)心肌細(xì)胞受損使CPK和LDH從細(xì)胞內(nèi)溢出，即心肌損傷程度越重，則血清CPK和LDH的含量越高。硝酸甘油是目前公認(rèn)的對心肌缺血有確切療效的藥物。各組動(dòng)物在給藥后，可以發(fā)現(xiàn)脫纖因子組、硝酸甘油組與對照組比較，ST抬高、LDH和CPK濃度的升高程度都有明顯降低(P<0.01)，且脫纖因子的療效比硝酸甘油更佳。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脫纖因子對抗犬心肌缺血有良好的作用。實(shí)驗(yàn)2:脫纖因子對大鼠腦梗塞的治療作用實(shí)驗(yàn)方法用三氯化鐵局部涂抹損傷血管方法制備大鼠大腦中動(dòng)脈血栓模型實(shí)驗(yàn)用大鼠經(jīng)腹腔注射10X水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，顳部開顱，暴露大腦中動(dòng)脈，置一小片塑料薄膜保護(hù)周圍血管、組織，將一片吸有50%三氯化鐵溶液(lmoL/L鹽酸)10ul的小片濾紙(2X2mm)敷在此段大腦中動(dòng)脈上，30min后取下濾紙，用生理鹽水沖洗局部組織，逐層縫合，回籠飼養(yǎng)。術(shù)中術(shù)后室溫嚴(yán)格控制在24~25°C。動(dòng)物分組和給藥取大鼠36只，體重280320g，隨機(jī)分為三組對照組(生理鹽水)，尿激酶組(5萬U/kg)和脫纖因子組(600mg/kg,實(shí)施例2制備的脫纖因子注射液)。給藥組在手術(shù)30min后由舌下靜脈給藥，24h后判斷神經(jīng)癥狀，然后抽取血漿測定其組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)和纖溶酶原激活物抑制劑(PAI)活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)用三氯化鐵局部涂抹損傷血管，對照組大鼠麻醉清醒后即有偏癱樣癥狀出現(xiàn)，主要表現(xiàn)為手術(shù)對側(cè)前肢內(nèi)收、肩內(nèi)旋、前肢肌張力下降，向手術(shù)對側(cè)推動(dòng)時(shí)抵抗阻力下降，表明大鼠大腦中動(dòng)脈血栓模型制備成功。t-PA是纖溶系統(tǒng)的主要激活劑，PAI為t-PA的特異抑制物，二者既是纖溶系統(tǒng)的關(guān)鍵酶，也是血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的分子標(biāo)志。血漿中纖溶活性的調(diào)節(jié)主要取決于內(nèi)皮細(xì)胞分泌的t-PA/PAI的相對比例。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)與對照組相比，尿激酶組和脫纖因子組的血漿t-PA活性明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO.05);尿激酶組和脫纖因子組PAI活性顯著低于對照組(PO.05)(見表2)。表2腦梗塞大鼠用藥前后血漿t-PA和PAI活性變化<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>脫纖因子可誘導(dǎo)血管壁產(chǎn)生和釋放t-PA，并能夠降低PAI活性，從而發(fā)揮纖溶和溶血栓作用，減輕腦缺血性損傷，保護(hù)腦組織功能。實(shí)驗(yàn)3:脫纖因子對家兔股動(dòng)脈血管閉塞的影響實(shí)驗(yàn)方法健康家兔18只，雌雄各半，隨機(jī)分為對照組、前列環(huán)素1(PGE1)組和脫纖因子組(實(shí)施例2制備的脫纖因子注射液)。家兔經(jīng)3%戊巴比妥鈉麻醉后，右側(cè)股三角處切開皮膚，股動(dòng)脈起始部結(jié)扎血管，向遠(yuǎn)心端注入融化的液態(tài)石蠟0.5ml/kg。分層縫合切口。單獨(dú)飼喂，第10日快速放血處死動(dòng)物。術(shù)后即刻及每日耳緣靜脈注射藥物1次。按下列劑量給藥對照組給予生理鹽水、PGE1組(300pg/kg)，脫纖因子組(150mg/kg)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測定各組動(dòng)物右側(cè)小腿骨骼肌ATP含量和醛縮酶(Aldolase)活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果缺血組織能量生成明顯減少，ATP儲(chǔ)備降低。脫纖因子組的小腿骨骼肌ATP含量為4.87土0.66pmol/g'dw，顯著高于對照組2.98士0.39pmol/g'dw(PO.01);PGE1組ATP含量為3.32士0.63nmol/g'dw，高于對照組(P<0.05)。骨骼肌組織缺血時(shí)發(fā)生糖代謝障礙，本例以醛縮糖活性降低作為指示其變化相對應(yīng)的指標(biāo)。脫纖因子組和PGE1組的Aldolase活性值分別為6.02士0.58ku/g'dw和5.51±0.67ku/g-dw，顯著高于對照組4.33±0.61ku/g'dw(PO.05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脫纖因子可增加組織的ATP儲(chǔ)備，減輕缺血組織的糖代謝障礙，對家兔外周動(dòng)脈閉塞組有明顯的作用。實(shí)驗(yàn)4:脫纖因子對大鼠深度靜脈血栓的影響實(shí)驗(yàn)方法取大鼠60只，體重280士30g，隨機(jī)分為三組對照組，尿激酶組和脫纖因子組(實(shí)施例2制備的脫纖因子注射液)，每組20只。各組大鼠用苯巴比妥鈉(75mg/kg)腹腔注射麻醉后，腹部備皮，經(jīng)腹白線正中切口近腹，分離下腔靜脈下端與雙側(cè)髂總靜脈。將絲線結(jié)扎下腔靜脈和雙側(cè)髂總靜脈，最后用可吸收縫線雙層關(guān)腹。模型制備后觀察到大鼠雙后肢顏色先變蒼白，后變青紫，雙后肢僵硬，說明深靜脈血栓模型制備成功。術(shù)后即刻給藥對照組給予生理鹽水，尿激酶組給予尿激酶5萬U/kg，脫纖因子組給予脫纖因子600mg/kg。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束第4天時(shí)取血測定各組動(dòng)物全血粘度與纖維蛋白原含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果治療前后大鼠血液流變改變結(jié)果見表3。表3治療前后模型大鼠血液流變改善情況<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注*與給藥前比較，PO.01;A與對照組組比較，P<0.01。深度靜脈血栓大鼠由于靜脈血栓的存在使血流減緩，導(dǎo)致血液粘稠度增大，血小板聚集，紅細(xì)胞變形能力下降，血液呈高凝狀態(tài)，而血漿粘度和血液中纖維蛋白原的含量是影響血液流變特性的兩個(gè)主要指標(biāo)。通過實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，脫纖因子組和尿激酶組均能顯著降低血漿粘度和纖維蛋白原含量(P<0.01)，且脫纖因子的療效優(yōu)于尿激酶。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，脫纖因子可以顯著改善血液粘稠程度，從而達(dá)到防治深度靜脈血栓形成的作用。權(quán)利要求1.脫纖因子在制備治療和/或預(yù)防血管疾病藥物中的應(yīng)用，該脫纖因子是從哺乳動(dòng)物組織中提取得到的一種單鏈核苷酸混合物，其平均分子量約在15～75kDa之間，優(yōu)選約在20～50kDa之間，其具有以下分子式P1-5，(dAP)12-24，(dGp)10-20，(dTp)13-26，(dCp)10-20式中P為磷基dAP為脫氧腺苷酸的單體dGp為脫氧鳥苷酸的單體dTp為脫氧胸苷酸的單體dCp為脫氧胞苷酸的單體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中脫纖因子具有以下物理化學(xué)性質(zhì)電泳=均勻陽極的遷移率；消光系數(shù)，在260土lnm處的E,C二220土10;消光比，E230/E260=0.45±0.04;摩爾消光系數(shù)(以磷表示)，e(P)=7.750±0.500;旋光度[a]D20°=53Q±6;在天然DNA中以％表示的可逆增色性，h=15±5。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其中所述的哺乳動(dòng)物組織是牛、羊、豬或馬的肺、腸、肝臟、胸腺或粘膜組織。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中所述的血管疾病是急性冠脈綜合征、腦梗塞、外周動(dòng)脈疾病或深靜脈血栓。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述的藥物可做成各種劑型，包括片劑、膠囊、軟膠囊、微丸、顆粒劑、口服液、注射液或凍干粉針劑。全文摘要本發(fā)明涉及脫纖因子用于制備治療和/或預(yù)防血管疾病的藥物的用途，所述的脫纖因子是從哺乳動(dòng)物組織中提取得到的一種單鏈核苷酸混合物，本發(fā)明的脫纖因子對血管疾病有明顯的治療作用。文檔編號(hào)A61K31/7076GK101176733SQ20061014589公開日2008年5月14日申請日期2006年11月22日優(yōu)先權(quán)日2006年11月22日發(fā)明者李德明申請人:李德明