專利名稱：：一種用于寵物的殺菌制劑及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種生物殺菌制劑，尤其涉及一種用于寵物的復合溶葡萄球菌酶制劑及其制備方法。
背景技術：
：寵物在帶給人們樂趣的同時也會帶來許多意想不到的問題，比如傳染疾病、引起過敏、抓傷咬傷等，人畜共患的200多種傳染病，其傳播途徑包括通過消化道、呼吸道和皮膚接觸等，由寵物傳染給人類，其中由狗傳給人類的病毒性、細菌性和寄生蟲性疾病多達40余種。皮膚接觸是比較主要的傳播途徑，寵物身上的皮毛容易沾染灰塵，造成致病菌滋生并大量繁殖，并通過和人體皮膚接觸傳染給人類。同時，寵物的身上所攜帶的致病菌又很容易造成寵物自身的疾病。如皮膚細菌感染，多數病例病原為中間葡萄球菌，臨床上表現為皮膚膿皰疹，小膿皰，毛囊炎，皮膚皺裂和干性膿皮病。又比如寵物的口腔疾病，寵物的口腔衛生不同于人類，通常難以刷牙，此類動物的口腔非常不衛生，以至大腸桿菌等細菌容易在口中生成。此外，黏著在牙上的食物殘渣可形成含唾液菌的菌斑，唾液菌中的細菌不僅包括革蘭氏陽性菌還有革蘭氏陰性菌，它們在唾液中生長和繁殖，會引起各種口腔疾病，如口臭、齒齦炎、牙周炎等。而這些問題都不能象人類一樣通過刷牙等手段來控制。目前常用的寵物皮膚粘膜用殺菌制劑主要包括酒精、碘酒、高錳酸鉀等化學類殺菌或抗菌制劑，會對皮膚產生不同程度的刺激和傷害，特別是不能用于口腔粘膜、破潰皮膚及過于嬌嫩皮膚，同時長期使用會產生耐藥性問題。
發明內容本發明所要解決的技術問題在于提供一種用于寵物的殺菌制劑，以克服現有技術的不足。本發明所要解決的另一個技術問題是提供該用于寵物的殺菌制劑的制備方法。本發明提供了一種用于寵物的殺菌制劑，該制劑包括殺菌有效量的溶葡萄球菌酶和溶菌酶，其重量百分比為為溶葡萄球菌酶溶菌酶=i:ioo~300。其中的溶葡萄球菌酶為野生類型、重組產生、突變異種或保留抗葡萄球菌細胞壁肽聚糖的含甘氨酸交聯鍵的任何重組或有關的酶中的一種或一種以上；溶菌酶為細菌胞壁溶解酶、酵母菌胞壁溶解酶、霉菌胞壁溶解酶中的一種或一種以上。所用的溶葡萄球菌酶是由基因重組產生，枯草桿菌分泌的。所用的溶菌酶是由蛋清中提取的或者基因重組產生。該殺菌制劑中還包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶總重量計0.5-30%的蛋白質穩定劑和0.6-20%的離子化合物。所述及的蛋白質穩定劑包括聚乙二醇類物質或殼聚糖、甲殼素、N-乙酰-D-氨基等藥用高分子化合物，可以包裹蛋白質或多肽，免受其他物質的破壞，從而增強蛋白質或多肽的穩定性；所述及的離子化合物是K+、Na+、Mg2+、P043\Cl-中任意兩種陰離子與陽離子的組合，如NaCl，KC1等，可以輔助增強該殺菌制劑的穩定性，并可以調節其酸堿度，使之適用于不同部位的創面或黏膜。所述及的聚乙二醇類物質包括是聚乙二醇400、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中的一種或一種以上。為了增強該殺菌制劑殺菌力，擴大殺菌譜，還包括以制劑總重量計0-10%的殺菌劑。其中殺菌劑是指醋酸氯己定、抑菌肽或者有殺菌作用的中藥提取物，如蒜頭素、麝香草酚、兒茶酚、番茄堿、大黃素等。該殺菌制劑還包括以制劑總重量計0-20%的麻黃素，麻黃素是平滑肌收縮劑，用于創面，可促進創面愈合；還可用于鼻腔，促進黏膜吸收。按照本發明，優選的組份和重量百分比含量為溶菌醃蛋白質穩定劑離子化合物水優選的組份和重量百分比含量為:溶菌酶離子化合物殺菌劑水0.01-1%0.5-20%0.6-10%余量0.0001-0.1%0.01-1%蛋白質穩定劑1-30%0.6-20o/o0.01-10%余量優選的組份和重量百分比含量為:溶菌酶離子化合物殺菌劑麻黃素水0.0001-0.1%0.01-1%蛋白質穩定劑1-30%0.6-20o/o0.01-10%0.1-15%,余量本發明的制劑的制備方法可采用常規的物理混合，將各組分按比例混合，然后灌裝于塑料或玻璃瓶中，入庫，室溫保存即可。本發明提供的殺菌制劑不僅殺菌效果較溶葡萄球菌酶高得多，殺菌譜也明顯擴大，對引起寵物皮膚、粘膜等感染的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均可達到很強的殺滅作用，而且對白色念珠菌等真菌也有很好的殺滅效果，同時對寵物比較嬌嫩的皮膚和黏膜無任何刺激和毒副作用。對400多株細菌進行了該制劑的抑殺菌實驗。實驗結果表明對常見的金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、D群腸球菌、四聯球菌、產單核李斯特菌、鏈球菌以及胃幽門螺旋桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等均有明顯的抑殺作用。純溶葡萄球菌酶在常溫下很不穩定，復配的溶葡萄球菌復合酶中含有多種我們篩選的穩定劑和增效劑，穩定性大為增強，使之可適用于工業化規模生產。溶葡萄球菌酶和溶葡萄球菌復合酶酶活穩定性實驗比較，經37C保存3個月(相當于常溫保存2年)，見表l、表2。表1溶葡萄球菌酶37°C3個月放置前后酶活性比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>由上表可見溶葡萄球菌復合酶中的溶葡萄球菌酶酶活穩定性較純溶葡萄球菌酶高。實驗還證明溶葡萄球菌復合酶制劑對耐藥性菌株，如耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，耐藥性肺炎雙球菌、嗜麥芽窄食單孢菌的殺滅效果更優于常用抗生素。其基本特點為-1.殺菌譜較溶葡萄球菌酶廣。不僅能有效殺滅葡萄球菌、葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、D群腸球菌、四聯球菌、產單核李斯特菌、鏈球菌、厭氧菌、嗜麥芽窄食單孢菌等常見致病細菌，對淋球菌、胃幽門螺旋桿菌也有很強的殺滅作用。此外對一些耐藥性細菌，如耐藥性金黃色葡萄球菌、耐藥性肺炎雙球菌等也顯示出極強的殺菌效果。2.殺菌活性和穩定性大大高于溶葡萄球菌酶。由于溶葡萄球菌復合酶是以溶葡萄球菌酶為主要成分，配以溶菌酶、上述小分子化合物及穩定劑、增效劑等成分復合而成，比純的溶葡萄球菌酶具有更大的穩定性，經測試證明，該產品在常溫下可保存2年。3.不易產生耐藥性。作為主要活性成分的溶葡萄球菌酶和溶菌酶，具有獨特的殺菌機理，溶葡萄球菌酶是通過專一性的切斷胞壁肽聚糖中的甘氨酸鍵，達到快速殺死致病菌的效果；而溶菌酶則能作用于胞壁中的e-1，4糖苷鍵或e-1，3葡聚糖，使之斷裂。兩種酶以一定的比例進行復配，協同作用，雙重裂解細菌細胞壁，因而細菌不易對其產生耐藥性。4.對機體無毒副作用。溶葡萄球菌酶和溶菌酶均為蛋白質產品，對皮膚和粘膜產生刺激，不對機體產生任何形式的毒副作用，并可通過代謝徹底降解，沒有殘留，不會富集。本發明殺菌制劑可用于寵物的皮膚粘膜等部位的殺菌消毒用，可用于寵物燒傷、燙傷、抓傷、咬傷等創面的清潔消毒，并可用于外科、婦產科、泌尿科、口腔科等各種外科手術術前術后的清創和防治感染。并可用于寵物口腔、耳道和鼻部的清潔和消毒。具體實施方式實施例l制造100克殺菌制劑配比溶葡葡球菌酶0.0015g溶菌酶0.2g磷酸鉀0.2g諷化鈉0.2g甲殼素2g蒸餾水97.4g方法在無菌室中，按上表所述稱取每一組分，按比例依次加入潔凈的玻璃或不銹鋼盛具中，加入無菌蒸餾水，輕輕攪拌，充分混和均勻后，灌裝于塑料或玻璃瓶中，入庫，室溫保存即可。該制劑可用于用于寵物的皮膚粘膜消毒用，可在2—10分鐘內殺滅皮膚、粘脇表面的淋球菌、金^色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌、大腸桿菌等，殺滅率達99.9%。可用于寵物燒傷、燙傷、抓傷、咬傷等創面的清潔消毒，均勻噴灑于患處，每天34次，以充分濕潤患處為宜。并可用于外科、婦產科、泌尿科、口腔科等各種外科手術術前術后的清創和防止感染，實施例2細菌定量殺滅i^一、器材1、試驗菌株白色念珠菌(ATCC10231),大腸桿菌(8099)，金黃色葡萄球菌(ATCC6538)，綠膿桿菌(ATCC27853).購自中國典型培養物保藏中心(CCTCC)。2、試驗材料實施例一所配制的殺菌制劑3、中和劑0.5硫代硫酸鈉、2%吐溫一80、0.5%卵磷脂的PBS溶液4、無菌硬水5、稀釋液(TPS)二、方法1、檢驗依據衛生部《消毒技術規范》(2002年版)2.丄1.7.4細菌定量殺滅試驗2、殺菌試驗試驗溫度2rc，試驗重復3次。三、對試驗菌的殺滅效果1、分別作用2.5min、5min和7.5min對白色念珠菌的平均殺滅對數值均〉5.00。表3對白色念珠菌的殺滅效果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2、對大腸桿菌的殺滅效果:表4對大腸桿菌的殺滅效果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注陽性對照組平均菌數及范圍為7.10X10Scfii/片(7.70—7.20X10Scfii/片)陰性對照組中和劑、PBS、培養基無細菌生長。3、對金黃色葡萄球菌的殺滅效果_表5對金黃色葡萄球菌的殺滅效果_<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注陽性對照組平均菌數及范圍為6.63X105cfii/片(6.50—6.80X105cfU/片)陰性對照組中和劑、PBS、培養基無細菌生長。4、對綠膿桿菌的殺滅效果_表6對綠膿桿菌的殺滅效果_稀釋濃度作用不同時間(min)的平均殺滅率及范圍(％)(%)251020原液99.8899.9499.9999.99(99.87—(99.93—(99.99_(99.99一99.87)99.94)99.99)100)5099.7899.8699.8999.91(99.73—(99.86—(99.88—(99.90—99.83)99.87)99.90)99.91)2598.9999.3099.6199.78(98.85—(99.25—(99.56—(99.74—99.04)99.35)99.65)99.81)注陽性對照組平均菌數及范圍為1.23X10、fW片(1.20—1.25X10ecfo/片)陰性對照組中和劑、PBS、培養基無細菌生長。實施例3制造100克溶葡萄球菌復合酶制劑配比溶葡葡球菌酶O.OOlg溶菌酶0.2g醋酸氯己定O.Olg氯化鉀0.15g氯化鈉0.15g殼聚糖1.5g蒸餾水97.99g方法在無菌室中，按上表所述稱取每一組分，按比例依次加入潔凈的玻璃或不銹鋼盛具中，加入無菌蒸餾水輕輕攪拌，充分混和均勻后，灌裝于塑料或玻璃瓶中，入庫，室溫保存即可。該殺菌制劑可用于寵物口腔的清潔消毒，可治療各類由細菌感染引起的口腔疾病、口臭等。可利用噴霧裝置噴入寵物的口腔，或用棉球蘸取擦拭寵物包括齒齦的口內組織，一天2-3次，癥狀好轉后，一天一次。實施例4制造100克溶葡萄球菌復合酶制劑配比溶葡葡球菌酶0.002g溶菌酶0.45g麝香草酚1.5g磷酸鉀0.25g氯化鈉0.25g聚乙二醇2g蒸餾水95.55g方法在無菌室中，按上表所述稱取每一組分，按比例依次加入潔凈的玻璃或不銹鋼盛具中，加入無菌蒸餾水輕輕攪拌，充分混和均勻后，灌裝于塑料或玻璃瓶中，入庫，室溫保存即可。該殺菌制劑可用于寵物的耳道清潔和消毒，對于各種致病菌所引起的耳炎癥、包括各類外耳道炎癥等，每天一次，每次l-2滴。實施例聚乙二醇制造IOO克溶葡萄球菌復合酶制劑配比溶葡葡球菌酶0.002g0.45g1.5g0.5g0.25g0.25g97.05g方法在無菌室中，按上表所述稱取每一組分，按比例依次加入潔凈的玻璃或不銹鋼盛具中，加入無菌蒸餾水輕輕攪拌，充分混和均勻后，灌裝于塑料或玻璃瓶中，入庫，室溫保存即可。該殺菌制劑可用于寵物鼻部細菌的清除，用于鼻部的清潔和消毒，每日l-2次，每次1-2滴。磷酸鉀氯化鈉水權利要求1.一種用于寵物的殺菌制劑，其特征在于，該制劑包括殺菌有效量的溶葡萄球菌酶和溶菌酶。2.根據權利要求1所述的殺菌制劑，其特征在于，溶葡萄球菌酶與溶菌酶的重量百分比為溶葡萄球菌酶溶菌酶=i:ioo-300。3.根據權利要求1或2所述的殺菌制劑，其特征在于，所述的溶葡萄球菌酶為野生類型、重組產生、突變異種或保留抗葡萄球菌細胞壁肽聚糖的含甘氨酸交聯鍵的任何重組或有關的酶中的一種或一種以上；所述的溶菌酶為細菌胞壁溶解酶、酵母菌胞壁溶解酶、霉菌胞壁溶解酶中的一種或一種以上。4.根據權利要求1或2所述的殺菌制劑，其特征在于，該制劑還包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶總重量計0.5-30%的蛋白質穩定劑和0.6-20%的離子化合物；蛋白質穩定劑為聚乙二醇類物質或殼聚糖、甲殼素、N-乙酰-D-氨基中的一種或一種以上；離子化合物為K+、Na+、Mg+、PO,、Cr中任意兩種陰離子與陽離子的組合。5.根據權利要求1或2所述的殺菌制劑，其特征在于，該制劑還包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶總重量計0-10%的殺菌劑；殺菌劑為醋酸氯己定、抑菌肽、蒜頭素、麝香草酚、兒茶酚、番茄堿或大黃素中的一種或一種以上。6.根據權利要求1或2所述的殺菌制劑，其特征在于，該制劑還包括以溶葡萄球菌酶和溶菌酶總重量計0-15%的麻黃素。7.—種如權利要求1或2所述的用于寵物的殺菌制劑，其特征在于該制劑的組份和重量百分比含量如下溶葡萄球菌酶0.0001-0.1%溶菌酶0.01-1%蛋白質穩定劑0.5-20%離子化合物0.6-10%水余量。8.—種用于寵物的殺菌制劑，其特征在于該制劑的組份和重量百分比含量如下溶葡萄球菌酶0.0001-0.1%溶菌酶0.01-1%蛋白質穩定劑1-30%離子化合物0.6-20%殺菌劑0.01-10%水余量。9.一種用于寵物的殺菌制劑，其特征在于該制劑的組份和重量百分比含量如下溶葡萄球菌酶0.0001-0.1%溶菌酶0.01-1%蛋白質穩定劑1-30%離子化合物0.6-20%殺菌劑0.01-10%麻黃素0.1-15%。水余量。10.—種如權利要求1~9任一項所述的用于寵物的殺菌制劑的制備方法，其特征在于將各組分按比例混合。全文摘要本發明公開了一種用于寵物的殺菌制劑。該制劑包括殺菌有效量的溶葡萄球菌酶和溶菌酶。本發明的制劑不僅殺菌效果較溶葡萄球菌酶高得多，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均可達到很強的殺滅作用，特別對耐藥性金黃色葡萄球菌具有很強的殺滅效果，而且對寵物的皮膚、粘膜無刺激，并不易產生耐藥性。本發明提供殺菌制劑可用于寵物的皮膚粘膜等部位的殺菌消毒用，可用于寵物燒傷、燙傷、抓傷、咬傷等創面的清潔消毒，并可用于外科、婦產科、泌尿科、口腔科等各種外科手術術前術后的清創和防治感染，還可用于寵物口腔、耳道和鼻部的清潔和消毒。文檔編號A61P31/04GK101288769SQ20061014741公開日2008年10月22日申請日期2006年12月18日優先權日2006年12月18日發明者陸婉英申請人:上海高科生物工程有限公司