專利名稱：：用于靶向ifnar2的方法和組合物的制作方法用于耙向IFNAR2的方法和組合物相關申請本申請是根據37CFR1.53(b)(l)提交的非臨時申請，根據35USC119(e)要求2005年6月22日提交的臨時申請第60/692,786號的優先權，本文引證其內容。發明領域本發明涉及抗I型千擾素受體抗體的領域，更具體的是涉及阻斷I型千擾素對I型干擾素受體復合物第二組分(IFNAR2)的結合的抗I型干擾素受體抗體。
背景技術：
：I型干擾素(IFNs)是對多種細胞類型具有多效作用的細胞因子。IFN最為人所知的是它們的抗病毒活性，但它們也具有抗細菌、抗原生動物、免疫調變、和細胞生長調節功能。I型干擾素包括a干擾素(IFN-a)和(3干擾素(IFN-P)。人a干擾素(hIFN-a)是一個具有至少23種不同多肽的家族，但INF-P多肽只有一種(J.InterferonRes"13:443-444(1993))。hIFN-a亞類顯示超過70%的氨基酸序列同源性，并且與hIFN-(3具有大約25%的氨基酸同一性。hIFN-a和hlFN-(3具有共同的受體。已經鑒定了hIFN-a受體復合物的兩種組分。第一種hIFN-a受體(hIFNARl)的cDNA編碼一種63kD的受體蛋白(Uzeetal,，Cell，60:225-234(1990)中有報道)。這種受體經歷大量的糖基化，這導致它在凝膠電泳中作為大得多的135kD蛋白遷移。第二種干擾素受體hlFNAR2(hlFN-a(3R長)是一種115kD的蛋白質，它與hIFNARl締合時介導功能性的信號傳導復合物(Domanskietal.,J.Biol.Chem.,270:21606-21611(1995)中報道)。一種IFNAR2變體，IFN-a/卩受體(hlFN-a(3R短)，是55kD的蛋白質，能夠結合I型hIFN，但與hIFNARl締合時不能形成功能性復合物(Novicketal,，Cell,77:391-400(1994)報道)。這種IFN-a/卩受體看來是hlFNAR2的一種可變剪接變體。未加工的hIFNARl表達產物由557個氨基酸組成，包括409個殘基的胞外域(ECD)、21個殘基的跨膜域、和100個殘基的胞內域，如Uze等人，同上，第229頁圖5所示。IFNAR1的胞外域由兩個功能域組成，即功能域1和功能域2，這兩個功能域被一個三脯氨酸基序分隔開來。功能域l和功能域2之間有19%的序列同一性和50%的序列同源性(Uzeetal.,supra)。每個功能域(D200)由大約200個殘基構成，并可進一步細分為兩個大約100個氨基酸的同源子域(SD100)。未加工的hlFNAR2表達產物由515個氨基酸組成，包括一個217殘基的胞外域(ECD),—個21殘基的跨膜域和一個250殘基的胞質長尾，如Domanskietal.,J.Biol.Chem.,37:21606-21611(1995)第21608頁的圖1所示。通過使用IFNAR1基因敲除小鼠已經證明，IFNAR1對于針對所有I型IFN的響應(Mulleretal.，Science,264:1918-1921(1994);Clearyetal.,J.Biol.Chem.,269:18747-18749(1994)),以及物種特異性IFN信號轉導(Constantinescuetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:9602-9606(1994))的介導，均是至關重要的。但是，在配體結合中起關鍵作用的是IFNAR2，而不是IFNAR1(Cohenetal.,Mol.CellBiol"15:4208(1995))。Benoitetal.,J.Immunol.,150:707-716(1993)報道了一種抗IFNAR1單抗64G12,發現它抑制IFN-a2(IFN-aA)和IFN-aB對Daudi細胞的結合，并且抑制IFN-a2、IFN-卩和IFN-co(IFN-anl)對Daudi細月包的抗病毒活性。Benoit等人也報道，64G12識別IFNAR1的結構域1中存在的一個表位。Eid和Tovey，J.InterferonCytokineRes.,15:205-211(1995)報道，64G12不能從Daudi細胞中免疫沉淀交聯的IFN-a2-受體復合物。ColamoniciandDomanski,J.Biol.Chem.,268:10895-10899(1993)才艮道了一種IFNAR2單抗(稱為"IFNaR(31單抗，，)，其阻斷IFN-a2(IFN-aA)對Daudi細胞和U-266細胞的結合，并阻斷不同類型的I型干擾素對Daudi細胞的抗增殖活性(使用MTT細胞增殖測定)。還有多種干擾I型干擾素-干擾素受體相互作用的其它抗體已^^>開。參見例如，US5516515，5919453，5,643,749，5821078，5886153，6458932，6136309,6713609，6787634,WO9320187,W096/33735,EP0822830,EP495907,WO95/07716,WO96/34096,EP0537166Bl,EP588177A2,EP588177Bl，W09741229,EP927252,EP676413Bl，WO2004/093908,WO2004/094473,和USPub.2003/0018174，USPub.2003/0166228。I型干擾素途徑在多種疾病中的作用已開始得到了解。這些疾病包括多種免疫復合物失調的表現。參見例如Schmidt&Ouyang,Lupus(2004),13:348-352。顯然，可有效地靶向和調節這種重要途徑的組合物和方法將是有益的。本文提供的發明涉及這樣的組合物和方法。本文引證本文所引用的包括專利申請和出版物在內所有參考文獻的全部內容。本發明的公開本發明提供新的抗體，它們能夠結合IFNAR2和/或通過I型干擾素受體復合物的第二組分(IFNAR2)調節與I型干擾素信號傳導相關的生物活性。在一個方面中，本發明提供一種分離的免疫球蛋白多肽，其包含選自下述群組的至少l個，2個，3個，4個，5個或全部高變區(HVR)序列，并特異性結合人IFNAR2:所述群組是由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的HC-HVR1、HC-HVR2、HC-HVR3、LC-HVR1、LC-HVR2和LC-HVR3序列構成的。例如，在一個方面中，本發明提供了一種分離的抗體，其包含選自下述群組的至少1個，2個，3個，4個，5個或全部高變區(HVR)序列，并特異性結合人IFNAR2:所述群組是由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的HC-HVR1、HC-HVR2、HC-HVR3、LC-HVR1、LC-HVR2和LC-HVR3序列構成的。在一個實施方案中，本發明4是供一種分離的抗體，其包括選自由HC-HVR1、HC-HVR2和HC-HVR3構成的群組的至少1個，2個或所有HC-HVR，以及選自由LC-HVR1、LC-HVR2和LC-HVR3構成的群組的至少1個，2個或所有LC-HVR。在一個實施方案中，本發明的分離的抗體中的HVR序列是以保藏號PTA-6242保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的HVR序列。在一個實施方案中，本發明的分離的抗體中的HVR序列是以保藏號PTA-6243保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的HVR序列。在一個實施方案中，本發明的分離的抗體中的HVR序列是以保藏號PTA-6244保藏于美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的HVR序列。在一個方面中，本發明提供一種分離的免疫球蛋白多肽，其包含如下所述的重鏈可變域和/或輕鏈可變域，且其特異性結合人IFNAR2:所述重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列是由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列。例如，在一個方面中，本發明提供一種分離的抗體，其包含如下所述的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列，且其特異性結合人IFNAR2:所述重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列是由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列。在一個實施方案中，所述分離的抗體包含以保藏號為PTA-6242保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列。在一個實施方案中，所述分離的抗體包含以保藏號為PTA-6243保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列。在一個實施方案中，所述分離的抗體包含以保藏號為PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列。在一個方面中，本發明提供一種IFNAR2抗體，它由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細月包系的抗體編碼序列所編碼。在一個實施方案中，本發明提供一種分離的抗體，它與以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體結合人IFNAR2上相同的表位。在一個方面中，本發明提供一種分離的抗體，它與以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體竟爭對人IFNAR2的結合。在本發明抗體的一個實施方案中，所述抗體抑制人白細胞干擾素的抗病毒活性。在本發明抗體的一個實施方案中，所述抗體抑制人a干擾素的抗病毒活性。在本發明抗體的一個實施方案中，至少大約IO嗎/ml的全長IgG形式的所述抗體抑制大約0.5U/ml到大約1000U/ml人白細胞干擾素的至少大約25%,40%,50%，75%,或90%的抗病毒活性。在一個實施方案中，白細胞干擾素為大約10U/ml。在本發明抗體的一個實施方案中，至少大約IOlag/ml的全長IgG形式的所述抗體抑制大約1000U/mla干擾素的至少大約25%,40%,50%，75°/0，或90%的抗病毒活性。在本發明抗體的一個實施方案中，至少大約O.Ol,0.04，0.1,0.4，1.1,3.3,10或20嗎/ml的全長IgG形式的所述抗體抑制大約25U/ml(3干擾素的至少大約25%,40°/。，50%，75%，或90%的抗病毒活性。在一個實施方案中，抗體濃度為至少大約10嗎/ml。在一個實施方案中，至少大約10嗎/ml4元病毒活寸生。在本發明抗體的一個實施方案中，全長IgG形式的所述抗體以大約300pM或更好的結合親和力特異性結合人IFNAR2。在一個實施方案中，結合親和力為大約280pM或更好。在一個實施方案中，結合親和力為大約200pM或更好。在一個實施方案中，結合親和力為大約100pM或更好。在一個實施方案中，結合親和力為大約60pM或更好。在一個實施方案中，本發明抗體以基本相等的抗體效價阻斷a干擾素和卩干擾素的抗病毒活性。在一個實施方案中，本發明抗體在體外阻斷第一種I型干擾素(afirstTypeIinterferon)(例如a干擾素)和第二種I型干擾素(asecondTypeIinterferon)(例如(3干擾素)的抗病毒活性的效力基本相等。例如，在一個實施方案中，相等量的本發明抗體能夠阻斷第一種I型干擾素和第二種I型干擾素的至少約50%、75%、85%、90%或95%的抗病毒活性，其中這些干擾素分別以它們各自在WISH細胞生物測定(例如，如下文的實施例中所述)中的近似最優抗病毒量施用，且其中所述第二種I型干擾素是(3干擾素。在一個實施方案中，第一種I型干擾素是a干擾素。在一個實施方案中，第一種I型干擾素是白細胞干擾素。本發明的抗體可以是多種形式。例如，本發明的抗體可以是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。在一個實施方案中，本發明的抗體不是人抗體，例如，它不是異種移植小鼠(xenomouse)中產生的抗體(例如，如W096/33735中所述的)。本發明的抗體可以是全長的抗體或者是其片段(例如，包含抗原結合部分的片段)。在一個實施方案中，本發明的抗體不是下列抗體由具有ATCC保藏號HB-12426、12427和/或12428的雜交瘤細胞系所產生的抗體；或1993年出版的JournalofBiologicalChemistry第268巻第10895到10899頁描述的IFNAR2抗體；或PCT公布W096/33735、WO96/34096、W09741229,歐洲專利588177B1、927252、676413,和/或美國專利6458932和6136309中/>開的分離的IFNAR2抗體。在一個實施方案中，本發明的抗體不與下述抗體竟爭對人IFNAR2的結合由具有ATCC保藏號HB-12426、12427和/或12428的雜交瘤細胞系所產生的抗體；或1993年出版的JournalofBiologicalChemistry第268巻第10895到10899頁描述的IFNAR2抗體；或PCT乂>布W096/33735、WO96/34096、W09741229,歐洲專利588177Bl、927252、676413,和/或美國專利6458932和6136309中公開的分離的IFNAR2抗體。在一個實施方案中，本發明的抗體不與下述抗體所結合的人IFNAR2上的表位結合由具有ATCC保藏號HB-12426、12427和/或12428的雜交瘤細胞系所產生的抗體；或1993年出版的JournalofBiologicalChemistry第268巻第10895到10899頁描述的IFNAR2抗體；或PCT公布W096/33735、WO96/34096、W09741229,歐洲專利588177Bl、927252、676413，和/或美國專利6458932和6136309中公開的分離的IFNAR2抗體。在一個方面中，本發明提供包含一種或多種本發明抗體以及載體的組合物。在一個實施方案中，所述載體是可藥用的。在一個方面中，本發明提供編碼本發明的免疫球蛋白多肽(例如抗體)的核酸。在一個方面中，本發明提供包含本發明核酸的載體。在一個方面中，本發明提供包含本發明核酸或載體的宿主細胞。載體可以是任何類型，例如重組載體諸如表達載體。可以使用多種宿主細胞中的任何一種。在一個實施方案中，宿主細胞是原核細胞，例如大腸桿菌(￡.co//)。在一個實施方案中，宿主細胞是真核細胞，例如哺乳動物細胞諸如中華倉鼠卵巢(CHO)細胞。在一個方面中，本發明提供制備本發明抗體的方法。例如，本發明提供一種制備抗IFNAR2抗體(如本文定義，其包括全長抗體及其片段)的方法，所述方法包括在合適的宿主細胞中表達編碼所述抗體(或其片段)的本發明重組載體，并回收所述抗體。在一個方面中，本發明提供一種制品，其包括容器和該容器中容納的組合物，其中所述組合物包含一種或多種本發明抗體。在一個實施方案中，所述組合物包含本發明的核酸。在一個實施方案中，包含本發明的免疫球蛋白多肽(例如抗體)的組合物還包含載體，所述載體在一些實施方案中是可藥用的。在一個實施方案中，本發明的制品還包含用于對受試者施用所述組合物(例如抗體)的iJL明書。在一個方面中，本發明提供一種試劑盒，包括包含組合物的第一容器，所述組合物包含一種或多種本發明抗體；及包含緩沖劑的第二容器。在一個實施方案中，所述緩沖劑是可藥用的。在一個實施方案中，包含抗體的組合物還包含載體，所述載體在一些實施方案中是可藥用的。在一個實施方案中，試劑盒還包含用于對受試者施用所述組合物(例如抗體)的說明書。在一個方面中，本發明提供本發明的抗體在制備用于疾病的治療性和/或預防性處理的藥物中的用途，所述疾病諸如細胞增殖性病癥或免疫(例如自身免疫)病癥。在一個方面中，本發明提供本發明的核酸在制備用于疾病的治療性和/或預防性處理的藥物中的用途，所述疾病諸如細胞增殖性病癥或免疫(例如自身免疫)病癥。性和/或預防性處理的藥物中的用途，所述疾病諸如細胞增殖性病癥或免疫(例如自身免疫)病癥。在一個方面中，本發明」提供本發明的宿主細胞在制備用于疾病的治療性和/或預防性處理的藥物中的用途，所述疾病諸如細胞增殖性病癥或免疫(例如自身免疫)病癥。在一個方面中，本發明提供本發明的制品在制備用于疾病的治療性和/或預防性處理的藥物中的用途，所述疾病諸如細胞增殖性病癥或免疫(例如自身免疫)病癥。在一個方面中，本發明提供本發明的試劑盒在制備用于疾病的治療性和/或預防性處理的藥物中的用途，所述疾病諸如細胞增殖性病癥或免疫(例如自身免疫)病癥。本發明提供可用于調節與I型干擾素/IFNAR2信號軸(axis)失調相關的疾病狀態的方法和組合物。該信號途徑參與了多種生物學和生理學功能。本發明的抗體能夠調節該途徑，從而可用于調節與一種或多種上述生物學和生理學功能異常相關的狀況。因此，在一個方面中，本發明提供一種方法，它包括對受試者施用本發明抗體，從而治療病理狀況。在一個方面中，本發明提供一種治療與a干擾素、p干擾素和/或IFNAR2的過表達和/或異常高水平活性相關的疾病或狀況的方法，所述方法包括對受試者施用有效量的本發明抗體，從而治療所述疾病/狀況。在一個實施方案中，所述受試者是哺乳動物。在一個實施方案中，所述受試者是人。可以使用本發明的方法和組合物治療與a干擾素、卩干擾素和/或IFNAR2的過表達和/或異常高水平活性相關的多種疾病。例如，在一個實施方案中，用本發明的方法或組合物進行治療的疾病是自身免疫疾病，例如胰島素依賴性糖尿病(IDDM);系統性紅斑狼瘡(SLE)(其可包括例如狼瘡性腎炎)；自身免疫性曱狀腺炎；斯耶格倫氏綜合征(Sjogen，ssyndrome);銀屑病；炎性腸病(例如潰瘍性結腸炎，克羅恩氏病(Crohn，sdisease));類風濕性關節炎和IgA腎病。在一個方面中，本發明提供一種抑制細胞或組織中I型干擾素/IFNAR2信號傳導的方法，所述方法包括使細胞或組織接觸有效量的本發明抗體，從而抑制所述細胞或組織中的I型干擾素/IFNAR2信號傳導。在一個方面中，本發明提供一種治療受試者中與I型干擾素/IFNAR2信號傳導失調相關的病理狀況的方法，所述方法包括使細胞或組織接觸有效量的本發明抗體，從而治療所述狀況。在一個實施方案中，所述病理狀況與I型干擾素/IFNAR2表達上調相關。可以使用本發明的方法來影響任何合適的病理狀態，例如，與I型干擾素/IFNAR2信號途徑失調相關的細胞和/或組織。在一個實施方案中，本發明的方法所革巴定的細胞是免疫細胞。在一個實施方案中，所述免疫細胞是T細胞、B細胞或單核細胞。在一個實施方案中，本發明抗體對I型干擾素/IFNAR2信號傳導的抑制與通過Tyk2、Jakl、Statl和/或Stat2的信號傳導的抑制相關。在一個實施方案中，本發明抗體對I型干擾素/IFNAR2細胞信號傳導的抑制與ISRE復合物形成的抑制相關。在一個實施方案中，本發明抗體對I型干擾素/IFNAR2細胞信號傳導的抑制與受干擾素調控的基因(例如Mx-l、MHCI、CD69、Fas)的表達的抑制相關。本發明的方法可進一步包含額外的治療步驟/藥劑。例如，在一個實施方案中，還可以對患者施用類固醇(例如對自身免疫疾病而言)。在一個方面中，本發明的抗體與毒素諸如細胞毒劑連接。這些分子可以與添加劑/增強劑諸如類固醇相組合來配制或施用。在一個方面中，本發明提供一種檢測樣品中IFNAR2之存在的方法，包括使所述樣品接觸本發明的抗體。在一個方面中，本發明提供一種診斷疾病的方法，包括測定組織細胞的測試樣品中IFNAR2的水平，所述測定是通過使該樣品與本發明抗體接觸，這樣該抗體所結合的IFNAR2可指示該樣品中IFNAR2的存在和/或量。在一個方面中，本發明提供一種診斷疾病的方法，包括測定組織細胞的測試樣品中I型干擾素/IFNAR2生物學活性的水平，其中所述測定是通過使該樣品與本發明抗體接觸，這樣，該樣品中所述生物學活性相比于對照樣品的減少可指示測試樣品中I型干擾素/IFNAR2的存在和/或生物學活性水平的i曽力口。在另一個方面中，本發明提供一種確定個體是否有風險患上疾病的方法，包括測定組織細胞的測試樣品中I型干擾素/IFNAR2的水平，所述測定是通過使測試樣品與本發明的抗體接觸，從而確定樣品中存在的IFNAR2的量，其中，相比于包含與測試樣品細胞來源相同的正常組織的對照樣品，測試樣品中IFNAR2的水平升高指示所述個體具有患上所述疾病的風險。在本發明的方法的一個實施方案中，根據測試樣品中被抗體結合的IFNAR2的量所指示的IFNAR2多肽的量來確定IFNAR2的水平。任選地，可將該方法中采用的抗體可檢測性地標記，附著于固體支持物，等等。在本發明的方法的一個實施方案中，I型干擾素/IFNAR2生物學活性抑制的量是基于與經由I型干擾素/IFNAR2途徑的信號傳導相關的生物學活性的量來確定的，例如通過抑制經由Tyk2，Jakl，Statl和/或Stat2的信號傳導；通過抑制ISRE復合物的形成，和/或通過抑制受IFN調控的基因的表達。在一個方面中，本發明提供一種使本發明的抗體與體液例如血液中存在的IFNAR2結合的方法。在另一個方面中，本發明涉及一種使本發明的抗體結合表達IFNAR2多肽的細胞的方法，其中所述方法包括使所述細胞與所述抗體在適于所述抗體結合IFNAR2的條件下接觸并容許它們之間結合。在一個實施方案中，所述抗體對細胞上IFNAR2的結合抑制IFNAR2的生物學功能。在一個實施方案中，所述抗體不抑制IFNAR2與其配體的相互作用。在一個實施方案中，所述抗體與細胞上IFNAR2分子結合并抑制另一分子與所述IFNAR2分子結合。在一個方面中，本發明提供一種使治療劑靶向宿主中IFNAR2相關組織的方法，該方法包括對宿主施用所述治療劑，其中該治療劑是與本發明抗體連接的形式，從而使該治療劑靶向宿主中的IFNAR2相關組織。在一個實施方案中，結合IFNAR2的抗體能夠特異性結合位于細胞上的IFNAR2(在體外或體內)，例如當IFNAR2存在于細胞表面時。附圖簡述圖1是顯示WISH干擾素生物測定數據的圖表，該生物測定評估抗體1922和1923在多種a干擾素濃度條件下的中和作用。圖2是顯示WISH干擾素生物測定數據的圖表，該生物測定評估抗體1922在多種人白細胞干擾素濃度或多種抗體濃度條件下的中和作用。圖3是顯示WISH干擾素生物測定數據的圖表，該生物測定評估抗體1923在多種人白細胞干擾素濃度或多種抗體濃度條件下的中和作用。圖4是顯示WISH干擾素生物測定數據的圖表，該生物測定評估抗體1922和1923針對干擾素a或干擾素(3的中和作用。圖5是顯示WISH干擾素生物測定數據的圖表，該生物測定評估抗體1922針對不同濃度干擾素(3的中和作用。圖6是顯示WISH干擾素生物測定數據的圖表，該生物測定評估抗體1922在多種抗體濃度條件下的中和作用。圖7是顯示WISH干擾素生物測定數據的圖表，該生物測定評估抗體1923在多種抗體濃度條件下的中和作用。本發明的實施方式通用技術除非另有說明，本發明的實施將使用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的常規技術，它們都在本領域技術的范圍之內。文獻對這些沖支術作出了充分的iJL明，例如"MolecularCloning:ALaboratoryManual",secondedition(Sambrooketal.,1989);"OligonucleotideSynthesis"(M.J.Gait,ed.,1984);"AnimalCellCulture"(R.I.Freshney,ed.,1987);"MethodsinEnzymology"(AcademicPress,Inc.);"CurrentProtocolsinMolecularBiology"(F.M.Ausubeletal.,eds,，1987,andperiodicupdates);"PCR:ThePolymeraseChainReaction",(Mullisetal"ed.，1994);"APracticalGuidetoMolecularCloning"(PerbalBernardV.,1988);"PhageDisplay:ALaboratoryManual"(Barbasetal"2001)。定義如本文4吏用的，術語"I型干擾素(typeIinterferon)"和"人I型千擾素"定義為屬于人源和合成a干擾素(IFN-a)、co干擾素(IFN-co)和卩干擾素(IFN-P)類型，并且結合共同的細胞受體的所有種類的天然和合成干擾素。天然人a干擾素包括23種密切相關的蛋白質，它們由不同的基因所編碼，并具有高度結構同源性(WeissmannandWeber，Prog.Nucl.Acid.Res.Mol.Biol,,33:251(1986);J.InterferonRes"13:443-444(1993))。人IFN畫a座位包括兩個亞家族。第一個亞家族由至少14種功能性非等位基因組成，包括編碼IFN-aA(IFN-a2)、IFN-aB(IFN-a8)、IFN誦aC(IFN-a10)、IFN-aD(IFN-al)、IFN-aE(IFN匿a22)、IFN-aF(IFN畫a21)、IFN-aG(IFN-a5)、IFN-al6、IFN-al7、IFN-a4、IFN-a6、IFN-a7和IFN-aH(IFN-al4)的基因，以及具有至少80%同源性的假基因。第二個亞家族，an或co，包括至少5種假基因和1種功能性基因(命名為"IFN-aul"或"IFN-co"),與IFN-a基因有70%同源性(Weissmann和Weber(1986))。一般認為人IFN-卩是由單拷貝基因編碼的。如本文所用的，術語"第一人a干擾素(hIFN-a)受體(Firsthumaninterferon-a(hIFN-a)receptor)"、"IFN-aR，，、"hIFNARl"、"IFNAR1"和"Uze鏈"定義為Uzeetal.,Cell,60:225-234(1990)克隆的557個氨基酸的受體蛋白質，其包括409個殘基的胞外域，21個殘基的跨膜域，和100個殘基的胞內域，如Uzeetal.第229頁上圖5所顯示的。在一個實施方案中，上述術語包括含有IFNAR1的胞外域(ECD)(或ECD的片段)的IFNAR1片段。如本文所用的，術語"第二人a干擾素(hIFN-a)受體"、"IFN-a卩R，，、"hlFNAR2"、"IFNAR2"和"Novick鏈"定義為Domanskietal.，J.Biol.Chem.,37:21606-21611(1995)所克隆的515個氨基酸的受體蛋白質，其包括217個殘基的胞外域，21個殘基的跨膜域，和250個殘基的胞內域，如Domanskietal.第21608頁上圖1所顯示的。在一個實施方案中，上述術語包括含有IFNAR2的胞外域(ECD)(或ECD的片段)的IFNAR2片段，以及IFNAR2的可溶形式，諸如與免疫球蛋白序列的至少一部分融合的IFNAR2ECD。"分離的"抗體指已經鑒定且與其天然環境成分分開和/或回收的抗體。其天然環境的污染性成分指會干擾該抗體的診斷或治療用途的物質，可包括酶、激素、和其它蛋白質性質或非蛋白質性質的溶質。在一個實施方案中，將抗體純化至(1)根據Lowry法的測定，抗體重量超過95%,最優選重量超過99%,(2)足以通過使用轉杯式測序儀獲得至少15個殘基的N-末端或內部氨基酸序列的程度，或(3)根據使用考馬斯藍或優選銀染色的還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE，達到同質。分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體，因為抗體天然環境的至少一種成分不會存在。然而，分離的抗體通常將通過至少一個純化步驟來制備。本文所用的術語"抗IFNAR2抗體"是指能夠結合IFNAR2的抗體。如本文所用的，具有"阻斷I型干擾素對IFNAR2的結合"的性質或能力的本發明抗體定義為這樣的抗IFNAR2抗體，它能夠結合IFNAR2，使得IFNAR2結合一種或多種I型干擾素的能力減弱或消除。如本文所用的，短語"基本類似"、"基本相同"、"等同"或"基本等同"是指兩個數值(例如一種分子與某一分子相關，另一種分子與某一參照/比較分子相關)之間足夠高的相似程度，使得本領域技術人員認為在這兩個數值所量度的生物學特征(例如，Kd值，抗病毒作用等)的背景下，這兩個數值間的差異幾乎沒有生物學和/或統計學上的顯著性。作為參照/比較分子的值的函數，所述兩個值之間的差異優選小于約50%,優選少于約40%,優選少于約30°/。，優選少于約20%，優選少于約10%。如本文所用的，短語"顯著減少(或降低)"或"顯著不同"，是指兩個數值(通常一個與某一分子相關，另一個與某一參照/比較分子相關)之間足夠高的差異程度，使得本領域技術人員認為在這兩個數值所量度的生物學特征(例如，Kd值，HAMA應答，抗病毒作用等)的背景下，這兩個數值間的差異具有統計學上的顯著性。作為參照/比較分子的值的函數，所述兩個值之間的差異優選大于約10%，優選大于約20%，優選大于約30%,優選大于約40%,優選大于約50%。"結合親和力，，通常指分子(例如抗體)的單一結合位點與其結合配偶(例如抗原)之間全部非共價相互作用總和的強度。除非另有說明，在用于本文時，"結合親和力"指反映結合對的成員(例如抗體和抗原)之間1:1相互作用的內在結合親和力。分子X對其配偶Y的親和力通常可用解離常數(Kd)來表述。親和力可通過本領域知道的常用方法來測量，包括本文中所描述的。低親和力抗體通常緩慢地結合抗原且趨于容易解離，而高親和力抗體通常更快地結合抗原且趨于保持更長時間的結合。本領域知道測量結合親和力的多種方法，其中任一種都可用于本發明的目的。下文描述了具體的示例性實施方案。在一個實施方案中，依照本發明的"Kd"或"Kd值"是通過如下述測定法所述使用目的抗體的Fab型式及其抗原進行的放射性標記抗原結合測定法(RIA)來測量的通過在存在未標記抗原的滴定系列的條件下，用最小濃度的(1251)標記抗原平衡Fab,然后用抗Fab抗體包被板捕捉結合的抗原來測量Fab對抗原的溶液結合親和力(Chen,etal.,JMolBiol293:865-881(1999))。為了確定測定法的條件，將微量滴定板(Dynex)用50mM碳酸鈉(pH9.6)中的5jig/ml捕捉用抗Fab抗體(CappelLabs)包被過夜，隨后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白于室溫(約23°C)封閉2-5小時。在非吸附板(Nunc#269620)中，將100pM或26pM(1251)-抗原與連續稀釋的目的Fab(例如與Prestaetal.,CancerRes.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗體，Fab-12的評估一致)混合。然后將目的Fab溫育過夜；然而，溫育可持續更長時間(例如65個小時)以保證達到平衡。此后，將混合物轉移至捕捉板，于室溫溫育(例如l小時)。然后除去溶液，并用含0.1%Tween-20的PBS洗板8次。平板干燥后，力口入150(J/孔閃爍液(MicroScint-20;Packard),然后在Topcount伽馬計數器(Packard)上對平板計數10分鐘。選擇各Fab給出小于或等于最大結合之20%的濃度用于竟爭性結合測定法。依照另一實施方案，Kd或Kd值是通過表面等離振子共振測定法使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)于25。C使用固定化抗原CM5芯片在約10個響應單位(RU)測量的。簡而言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-乙基-N，-(3-二曱氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖香生物傳感器芯片(CM5，BIAcorelnc.)。將抗原用10mM乙酸鈉pH4.8稀釋至5嗎/ml(約0.2pM),然后以5nl/分鐘的流速注入以獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封閉未反應基團。為了進行動力學測量，于25°C以約25^1/分鐘的流速注入在含0.05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續稀釋的Fab(0.78nM至500nM)。使用筒單一對一朗格謬爾(Langmuir)結合模型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通過同時擬合結合和解離傳感圖計算結合速率(k加)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd)以比率k。f/k。n計算。參見例如Chen，Y.,etal.,JMolBiol293:865-881(1999)。如果根據上文表面等離振子共振測定法，結合速率超過1(^M"S",那么結合速率可使用焚光淬滅技術來測定，即根據分光計諸如配備了停流裝置的分光光度計(AvivInstruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測量，存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBSpH7.2中20nM抗抗原抗體(Fab形式)于25。C的熒光發射強度(激發=295謡；發射弓40nm,lfem帶通(band-pass))的升高或降低。依照本發明的"結合速率，，(on陽rate,rateofassociation,associationrate)或"k。n"也可通過上文所述相同的表面等離振子共振技術來測定，其中使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，于25。C使用固定化抗原CM5芯片及大約10個響應單位(RU)的條件進行測定。簡而言之，依照供應商的說明書用鹽酸iV-乙基-7V'-(3-二曱氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和TV-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖苦生物傳感器芯片(CM5,BIAcoreInc.)。將抗原用10mM乙酸鈉pH4.8稀釋至5嗎/ml(約0.2pM),然后以5pl/分鐘的流速注入以獲得約IO個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。然后注入1M乙醇胺以封閉未反應基團。為了進行動力學測量，于25。C以約25|^1/分鐘的流速注入在含0.05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續稀釋的Fab(0.78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結合才莫型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通過同時擬合結合和解離傳感圖計算結合速率(k^)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd)以比率k。ff/k。n計算。參見例如Chen,Y.，etal.,JMolBiol293:865-881(1999)。然而，如果根據上文表面等離子共振測定法，結合速率超過106]^13-1,那么結合速率優選使用熒光淬滅技術來測定，即在根據分光計諸如配備了停流裝置的分光光度計(AvivInstruments)或8000系歹'JSLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測量，存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBSpH7.2中20nM抗抗原抗體(Fab形式)于25。C的熒光發射強度(激發二295nm;發射340nm，16nm帶通)的升高或降低。在一個實施方案中，使用Fab形式的抗體和抗原進行放射標記抗原結合測定"RIA"來測量根據本發明的"Kd"或"Kd值"，如下述的測定法所描述的該測定法在未標記抗原的滴定系列存在的條件下使用最小濃度的(1251)標記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體包被的平板捕獲結合的抗原(Chen，etal.,(1999)J.MolBiol293:865-881)。為了確立該測定法的條件，將4效量滴定板(Dynex)用含5|ig/ml抗Fab捕捉抗體(CappelLabs)的50mM碳酸鈉(pH9.6)包被過夜，然后用含2%(w/v)牛血清白蛋白的PBS于室溫(大約23。C)封閉2到5個小時。在非吸附性平板(Nunc弁269620)中將100pM或26pM的[1251]-抗原與目標Fab的系列稀釋物混合(與Prestaetal.,(1997)CancerRes.57:4593-4599中對一種抗VEGF抗體Fab-12的評估一致)。然后將目標Fab溫育過夜；但是，可以繼續溫育更長時間(例如65個小時)以保證達到平衡。然后將所述混合物轉移到捕捉平板中，于室溫溫育1小時。然后移去溶液，用含0.1%Tween-20的PBS將平壽反洗滌8次。待平板干燥后，加入150pl/孑L的閃爍劑(MicroScint-20;Packard),將平4反在Topcount伽馬計凄t器(Packard)上計數10分鐘。選擇每種Fab的產生少于或等于20%最大結合的濃度用于竟爭性結合測定。根據另一個實施方案，利用表面等離振子共振才支術，4吏用BIAcore-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)于25。C使用固定化抗原CM5芯片以約10個響應單位(RU)進行測定。簡而言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-乙基-N，-(3-二曱氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5,BIAcoreInc.)。將抗原用10mM乙酸鈉pH4.8稀釋至5昭/ml(約0.2^M)，然后以5^1/分鐘的流速注入以獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封閉未反應基團。為了進行動力學測量，于25。C以約25^1/分鐘的流速注入在含0.05°/。Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續稀釋的Fab(0.78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格繆爾(Langmuir)結合才莫型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通過同時擬合結合和解離傳感圖計算結合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd)以比率k。ff/k。n計算。參見例如Chen,Y.，etal.，(1999)JMolBiol293:865-881。然而，如果根據上文表面等離子共振測定法，結合速率超過106M-1S-1,那么結合速率可使用熒光淬滅技術來測定，即在根據分光計諸如配備了停流裝置的分光光度計(AvivInstruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測量，存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBSpH7.2中20nM抗抗原抗體(Fab形式)于25'C的熒光發射強度(激發二295nm;發射二340nm，16nm帶通)的升高或降低。在一個實施方案中，利用與上述同樣的表面等離振子共振技術，使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore，Inc.,Piscataway,NJ)于25。CM吏用固定化抗原CM5芯片以約10個響應單位(RU)來測定依照本發明的"結合速率，，或"k。n"。簡而言之，依照供應商的說明書用鹽酸N-乙基-N，-(3-二曱氨基丙基)-碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物傳感器芯片(CM5,BIAcorelnc.)。將抗原用10mM乙酸鈉pH4.8稀釋至5pg/ml(約0.2|iM),然后以5pl/分鐘的流速注入以獲得約10個響應單位(RU)的偶聯蛋白質。然后注入1M乙醇胺以封閉未反應基團。為了進4亍動力學測量，于25。C以約25^1/分鐘的流速注入在含0.05%Tween-20的PBS(PBST)中兩倍連續稀釋的Fab(0.78nM至500nM)。使用簡單一對一朗格纟夢爾(Langmuir)結合才莫型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通過同時擬合結合和解離傳感圖計算結合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。平衡解離常數(Kd)以比率k。^k。n計算。參見例如Chen,Y"etal.，(1999)JMolBiol293:865-881。然而，如果根據上文表面等離子共振測定法，結合速率超過106M"S"，那么結合速率可使用萸光淬滅技術來測定，即在根據分光計諸如配備了1亭流裝置的分光光度計(AvivInstruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度計(ThermoSpectronic)中用攪拌比色杯的測量，存在濃度漸增的抗原的條件下，測量PBSpH7.2中20nM抗抗原抗體(Fab形式)于25°C的熒光發射強度(激發-295nm;發射-340nm，16nm帶通)的升高或降低。術語"載體"在用于本文時意指能夠運輸與其連接的其它核酸的核酸分子。一類載體是"質粒"，指其中可連接另外的DNA區段的環狀雙鏈DNA環。另一類載體是噬菌體載體。另一類載體是病毒載體，其中可將另外的DNA區段連接到病毒基因組中。某些載體能夠在其所導入的宿主細胞中自主復制(例如具有細菌復制起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)。其它載體(例如非附加型哺乳動物載體)可在導入宿主細胞后整合到宿主細胞的基因組中，由此隨著宿主基因組一起復制。此外，某些載體能夠指導與其可操作連接的基因表達。此類載體在本文中稱為"重組表達載體"(或簡稱為"重組載體")。通常，在重組DNA技術中有用的表達載體常常是質粒形式。在本說明書中，"質粒，，和"載體"可互換使用，因為質粒是載體的最常用形式。"多核芬酸"或"核酸，，在本文中可互換使用，指任何長度的核苷酸聚合物，包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經過修飾的核苷酸或堿基、和/或其類似物，或者是可通過DNA或RNA聚合酶或者通過合成反應摻入聚合物的任何底物。多核苷酸可包含經過修飾的核苦酸，諸如曱基化核苷酸及其類似物。"抗體"(Abs)和"免疫球蛋白"(Igs)是具有相同結構特征的糖蛋白。抗體展現對特定抗原的結合特異性，而免疫球蛋白包括抗體和其它通常缺少抗原特異性的類抗體分子。后一種類的多肽，例如，在淋巴系統中以低水平產生，而在骨髓瘤中產生的水平升高。術語"抗體，，和"免疫球蛋白"可互換地以最廣義使用，包括單克隆抗體(例如全長或完整的單克隆抗體)、多克隆抗體、單價、多價抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要它們展現期望的生物學活性)，還可以包括特定的抗體片段(如本文進一步詳述的)。抗體可以是嵌合的、人的、人源化的和/或親和力成熟的。根據其重鏈恒定域氨基酸序列，抗體(免疫球蛋白)可歸入不同的"類"。免疫球蛋白有五種主要的類IgA、IgD、IgE、IgG和IgM,其中有些可進一步分為"亞類"(同種型),例如IgG-l、IgG-2、IgA-l,IgA-2，等等。將與抗體的不同類對應的重鏈恒定域分別稱作a、5、s、y和P。不同類別免疫球蛋白的亞基結構和三維構造是眾所周知的，一般性描述于例如Abbasetal.，CellularandMol.Immunology,4thed.(2000)。抗體可以是抗體與一種或多種其它蛋白質或肽共價或非共價締合而形成的更大融合分子的一部分。術語"全長抗體"、"完整抗體"和"整個抗體"在本文中可互換使用，指基本上完整形式的抗體而非如下文所定義的抗體片段。該術語具體指重鏈包含Fc區的抗體。"抗體片段"只包含完整抗體的一部分，其中所述部分保留該部分存在于完整抗體中時通常與之有關的至少一項功能，優選保留大多數或所有功能。在一個實施方案中，抗體片段包含完整抗體的抗原結合位點，從而保留結合抗原的能力。在另一個實施方案中，抗體片段，例如包含Fc區的抗體片段，保留通常與Fc區存在于完整抗體中時通常與之有關的至少一項生物學功能，諸如FcRn結合、抗體半衰期調節、ADCC功能、和/或補體結合。在一個實施方案中，抗體片段是具有與完整抗體基本上相似的體內半衰期的單價抗體。例如，這樣的抗體片段可包含抗原結合臂，其與可賦予該片段以體內穩定性的Fc序列相連。術語"單克隆抗體，，在用于本文時指從一群基本上同質的抗體獲得的抗體，即構成群體的各個抗體相同，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變外。單克隆抗體是高度特異性的，針對單一抗原。此外，與典型的包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的常規(多克隆)抗體制備物不同，每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。單克隆抗體在本文中明確包括"嵌合"抗體，以及此類抗體的片段，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬于特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或屬于另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，只要它們展現出期望生物學活性(美國專利第4,816,567號；Morrisonetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855(1984))。非人(例如鼠源)抗體的"人源化，，形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在一個實施方案中，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區殘基用具有期望特異性、親和力和/或能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類的高變區殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(FR)殘基用相應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。進行這些修飾是為了進一步改進抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含至少一個、通常兩個基本上整個如下可變區，其中整個或基本上整個高變環對應于非人免疫球蛋白的高變環，且整個或基本上整個FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定區。更多細節參見Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.，Nature332:323-329(1988)和Presta，Curr.Op.Struct.Biol,2:593-596(1992)。還參見下列綜述文章和其中引用的參考文獻VaswaniandHamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998);Harris,Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038(1995);HurleandGross,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。Biotech.5:428-433(1994).術語"高變區"、"HVR"或"HV"在用于本文時指抗體可變域中序列上高度可變和/或形成結構上定義的環的區域。術語"HVR"或"HV"前的字母"HC"和"LC"分別指重鏈和輕鏈的HVR或HV。通常，抗體包含六個高變區三個在VH中(H1、H2、H3)，三個在VL中(Ll、L2、L3)。本文中使用且涵蓋許多高變區的敘述。Kabat互補決定區(CDR)是以序列變異性為基礎的，而且是最常用的(Kabatetal.，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。Chothia改為指結構環的位置(ChothiaandLesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM高變區代表KabatCDR和Chothia結構環之間的折衷，而且得到OxfordMolecular的AbM抗體建模軟件的使用。"接觸"高變區是以對可獲得的復合物晶體結構的分析為基礎的。下文記錄了這些高變區中每一個的殘基。環KabatAbMChothia接觸L24-L34L24-L34L26-L32L30-L36L2L50-L56L50-L56L50-L52L46-L55L89-L97L89-L97L91-L96L89-L96HIH31畫H35BH26-H35BH26-H32H30畫H35B(Kabat編號)HIH31-H35H26-H35H26-H32H30-H35(Chothia編號)H2H50-H65H50-H58H53-H55H47-H58H3H95-H102H95-H102H96-H101H93-H101"框架"或"FR"殘基是指除本文定義的高變區殘基之外的那些可變域殘基。抗體的"可變區"或"可變域"是指抗體的重鏈或輕鏈的氨基末端域。這些域通常是抗體最具可變性的部分，并含有抗原結合位點。"人源抗體，，或"人抗體"指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對的抗體。人源抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結合殘基的人源化抗體。"親和力成熟的"抗體指在其一個或多個HVR中具有導致抗體對抗原的親和力與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進的一處或多處改變的抗體。在一個實施方案中，親和力成熟的抗體具有納摩爾或甚至皮摩爾水平的對耙抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過本領域已知流程生成。Marks^a/.,5/0/Tec/z"o/ogy10:779-783(1992)記載了通過VH和VL結構域改組的親和力成熟。下列文獻記載了CDR和/或框架殘基的隨機誘變-.Barbasda/"Prac.iVaf.^cad91:3809-3813(1994);Schier"(7e"e169:147-155(1995);Yeltonaa/.,J/m附wwo/.155:1994-2004(1995);Jacksona/.,7!/mmwwo/.154(7):3310-9(1995);Hawkinsa/.，il/o/.丑/o/'226:889-896(1992)。"阻斷性"抗體或"拮抗性"抗體是抑制或降低其所結合的抗原的生物學活性的抗體。優選的阻斷性抗體或拮抗劑抗體顯著地或完全地抑制抗原的生物學活性。"激動性"抗體用于本文時是指模仿目標多肽的至少一種功能活性的抗體o"病癥"是指任何可得益于本發明抗體治療的狀況。這包括慢性和急性病癥，包括使哺乳動物易患所討論病癥的那些病理狀況。本文要治療的病癥的非限制性例子包括炎癥性病癥、免疫性病癥和其它與干擾素有關的病癥。"自身免疫病"在本文中指源于且針對個體自身組織的非惡性疾病或病癥。自身免疫病在本文中明確排除惡性或癌性疾病或狀況，尤其排除B細胞淋巴瘤、急性成淋巴細胞白血病(ALL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、毛細月包白血病(Hairycellleukemia)和十曼性成髓細月包白血病(chronicmyeloblastsleukemia)。自身免疫性疾病或病癥的例子包括但不限于炎性應答，諸如炎性皮膚病，包括銀屑病和皮炎(例如特應性皮炎)；系統性硬皮病和硬化；與炎性腸病有關的應答(諸如克羅恩氏(Crohn)病和潰瘍性結腸炎)；呼吸窘迫綜合征(包括成人呼吸窘迫綜合癥；ARDS);皮炎；腦膜炎；腦炎；葡萄膜炎；結腸炎；腎小球腎炎；過敏狀況，諸如濕疹和哮喘及涉及T細胞浸潤和慢性炎性應答的其它狀況；動脈粥樣硬化；白細胞粘著缺陷；類風濕性關節炎；系統性紅斑狼瘡(SLE)(包括^f旦不限于狼瘡腎炎，皮膚狼瘡)；糖尿病(例如I型糖尿病或胰島素依賴性糖尿病)；多發性硬化；雷諾氏(Reynaud)綜合征；自身免疫性曱狀腺炎；橋本氏曱狀腺炎；變應性腦脊髓炎；斯耶格倫氏(Sjogren)綜合征；幼發型糖尿病(juvenileonsetdiabetes);通常在肺結核病、結節病、多肌炎、肉芽腫病和脈管炎中發現的與細胞因子和T-淋巴細胞介導的急性和遲發性超敏反應有關的免疫應答；惡性貧血(阿狄森氏(Addison)病)；涉及白細胞滲出的疾病；中樞神經系統(CNS)炎性病癥；多器官損傷綜合征；溶血性貧血(包括但不限于冷球蛋白血癥或庫姆斯氏(Coombs)陽性貧血)；重癥肌無力；抗原-抗體復合物介導的疾病；抗腎小球基底膜病；抗磷脂綜合癥；過敏性神經炎；格雷夫斯氏(Graves)病；朗-伊二氏(Lambert-Eaton)肌無力綜合癥；大皰性類天皰裔；天皰瘡；自身免疫性多種內分泌腺病；萊特氏(Reiter)病；僵人(stiff-man)綜合癥；貝切特氏(Behcet)病；巨細胞動脈炎；免疫復合物腎炎；IgA腎病；IgM多神經病；免疫性血小板減少性紫癜(ITP)或自身免疫性血小板減少癥等。術語"細胞增殖性病癥"和"增殖性病癥"是指與某種程度的異常細胞增殖相關的病癥。在用于本文時，"治療"指試圖改變所治療個體或細胞的自然進程的臨床千預，可以是為了預防或在臨床病理學的進程中進行。治療的期望效果包括預防疾病的發生或復發、緩解癥狀、削弱疾病的任何直接或間接病理學后果、預防或減少炎癥和/或組織/器官損傷、減緩疾病進展的速率、改善或減輕疾病狀態、及減輕或改善預后。在有些實施方案中，本發明的抗體用于延遲疾病或病癥的發展。"有效量"是指在必須的劑量和時程條件下可有效地達到期望地治療或預防結果地量。本發明物質/分子的"治療有效量"可根據諸如個體的疾病狀態、年齡、性別和體重及該物質/分子在個體中引發期望應答的能力等因素而變化。治療有效量還指該物質/分子的治療有益效果勝過任何有毒或有害后果的量。"預防有效量，，指在必需的劑量和時間上有效實現期望的預防效果的量。通常而非必然，由于預防劑量是在疾病發作之前或在疾病的早期用于受試者的，因此預防有效量將低于治療有效量。如本文中所用的，術語"細胞毒劑"是指抑制或阻止細胞的功能和/或造成細胞破壞的物質。B.通用方法一般地，本發明提供可用于治療期望部分或全部阻斷I型干擾素活性的免疫介導病癥的抗IFNAR2抗體。在一個實施方案中，本發明的抗IFNAR2抗體用于治療自身免疫病癥，諸如上面提到的那些。在另一個實施方案中，本文提供的抗IFNAR2抗體用于治療移植物排斥或移植物抗宿主病。本發明的抗IFNAR2抗體的獨特性質使得它們特別有用于在患者中實現目標水平的免疫抑制。對于需要緊急介入的患者，可使用本文提供的導致廣譜I型干擾素活性消除(ablation)的抗IFNAR2抗體來盡可能多地減損不希望的免疫應答。對于需要維持免疫抑制的患者，可以使用本文提供的阻斷一種或多種(但不一定是所有)I型干擾素，或使用以不同的程度阻斷不同種類的I型干擾素的抗IFNAR2抗體，來部分減弱該患者的免疫系統，從而降低不希望的免疫應答的風險，同時使該患者I型干擾素介導的免疫的某些組分保持完整，以避免不希望的副作用，諸如感染。在另一個方面中，本發明的抗IFNAR2抗體可用作IFNAR2的檢測及分離用試劑，例如用于檢測多種細胞類型和組織中的IFNAR2表達，包括細胞群體中IFNAR2受體的密度和分布的確定以及基于IFNAR2受體表達的細胞分選。在另一個方面中，抗IFNAR2抗體可用于開發具有與本發明抗體相類似的I型干擾素阻斷活性模式的IFNAR2拮抗劑。例如，可以使用本發明的抗IFNAR2抗體來確定和鑒定具有相同IFNAR2結合特征和/或抗病毒阻斷能力的其它抗體。另一個例子是，可以使用本發明的抗IFNAR2抗體來鑒定與本文列舉的抗體結合基本相同的IFNAR2表位，包括線性表位和構象表位的其它抗IFNAR2抗體。可以在IFNAR2信號轉導測定中使用本發明的抗IFNAR2抗體來篩選在阻斷I型干擾素與IFNAR2的結合方面將展現相似的藥理作用的小分子IFNAR2拮抗劑。候選抗體的生成可以使用本領域常規技術來實現，包括本文中描述的那些技術，諸如雜交瘤技術和結合物分子噬菌體展示庫的篩選。這些方法是本領域普遍認可的。簡單地說，可以使用組合文庫來篩選具有期望的一種或多種活性的合成抗體克隆，以制備本發明的抗IFNAR2抗體。理論上，通過篩選噬菌體庫來選擇合成抗體克隆，其中噬菌體庫含有展示多種與噬菌體外殼蛋白融合的抗體可變區(Fv)片段的噬菌體。使用親和色語，針對期望的抗原對這樣的噬菌體庫進行淘選。表達能夠結合期望抗原的Fv片段的克隆被吸附于所述抗原，從而與庫中的非結合性克隆分離。然后將結合的克隆從抗原上洗脫下來，并可使用更多的抗原吸附/洗脫循環將其進一步富集。任何本發明的抗IFNAR2抗體可以這樣獲得設計合適的抗原篩選流程來選擇感興趣的噬菌體克隆，然后使用來自感興趣的噬菌體克隆的Fv序列和合適的恒定區(Fc)序列構建全長抗IFNAR2抗體克隆，所述恒定區序列描述于Kabatetal"SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NIHPublication91-3242,BethesdaMD(1991),vols.1-3。另參見PCTPub.WO03/102157及其中引用的參考文獻。在一個實施方案中，本發明的抗IFNAR2抗體是單克隆的。本發明范圍中還涵蓋本文所提供的抗IFNAR2抗體的抗體片段，諸如Fab,Fab',Fab'-SH和F(ab')2片段，及其變化形式。這些抗體片段可以通過常規方式諸如酶消化來形成，或者可通過重組技術來產生。此類抗體片段可以是嵌合的、人源的或人源化的。這些片段可用于本文提出的診斷和治療目的。單克隆抗體可以獲自一群基本上同質的抗體，即構成群體的抗體個體是相同的，除了在生產單克隆抗體的過程中可能產生的變體外，這種變體可以很少量存在。由此，修飾語"單克隆，，表示抗體的特征，即不是不同抗體的混合物。本發明的抗IFNAR2單克隆抗體可以使用多種本領域已知的方法來制備，包括Kohleretal.，Nature,256:495(1975)首先描述的雜交瘤方法，或者它們可以通過重組DNA方法來制備(例如美國專利4,816,567)。載體、宿主細胞和重組方法為了重組生產本發明的抗體，分離編碼它的核酸，并將其插入可復制載體，用于進一步克隆(DNA擴增)或表達。可使用常規流程容易地分離編碼抗體的DNA并測序(如使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異結合的寡核苦酸探針)。可利用許多載體。載體的選擇部分取決于將要使用的宿主細胞。通常，優選的宿主細胞是原核或真核(通常是哺乳動物)起源的。使用原核宿主細胞生成抗體載體構建可使用標準重組技術來獲得編碼本發明抗體多肽構件的多核苷酸序列。可從抗體生成細胞諸如雜交瘤細胞分離期望的多核苷酸序列并測序。或者，可使用核苦酸合成儀或PCR技術合成多核苷酸。一旦得到，將編碼多肽的序列插入能夠在原核宿主中復制并表達異源多核苷酸的重組載體。為了本發明的目的，可使用本領域可獲得的且知道的許多載體。適宜載體的選擇將主要取決于將要插入載體的核酸的大小和將要用載體轉化的具體宿主細胞。根據其功能(擴增或表達異源多核苷酸，或二者兼有)及其與它在其中駐留的具體宿主細胞的相容性，每種載體含有多種構件。載體構件通常包括但不限于復制起點、選擇標志基因、啟動子、核糖體結合位點(RBS)、信號序列、異源核酸插入片段、和轉錄終止序列。一般而言，與宿主細胞一起使用的質粒載體包含衍生自與這些宿主相容物種的復制子和控制序列。載體通常攜帶復制位點，以及能夠在轉化細胞中提供表型選擇的標志序列。例如，通常用衍生自大腸桿菌物種的質粒pBR322轉化大腸桿菌。pBR322包含編碼氨千青霉素(Amp)和四環素(Tet)抗性的基因，由此提供輕松鑒定轉化細胞的手段。pBR322、其衍生物、或其它孩l生物質粒或噬菌體還可包含或經修飾而包含可^皮;徵生物生物體用于表達內源蛋白質的啟動子。Carter等人，美國專利5,648,237中詳細記載了用于表達特定抗體的pBR322衍生物的實例。另外，可將包含與宿主微生物相容的復制子和控制序列的噬菌體載體用作這些宿主的噬菌體載體。例如，可使用噬菌體諸如入GEM.TM.-ll來構建可用于轉化易感宿主細胞諸如大腸桿菌LE392的重組載體。本發明的表達載體可包含兩種或多種啟動子-順反子對，它們編碼每一種多肽構件。啟動子是位于順反子上游(5')的非翻譯調控序列，它調控順反子的表達。原核啟動子通常分成兩類，誘導型的和組成性的。誘導型啟動子指響應培養條件的變化(如營養物的存在與否或溫度變化)而啟動受其控制的順反子的升高水平轉錄的啟動子。眾所周知受到多種潛在宿主細胞識別的大量啟動子。通過限制酶消化切下源DNA中的啟動子并將分離的啟動子序列插入本發明的載體，由此可將選擇的啟動子與編碼輕鏈或重鏈的順反子DNA可操作連接。天然啟動子序列和許多異源啟動子都可用于指導靶基因的直接擴增和/或表達。在有些實施方案中，使用異源啟動子，因為與天然靶多肽啟動子相比，它們通常容許所表達靶基因的更高轉錄和更高產量。適用于原核宿主的啟動子包括PhoA啟動子、p-半乳糖苷酶和乳糖啟動子系統、色氨酸(trp)啟動子系統、和雜合啟動子諸如tac或啟動子。然而，在細菌中有功能的其它啟動子(諸如其它已知的細菌或噬菌體啟動子)也是合適的。它們的核苷酸序列已經發表，由此熟練工作人員能夠使用提供任何所需限制位點的接頭或銜接頭將它們與編碼靶輕鏈和重鏈的順反子可操作連接(Siebenlistetal.,Cell20:269(1980))。在本發明的一個方面，重組載體內的每個順反子都包含指導所表達多肽穿膜轉運的分泌信號序列構件。一般而言，信號序列可以是載體的構件，或者它可以是插入載體的靶多肽DNA的一部分。為了本發明而選擇的信號序列應當是受到宿主細胞識別并加工(即被信號肽酶切除)的信號序列。對于不識別并加工異源多肽的天然信號序列的原核宿主細胞，將信號序列用選自例如下組的原核信號序列替代堿性磷酸酶、青霉素酶、Ipp、或熱穩定的腸毒素II(STII)前導序列、LamB、PhoE、Pe舊、OmpA和MBP。在本發明的一個實施方案中，表達系統的兩個順反子中都使用的信號序列是30STII信號序列或其變體。在另一方面，依照本發明的免疫球蛋白的生成可在宿主細胞的細胞質中發生，因此不需要在每個順反子內存在分泌信號序列。在那點上，免疫球蛋白輕鏈和重鏈在細胞質內表達、折疊和裝配而形成功能性免疫球蛋白。某些宿主菌抹(如大腸桿菌化W菌抹)提供有利于二硫鍵形成的細胞質條件，從而容許所表達蛋白質亞基的正確折疊和裝配。ProbaandPluckthun,Gene159:203(1995))。本發明的抗體還可以通過使用這樣的表達系統來生成，其中可以調控所表達多肽構件的數量比率，從而使分泌且正確裝配的本發明抗體的產量最大化。這種調控是至少部分通過同時調控多肽構件的翻譯強度而實現的。Simmons等人，美國專利5,840,523中公開了用于調控翻譯強度的一種技術。它在順反子內利用翻譯起始區(TIR)的變體。對于指定TIR,可創建具有一定范圍翻譯強度的一系列氨基酸或核苷酸序列變體，由此提供針對特定鏈的期望表達水平調節此因素的方便手段。可通過常規誘變技術導致能改變氨基酸序列的密碼子變化(盡管優選核苷酸序列中的沉默變化)從而生成TIR變體。TIR中的改變可包括例如Shine-Dalgamo序列的數目或間距的改變，及信號序列中的改變。用于生成突變型信號序列的一種方法是在編碼序列的開端生成不改變信號序列氨基酸序列的"密碼子庫"(即變化是沉默的)。這可通過改變每個密碼子的第三個核苦酸位置來實現；另外，有些氨基酸，諸如亮氨酸、絲氨酸、和精氨酸，具有多種第一個和第二個位置，這可在建庫中增加復雜性。Yansuraetal.,METT/OAS:ACompaniontoMethodsinEnzymol.4:151-158(1992)中詳細記載了這種誘變方法。優選的是，對于載體中的每個順反子，生成具有一定范圍TIR強度的一組載體。這個有限集合提供了每條鏈的表達水平以及期望抗體產物的產量在各種TIR強度組合下的比較。可通過量化^^艮道基因的表達水平來測定TIR強度，Simmons等人，美國專利5,840,523中有詳細描述。根據翻譯強度的比較，選擇期望的各個TIR在本發明的表達載體構建物中進行組合。適于表達本發明抗體的原核宿主細胞包括古細菌(Archaebacteria)和真細菌(Eubacteria)，諸如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體。有用細菌的實例包括埃希氏菌屬(Escherichia)(如大腸埃希氏菌(大腸桿菌(E.Coli))、芽孢桿菌屬(Bacillus)(如枯草芽孢桿菌(及5"w^7/力)、腸桿菌屬(Enterobacteria)、假單胞菌屬(Pseudomonas)(如銅綠假單胞菌(尸.爿erwg/mwa))、鼠1另寒妙、門氏菌(j^p/wVnwn^m)、津占質沙'雷氏菌(Serra"(3marcescfl"s)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、變形菌屬(Proteus)、志賀氏菌屬(Shigella)、根瘤菌屬(Rhizobium)、透明顫菌屬(Vitreoscilla)、或副球菌屬(Paracoccus)。在一個實施方案中，使用革蘭氏陰性細胞。在一個實施方案中，使用大腸桿菌細胞作為本發明的宿主。大腸桿菌菌抹的實例包括菌抹W3110(Bachmann,CellularandMolecularBiology,第2巻，Washington,D.C.,美國微生物學學會，1987，第1190-1219頁；ATCC保藏號27,325)及其4汙生物，包括具有基因型W3110(Ato"A/ac勿/ac丄SAow/rA廣"w/o/印巧degiM7Ar"""的菌抹33D3(美國專利號5,639,635)。其它菌抹及其衍生物，諸如大腸桿菌294(ATCC31,446)、大腸桿菌B、大腸桿菌、1776(ATCC31，537)和大腸桿菌RV308(ATCC31,608)也是合適的。這些實例只是例示而非限制。本領域知道用于構建具有指定基因型的任何上述細菌書f生物的方法，參見例如Bassetal.,Proteins8:309-314(19卯)。通常必需考慮復制子在細菌細胞中的可復制性來選擇適宜的細菌。例如，在使用眾所周知的質粒諸如pBR322、pBR325、pACYC177或pKN410來提供復制子時，大腸桿菌、沙雷氏菌屬、或沙門氏菌屬各個種可能適于用作宿主。通常，宿主細胞應當分泌最小量的蛋白水解酶，而且可能希望在細胞培養物中摻入額外的蛋白酶抑制劑。抗體生成用上述表達載體轉化宿主細胞，并在為了誘導啟動子、選擇轉化子或擴增編碼期望序列的基因而適當改動的常規營養培養基中進行培養。轉化即將DNA導入原核宿主，使得DNA能夠進行復制，或是作為染色體外元件或是作為染色體整合成分。根據所用宿主細胞，使用適于這些細胞的標準技術進行轉化。采用氯化鈣的鈣處理通常用于具有實質性細胞壁屏障的細菌細胞。另一種轉化方法采用聚乙二醇/DMSO。使用的還有一種技術是電穿孔。在本領域知道的且適于培養選定宿主細胞的培養基中培養用于生成本發明多肽的原核細胞。合適培養基的實例包括添加了必需營養補充物的LB培養基(Luriabroth)。在有些實施方案中，培養基還含有根據表達載體的構建而選擇的選擇劑，以選擇性容許包含表達載體的原核細胞生長。例如，向用于培養表達氨爺青霉素抗性基因的細胞的培養基中添加氨芐青霉素。除了碳、氮、和無機磷酸鹽來源以外，還可含有適當濃度的任何必需補充物，或是單獨加入或是作為與另一種補充物或培養基的混合物，諸如復合氮源。任選的是，培養基可含有一種或多種選自下組的還原劑谷胱甘肽、半胱氨酸、胱胺、巰基乙酸鹽/酯、二硫赤蘚糖醇和二硫蘇糖醇。在合適的溫度培養原核宿主細胞。例如，對于培養大腸桿菌，優選的溫度范圍是約2(TC至約39°C，優選約25。C至約37°C,優選約30。C。主要取決于宿主生物體，培養基的pH可以是范圍為約5至約9的任何pH。對于大腸桿菌，pH可以是約6.8至約7.4,或大約7.0。如果本發明的表達載體中使用誘導型啟動子，那么在適于激活啟動子的條件下誘導蛋白質表達。在本發明的一個方面，使用PhoA啟動子來控制多肽的轉錄。因此，為了誘導，在磷酸鹽限制培養基中培養經過轉化的宿主細胞。優選的是，磷酸鹽限制培養基是C.R.A.P培養基(參見例如Simmonsetal.，J.Immunol.Methods263:133-147(2002))。根據所采用的載體構建物，可采用多種其它誘導物，正如本領域所知道的。在一個實施方案中，所表達的本發明多肽分泌到宿主細胞的周質中并從中回收。蛋白質回收通常涉及破壞微生物，通常通過諸如滲壓震擾(osmoticshock)、超聲處理或裂解等手段。一旦細胞遭到破壞，可通過離心或過濾清除細胞碎片或整個細胞。可以通過例如親和樹脂層析進一步純化蛋白質。或者，蛋白質可能轉運到培養液中并從中分離。可從培養液清除細胞，并將培養物上清液過濾和濃縮，用于進一步純化所生成蛋白質。可使用普遍知道的方法諸如聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和Western印跡分析進一步分離和鑒定所表達蛋白質。在本發明的一個方面，通過發酵過程大量進行抗體生產。多種大規模補料-分批發酵流程可用于生產重組蛋白。大規模發酵具有至少1000升的容量，優選約1,000至100,000升的容量。這些發酵罐使用攪拌器葉輪來分配氧和養分，尤其是葡萄糖(優選的碳源/能源)。小規模發酵通常指在體積容量不超過約100升的發酵罐中進行的發酵，范圍可以是約1升至約100升。在發酵過程中，通常在將細胞在合適條件下培養至期望密度(如ODs50約180-220,在此階段細胞處于早期穩定期)后啟動蛋白質表達的誘導。根據所采用的載體構建物，可使用多種誘導物，正如本領域知道的和上文描述的。可在誘導前將細胞培養更短的時間。通常將細胞誘導約12-50小時，但是可使用更長或更短的誘導時間。為了提高本發明多肽的產量和質量，可修改多種發酵條件。例如，為了改善所分泌抗體多肽的正確裝配和折疊，可使用過度表達伴侶蛋白諸如Dsb蛋白(DsbA、DsbB、DsbC、DsbD和/或DsbG)或FkpA(具有伴侶活性的一種肽基脯氨酰-順式,反式-異構酶)的額外載體來共轉化宿主原核細胞。已經證明伴侶蛋白促進在細菌宿主細胞中生成的異源蛋白質的正確折疊和溶解度。Chenetal"J.Biol.Chem.274:19601-19605(1999);Georgiou等人，美國專利6,083,715;Georgiou等人，美國專利6,027,888;BothmannandPluckthun,J.Biol.Chem.275:17100-17105(2000);Ra畫andPluckthun，J.Biol.Chem.275:17106-17113(2000);Arieetal"Mol.Microbiol.39:199-210(2001))。為了將所表達異源蛋白質(尤其是對蛋白水解敏感的異源蛋白質)的蛋白水解降至最低，可將蛋白水解酶缺陷的某些宿主菌抹用于本發明。例如，可修飾宿主細胞菌株，在編碼已知細菌蛋白酶的基因中進行遺傳突變，諸如蛋白酶III、OmpT、DegP、Tsp、蛋白酶I、蛋白酶Mi、蛋白酶V、蛋白酶VI及其組合。可以獲得有些大腸桿菌蛋白酶缺陷菌林，參見例如Jolyetal.,(1998)見上文；Georgiou等人，美國專利5,264,365;Georgiou等人，美國專利5,508,192;Haraetal"MicrobialDrugResistance2:63-72(1996)。在一個實施方案中，在本發明的表達系統中使用蛋白水解酶缺陷且經過過度表達一種或多種伴侶蛋白的質粒轉化的大腸桿菌菌株作為宿主細胞。抗體純化在一個實施方案中，進一步純化本文中生成的抗體蛋白質以獲得基本上同質的制品，用于進一步的測定和使用。可采用本領域知道的標準蛋白質純化方法。下面的流程是合適純化流程的例示免疫親和或離子交換柱上的分餾、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土或陽離子交換樹脂諸如DEAE上的層析、層析聚焦、SDS-PAGE、石克酸銨沉淀、和使用例如SephadexG-75的凝膠過濾。在一個方面，將固定在固相上的蛋白A用于本發明抗體產物的免疫親和純化。蛋白A是來自金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureas)的41kD細月包壁蛋白質，它以高親和力結合抗體Fc區。Lindmarketal.,J.Immunol.Meth.62:1-13(1983))。蛋白A固定其上的固相可以是具有玻璃或石英表面的柱子，或者是可控孔徑的玻璃柱或硅酸柱。在有些應用中，柱子以諸如甘油等試劑包被，以防止可能的污染物的非特異粘附。作為純化的第一步，可以將衍生自如上所述細胞培養物的制備物施加到蛋白A固定化固相上，使得目的抗體特異結合蛋白A。然后清洗固相以清除與固相非特異結合的污染物。最后通過洗脫從固相回收目的抗體。z使用真核宿主細胞生成抗體載體構件通常包括但不限于如下一種或多種信號序列、復制起點、一種或多種標志基因、增強子元件、啟動子、和轉錄終止序列。0針淨柳伴在真核宿主細胞中使用的載體還可在目的成熟蛋白質或多肽的N端包含信號序列或具有特異切割位點的其它多肽。所選的異源信號序列通常是被宿主細胞識別并加工(即祐:信號肽酶切除)的。在哺乳動物細胞表達中，可利用哺乳動物信號序列以及病毒分泌前導序列，例如單純皰疹病毒gD信將這些前體區的DNA共閱讀框地與編碼抗體的DNA連接。通常，哺乳動物表達載體不需要復制起點構件。例如，SV40起點通常可能只因包含早期啟動子才使用。逸凈差西^伴表達和克隆載體可包含選擇基因，也稱為選擇標志。典型的選擇基因編碼如下蛋白質(a)賦予對抗生素或其它毒素的抗性，如氨芐青霉素、新霉素、曱氨蝶呤或四環素；(b)補足相應的營養缺陷；或(c)提供不能從復合培養基獲得的關鍵營養物。選擇方案的一個實例利用藥物來阻滯宿主細胞的生長。經異源基因成功轉化的那些細胞生成賦予藥物抗性的蛋白質，因而可經歷選擇方案而存活。此類顯性選擇的實例使用藥物新霉素、霉酚酸和潮霉素。適于哺乳動物細胞的選擇標志的另一個實例是能夠鑒定有能力攝取抗體核酸的細胞的選擇標志，諸如DHFR、胸苷激酶、金屬硫蛋白I和II(例如靈長類金屬硫蛋白基因)、腺苷脫氨酶、鳥氨酸脫羧酶等。例如，可以首先通過將所有轉化子在含有曱氨蝶呤(Mtx,DHFR的一種竟爭性拮抗劑)的培養基中進行培養來鑒定經DHFR選擇基因轉化的細胞。在采用野生型DHFR時，適宜的宿主細胞包括，例如，DHFR活性缺陷的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系(如ATCCCRL-9096)。或者，可通過在含有針對選擇標志的選擇劑諸如氨基糖苷抗生素如卡那霉素、新霉素或G418的培養基中培養細胞來選擇被編碼抗體、野生型DHFR蛋白、和另一種選擇標志諸如氨基糖苷3'-磷酸轉移酶(APH)的DNA序列轉化或共轉化的宿主細胞(特別是包含內源DHFR的野生型宿主)。參見美國專利4,965,199。表達和克隆載體通常包含為宿主生物體所識別，且與編碼目標多肽(例如抗體)的核酸可操作連接的啟動子。真核細胞的啟動子序列是已知的。幾乎所有真核基因都具有一個富含AT的區域，它位于起始轉錄的位點上游約25至30個堿基處。在許多基因的轉錄起點上游70至80個堿基處發現的另一種序列是CNCAAT區，其中N可以是任何核苷酸。在大多數真核基因的3'端是AATAAA序列，它可能是向編碼序列的3'端添加聚腺苷酸(polyA)尾的信號。所有這些序列適宜地插入真核表達載體中。例如，在哺乳動物宿主細胞中，抗體多肽從載體轉錄的過程可以由來自病毒基因組、來自異源哺乳動物啟動子、或來自熱休克啟動子的啟動子所控制，倘若這些啟動子與宿主細胞系統相容的話。其中所述病毒的例子有多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(諸如2型腺病毒)、牛乳頭瘤病毒、禽類肉瘤病毒、巨細胞病毒、逆轉錄病毒、乙肝病毒、和猿猴病毒40(SV40),異源哺乳動物啟動子例如肌動蛋白啟動子或免疫球蛋白啟動子。適宜地，以SV40限制性片段的形式獲得SV40病毒的早期和晚期啟動子，該片段還包含SV40病毒復制起點。適宜地，以HindIIIE限制性片段的形式獲得人巨細胞病毒的立即早期啟動子。美國專利4,419,446中公開了使用牛乳頭瘤病毒作為載體在哺乳動物宿主中表達DNA的系統。美國專利4,601,978中記載了該系統的一種修改。關于在小鼠細胞中在來自單純皰滲病毒的胸苷激酶啟動子的控制下表iiA(3-干擾素cDNA還可參見Reyesetal.,Nature297:598-601(1982)。或者，可使用勞氏肉瘤病毒長末端重復序列作為啟動子。0」乂f強f兒伴種伴常常可以通過在載體中插入增強子序列來提高高等真核細胞對編碼本發明抗體多肽的DNA的轉錄。現在知道來自哺乳動物基因(球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、a-胎蛋白和胰島素)的許多增強子序列。然而，通常使用來自真核細胞病毒的增強子。實例包括SV40復制起點晚期側的增強子(bp100-270)、巨細胞病毒早期啟動子增強子、多瘤病毒復制起點晚期側的增強子、和腺病毒增強子。關于激活真核啟動子的增強元件還可參見Yaniv,Nature297:17-18(1982)。增強子可剪接到載體中抗體多肽編碼序列的5'或3'側的位置，但是通常位于啟動子的5'—側。(vi)轉錄終止構件在真核宿主細胞中使用的表達載體通常還包含終止轉錄和穩定mRNA所必需的序列。此類序列通常可從真核或病毒DNA或cDNA的5'非翻譯區，偶爾也可從其3'非翻譯區獲得。這些區域包含在編碼抗體的mRNA的非翻譯區中轉錄成聚腺芬酸化片段的核苷酸區段。一種有用的轉錄終止構件是牛生長激素聚腺苷酸化區。參見WO94/11026及其中公開的表達載體。鄉涼i勿/^M舉科狄適于克隆或表達本文載體中的DNA的宿主細胞包括本文描述的高等真核細胞，包括脊稚動物宿主細胞。脊推動物細胞在培養(組織培養)中的繁殖已經成為常規流程。有用哺乳動物宿主細胞系的實例有經SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7，ATCCCRL1651)、人胚腎系(293細胞或為懸浮培養而亞克隆的293細胞，Grahametal.，J.Gen.Virol.36:59(1977))、幼倉鼠腎細胞(BHK,ATCCCCL10)、中國倉鼠卵巢細胞ADHFR(CHO，Urlaubetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))、小鼠塞托利(Sertoli)細胞(TM4，Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))、猴腎細胞(CV1，ATCCCCL70)、非洲綠猴腎細胞(VERO-76,ATCCCRL1587)、人宮頸癌細胞(HELA,ATCCCCL2)、犬腎細胞(MDCK，ATCCCCL34)、牛鼠(buffalorat)肝細胞(BRL3A，ATCCCRL1442)、人肺細胞(W138,ATCCCCL75)、人肝細胞(HepG2，HB8065)、小鼠乳瘤(MMT060562,ATCCCCL51)、TRI細胞(Matheretal"AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982))、MRC5細月包、FS4細胞和人肝細胞瘤(hepatoma)系(HepG2)。為了生成抗體，用上文所述表達或克隆載體轉化宿主細胞，并在為了誘導啟動子、選擇轉化子或擴增編碼期望序列的基因而適當改動的常規營養培養基中進行培養。可在多種培養基中培養用于生成本發明抗體的宿主細胞。商品化培養基諸如Ham氏F10(Sigma)、極限必需培養基(MEM,Sigma)、RPMI-1640(Sigma)、和Dulbecco氏修改Eagle氏培養基(DMEM,Sigma)適于培養宿主細胞。另外，可使用下列文獻中記載的任何培養基作為宿主細胞的培養基Hametal.,Meth.Enz.58:44(1979);Barnesetal.,Anal.Biochem.102:255(1980);美國專利4,767,704;4,657,866;4,927,762;4,560,655;5,122,469;WO90/03430;WO87/00195;或美國再版專利30,985。任何這些培養基可根據需要補充激素和/或其它生長因子(諸如胰島素、運鐵蛋白或表皮生長因子)、鹽(諸如氯化鈉、鈣、鎂和磷酸鹽)、緩沖劑(諸如HEPES)、核苦酸(諸如腺苷和胸苷)、抗生素(諸如GENTAMYCINTM藥物)、痕量元素(定義為通常以微摩爾范圍的終濃度存在的無機化合物)、和葡萄糖或等效能源。還可以適宜濃度含有本領域技術人員知道的任何其它必需補充物。培養條件諸如溫度、pH等即為表達而選擇的宿主細胞先前所用的，這對于普通技術人員是顯然的。"力我謬的^^在使用重組技術時，可在細胞內生成抗體，或者直接分泌到培養基中。如果在細胞內生成抗體，那么首先一般通過例如離心或超濾清除微粒碎片(或是宿主細胞或是裂解片段)。如果抗體分泌到培養基中，那么通常首先使用商品化蛋白質濃縮濾器(例如Amicon或MilliporePellicon超濾單元)濃縮來自這些表達系統的上清液。可在任何上述步驟中包括蛋白酶抑制劑諸如PMSF以抑制蛋白水解，而且可包括抗生素以防止外來污染物的生長。可使用例如羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析和親和層析(優選的純化技術是親和層析)來純化從細胞制備的抗體組合物，其中親和色譜是普遍接受的純化技術。親和試劑例如蛋白A作為親和配體的適宜性取決于抗體中存在的任何免疫球蛋白Fc域的種類和同種型。蛋白A可用于純化基于人yl、丫2、或丫4重鏈的抗體(Lindmarketal.,J.Immunol.Meth.62:1-13(1983))。蛋白G推薦用于所有小鼠同種型和人y3(Gussetal.,EMBOJ.5:1567-1575(1986))。親和配體所連接的基質最常用的是瓊脂糖，但是可使用其它基質。物理穩定的基質諸如可控孔徑玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯(poly(styrenedivinyl)benzene)能獲得比瓊脂糖更快的流速和更短的加工時間。若抗體包含CH3域，則可使用BakerbondABXtm樹脂(J.T.Baker,Phillipsburg,NJ)進行純化。根據待回收的抗體，也可使用其它蛋白質純化技術諸如離子交換柱上的分級分離、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅上的層析、肝素SEPHAROSETM上的層析、陰離子或陽離子交換樹脂(諸如聚天冬氨酸柱)上的層析、層析聚焦、SDS-PAGE和硫酸銨沉淀。在任何初步純化步驟之后，可視需要對含有目的抗體和污染物的混合物進行更多的純化步驟，例如低pH疏水相互作用層析，使用pH約2.5-4.5的洗脫緩沖液，通常在低鹽濃度(如約0-0.25M鹽)進行。應當指出，一般而言，制備用于研究、測試和臨床應用的抗體的技術和方法學是本領域普遍認可的，與上述一致的，和/或本領域技術人員認為對感興趣的具體抗體適宜的。活性測定法可通過本領域知道的多種測定法對本發明的抗體鑒定它們的物理/化學特性和生物學功能。可通過一系列測定法進一步鑒定純化的抗體，包括^f旦不限于N端測序、氨基酸分析、非變性大小排阻高壓液相層析(HPLC)、質譜、離子交換層析和木瓜蛋白酶消化。必要的時候，分析抗體的生物學活性。在有些實施方案中，對本發明的抗體測試它們的抗原結合活性。本領域知道的且可用于本文的抗原結合測定法包括但不限于使用諸如Western印跡、放射免疫測定法、ELISA(酶聯免疫吸附測定法)、"三明治"免疫測定法、免疫沉淀測定法、熒光免疫測定法和蛋白A免疫測定法等技術的任何直接或竟爭性結合測定法。在一個實施方案中，本發明設想了這樣的改良抗體它具有一些但不是所有的效應器功能，從而使它在許多抗體體內半衰期是重要的，但某些效應器功能(諸如補體和ADCC)是不必要的或有害的應用中成為理想的候選物。在某些實施方案中，測量所生成抗體的Fc活性以確保只保留了期望的特性。可進行體外和/或體內細胞毒性測定法以確認CDC和/或ADCC活性的降〗氐/消減。例如，可進行Fc受體(FcR)結合測定法以確認抗體缺乏FcyR結合(因此有可能缺乏ADCC活性)但保留FcRn結合能力。介導ADCC的主要細胞，NK細胞，只表達FcyRIII，而單核細胞表達FcyRI、FcyRII和FcyRin。RavetchandKinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464頁表3總結了造血細胞上的FcR表達。美國專利5，500，362或5,821,337中記載了用于評估目的分子的ADCC活性的體外測定法的實例。可用于此類測定法的效應細胞包括外周血單個核細胞(PBMC)和天然殺傷(NK)細胞。或者/另夕卜，可在體內評估目的分子的ADCC活性，如在動物模型中，諸如Clynesetal.,PNAS(USA)95:652-656(1998)中所公開的。還可進行Clq結合測定法以確認抗體不能結合Clq且因此缺乏CDC活性。為了評估補體激活，可進4亍CDC測定、法，侈'B口^口Gazzano-Santoroetal.,J.Immunol.Methods202:163(1996)中所述。還可使用本領域知道的方法進行FcRn結合和體內清除/半衰期測定。人源化抗體本發明涵蓋人源化抗體。本領域知道用于人源化非人抗體的多種方法。例如，人源化抗體可具有一個或多個從非人來源引入的氨基酸殘基。這些非人氨基酸殘基常常稱為"輸入"殘基，它們通常取自"輸入"可變區。基本上可遵循Winter及其同事的方法進行人源化(Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal"Nature332:323-327(1988);Verhoeyenetal.:(1988)Science239:1534-1536),即用高變區序列替代人抗體的對應序列。因此，此類"人源化，，抗體是嵌合抗體(美國專利4,816,567),其中顯著少于完整的人可變區用非人物種的相應序列替代。在實踐中，人源化抗體通常是如下人抗體，其中有些高變區殘基和可能的有些FR殘基用嚙齒類抗體類似位點的殘基替代。用于制備人源化抗體的人輕鏈和重鏈可變區的選擇對于降低抗原性可能是重要的。依照所謂的"最適(best-fit)"方法，用嚙齒類抗體的可變區序列對已知人可變區序列的整個文庫進行篩選。然后選擇與嚙齒類最接近的人序列作為人源化抗體的人框架(Simsetal.，J.Immunol.151:2296(1993);Chothiaetal.,J.Mol.Biol.196:卯l(1987))。另一種方法4吏用由特定輕鏈或重鏈亞類(subgroup)的所有人抗體的共有序列衍生的特定框架。相同框架可用于幾種不同的人源化抗體(Carteretal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:4285(1992);Prestaetal.，J.Immunol.151:2623(1993))。通常理想的是，抗體在人源化后保留對抗原的高親和力和其它有利的生物學特性。為了達到此目的，依照一種方法，通過使用親本序列和人源源化抗體。通常可獲得免疫球蛋白三維模型，這是本領域技術人員所熟悉的。還可獲得圖解和顯示所選候選免疫球蛋白序列的可能三維構象結構的計算機程序。通過檢查這些顯示圖像能分析殘基在候選免疫球蛋白序列發揮功能中的可能作用，即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原的能力的殘基。這樣，可以從受體序列和輸入序列中選出FR殘基并組合，從而得到期望的抗體特征，諸如對靶抗原的親和力升高。一般而言，高變區殘基直接且最實質的參與對抗原結合的影響。抗體變體一方面，本發明提供了在構成Fc區的Fc多肽界面中包含修飾的抗體，其中該修飾推動和/促進異多聚化。這些修飾包括將突起導入第一Fc多肽和將腔導入第二Fc多肽，其中突起可位于腔中，從而促進第一和第二Fc多肽的復合。本領域知道生成具有這些修飾的抗體的方法，例如美國專利5,731,168中所述。在有些實施方案中，設想了本文所述抗體的氨基酸序列修飾。例如，可能希望改進抗體的結合親和力和/或其它生物學特性。抗體的氨基酸序列變體是通過將適宜的核苷酸變化引入抗體核酸或通過肽合成制備的。此類修飾包括例如抗體氨基酸序列內的殘基刪除和/或插入和/或替代。可以進行任何刪除、插入和替代組合以獲得最終的構建物，只要最終的構建物具有期望的特征。可在制備序列時將氨基酸改變？1入本發明抗體氨基酸序列。可用于鑒定抗體中作為優選誘變位置的某些殘基或區域的方法有"丙氨酸掃描誘變"，如CunninghamandWells，Science244:1081-1085(1989)中所述。這里，鑒定一個殘基或一組靶殘基(如帶電荷的殘基，諸如精氨酸、天冬氨酸、組氨酸、賴氨酸和谷氨酸)并用中性或帶負電荷的氨基酸(例如丙氨酸或多聚丙氨酸)替代，以影響氨基酸與抗原的相互作用。然后通過在或對替代位點引入更多或其它變體，推敲對替代展示功能敏感性的氨基酸位置。由此，盡管用于引入氨基酸序列變異的位點是預先決定的，然而突變本身的本質不必預先決定。例如，為了分析指定位點處突變的后果，在靶密碼子或區域進行丙氨酸掃描或隨機誘變，并根據期望的活性對所表達免疫球蛋白進行篩選。氨基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端的融合，長度范圍由一個殘基至包含上百或更多殘基的多肽，以及單個或多個氨基酸殘基的序列內插入。末端插入的例子包括具有N端曱硫氨酰殘基的抗體或與細胞毒性多肽融合的抗體。抗體分子的其它插入變體包括將抗體的N或C端與酶(如用于ADEPT)或延長抗體血清半衰期的多肽融合。另一類變體是氨基酸替代變體。這些變體在抗體分子中有至少一個氨基酸殘基用不同殘基替代。最有興趣進行替代誘變的位點包括高變區，但是也設想了FR改變。表A中"優選替代"欄顯示了保守替代。如果此類替代導致生物學活性變化，那么可導入表A中稱為"例示替代"的更實質變化，或如下文參照氨基酸分類進一步所述，并篩選產物。表A<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>對抗體生物學特性的實質性修飾可通過選擇對維持以下方面的效果差異顯著的替代來實現(a)替代區域中多肽主鏈的結構，例如(折疊)片或螺旋構象，(b)靶位點處分子的電荷或疏水性，或(c)側鏈的體積。根據其側鏈特性的相似性，氨基酸可如下分組(A.L.Lehninger，《歷oc/2em"^7》，第2版，第73-75頁，WorthPublishers,NewYork,1975):(1)非極性的Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、lie(1)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)(2)不帶電荷、極性的Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)(3)酸性的Asp(D)、Glu(E)(4)堿性的Lys(K)、Arg(R)、His(H)或者，根據共同的側鏈特性，天然發生殘基可如下分組(1)疏水性的:正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)中性、親水性的-.Cys、Ser、Thr、Asn、Gin;(3)酸性的Asp、Glu;(4);威性的:His、Lys、Arg;(5)影響鏈取向的殘基Gly、Pro;(6)芳香族的Trp、Tyr、Phe。非保守替代需要用這些類別之一的成員替換另一個類別的。還可將此類替代殘基引入保守替代位點，或者更優選的是引入剩余(非保守)位點。一類替代變體涉及替代親本抗體(例如人源化或人抗體)的一個或多個高變區殘基。通常，選擇用于進一步開發的所得變體相對于產生它們的親本抗體將具有改變的(例如改進的)生物學特性。用于生成此類替代變體的一種便利方法涉及使用噬菌體展示的親和力成熟。筒而言之，將數個高變區位點(例如6-7個位點)突變，在各個位點產生所有可能的氨基酸替代。如此生成的抗體展示在絲狀噬菌體顆粒上，作為與各個顆粒內包裝的噬菌體包被蛋白(例如M13基因m產物)的融合物。然后如本文所公開的根據其生物學活性(例如結合親和力)對噬菌體展示的變體進行篩選。為了鑒定用于修飾的候選高變區位點，可進行掃描誘變(例如丙氨酸掃描)以鑒定對抗原結合具有重要貢獻的高變區殘基。或者/另外，分析抗原-抗體復合物的晶體結構以鑒定抗體和抗原之間的接觸點可能是有益的。所述接觸殘基及鄰近殘基是依照本領域已知的技術，例如本文詳述的那些技術進行替代的候選位點。一旦產生這樣的變體，使用本領域知道的技術，包括本文所述的那些4支術，對該組變體進行篩選，可選4奪在一種或多種相關測定法中具有優良特性的抗體用于進一步的開發。編碼抗體氨基酸序列變體的核酸分子可通過本領域知道的多種方法來制備。這些方法包括但不限于從天然來源分離(在天然發生氨基酸序列變體的情況中)，或者通過對較早制備的變體或非變異型式的抗體進行寡核芬酸介導的(或定點)誘變、PCR誘變和盒式誘變來制備。可能希望在本發明抗體的Fc區中引入一處或多處氨基酸修飾，由此生成Fc區變體。Fc區變體可包括在一個或多個氨基酸位置(包括鉸鏈半胱氨酸)包含氨基酸修飾(例如替代)的人Fc區序列(例如人IgGl、IgG2、IgG3或IgG4Fc區)。依照此描述和本領域的教導，設想了在有些實施方案中，本發明的抗體與野生型對應抗體相比可在例如Fc區中包含一處或多處改變。與它們的野生型對應物抗體相比，這些抗體仍將基本上保留治療功效所需要的相同特性。例如，認為可在Fc區中進行將會導致Clq結合和/或補體依賴性細胞毒性(CDC)改變(即或是增強或是削弱)的某些改變，例如W099/51642中所述。還可參見關注Fc區變體其它實例的DuncanandWinter,Nature322:738-40(1988);美國專利5,648,260;美國專利5,624,821;及W094/29351。免疫偶聯物在另一個方面中，本發明提供包含偶聯有細胞毒劑的抗體的免疫偶聯物或抗體-藥物偶聯物(ADC),所述細胞毒劑諸如化療劑、藥物、生長抑制劑、毒素(如細菌、真菌、植物或動物起源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射偶聯物)。抗體-藥物偶聯物在癌癥治療中用于局部遞送細胞毒劑或抑制細胞試劑(即用于殺死或抑制腫瘤細月包的藥物)的用途(SyrigosandEpenetos,AnticancerResearch19:605-614(1999);Niculescu-DuvazandSpringer,Adv.Drg.Del.Rev.26:151-172(1997);美國專利4，975，278)能將藥物部分靶向遞送至腫瘤，并在那里進行細胞內積累，而系統施用這些未經偶聯的藥物試劑可能在試圖消除的腫瘤細胞以外導致不可接受的對正常細胞的毒性水平(Baldwinetal.，Lancet603-05(1986年5月15日)；Thorpe,"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview",在《MonoclonalAntibodies'84:BiologicalAndClinicalApplications》中,A.Pinchera等人編,第475-506頁，1985)。由此試圖獲得最大功效及最小毒性。多克隆抗體和單克隆抗體皆有報道可用于這些策略(Rowlandetal.,CancerImmunol.Immunother.21:183-87(1986))。這些方法中所使用的藥物包括道諾霉素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、曱氨蝶呤(methotrexate)和長春地辛(vindesine)(Rowlandetal.,1986，見上文)。抗體-毒素偶聯物中所使用的毒素包括細菌毒素諸如白喉毒素、植物毒素諸如蓖麻毒蛋白、小分子毒素諸^口才各爾德、霉素(geldanamycin)(Mandleretal.，Jour,oftheNat.CancerInst.92(19):1573-1581(2000);Mandleretal"Bioorganic&Med.Chem.Letters10:1025-1028(2000);Mandleretal.，BioconjugateChem.13:786-791(2002))、美登木素生物堿類(EP1391213;Liuetal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8618-8623(1996))、和加利車霉素(Lodeetal"CancerRes.58:2928(1998);Hinmanetal.,CancerRes.53:3336-3342(1993))。毒素可通過包括微管蛋白結合、DNA結合或拓樸異構酶抑制在內的機制發揮其毒害細胞和抑制細胞的效果。有些細胞毒藥物在與大的抗體或蛋白質受體配體偶聯時趨于失活或活性降低。ZEVALIN(ibritumomabtiuxetan，Biogen/Idec)是由針對在正常和惡性B淋巴細胞表面上發現的CD20抗原的鼠IgGlk單克隆抗體與通過硫脲接頭-螯合劑所結合的mIn或^Y放射性同位素構成的抗體-放射性同位素偶4關物(Wisemanetal.,Eur.Jour.Nucl.Med.27(7):766-77(2000);Wisemanetal.，Blood99(12):4336-42(2002);Witzigetal"J.Clin.Oncol.20(10):2453-63(2002);Witzigetal"J.Clin.Oncol.20(15):3262-69(2002))。盡管ZEVALIN具有針對B細胞非何杰金氏(Hodgkin)淋巴瘤(NHL)的活性，然而施藥在大多數患者中導致嚴重且長時間的血細胞減少。MYLOTARG(gemtuzumabozogamicin,WyethPharmaceuticals),即由人CD33抗體與加利車霉素連接而構成的抗體-藥物偶聯物，在2000年批準用于經注射治療急性髓性白血病(DrugsoftheFuture25(7):686(2000);美國專利4970198;5079233;5585089;5606040;5693762;5739116;5767285;5773001)。Cantuzumabmertansine(I腿unogenInc.),即由huC242抗體經二硫化物接頭SPP與美登木素生物石威藥物部分DM1連接而構成的抗體-藥物偶聯物，正在進行用于治療表達CanAg的癌癥諸如結腸癌、胰腺癌、胃癌和其它癌的測試。MLN-2704(MillenniumPharm.，BZLBiologies,ImmunogenInc.),即由4元前列腺特異膜抗原(PSMA)單克隆抗體與美登木素生物^喊藥物部分DM1連接而構成的抗體-藥物偶聯物，正在進行用于前列腺腫瘤潛在治療的測試。將多拉司他汀(dolastatin)的合成類似物auristatin肽、auristatinE(AE)和單甲基auristatin(MMAE)與嵌合單克隆抗體cBR96(對癌上的LewisY特異)和cACIO(對惡性血液腫瘤上的CD30特異)偶聯(Doroninaetal.,NatureBiotechnology21(7):778-784(2003))，且正在進行治療性開發。本文(上文中)描述了可用于生成免疫偶聯物的化療劑。可使用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A鏈、白喉毒素的非結合活性片段、外毒素A鏈(來自銅纟錄有支單月包菌/^ewcfomo"asaerwg/"osa)、荒麻毒蛋白(ricin)A鏈、相思豆毒蛋白(abrin)A鏈、蒴蓮根毒蛋白(modeccin)A鏈、a-帚曲霉素(sarcin)、油4同(v4/ew份es/c^/")毒蛋白、香石沖個(dianthin)毒蛋白、美洲商陸(尸/^to/acflamen'cawa)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(AiomoM/cac/wra"Ha)抑制物、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、月巴皂草(ra/ao"ar/aOj^cz'"ato)承卩制物、白沖對毒蛋白(gelonin)、絲i木霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依諾霉素(enomycin)禾口單端孢菌素(trichothecenes)。參見，例如，1993年10月28日公布的W093/21232。多種放射性核素可用于生成放射偶聯抗體。實例包括^Bi、mI、131In、9QY和186Re。抗體和細胞毒劑的偶聯物可使用多種雙功能蛋白質偶聯劑來制備，諸如N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、亞氨基硫烷(IT)、亞氨酸酯(諸如鹽酸己二酰亞氨酸二曱酯)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對-疊氮苯曱酰基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對-重氮苯曱酰基)己二胺)、二異氰酸酯(諸如曱苯2,6-二異氰酸酯)、和雙活性氟化合物(諸如l,5-二氟畫2,4醫二硝基苯)的雙功能衍生物。例如，可如Vitettaetal.，Science238:1098(1987)中所述制備蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14標記的1-異硫氰酸苯曱基-3-曱基二亞乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于將放射性核苷酸與抗體偶聯的例示性螯合劑。參見WO94/11026。本文還設想了抗體與一種或多種小分子毒素諸如加利車霉素(calicheamicin)、美登木素生物械類(maytansinoids)、dolostatins,aurostatins，單端孢霉素(trichothecene)和CC1065及這些毒素具有毒素活性的4汙生物的偶聯物。美登素和美登木素生物堿類在某些實施方案中，免疫偶聯物包括與一個或多個美登木素生物堿分子偶聯的本發明的抗體。美登木素生物堿類是通過抑制微管蛋白多聚化來發揮作用的有絲分裂抑制劑。美登素最初從東非灌木齒葉美登木(Mfl"em^分離得到(美國專利3,896,111)。隨后發現某些微生物也生成美登木素生物堿類，諸如美登醇和C-3美登醇酯(美國專利4,151,042)。例如下列美國專利公開了合成美登醇及其衍生物和類似物4，137，230;4,248,870;4,256,746;4,260,608;4,265,814;4,294,757;4,307,016;4,308,268;4,308,269;4,309,428;4,313,946;4，315，929;4,317,821;4,322,348;4,331,598;4,361,650;4,364,866;4,424,219;4,450,254;4,362,663;及4,371,533。美登木素生物堿藥物部分在抗體藥物偶聯物中是令人感興趣的藥物部分，因為它們(i)相對易于通過發酵或發酵產物的化學修飾、衍生而制得；(ii)可以用適于通過非二硫化物接頭與抗體偶聯的功能團來衍生化；(iii)在血漿中穩定，和(iv)對多種腫瘤細胞系有效。美登木素生物堿藥物部分的示例性實施方案包括DM1;DM3;和DM4。下列專利公開了包含美登木素生物堿類的免疫偶聯物，其制備方法，及其治療用途，例如美國專利5,208,020;5,416,064;及歐洲專利EP0425235Bl，明確將其公開內容收入本文作為參考。Liuetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8618-8623(1996)記載了包含與針對人結腸直腸癌的單克隆抗體C242連接的稱為DM1的美登木素生物堿的免疫偶聯物。發現該偶聯物具有針對培養的結腸癌細胞的高度細胞毒性，而且在體內腫瘤生長測定法中顯示抗胂瘤活性。Charietal.，CancerResearch52:127-131(1992)記栽了其中美登木素生物堿經二硫化物接頭與結合人結腸癌細胞系上抗原的鼠抗體A7或結合HER-2/wew癌基因的另一種鼠單克隆抗體TA.1偶聯的免疫偶聯物。在體外在人乳癌細胞系SK-BR-3上測試了TA.l-美登木素生物堿偶聯物的細胞毒性，該細胞系每個細胞表達3xl05個HER-2表面抗原。藥物偶聯物達到了與游離美登木素生物堿藥物相似程度的細胞毒性，這可通過增加每個抗體分子偶聯的美登木素生物堿分子數目來提高。A7-美登木素生物堿偶聯物在小鼠中顯示低系統性細胞毒性。抗體-美登木素生物堿偶聯物可通過將抗體與美登木素生物堿分子化學連接且不顯著削弱抗體或美登木素生物堿分子的生物學活性來制備。參見，例如，美國專利5,208,020(本文明確引證其公開內容)。每個抗體分子偶聯平均3-4個美登木素生物堿分子在增強針對靶細胞的細胞毒性中顯示功效，且對抗體的功能或溶解度沒有負面影響，盡管預計甚至一個分子的毒素/抗體也將較之棵抗體的使用增強細胞毒性。美登木素生物堿類在本領域是眾所周知的，而且可通過已知技術合成或從天然來源分離。例如美國專素生物堿類。優選的美登木素生物堿類是美登醇和美登醇分子的芳香環或其它位置經過修飾的美登醇類似物，諸如各種美登醇酯。本領域知道許多連接基團可用于制備抗體-美登木素生物堿偶聯物，包括例如美國專利5,208,020或歐洲專利0425235Bl及Charietal.，CancerResearch52:127-131(1992),和2004年10月8曰提交的美國專利申請10/960,602中所公開的，本文明確引證上述文件的公開內容。包含接頭構件SMCC的抗體-美登木素生物堿偶聯物可以如2004年10月8日提交的美國專利申請10/960,602中公開的那樣加以制備。連接基團包括二硫化物基團、硫醚基團、酸不穩定基團、光不穩定基團、肽酶不穩定基團、或酯酶不穩定基團，正如上文所述專利中所公開的，優選二石克化物和硫醚基團。本文描述并例舉了其它連接基團。可使用多種雙功能蛋白質偶聯劑來制備抗體和美登木素生物堿的偶聯物，諸如N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亞氨基-4-(N-馬來酰亞氨基曱基)環己烷-l-羧酸酯(SMCC)、亞氨基硫烷(IT)、亞氨酸酯(諸如鹽酸己二酰亞氨酸二曱酯)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對-疊氮苯曱酰基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對-重氮苯曱酰基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如曱苯2,6-二異氰酸酯)、和雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)的雙功能衍生物。特別優選的偶聯劑包括]^-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡咬基二硫代)丙酸酯(SPDP)(Carlssonetal"Biochem.J.173:723-737(1978))和N-琥珀酰亞氨基-4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)，由此提供二硫鍵連接。根據連接的類型，可將接頭附著于美登木素生物堿分子的多個位置。例如，可使用常規偶聯技術通過與羥基的反應來形成酯鍵。反應可發生在具有羥基的C-3位置、經羥曱基修飾的C-14位置、經羥基修飾的C-15位置、和具有羥基的C-20位置。在一個優選的實施方案中，在美登醇或美登醇類似物的C-3位置形成鍵連接。Auristatins禾口dolostatins在一些實施方案中，免疫偶聯物包括與多拉司他汀(dolastatin)或dolostatin肽才莫擬物和書亍生物一auristatins(美國專利5635483;5780588)偶聯的本發明抗體。已經證明多拉司他汀和auristatins干擾微管動力學，GTP水解，以及核和細胞分裂(Woykeetal(2001)Antimicrob,AgentsandChemother.45(12):3580畫3584)，并具有抗癌(US5663149)和抗真菌(Pettitetal(1998)Antimicrob.AgentsChemother.42:2961-2965)活性。多拉司他汀或auristatins藥物部分可以通過肽藥物部分的N(氨基)末端或C(羧基)末端與抗體連接(WO02/088172)。示例性的auristatin實施方案包括N末端連才妄的monomethylauristatin藥物部分DE和DF,其公開于《MonomethylvalineCompoundsCapableofConjugationtoLigands》，美國流水號10/983,340，提交于2004年11月5日，本文明確引證該文件的全部公開內容。示例性的auristatin實施方案有MMAE和MMAF。其它示例性實施方案包括MMAE或MMAF以及多種接頭構件(本文進一步有說明)Ab-MC-vc國PAB畫MMAF，Ab-MC-vc-PAB-MMAE,Ab國MC畫MMAE和Ab畫MC畫MMAF。典型地，基于肽的藥物部分可以通過在兩個或多個氨基酸和/或肽片段之間形成肽4建來制備。這樣的肽鍵可以，例如，通過肽化學領域^^知的液相合成方法(參見E.Schr6derandK.Liibke,"ThePeptides",volume1，pp76-136，1965，AcademicPress)來制備。auristatin/多拉司他汀藥物部分可以根據下列文件的方法來制備US5635483;US5780588;Pettitetal(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465;Pettitetal(1998)Anti-CancerDrugDesign13:243-277;Pettit，G.R.，etal.Synthesis,1996，719-725;及Pettitetal(1996)J.Chem.Soc.PerkinTrans.15:859-863。還參見Doronina(2003)NatBiotechnol21(7):778-784;《MonomethylvalineCompoundsCapableofConjugationtoLigands》，美國流水號10/983,340，提交于2004年11月5日，本文引證其全部內容(其公開了例如用于制備單曱基纈氨酸化合物，諸如偶聯有接頭的MMAE和MMAF的纟姿頭和方法)。加利車霉素在其它實施方案中，免疫偶聯物包含與一個或多個加利車霉素分子偶聯的本發明抗體。加利車霉素抗生素家族能夠在亞皮摩爾濃度生成雙鏈DNA斷裂。關于加利車霉素家族偶聯物的制備參見美國專利5,712,374;5，714，586;5，739，116;5，767，285;5,770,701;5，770，710;5,773,001;5,877,296(都授予美國Cyanamid公司)。可用的加利車霉素結構類似物包括但不限于y卩、(X21、a,N-乙酰基-Yi、PSAG和e、(Hinmanetal.，CancerResearch53:3336-3342(1993);Lodeetal.,CancerResearch58:2925-2928(1998);及上述授予美國Cyanamid公司的美國專利)。可與抗體綴合的另一種抗腫瘤藥物是QFA,它是一種抗葉酸藥物。加利車霉素和QFA都具有胞內作用位點，且不易穿過質膜。因此，這些試劑經由抗體介導的內在化的細胞攝取大大增強了它們的細胞毒效果。50其它細胞毒劑可與本發明抗體偶聯的其它抗腫瘤劑包括BCNU、鏈佐星(streptozoicin)、長春新堿(vincristine)、5-氟尿嘧咬、美國專利5,053,394、5,770,710中記載的統稱為LL-E33288復合物的試劑家族、及埃斯波霉素類(espe薩icins)(美國專利5，877，296)。可用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A鏈、白喉毒素的非結合活性片段、外毒素A鏈(來自銅綠假單胞菌尸ww^wowos毒蛋白(ricin)A鏈、相思豆毒蛋白(abrin)A鏈、蒴蓮根毒蛋白(modeccin)A鏈、a-帚曲霉素(sarcin)、油4同(^/ew/7Yasybni/()毒蛋白、香石4十(dianthin)毒蛋白、美洲商陸CP/^o/acaawen'ca"a)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Afomoni/cac/7"ra"/7'a)承卩制物、麻瘋扭t毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥皂草0a;^o"an'aq^7c/加fe)抑制物、白樹毒蛋白(gelonin)、絲林霉素(mitogellin)、局卩艮曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依i若霉素(enomycin)和單端孢菌素(trichothecenes)。參見例如1993年10月28曰公布的WO93/21232。本發明還設想了抗體和具有核酸降解活性的化合物(如核糖核酸酶或DNA內切核酸酶，諸如脫氧核糖核酸酶；DNA酶)之間形成的免疫偶聯物。為了選擇性破壞腫瘤，抗體可包含高度放射性的原子。有多種放射性同位素可用于生成放射偶聯抗體。實例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb"2和Lu的放射性同位素。在將偶聯物用于檢測時，可包含放射性原子用于閃爍照相研究，例如Tc"m或I123，或是包含自旋標記物用于核磁共振(NMR)成像(也稱為石茲共振成像，mri),諸如碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、禮、錳或鐵。可以已知方式將放射性或其它標記物摻入偶聯物。例如，可生物合成肽，或是通過化學氨基酸合成法合成肽，其中使用涉及例如氟-19代替氫的合適氨基酸前體。可經肽中的半胱氨酸殘基來附著標記物，諸如Tc"m或I123、Re186、Re"8和In川。可以經賴氨酸殘基來附著釔-90。IODOGEN法(Fmkeretal.,Biochem.Biophys.Res.Commun.80:49-57(1978))可用于摻入石典-123。《MonoclonalAntibodiesinImmunoscintigraphy》(Chatal,CRCPress,1989)詳細記載了其它方法。如N-琥珀酰亞氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亞氨基-4-(N-馬來酰亞氨基曱基)環己烷-l-羧酸酯(SMCC)、亞氨基硫烷(IT)、亞氨酸酯(諸如鹽酸己二酰亞氨酸二曱酯)、活性酯類(諸如辛二酸二琥珀酰亞氨基酯)、醛類(諸如戊二醛)、雙疊氮化合物(諸如雙(對-疊氮苯曱酰基)己二胺)、雙重氮衍生物(諸如雙(對-重氮苯曱酰基)-乙二胺)、二異硫氰酸酯(諸如曱苯2,6-二異氰酸酯)、和雙活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)的雙功能衍生物。例如，可如Vitettaetal.,Science238:109S(1987)中所述制備蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14標記的l-異硫氰酸苯曱基-3-曱基二亞乙基三參見W094/11026。接頭可以是便于在細胞中釋放細胞毒藥物的"可切割接頭"。例如，可使用酸不穩定接頭、肽酶敏感接頭、光不穩定接頭、二曱基接頭、或含二硫化物接頭(Charietal.，CancerResearch52:127-131(1992);美國專利5,208,020)。本發明的化合物明確設想但不限于用下列交聯劑制備的ADC:商品化(如購自PierceBiotechnologyInc.,Rockford,IL，U.S.A.)的BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC掘CC、認S、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、S旨B、SMPH、sulfo-EMCS、sulfo-GMBS、s函國KMUS、sulfo誦廳S、sulfo-SIAB、sulfo-SMCC和sulfo-SMPB、和SVSB(琥珀酰亞胺基-(4-乙烯基砜)苯曱酸酯)。見2003_2004年度應用手冊和產品目錄(ApplicationsHandbookandCatalog)第467-498頁。抗體-藥物偶聯物的制備在本發明的抗體-藥物偶聯物(ADC)中，將抗體(Ab)經接頭(L)與一個或多個藥物部分(D)偶聯，例如每個抗體偶聯約1個至約20個藥物部分。可采用本領域技術人員知道的有機化學反應、條件和試劑通過數種路徑來制備通式I的ADC，包括(l)抗體的親核基團經共價鍵與二價接頭試劑反應，形成Ab-L,隨后與藥物部分D反應；和(2)藥物部分的親核基團經共價鍵與二價接頭試劑反應，形成D-L，隨后與抗體的親核基團反應。本文描述了用于制備ADC的其它方法。Ab—(L-D)pI接頭可由一種或多種接頭構件組成。示例性的接頭構件包括6-馬來酰亞胺己酰基("MC")、馬來酰亞胺丙酰基("MP")、纈氨酸-瓜氨酸("val-cit")、丙氨酸-苯丙氨酸("ala-phe")、對氨基芐基氧羰基("PAB"),N-琥珀酰亞氨基4-(2-吡咬基硫代)戊酸酯("SPP")，N-琥珀酰亞氨基4-(N-馬來酰亞胺曱基)環己烷-l-羧酸酯("SMCC，)，和N-琥珀酰亞氨基(4-碘-乙酰基)氨基苯曱酸酯("SIAB")。其它的接頭構件是本領域已知的，其中一些在本文中有描述。另見《MonomethylvalineCompoundsCapableofConjugationtoLigands》，流7JC號為10/983,340的美國申請，提交于2004年11月5日，本文引證其全部內容。在一些實施方案中，接頭可包含氨基酸殘基。示例性的氨基酸接頭構件包括二肽、三肽或五肽。示例性的二肽包括纈氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)，丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。示例性的三肽包括甘氨酸-纈氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。構成氨基酸接頭構件的氨基酸殘基包括天然存在的那些，以及稀有(minor)氨基酸以及非天然存在的氨基酸類似物，諸如瓜氨酸。可以設計并優化氨基酸接頭構件對于特定酶(例如腫瘤相關蛋白酶、組織蛋白酶B、C和D或纖溶酶蛋白酶)的酶促切割的選擇性。示例性的接頭構件結構如下圖所示(其中波浪線表示與ADC其它構件共價連接的位點)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>抗體的親核基團包括但不限于(i)N末端氨基；(ii)側鏈氨基，如賴氨酸；(iii)側鏈巰基，如半胱氨酸；和(iv)糖基化抗體中糖的羥基或氨基。氨基、巰基、和羥基是親核的，能夠與接頭部分上的親電子基團反應而形成共價4定，而接頭試劑包括(i)活性酯類，諸如NHS酯、HOBt酯、鹵代曱酸酯、和酸性卣化物；(ii)烴基和苯曱基鹵化物，諸如鹵代乙酰胺；(iii)醛類、酮類、羧基和馬來酰亞胺基團。某些抗體具有可還原的鏈間二硫鍵，即半胱氨酸橋。可通過還原劑諸如DTT(二硫蘇糖醇)處理使抗體具有與其它示例性接頭構件和縮寫包括(其中畫出了抗體(Ab)和接頭，p為1到約8):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>接頭試劑綴合的反應活性。每個半胱氨酸橋理論上將形成兩個反應性硫醇親核體。可經由賴氨酸與2-亞氨基硫烷(Traut氏試劑)的反應，導致胺轉變為硫醇，從而將額外親核基團引入抗體。可以通過引入一個，兩個，三個，四個或者更多半胱氨酸殘基(例如制備包含一個或多個半胱氨酸氨基酸殘基的突變體多肽)來將反應性硫醇基團引入抗體(或其片段)。還可通過修飾抗體來生成本發明的抗體-藥物偶聯物，即引入可與接頭試劑或藥物上的親核取代基反應的親電子部分。可用例如高碘酸鹽氧化劑氧化糖基化抗體的糖，從而形成可與接頭試劑或藥物部分的胺基團反應的醛或酮基團。所得亞胺Schiff堿基可形成穩定的鍵，或者可用例如硼氫化物試劑還原而形成穩定的胺連接。在一個實施方案中，糖基化抗體的碳水化合物部分與半乳糖氧化酶或偏高碘酸鈉的反應可在蛋白質中生成羰(醛和酉同)基團，它可與藥物上的適宜基團反應(Hermanson,BioconjugateTechniques)。在另一個實施方案中，包含N末端絲氨酸或蘇氨酸殘基的蛋白質可與偏高碘酸鈉反應，導致在第一個氨基酸處生成醛(Geoghegan&Stroh,BioconjugateChem.3:138-146(1992);US5362852)。此類醛可與藥物部分iU矣頭親核體反應。同樣，藥物部分上的親核基團包括但不限于胺、硫醇、羥基、酰肼、肟、肼、縮氨基硫脲、肼羧酸酯、和芳基酰肼基團，它們能夠與接頭部分上的親電子基團反應而形成共價鍵，而接頭試劑包括(i)活性酯類，諸如NHS酯、HOBt酯、卣代曱酸酯、和酸性卣化物；(ii)烴基和苯曱基鹵化物，諸如卣代乙酰胺；(iii)醛類、酮類、羧基、和馬來酰亞胺基團。或者，可通過例如重組技術或肽合成來制備包含抗體和細胞毒劑的融合蛋白。DNA的長度可包含各自編碼偶聯物兩個部分的區域，或是彼此毗鄰或是由編碼接頭肽的區域分開，該接頭肽不破壞偶聯物的期望特性。在又一個實施方案中，可將抗體與"受體"(諸如鏈霉親和素)偶聯從而用于腫瘤預先靶向，其中對患者施用抗體-受體偶聯物，接著使用清除劑由循環中清除未結合的偶聯物，然后施用與細胞毒劑(如放射性核苷酸)偶聯的"配體，，(如親合素)。抗體(Ab)-MC-MMAE可以如下所述將本文4是供的任何抗體與MC-MMAE偶聯來制備。將溶于500mM硼酸鈉和500mM氯化鈉，pH8.0的抗體用過量的100mM二硫蘇糖醇(DTT)處理。37。C溫育大約30分鐘后，通過在SephadexG25樹脂上洗脫交換緩沖液，并用含lmMDTPA的PBS洗脫。通過下述方法檢查硫醇基/Ab值由溶液的280nm吸光度確定還原抗體的濃度，通過與DTNB(Aldrich,Milwaukee,WI)反應并測定412nm吸光度來確定硫醇基濃度。將溶于PBS的還原抗體在冰上冷卻。將溶于DMSO中的藥物接頭試劑一馬來酰亞胺基己酰基-monomethylauristatinE(MMAE),即MC-MMAE,在乙腈和水中稀釋到已知濃度，并加入到含還原抗體2H9的冷卻PBS中。大約1小時后，加入過量的馬來酰亞胺終止反應并封閉任何未反應的抗體碌c醇基團。通過離心超濾濃縮反應混合物，將2H9-MC-MMAE通過G25樹脂在PBS中洗脫純化并脫鹽，無菌條件下過0.2pm濾器過濾，并冷凍保存。可以按照為Ab-MC-MMAE提供的規程將本文所述的任何抗體與MC-MMAF偶聯，來制備抗體-MC-MMAF。可以按照為Ab-MC-MMAE提供的M4呈將本文所述的任何抗體與MC-val-cit-PAB-MMAE偶聯，來制備抗體-MC-val-cit-PAB-MMAE。可以按照為Ab-MC-MMAE提供的規程將本文所述的任何抗體與MC-val-cit-PAB-MMAF偶聯，來制備抗體-MC-val-cit-PAB-MMAF。如下所述將本文提供的任何抗體與SMCC-DM1偶聯制備抗體-SMCC-DM1。將純化的抗體用(琥珀酰亞氨基-4-(N-馬來酰亞氨基甲基)環己烷-l-羧酸酯(SMCC，PierceBiotechnology,Inc)衍生化以引入SMCC接頭。具體地說，用7.5個摩爾當量的SMCC(20mM于DMSO中，6.7mg/mL)處理50mM磷酸鉀/50mM氯化鈉/2mMEDTA，pH6.5中20mg/mL的抗體。在環境溫度氬氣氛下攪拌2小時后，將反應混合物用50mM磷酸鉀/50mM氯化鈉/2mMEDTA,pH6.5平衡的SephadexG25柱過濾。合并含有抗體的級分并進行測定。將這樣制備的抗體-SMCC用50mM磷酸鉀/50mM氯化鈉/2mMEDTA,pH6.5稀釋到最終濃度為大約10mg/ml，并與DM1在二曱基乙酰胺中的10mM溶液反應。在環境溫度氬氣氛下攪拌反應物16.5小時。用1xPBS,pH6.5將偶聯反應混合物通過SephadexG25凝膠過濾柱(1.5x4.9cm)過濾。DM1藥物對抗體的比率(p)可以是約2到5,由252nm及280nm的吸光度測量。如下所述將本文提供的任何抗體與SPP-DM1偶聯制備抗體-SPP-DMl。將經過純化的抗體用N-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯衍生化以引入二^5危代吡p定基團。用SPP(5.3個摩爾當量，于2.3mL乙醇中)處理含NaCl(50mM)和EDTA(1mM)的44.7mL50mM磷酸鉀緩沖液(pH6.5)中的抗體(376.0mg,8mg/mL)。在環境溫度氬氣氛下攪拌90分鐘后，將反應混合物用35mM檸檬酸鈉，154mMNaCl，2mMEDTA平衡的SephadexG25柱凝膠過濾。合并含有抗體的級分并加以測定。如上所述測定抗體的修飾程度。將抗體-SPP-Py(大約10微摩爾可釋放的2-硫代吡啶基團)用上述35mM檸檬酸鈉緩沖液，pH6.5稀釋到大約2.5mg/mL的終濃度。然后將含DM1(1.7個當量，17微摩爾)的3.0mM二曱基乙酰胺(DMA，最終反應混合物中3.3%v/v)加入抗體溶液中。反應在環境溫度氬氣氛下進行大約20個小時。將反應物加載到用35mM檸檬酸鈉，154mMNaCl，pH6.5平衡的SephacrylS300凝膠過濾柱(5.0cmx90.0cm,1.77L)上。流速可為大約5.0mL/min,收集了65個級分(每個20.0mL)。每個抗體分子連接的DM1藥物分子的凄t目(p，)通過測量252nm和280nm的吸光度來確定，并且可以是每個2H9抗體大約2個到4個DM1藥物部分(moity)。如下所述將本文提供的任何抗體與BMPE0-DM1偶聯制備抗體-BMPE0-DM1。用雙馬來酰亞胺基試劑BM(PEO)4(PierceChemical)修飾抗體，在抗體表面上留下未反應的馬來酰亞胺基團。這可以通過下面的步驟實現將BM(PEO)4在50%乙醇/水混合物中溶解至10mM的濃度，并以IO倍摩爾過量加入抗體溶液中，其中抗體溶液為含有大約1.6mg/ml(10微摩爾)抗體的磷酸鹽緩沖鹽水；使其反應1小時，形成抗體-接頭中間體2H9-BMPEO。通過在含150mMNaCl的30mM檸檬酸鹽pH6緩沖液中凝膠過濾(HiTrap柱，Pharmacia)去除過量的BM(PEO)4。將大約10倍摩爾過量的DM1溶于二曱基乙酰胺(DMA)中并加入該2H9-BMPEO中間體中。也可以4吏用二曱基曱酰胺(DMF)來溶解藥物部分試劑。讓反應混合物反應過夜，然后凝膠過濾或透析到PBS中以去除未反應的DM1。用S200柱在PBS中進行凝膠過濾去除高分子量聚集體，并提供純化的2H9-BMPE0-DM1。抗體書f生物可進一步修飾本發明的抗體以包含本領域知道的且易于獲得的額外非蛋白質性質部分。在一個實施方案中，適于抗體衍生化的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧曱基纖維素、右旋糖苷、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-l，3-二氧戊環、聚-l，3，6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或隨機共聚物)、和右旋糖香或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的穩定性，聚乙二醇丙醛在生產中可能具有優勢。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附著到抗體上的聚合物數目可以變化，而且如果附著了一個以上的聚合物，那么這些聚合物可以是相同或不同的分子。一般而言，可根據下列考慮來確定用于衍生化的聚合物的數目和/或類型，包括但不限于待改進抗體的具體特性或功能、抗體衍生物是否將用于指定條件下的治療等。藥用配制劑可通過將具有期望純度的抗體與任選的生理可接受的載體、賦形劑或穩定劑(《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版，Osol，A.編，1980)混合，以水溶液、凍干或其它干燥制劑的形式，制備包含本發明抗體的治療用配制劑供貯存。可接受的載體、賦形劑或穩定劑在所采用的劑量和濃度對接受者是無毒的，包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽，組氨酸和其它有機酸的緩沖劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸和曱硫氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二曱基千基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；苯酚、丁醇或苯曱醇；對羥基苯曱酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸曱酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間曱酚)；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA;糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；金屬復合物(例如Zn-蛋白質復合物)；和/或非離子表面活性劑，諸如TWEENtm、PLUROMCStm或聚乙二醇(PEG)。本文中的配制劑還可含有一種以上的所治療具體適應癥所必需的活性58化合物，優選那些活性互補且彼此沒有不利影響的。合適的是，此類分子以對于預定目的有效的量組合。活性成分還可包載于例如通過凝聚技術或通過界面聚合制備的微嚢中(例如分別是羥曱基纖維素或明膠微嚢和聚(曱基丙烯酸曱S旨)微嚢)、在膠狀藥物遞送系統中(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米膠嚢)、或在粗滴乳狀液(macroemulsions)中。此類技術公開于例如《Remington'sPharmaceuticalSciences》，第16版,Osol，A.編,1980。用于體內施用的配制劑必須是無菌的。這可容易地通過使用無菌濾膜過濾來實現。可制備持續釋放制劑。持續釋放制劑的合適例子包括含有本發明免疫球蛋白的固體疏水性聚合物半透性基質，該基質是定型產品的形式，例如薄膜或微嚢。持續釋放基質的例子包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-曱基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利第3,773,919號)、L畫谷氨酸和L-谷氨酸y乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。雖然諸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇酸等聚合物能夠釋放分子達100天以上，但是某些水凝膠釋放蛋白質的時間較短。當包嚢的免疫球蛋白在體內長時間維持時，它們可能由于暴露于37。C的潮濕環境而變性或聚集，導致生物學活性損失和免疫原性可能改變。可以根據相關機制來設計合理的穩定化策略。例如，如果發現聚集機制是經由硫醇-二硫化物互換的分子間S-S鍵形成，那么可通過修飾巰基殘基、由酸性溶液凍干、控制濕度、采用適宜添加劑和開發特定聚合物基質組合物來實現穩定。用途本發明的抗體可用于例如體外、回體(exvivo)和體內治療方法。本發明的抗體可用作拮抗劑，在體外、離體和/或體內部分或完全阻斷特異抗原活性。此外，至少有些本發明抗體可中和來自其它物種的抗原活性。因此，本發明的抗體可用于抑制特異抗原活性，例如在含有抗原的細胞培養物中、試者(如黑猩猩(chimpanzee)、狒狒(baboon)、狨猴(marmoset)、獼猴(cynmolgus)和恒河浙美、豬或小鼠)中。在一個實施方案中，本發明的抗體可用于抑制抗原活性，即使抗體接觸抗原，使得抗原活性受到抑制。在一個實施方案中，抗原是人蛋白質分子。在一個實施方案中，本發明的抗體可用于在患有某種病癥的受試者中抑制抗原的方法，在所述病癥中抗原活性是有害的，包括對受試者施用本發明的抗體，使得受試者中的抗原活性受到抑制。在一個實施方案中，抗原是人蛋白質分子且受試者是人受試者。或者，受試者可以是表達本發明抗體所結合的抗原的哺乳動物。又或者，受試者可以是其中導入了抗原(如通過施用抗原或通過表達抗原轉基因)的哺乳動物。可出于治療目的將本發明的抗體施用于人受試者。此外，可出于獸醫目的將本發明的抗體施用于表達抗體與之交叉反應的抗原的非人哺乳動物(如靈長類、豬或小鼠)，或是人疾病的動物模型。關于后者，此類動物模型可用于評估本發明抗體的治療功效(如測試施藥的劑量和時程)。本發明的抗體可用于治療、抑制、延遲其發展、預防/延遲其復發、改善、或預防與I型干擾素/IFNAR2的異常表達和/或活性有關的疾病、病癥或狀況，包括但不限于炎癥性、自身免疫性和其它免疫性病癥。一方面，本發明的阻斷性抗體對IFNAR2特異，且通過阻斷或干擾涉及IFNAR2的配體-受體相互作用來抑制IFNAR2活性，由此抑制相應的信號途經和其它相關的分子或細胞事件。本發明的特色還有受體特異抗體，它們不是必須阻止(或僅部分阻止)配體結合，但顯著地干擾受體活化，由此抑制通常由配體結合啟動的任何應答。在某些實施方案中，將包含與細胞毒劑偶聯的抗體的免疫偶聯物施用于患者。在有些實施方案中，免疫偶聯物和/或它所結合的抗原由細胞內在化，導致免疫偶聯物殺傷它所結合的靶細胞的治療功效提高。在一個實施方案中，細胞毒劑靶向或干擾靶細胞中的核酸。此類細胞毒劑的實例包括本文所述任何化療劑(諸如美登木素生物堿或加利車霉素)、放射性同位素、或核糖核酸酶或DNA內切核酸酶。在治療中，本發明的抗體可單獨使用，或是與其它組合物聯合使用。例如，本發明的抗體可與另一種抗體，和/或佐劑/治療劑(例如類固醇)聯合施用。例如，在治療方案中，例如在包括炎癥性、自身免疫性和其它免疫病癥在內的任何本文所述疾病的治療中，本發明的抗體可以與抗炎劑和/或抗菌防腐藥聯合。上文所述此類聯合療法包括聯合施藥(當相同或分開配制劑中包含兩種或多種藥劑時)和分開施藥，在后一種情況中，本發明抗體的施用可發生在伴隨療法的施用之前和/或之后。可通過任何合適手段來施用本發明的抗體(和伴隨治療劑)，包括腸胃外、皮下、腹膜內、肺內和鼻內，以及損傷部位內(如果希望局部治療的話)施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。另外，脈沖輸注抗體也是合適的，特別是抗體劑量遞減時。可通過任何合適路徑服藥，例如通過注射，諸如靜脈內或皮下注射，這部分取決于施藥是短期的還是長期的。可以與優良醫學實踐一致的方式配制、劑量給藥和施用本發明的抗體組合物。在此內容中考慮的因素包括所治療的具體病癥、所治療的具體哺乳動物、患者個體的臨床狀況、病癥的起因、遞送藥劑的部位、施藥的方法、施藥的日程安排、和醫學從業人員知道的其它因素。不是必需而是任選將抗體與目前用于預防或治療所討論病癥的一種或多種藥劑一起配制。此類其它藥劑的有效量取決于配制劑中存在的本發明抗體的量、病癥或治療的類型、和上文討論的其它因素。這些通常是以與本文所述的相同劑量和施用路徑使用，或是本文所述劑量的大約1-99%,或者施用按經驗/臨床上確定為合適的任何劑量或路徑。對于疾病的預防或治療，本發明抗體的適宜劑量(在單獨使用或聯合其它藥劑諸如化療劑時)將取決于待治療疾病的類型、抗體的類型、疾病的嚴重程度和進程、施用抗體是出于預防還是治療目的、先前的療法、患者的臨床病史和對抗體的響應、及主治醫師的判斷。合適的是，一次性或通過一系列治療將抗體施用于患者。根據疾病的類型和嚴重程度，施用于患者的初始候選劑量可以是約lpg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)抗體，例如或是通過一次或多次分開施藥或是通過連續輸注。根據上文所述因素，典型日劑量的范圍可以是約lpg/kg至100mg/kg或更多。對于持續數天或更長的重復施藥，根據狀況，一般持續治療直至疾病癥狀發生期望的抑制。抗體的例示劑量的范圍可以是約0.05mg/kg至約10mg/kg。由此，可對患者施用約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意組合)的一劑或多劑。這些劑量可間歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受約2劑至約20劑，或例如約6劑抗體)。可施用一劑較高的初始加載劑量，后續一劑或多劑較低劑量。例示性劑量給藥方案包括施用一劑約4mg/kg抗體的初始加載劑量，后續每周一劑約2mg/kg的維持劑量。然而，其它劑量方案也是有用的。這種療法的進程易于通過常規技術和測定法來監測。制品在本發明的另一個方面，提供了包含可用于治療、預防和/或診斷上文所述病癥的物質的制品。制品包括容器和貼在所述容器上或與其相連的標簽或包裝插頁。合適的容器包括例如瓶子、小管、注射器等。容器可用各種材料制成，諸如玻璃或塑料。容器中裝有其自身或在聯合其它組合物時有效治療、預防和/或診斷疾患的組合物，而且可具有無菌存取口(例如容器可以是具有皮下注射針頭可刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或小管)。組合物中的至少一種活性劑是本發明的抗體。標簽或包裝插頁指示該組合物用于治療選擇的疾患。此外，制品可包括(a)其中裝有組合物的第一容器，其中所述組合物包含本發明的抗體；和(b)其中裝有組合物的第二容器，其中所述組合物包含額外的細胞毒劑或其它治療劑。本發明此實施方案中的制品還可包括指示所述組合物可用于治療特定疾患的包裝插頁。或者/另外，制品還可包括第二(或第三)容器，其中裝有藥用緩沖劑，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。它還可包括商業和用戶立場上所需的其它物質，包括其它緩沖劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。下面是本發明方法和組合物的實施例。應當理解，根據上文提供的一般描述，可實行多種其它實施方案。實施例材津牛和方法針對IFNAR2的抗體的產生基本上如2003年1月23日公開的USPub.2003-0018174所述產生針對IFNAR2的抗體。單克隆抗體(mAb)親和力的測定在Biacore3000儀上使用BiosensorCM5芯片(Biacorecat#BR-1000-14;Neuchatel,Switzerland)進行結合親和力測定。使用10mM乙酸鈉pH4.8的緩沖液，將CHO細胞中產生的人干擾素抗體受體2(IFNAR2)ECD蛋白與IgGl的融合物(IFNAR2.ECD.IgGl)固定到所述芯片上。使用針對受體卩鏈的抗體作為測定中的分析物。將每種抗體在加有0.05%Tween20TM的PBS中制成500nM到0.69nM的一系歹'J1/3連續稀釋物。結合在37。C完成，其中最高的兩個測試物濃度的解離速率是60分鐘。在各次分析物注入之間，通過注入20mM鹽酸兩次再生芯片。使用1:1(Langmuir)結合模型同時擬合動力學ka/kd來測量KD。4元病毒測定進行遵照下述規程的實驗來測量干擾素介導的抗病毒活性和多種抗體中和該活性的能力。對ECMV敏感的細胞系(例如WISH細胞系)在組織培養物中被這種病毒殺死。如果與ECMV溫育的過程中存在干擾素(IFN)，則細胞被保護免遭病毒殺死。可以將抗IFN受體抗體與干擾素一起添加到組織培養物中來評估這些抗體的中和活性。可以基于抗體阻斷干擾素保護活性的能力來確定該抗體的中和活性。材料(下文所有的體積計算均相應于總終體積為1L的制備物)WISH成纖維細胞(人)成纖維細胞培養基培養基Eagle'sMEM(ATCC#30-2003)900ml(已含有非必需氨基酸，2mML-glu,1mM丙酮酸鈉和1500mg/L》友酸氫鈉)10。/。胎牛血清(FCS)(熱滅活)100ml10mMHEPES10ml(lM)1X青霉素/鏈霉素10ml培養基DDMEM(高glu)900ml10%FCS(熱滅活)0.4%碳酸氬鈉53ml(7.5%)4ml(1M)20ml(200mM)100ml4mMHEPES40mML-谷氨酰胺青霉素/鏈霉素(lX)10ml(卿生物測定培養基DMEM(高glu)2%FCS(熱滅活)0.4%碳酸氬鈉900ml53ml(7.5%)4ml(1M)20ml(200mM)lOml(卿畫ml4mMHEPES40mML-谷氨酰胺青霉素/鏈霉素(lX)EMC病毒(小鼠腦心肌炎，ATCCVR-129B),保存于-80。C;以1ml等分保存(效價大約3.25x108PFU/ml).結晶紫溶液(0.5%)96孔平底平板12孔多孔洗4反機/真空濾器系統流程在成纖維細胞培養基中培養成纖維細胞。第1天1.將成纖維細胞以2x1()S個細胞/ml(100(al/孔)接種于96孔平板上培養基D中，并在37。C、5。/。C02條件下溫育18-24h。1.在有或沒有中和抗體存在的條件下，將IFN(例如IFN-a(Genentech,Inc.自制或購自PBL(Piscataway,NewJersey))和白細胞干4尤素(Sigma;St.Louis,MO))在培養基D中進行稀釋。將100pi的每種稀釋物加入每個孔中(200pl終體積)。然后將平板在37。C、5。/。C02條件下溫育18-24h。第2天:第3天1.對所有的孔進行抽吸以去除培養基D(+/-IFNAR2抗體(Ab)稀釋物，如數據組/圖中示明的)。向每個孔中加入生物測定培養基(100pl/孔)。2.用EMC病毒對除了對照孔之外的所有孔進行攻擊(100(ilEMC/孔—200pi終體積，于生物測定培養基中)。WISH細胞1ml中5pl=1MOI每個需要病毒的平板(100pl/孔=7ml)35(il(未稀釋病毒)于6965^生物測定培養基中3.將細胞再次在37。C,5%C02條件下溫育18-24個小時(在專用于病毒操作的培養箱中)。第4天1.抽吸掉培養基，并用0.5%結晶紫(每個孔290^1)染色10-30min,然后用蒸餾水(2X)清洗。2.干燥后在540nm讀板。結果IFNAR2抗體在抗病毒測定中對干擾素的中和測試了針對IFNAR2生成的抗體中和1000U/ml的IFN-a對病毒攻擊的WISH成纖維細胞的抗病毒作用的能力。抗體1922和1923的數據顯示在表A并圖示在圖1中。對照實驗的組成為(i)在有IFN-a存在的條件下培養的細胞；(ii)在有IFN-a以及已知的阻斷性抗-IFN-a抗體存在的條件下培養的細胞；(iii)未剌激細胞(即未加入I型干擾素)的生長；(iv)在沒有病毒存在的條件下細胞的生長。測試了第三種抗體一抗體1924中和a干擾素的能力。抗體1924能夠中和a干擾素，盡管以相同抗體濃度測試時其活性不如抗體1922和1923強(數據未顯示)。Chuntharapaietal.,J,Immunol.(1999),163:766-773中也對抗體1924作了一般性的表征(表1中"3B2"所代表的抗體)。表達抗體1924的雜交瘤細胞系已經保藏于ATCC,如下文所述。表A<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>還測試了針對IFNAR2生成的抗體中和不同濃度的人白細胞干擾素對病毒攻毒的WISH成纖維細胞的抗病毒作用的能力。抗體1922的數據顯示在表B并圖示在圖2中。抗體1923的數據顯示在表C并圖示在圖3中。對照實驗的組成為(i)在有a2干擾素(1000U/ml;Sigma)存在的條件下培養的細胞；(ii)在有a2干擾素(IOOOU/ml;Sigma)及抗體(Ab)1922或抗體(Ab)1923(10pg/ml)存在的條件下培養的細胞；(iii)在有IFN-y(10U/ml;PBL)存在的條件下培養的細胞；(iv)在有IFN-y(10U/ml;PBL)及抗體1922或1923(10嗎/ml)存在的條件下培養的細胞；(v)未刺激細胞(即沒有添加I型干擾素)的生長；(vi)在沒有病毒存在的條件下細胞的生長。表B<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>表c<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>還測試了抗體中和IFN-卩的抗病毒保護作用的能力。10(ig/ml濃度的抗體1922和1923針對IFN-a(1000U/ml)或IFN-p(25U/ml)的測試數據如下文表D和圖4所示。對照實驗的組成亦為(i)在僅有IFN-a存在的條件下細胞的活力(viability);(ii)在僅有IFN-(3存在的條件下細胞的生長；(iii)未刺激細胞的活力；(iv)在沒有病毒存在的條件下細胞的活力。表D<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>還測試了抗體1922在多種干擾素濃度下中和IFN-P(PBL,批號1400-2)的抗病毒保護作用的能力。數據如下面的表E和圖5所示。對照實驗的組成亦為(i)在僅有IFN扁a(1000U/ml)存在的條件下的細胞活力；(ii)在有IFN-a(1000U/ml)和抗體1922(10嗎/ml)存在的條件下的細胞活力；(iii)未刺激細胞的活力；(iv)在沒有病毒存在的條件下細胞的活力。表E<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>還測試了抗體1922和1923在多個抗體濃度下中和IFN-卩(PBL,批號11400-2)抗病毒保護作用的能力。抗體1922的數據在下文表F和圖6中顯示。抗體1923的數據在下文表G和圖7中顯示。對照實驗的組成亦為(i)在有a干擾素(IFN-a)(1000U/ml)存在的條件下的細胞生長；(ii)在有a干擾素和抗體1922(表F)或卩干擾素(IFN-P)和抗體1922(表G)存在的條件下的細胞活力；(iii)未刺激細胞的細胞活力；(iv)在沒有病毒存在的條件下細胞的活力。表F<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>表G<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>無病毒3.5973.2693.4633.443通過Biacore測定評估的抗體對IFNAR2的結合親和力通過Biacore測定了抗體1922和1923對人IFNAR2.ECD.IgGl的結合親和力。沒有觀察到對鼠IgGl和IgG2a的結合，而抗體1922和1923顯示了對IFNAR2的高結合親和力。表H抗體結合親和力對照抗體1無結合對照抗體2無結合抗體192258pM抗體1923280pM對照抗體3無結合下列雜交瘤已經保藏于美國典型培養物保藏中心(theAmericanTypeCultureCollection,12301ParklawnDrive,Rockville,MD,USA(ATCC)):細胞系ATCC保藏號為保藏曰4元體1922(1C7.8.8)PTA-62422004年10月5日抗體1923(2B4.10.6)PTA-62432004年10月5日抗體1924(3B2.5.7)PTA-62442004年10月5曰這些保藏是根據《國際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約》及其實施細則(《布達佩斯條約》)的規定作出的。這將保證自保藏日起保藏物維持存活30年。這些細胞林將由ATCC根據《布達佩斯條約》的規定予以提供，并且受Genentech,Inc.和ATCC之間達成的協議的制約；該協議保證，一旦相關的美國專利得到授權，或者一旦任何美國專利申請或任何外國專利申請對公眾公開，以其先發生者為準，公眾即對這些細胞系享有永久且不受限制的獲取權，該協議還保證，由美國專利商標局局長根據35USC§122及據此作出的局長令(包括37CFR§1.14，特別是886OG638)的規定認定為有權獲取這些細胞系的，即能夠獲取這些細胞系。本申請的受讓人已經同意，如果被保藏的細胞系在合適的條件下培養的過程中發生丟失或破壞，在得到通知后，將迅速用相同細胞系的樣品予以替換。對保藏細胞系的獲取權不應被解釋為對于侵犯任何政府根據其專利法授予的權利而實施本發明之行為的許可。權利要求1.一種分離的抗體，其包含選自下組的至少一個高變區(HVR)序列該組由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244的保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的HC-HVR1、HC-HVR2、HC-HVR3、LC-HVR1、LC-HVR2和LC-HVR3構成，并且該抗體結合人α干擾素受體2(IFNAR2)。2.—種分離的抗體，其包含如下所述的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列，且結合人a干擾素受體2(IFNAR2):所述重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列是由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244的保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列。3.—種免疫球蛋白多肽，其包含選自下組的至少一個高變區(HVR)序列該組由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244的保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的HC-HVRl、HC-HVR2、HC-HVR3、LC-HVRl、LC-HVR2和LC-HVR3構成，并且該免疫球蛋白多肽結合人a干擾素受體2(IFNAR2)。4.一種免疫球蛋白多肽，其包含如下所述的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列，且結合人a干擾素受體2(IFNAR2):所述重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列是由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體的重鏈可變域和/或輕鏈可變域序列。5.—種分離的抗體，其與以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體結合人IFNAR2上相同的表位。6.—種分離的抗體，其與以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系所產生的抗體竟爭對人IFNAR2的結合。7.前述任一項權利要求的抗體，其中所述抗體抑制人白細胞干擾素的々元病毒活'f生。8.前述任一項權利要求的抗體，其中所述抗體抑制人a干擾素的抗病毒活性。9.前述任一項權利要求的抗體，其中至少大約10pg/ml的全長IgG形式的所述抗體抑制大約0.5U/ml到大約1000U/ml人白細力包干擾素的至少大約25%的抗病毒活性。10.權利要求9的抗體，其中所述白細胞干擾素是大約10U/ml。11.前述任一項權利要求的抗體，其中至少大約10pg/ml的全長IgG形式的所述抗體抑制大約1000U/mla干擾素的至少大約25%的抗病毒活性。12.前述任一項權利要求的抗體，其中至少大約0.01|ig/ml的全長IgG形式的所述抗體抑制大約25U/ml卩干擾素的至少大約25%的抗病毒活性。13.權利要求12的抗體，其中抗體濃度為至少大約10嗎/ml。14.前述任一項權利要求的抗體，其中至少大約10嗎/ml的全長IgG形式的所述抗體抑制大約25U/ml卩干擾素的至少大約25%的抗病毒活性。15.前述任一項權利要求的抗體，其中全長IgG形式的所述抗體以300pM或更好的結合親和力特異性結合人IFNAR2。16.權利要求15的抗體，其中所述結合親和力是280pM或更好。17，權利要求16的抗體，其中所述結合親和力是200pM或更好。18.權利要求17的抗體，其中所述結合親和力是100pM或更好。19.權利要求18的抗體，其中所述結合親和力是60pM或更好。20.前述任一項權利要求的抗體，其中所述抗體以基本上相等的抗體效價阻斷a干擾素和(3干擾素的抗病毒活性。21.前述任一項權利要求的抗體，其中相等量的所述抗體能夠阻斷第一種I型干擾素和第二種I型干擾素的至少75%的抗病毒活性，其中這些干擾素的每一個以其各自的最優抗病毒量施用于WISH細胞生物測定中，且其中所述第二種I型干擾素是(3干擾素。22.權利要求21的IFNAR2抗體，其中所述第一種I型干擾素是a干擾素。23.權利要求21的IFNAR2抗體，其中所述第一種I型干擾素是人白細胞干擾素。24.前述權利要求中任一項的分離的抗體，其中所述抗體不是如下所述的抗體由具有ATCC保藏號HB-12426、12427和/或12428的雜交瘤細胞系所產生的抗體；或1993年出版的JournalofBiologicalChemistry第268巻第10895到10899頁描述的IFNAR2抗體；或PCT公開號為W096/33735、WO96/34096、W09741229的PCT申請，歐洲專利588177Bl、927252、676413,和/或美國專利6458932和6136309中公開的分離的IFNAR2抗體。25.前述權利要求中任一項的分離的抗體，其中該抗體不與下述抗體竟爭對人IFNAR2的結合由具有ATCC保藏號HB-12426、12427和/或12428的雜交瘤細胞系所產生的抗體；或1993年出版的JournalofBiologicalChemistry第268巻第10895到10899頁描述的IFNAR2抗體；或PCT公開號為WO96/33735、WO96/34096、WO9741229的PCT申請，歐洲專利588177Bl、927252、676413,和/或美國專利6458932和6136309中7>開的分離的IFNAR2抗體。'26.前述權利要求中任一項的分離的抗體，其中該抗體不與下述抗體結合相同的人IFNAR2上的表位由具有ATCC保藏號HB-12426、12427和/或12428的雜交瘤細胞系所產生的抗體；或1993年出版的JournalofBiologicalChemistry第268巻第10895到10899頁描述的IFNAR2抗體；或PCT公布W096/33735、WO96/34096、W09741229,歐洲專利588177Bl、927252、676413,和/或美國專利6458932和6136309中公開的分離的IFNAR2抗體27.IFNAR2抗體，其由以保藏號為PTA-6242、PTA-6243或PTA-6244保藏在美國典型培養物保藏中心(ATCC)的雜交瘤細胞系的抗體編碼序列所編碼。28.編碼前述任一項權利要求的抗體的核酸分子。29.宿主細胞，其包含編碼前述任一項權利要求的抗體的核酸序列。30.能夠產生前述任一項權利要求的IFNA2抗體的細胞系。31.—種產生前述任一項權利要求的抗體的方法，包括在產生所述抗32.—種組合物，包含有效量的前述任一項權利要求的抗體和載體。33.—種診斷樣品中IFNAR2的存在的方法，包括使樣品接觸前述任一項權利要求的抗體。34.—種治療與IFN-a、卩和/或IFNAR2的表達相關的疾病或狀況的方法，該方法包括對患者施用有效量的前述任一項權利要求的抗體。35.權利要求24的方法，其中所述患者是哺乳動物患者。36.權利要求36的方法，其中患者是人。37.權利要求30的方法，其中所述疾病是自身免疫疾病。38.權利要求37的方法，其中所述疾病選自胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、系統性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫性曱狀腺炎，斯耶格倫氏綜合征、銀屑病、炎性腸病(例如潰瘍性結腸炎，克羅恩氏病)、類風濕性關節炎和IgA腎病。全文摘要提供了抗IFNAR2單克隆抗體和使用這些抗體的方法。文檔編號A61K39/395GK101243105SQ200680030466公開日2008年8月13日申請日期2006年6月21日優先權日2005年6月22日發明者克斯廷·施密特,阿南·丘恩薩拉佩申請人:健泰科生物技術公司