專利名稱：：大蝎子草的臨床新用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及大蝎子草的臨床新用途，特別是大蝎子草提取物在制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病等心血管疾病藥物中的應用，屬于藥品的
技術領域：
。技術背景大蝎子草Girardiniadiversifolia(Link)Friis是蕁麻科蝎子草屬植物大蝎子草Girardiniadiversifolia(Link)Friis的干燥全草，莖高大2米，具5棱，生刺毛和細糙毛或伸展的絨毛，多分枝。葉互生，葉片輪廓寬卵形、扁圓形或五角形，莖干的葉較大，分枝上的葉較小，長和寬均825cm，基部寬心形或近截形，具(3-)5-7深裂片，稀、不裂，邊緣有不規則的牙齒或重牙齒，上面疏生刺毛和糙伏毛，下面生糙伏毛或短硬毛和在脈上疏生刺毛，基生脈3條；葉柄長315cm，毛被同莖上的；托葉大，長圓狀卵形，長1030mm，外面疏生細糙伏毛。大蝎子草，性涼、味苦、辛，有毒。具有祛痰，利濕，解毒的功效，在貴州苗族的部分區域被使用，用于咳嗽痰多，水腫。外用治瘡毒。用量為1050g，外用適量煎水洗。大蝎子草用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，目前尚未見有報道。
發明內容本發明的目的在于，提供大蝎子草的臨床新用途。即大蝎子草在制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病藥物中的應用。用大蝎子草為原料制成的藥物制劑對肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病等心血管疾病具有顯著的治療作用本發明的技術方案。大蝎子草的臨床新用途，是將大蝎子草用在制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病藥物中。上述大蝎子草的臨床新用途中，大蝎子草提取物應用于制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病的藥物，可采用任何臨床上允許的劑型。可以是口服藥劑，如散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、口服液、糖漿劑、分散片、噴霧劑或氣霧劑等；也可以是非口服藥劑，如栓劑、注射劑(包括靜脈注射、肌肉注射)、軟膏劑、吸入劑、凝膠劑等。前述大蝎子草的臨床新用途中，將大蝎子草用于制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病的藥物，是以大蝎子草為原料，按常規工藝經提取得到大蝎子草總提取物，然后再加入相應輔料，制備成任何一種適合于臨床上使用的口服或非口服劑型，如散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、微囊劑、丸劑、滴丸、軟膠囊、口服液、糖漿劑、分散片、噴霧劑或氣霧劑、栓劑、注射劑(包括靜脈注射、肌肉注射)、軟膏劑、吸入劑、凝膠劑等。所用的輔料包括常規的溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、粘合劑、潤滑劑、潤滑劑、濕潤劑、增稠劑、增溶劑、基質等藥物輔料。前述大蝎子草的臨床新用途中，將大蝎子草用于制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病的藥物，還可以與解表藥、清熱藥、瀉下藥、祛風濕藥、化濕藥、利水滲濕藥、消食藥、止血藥、溫里藥、理氣藥、化瘀止血藥、活血化瘀藥、化痰止咳平喘藥、安神藥、平肝息風藥、開竅藥、補虛藥中的一種或一種以上的藥物組成復方藥物。前述大蝎子草的臨床新用途中，將大蝎子草用于制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病藥物，所述的解表藥是桂枝、細辛、生姜、薄荷、葛根或升麻；所述的清熱藥是黃芩、黃連、黃柏、蒲公英或魚腥草，所述的瀉下藥是大黃、番瀉葉或巴豆，所述的祛風濕藥是獨活、川烏或雷公藤，所述的化濕藥是蒼術或厚樸，所述的利水滲濕藥是茯苓、豬苓、澤瀉或薏苡仁，所述的消食藥是山楂或麥芽，所述的止血藥是三七、蒲黃、茜草或白及，所述的溫里藥是附子、干姜、肉桂、吳茱萸、花椒或丁香；所述的理氣藥是陳皮、青皮、木香、香附、川楝子或烏藥；所述的化瘀止血藥是三七、蒲黃或茜草；所述的活血化瘀藥是川芎、延胡索、郁金、姜黃、乳香、沒藥、丹參、牛膝、紅花、桃仁、益母草、毛冬青、莪術、水蛭、血竭或馬錢子；所述的化痰止咳平喘藥是半夏、天南星、橘梗、川貝母、洋金花；安神藥是酸棗仁或靈芝；平肝息風藥是天麻、鉤藤、羚羊角、全蝎、僵蠶、地龍或牛黃；所述的開窮藥是麝香、冰片或蘇合香；所述的補虛藥是人參、西洋參、黨參、黃芪、白術、山藥、甘草或刺五加。本發明應用大蝎子草制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病的藥物，其藥物療效可通過大蝎子草提取物對肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤及血管栓塞性疾病等實驗動物模型的影響來表現。以下是本發明的實驗例實驗例l:大蝎子草提取物對對大鼠實驗性急性肝損傷的影響1.實驗材料1.1材料大蝎子草的二氧化碳超臨界提取物，為灰褐色粉末。人用量為0.512g(提取物)/10120g生藥/60kg。1.2實驗動物健康雄性SD大鼠，ICR小鼠，清潔級，體重為180220g，貴陽醫學院試驗動物中心，合格證號SCXK(黔)2002-2001。動物飼以試驗全價顆粒飼料(貴陽醫學院試驗動物中心提供)，自由飲7K，室溫22士2。C。2.方法2.l大蝎子草對D-Gal誘導急性肝損傷模型的影響SD大鼠50只，體重為180220g，隨機分為5組，g卩正常對照組(給予等容積蒸餾水)、模型組(給予等容積蒸餾水)、藥物組分為三個劑量組2.5g/kg、5g/kg、10g/kg，給藥容積為10ml/kg;各組連續灌胃給藥5d后，末次給藥后除正常對照組外，其余各組腹腔注射D-Gal800mg/kg，llh后，各組灌胃給予1次藥物，lh后，經球后靜脈叢取血，分析AST、ALT。2.2大蝎子草對CCU誘導小鼠肝損傷模型的影響ICR健康雄性小鼠50只隨機分為5組，正常對照組(給予等容積蒸餾水)、模型組(給予等容積蒸餾水)、藥物組分為三個劑量組4g/kg、8g/kg、16g/kg，給藥容積為20ml/kg;各組連續灌胃給藥5d后，于給藥后lh，除正常對照組外其余各組腹腔注射含O.5%CC14的橄欖油10ml/kg，造模后16h各組再給藥1次，lh后小鼠球后靜脈叢取血，1500轉/min，分離血清，按市售試劑盒分析ALT、AST活力。2.3大蝎子草對小鼠酒精性肝損傷的保護作用將小鼠隨機分為5組空白對照組(給予等容積蒸餾水)、模型組(給予等容積蒸餾水)、藥物組分為三個劑量組4g/kg、8g/kg、16g/kg，給藥容積為20ml/kg;各組連續灌胃給藥30d。末次給藥后60min，除空白對照組外其余各組經口l次灌胃酒精50。/。分析純的乙醇12ml/kg(4.8g/kg)。空白對照組給予蒸餾水，禁食12h后取血進行生化分析，處死動物，取肝臟用生理鹽水制成10%的肝臟勻漿，檢測肝組織中MDA、GSH、TG的含量。2.4數據分析與統計方法所有數據以x士s表示，統計學分析采用student-T檢驗。3.結果3.l大蝎子草提取物對D-氨基半乳糖所致大鼠急性肝損傷的影響模型組腹腔注射D-Gal后，血中AST、ALT顯著增加，而大蝎子草連續灌胃給藥5d，顯著降低血中AST、ALT。結果見表l。表l蝎子草提取物對D-Gal肝損傷大鼠血清ALT和AST活性的影響(x士s，n=10)組別劑量(g生藥/kg)AST(U/L)ALT(U/L)對照組215±4560±16模型組876±163""382±123""<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.053.2大蝎子草提取物對CCU肝損傷小鼠血清ALT和AST活性的影響小鼠注射CCU后16h，血清ALT、AST活力顯著升高。與模型組比較，大蝎子草提取物可顯著抑制ALT、AST活力的升高，表明大蝎子草可明顯改善CCU所致小鼠急性肝損傷。結果見表2。表2大蝎子草提取物對CCU肝損傷小鼠血清ALT和AST活性的影響(x士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.05。3.3大蝎子草對小鼠酒精性肝損傷的保護作用乙醇肝損傷模型組小鼠肝組織中的丙二醛、三酰甘油均高于空白對照組，差異有顯著性意義(P〈0.01);乙醇肝損傷模型組小鼠肝組織中的還原型谷胱甘肽低于空白對照組，差異有顯著性意義(P〈0.01)，說明模型建立成功。16g/kg大蝎子草組小鼠肝組織中還原型谷胱甘肽高于乙醇肝損傷模型組，差異有顯著性意義(P〈0.05);16g/kg大蝎子草組小鼠肝組織中的丙二醛、三酰甘油低于乙醇肝損傷模型組，差異有顯著性意義(P〈0.05)，結果見表3。表3大蝎子草提取物對酒精性肝損傷小鼠肝組織MDA、GSH、TG的影響(x士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.05。實驗例2:大蝎子草提取物對大鼠實驗性腎炎的影響1.實驗材料1.l材料大蝎子草的二氧化碳超臨界提取物，人用量為0.512g(提取物)/10120g生藥/60kg。牛血清白蛋白(BSA)(Sino-AmericanBiotec)葡萄球菌腸毒素(SEB)(解放軍軍事科學院)弗氏完全佐劑和不完全佐劑(BioBasic)1.2實驗動物健康SD大鼠，清潔級，貴陽醫學院試驗動物中心，合格證號SCXK(黔)2002-2001。動物經普通飼料適應性喂養l周后，選用尿紅細胞、尿蛋白定性結果陰性者進入實驗。動物飼以試驗全價顆粒飼料(貴陽醫學院試驗動物中心提供)，自由飲水，室溫22士2。C。2.方法2.1大蝎子草提取物對大鼠系膜增生性腎炎的防治作用SD大鼠80只，隨機選擇10只作為正常對照組，其他大鼠自實驗第ld起，以BSA20mg配成水溶液隔日灌胃l次(約lml/100g體重)，至實驗結束。實驗的第l天經皮下分點注射完全弗氏完全佐劑0.2ml(含BSA2mg)，第8天注射弗氏不完全佐劑0.2ml(含BSA2mg)，實驗第8、15d尾靜脈注射SEB(0.4mg/kg)各1次，其中30只，與模型復制同日灌胃給予不同劑量的大蝎子草。每周收集尿液作常規檢査RBC、WBC，以出現尿蛋白(定性1+)提示動物模型成功，繼續灌胃BSA至14周末，將大鼠再隨機分為模型組、大蝎子草提取物2.5、5.0、10g(生藥)/kg等劑量組。每日灌胃1次，模型組給予等容積的蒸餾水，各組給藥容積為10ml/kg，至第18周末處死動物。代謝籠收集O、2、6、10、14及18周末大鼠24H的尿液，尿沉渣作常規鏡檢分析RBC、WBC及尿蛋白。球后靜脈叢取血，分離血清，分析肌酐、尿素氮、總蛋白、白蛋白及ALT。2.2大蝎子草提取物對大鼠Heymann腎炎模型的影響取150200g左右大鼠，雌雄兼用，處死后取出腎臟插入導管，用生理鹽水反復沖洗后，取腎皮質5g研成勻漿，與弗氏完全佐劑混勻成10ml，加生理鹽水20ml，給同種雄性大鼠ip，兩周1次，每次1.52ml，共8次，直至出現蛋白尿。將形成模型的雄性SD大鼠40只，平分為4組，即模型對照組、大蝎子草提取物2.5、5.0、10g(生藥)/kg等劑量組，并取正常雄性大鼠10只設為正常對照組，給藥容積為10ml/kg，每日1次，正常對照組與模型對照組給予等容積蒸餾水。連續給藥30d，并于大鼠注射腎勻漿弗氏完全佐劑混懸液前、給藥前及給藥后，測定家兔的Cr、B皿以及Uricprotein。2.3數據分析與統計方法:所有數據以x士s表示，統計學分析采用student-T檢驗。3.結果3.l大蝎子草對大鼠系膜增生性腎炎的防治作用3.l.l對尿蛋白的影響大鼠實驗前尿檢RBC、WBC均為陰性，自實驗第2周起造模組可見RBC03個/HP，但結果不穩定。實驗至第6周，造模組出現不同程度的蛋白尿，第ll周定性達l+，第14、18周末時24h尿蛋白定量與正常對照組差異顯著，而且逐漸加重。預防組中高劑量組，防治作用明顯，14周尿蛋白與模型組比較顯著降低；治療組治療4周后尿蛋白顯著降低，與治療前比較差異也有顯著性。結果見表4。表4大蝎子草提取物對大鼠系膜增生性腎炎尿蛋白的影響(x士s，n=10)尿蛋白(w/24h)'^gy'剤呈(e^/ke)^-14周"1S周"正制鵬'6.2±1-5:.6-36±1-2,:12.5±2-l氣14-吐1.9^..預防io'.-6-吐2-0++》.大-組-8-l±2-B*+》.9-5±3-0*+..-娛.2-5i...10.1±2-0*".11.吐4.1<.子:治療IO',12-7±3丄..10.0土2-0沐.'草:組、5-.12-0±2-5:11-6±3.1*!.2-5'.12-吐2-8::12.5±2-4:..與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.05。3.1.2對大鼠血Cr、B皿、TP、Alb、ALT的影響18周末，模型組Cr、B皿以及ALT顯著增高，而ALB與TP明顯降低，各指標與正常對照組比較具有顯著性差異(P〈0.05，P〈0.01);給藥組無論預防還是治療組，大蝎子草提取物明顯降低血Cr、Bun、ALT，升高血TP、Alb，與模型組比較差異具有顯著性(P〈0.05sP〈0.01)，預防給藥組與治療給藥組之間未間顯著性差異(P>0.05)，但是數值上預防組比治療組的作用趨勢明顯。結果見表5。表5大蝎子草提取物對大鼠系膜增生性腎炎血液生化指標的影響(x士s，n=10)剤量，ALT(殖)52-2士7-8:L06.3±15-3T、38.5±10.9++TO-6±20.76.5±26_沐'85.6±20_沐.-90-2±16-7二與正常對照組比較^P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.05。3.2大蝎子草提取物大鼠Heyma皿腎炎模型的影響由實驗結果可知，模型組在模型復制30d后，尿蛋白、血中Cr和Bun的含量顯著增加，與正常對照組比較，差異顯著(P〈0.05，P〈0.01);而連續給予大蝎子草提取物30d后，顯著降低24h尿蛋白的量和血中Cr、Bun的含量，與模型組比較，差異顯著(P〈0.05，P〈0.01)。結果見表6、表7。表6大蝎子草提取物對大鼠Heymann腎炎尿蛋白含量的影響(x±s，n=10)劑呈-尿蛋白(Bg/24h)鄉J:(s錢/ts)。錢后'正制鵬、5-97±1-13、.、6-05±1.38—6.ll士l-53;6.07±0-98'.IB-23±5.34，.20.26±6.35。10.:.5-89±1-34-.17.95土6.68,'10.38±3.47*+'.'6-13土l-25':IS.37±6-3214.06±4.35+—:2-5-.6-06±1-35':16.45±7-36..:17-22±6-37:翻J'.(S生Cr(M"MlAJ:咖(mm1A)一^^^^^^^正^f，——50.6±6.8:6.5±1.1:^j^:——88.5±8.7".9.6±1.7",預10、、58.4±10.3++7.0±2.1++-'5'.:TO.5±8.3林6.9±3.2*+!.2.5<.80.2±5.8*-:7.5±3.0.、l(K68.8±12.6**'.'7.2±1.5'..T6.4±8-9*v8-0±2-1':2.5:.'86.3±8.3、■■8.6±3.3—大-子'防組,治療組;30.2±1-6:.20.2±26-吐23-T±2-沐.22.6±3-7、25-2±22.6±2-8，20.3±3-2'..56-吐8.2.。45.7±54.4±5.3+'.47.吐3.8<.46.吐2.6-'50.5±4.8+-.47.6±8.3、...45.8±與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.05。表7大蝎子草提取物對大鼠Heymann腎炎Cr和Bun的影響(x士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>各組動物給藥后40min皮下注射丙酸睪酮5mg/kg，連續注射給藥7d，7天后各組隨機處死動物23只，剖取前列腺稱濕重，計算前列腺指數=前列腺重量/鼠重(mg/g)，結果提示模型復制成功。從第8d開始，灌胃給予藥物處理，同時繼續皮下注射給予丙酸睪酮5mg/kg，連續3周。2.3數據分析與統計方法所有數據以x士s表示，統計學分析采用student-T檢驗。3.結果3.l大蝎子草提取物對大鼠前列腺增生的影響切除睪丸，連續皮下注射丙酸睪酮4周后，模型組前列腺體積增大，前列腺各葉濕重明顯大于假手術對照組，差異顯著，(P〈0.01)。大蝎子草提取物IO、5g生藥/kg劑量組，顯著降低前列腺容積和各葉重量的增加(P〈0.05，P〈0.01)。結果見表8。表8大蝎子草提取物對大鼠前列腺增生的影響(x士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.053.2大蝎子草提取物對小鼠前列腺增生的影響與正常對照組比較，模型組前列腺濕重、濕重指數均增高(P〈0.01)。大蝎子草提取物IO、5g生藥/kg劑量組，顯著降低前列腺濕重和濕重指數(P〈0.05，P〈0.01)。結果見表9。表9大蝎子草提取物對小鼠前列腺增生的影響(x士s，n=10)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.05實驗例4大蝎子草提取物對小鼠實驗性腫瘤模型的影響1.實驗材料l.l材料大蝎子草的二氧化碳超臨界提取物，人用量為0.512g(提取物)/10120g生藥/60kg。1.2實驗動物:健康昆明種小鼠，清潔級，體重1822g，均由貴陽醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK(黔)2002—0001。動物飼以試驗全價顆粒飼料(貴陽醫學院試驗動物中心提供)，自由飲7K，室溫22士2。C。1.1.3腫瘤細胞株小鼠肝癌H22:華西醫科大學腫瘤研究所；小鼠Sl80肉瘤上海中科院細胞研究所；以上瘤株低溫凍存，試驗時經復蘇后按常規方法傳代用于試驗。2.方法2.1大蝎子草提取物對小鼠H22實驗性動物腫瘤模型的影響取H22腫瘤細胞株用培養液制成細胞懸液，取少許的細胞懸液加等量的O.4%臺盼藍染液，顯微鏡下用血細胞計數板計數活細胞，計數后將懸液移入到25ml培養瓶里，用含10。/。小牛血清的培養液按比例稀釋至1X107/ml。再將培養瓶放入溫度37。C，相對濕度100%，含5%(]02，95%空氣的培養箱培養。每天給培養瓶內的細胞換液一次，23d傳代一次，傳代4次，將培養液離心得濃縮的腫瘤細胞，再稀釋成濃度為lXl()7/ml的細胞后，用無菌注射器接種到小鼠腹腔內，0.2ml/只。瘤珠在動物體內傳代4次后，選擇接種8天腹部明顯膨大的動物，頸椎脫臼，固定于蠟板上，無菌操作，抽吸腹水，將6只動物的腹水混合。滴一滴腹水混合液于載玻片上，推片，瑞氏染色，鏡下進行細胞分類記數，瘤細胞數〉95%。腹水用無菌PBS液稀釋至lXl(/個/ml，每鼠右腋下接種0.2ml細胞。24h后隨機分組，g卩正常對照組(等容積蒸餾水)，模型組(等容積蒸餾水)，大蝎子草提取物2.5、5.0、10g(生藥)/kg等劑量組；每組10只。每天灌胃給藥l次，連續給藥7d。末次給藥后lh球后靜脈叢取血，處死小鼠，稱體重并剝離皮下瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。實驗重復三批，每批實驗采用同種性別動物。2.2大蝎子草提取物對小鼠S^o肉瘤實驗性動物腫瘤模型的影響取S!80腫瘤細胞株用培養液制成細胞懸液，取少許的細胞懸液加等量的O.4%臺盼藍染液，顯微鏡下用血細胞計數板計數活細胞，計數后將懸液移入到25ml培養瓶里，用含10%小牛血清的培養液按比例稀釋至lX107/ml。再將培養瓶放入溫度37。C，相對濕度100%，含5%(]02，95%空氣的培養箱培養。每天給培養瓶內的細胞換液一次，23d傳代一次，傳代4次，將培養液離心得濃縮的腫瘤細胞，再稀釋成濃度為lXl()7/ml的細胞后，用無菌注射器接種到小鼠腹腔內，0.2ml/只。瘤珠在動物體內傳代4次后，選擇接種8天腹部明顯膨大的動物，頸椎脫臼，固定于蠟板上，無菌操作，抽吸腹水，將6只動物的腹水混合。滴一滴腹水混合液于載玻片上，推片，瑞氏染色，鏡下進行細胞分類記數，瘤細胞數〉95%。腹水用無菌PBS液稀釋至lXl(/個/ml，每鼠右腋下接種0.2ml細胞。24h后隨機分組，g卩正常對照組(等容積蒸餾水)，模型組(等容積蒸餾水)，大蝎子草提取物2.5、5.0、10g(生藥)/kg等劑量組；每組10只。每天灌胃給藥1次，連續給藥7d。末次給藥后lh球后靜脈叢取血，處死小鼠，稱體重并剝離皮下瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。實驗重復三批，每批實驗采用同種性別動物。2.3數據分析與統計方法所有數據以x士s表示，統計學分析采用student-T檢驗。變化率計算抑瘤率(％)=(模型組-給藥組)/模型組X100。/。3.結果3.1大蝎子草提取物對小鼠H22實驗性動物腫瘤模型的影響三批試驗的結果提示，大蝎子草提取物高劑量抑瘤率均高于30%，且大蝎子草提取物顯著的抑制H22腫瘤生長作用，與模型組比較差異顯著(p〈0.01)，并呈一定的量效關系，三批實驗結果基本一致。結果見表10。表IO大蝎子草提取物對小鼠H22的抑制作用(x±s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>與正常對照組比較P〈0.01，與模型組比較林P〈0.01，*P〈0.05。實驗例5大蝎子草提取物對血管栓塞性疾病動物模型的影響1.實驗材料l.l材料大蝎子草的二氧化碳超臨界提取物，人用量為0.512g(提取物)/10120g生藥/60kg。1.2實驗動物:健康昆明種小鼠、SD大鼠，清潔級，均由貴陽醫學院實驗動物中心提供，動物合格證號SCXK(黔)2002—0001。動物飼以試驗全價顆粒飼料(貴陽醫學院試驗動物中心提供)，自由飲水，室溫22士2。C。2.方法2.l大蝎子草提取物對大鼠靜脈血栓形成的影響將大鼠隨機分成4組即大蝎子草2.5、5和10g生藥/kg3個劑量組和模型組。每組大鼠10只，各給藥組大鼠按lml/100g體重灌服相應的藥物，模型組以等體積蒸餾水灌胃。連續給藥7天后，于末次給藥后l小時，以10%水合氯醛0.4ml/100g腹腔注射麻醉大鼠，仰臥位固定，打開腹腔，分離下腔靜脈，并在下腔靜脈下穿一絲線，于左腎靜脈與下腔靜脈交叉處結扎下腔靜脈，然后縫合腹壁，4小時后重新打開腹腔，在結扎下方2厘米處用止血鉗夾閉血管，剖開管腔，取出栓子，用濾紙吸去殘余血液后稱濕重，再將栓子放入7(TC烘箱，4小時后稱干重，按下列公式計算血栓形成抑制率血栓形成抑制率％=(模型組血栓重量一給藥組血栓重量)/模型組血栓重量X100呢2.2大蝎子草提取物對大鼠血小板聚集的影響將大鼠隨機分成4組即大蝎子草2.5、5和10g生藥/kg3個劑量組和空白對照組。給藥組以lml/100g體重灌胃，空白對照組給予等容積的蒸餾水，連續給藥7天，于末次給藥后l小時，0.64。/。戊巴比妥鈉0.4ml/100g體重腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，然后按9:1(全血抗凝劑)分別放入3.8%枸櫞酸鈉抗凝管和2呢EDTA-Na2抗凝管中，500轉/分離心5分鐘后取出上層富血小板血漿(PRP)，將后者的PRP再以2000轉/分離心5分鐘，沉淀血小板，傾去血漿，然后將沉淀血小板用血小板洗滌液洗滌兩次后，加入原血漿體積的改良臺氏液(1000ml溶液中含KCl195mg，MgCl26H20212.5mg，NaCl8g，CaCl2144mg，Tris1.2g，葡萄糖lg，牛血清白蛋白2.5g，pH7.4)。以PPP或改良臺氏液的透光率為100%，將200yLPRP或血小板懸液37。C溫育5分鐘后分別加入ADP(終濃度4ymol/L)、凝血酶(終濃度125U/L)和花生四烯酸(終濃度O.8mmol/L)，然后描記5分鐘血小板聚集曲線，以最大聚集率、l分鐘聚集率和解聚率為觀察指標，血小板聚集抑制率按下列公式計算。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>3.結果3.l大蝎子草提取物對大鼠靜脈血栓形成的影響大鼠連續7天給予大蝎子草提取物2.5、5和10g生藥/kg后，其血栓濕重和干重與模型組相比呈劑量依賴性降低，血栓形成抑制率分別為30.4%，44.9%，50.7%和34.2%，47.4%，52.6%。結果表明祛栓靈膠囊對大鼠靜脈血栓形成有明顯的抑制作用，且有一定的量效關系。結果見表12。表12祛栓靈膠囊對大鼠靜脈血栓形成的影響(x士s，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>與模型組相比林P〈0.01。3.2大蝎子草提取物對大鼠血小板聚集的影響見表13、14、15。由表13可知，與空白對照組比較，大蝎子草提取物三劑量組能明顯抑制ADP誘導的血小板最大聚集率(P〈0.05、P〈0.01)，3個給藥劑量組大鼠血小板最大聚集抑制率分別為13.8%，16.7%和24.0%;10g/kg組也可以明顯抑制血小板l分鐘聚集率(P〈0.05)。給予5g/kg和10g/kg劑量的大蝎子草提取物也能明顯增加血小板的解聚率(P〈0.05)。由表14可知，大蝎子草提取物對凝血酶誘導的大鼠血小板聚集，雖也有劑量依賴性抑制作用，但僅10g/kg組能顯著性抑制血小板最大聚集率(P〈0.01)，其抑制率為35.3%。由表15可知，10g/kg大蝎子草提取物對花生四烯酸誘導的大鼠血小板最大聚集率具有明顯的抑制作用。表13大蝎子草提取物ADP誘導大鼠血小板聚集的影響(x士s，n=10)翻。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>與空白對照組相比傘P〈0.05，**P〈0.01。表14大蝎子草提取物對凝血酶誘導大鼠血小板聚集的影響(x士s，n=10)200710201631.X說明書第16/17頁<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>與空白對照組相比傘P〈0.05，**P〈0.01。具體實施方式大蝎子草的臨床新用途，是指大蝎子草在制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病藥物中的應用。實施例l:膠囊劑取大蝎子草6001200g，按常規制備工藝制成細粉或顆粒，混勻，裝入0號膠囊1000粒。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每次l-4粒，一日l-4次實施例2:注射劑取大蝎子草6001200g，按常規制備工藝制成注射劑1000支。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每次一支，肌肉注射，一日l-4次。實施例3:口崩片取大蝎子草1200g，按常規制備工藝制成口崩片1000片。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每次l-4片，一日l-4次。實施例4:復方顆粒劑取大蝎子草1500g、桂枝320g，按常規制備工藝制成200袋。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每袋5克，每次0.5-3袋，一日1-4次。實施例5:復方片劑取大蝎子草1300g、薄荷150g，按常規制備工藝制成片劑1000片。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每次l-4片，一日l-4次。實施例6:復方滴丸取大蝎子草400g、冰片20g，按常規制備工藝制成滴丸1000滴。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每次1-8粒，一日1-4次。實施例7:復方軟膠囊取大蝎子草1500g、黃芪800g，按常規制備工藝制成軟膠囊1000粒。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每次l-6粒，一日l-4次。實施例8:復方口崩片取大蝎子草1500g、丹參600g，延胡索600g，按常規制備工藝制成口崩片1000片。用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病，每次l-6片，一日l-4次。權利要求1.大蝎子草的臨床新用途，其特征在于是指大蝎子草在制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病藥物中的應用。全文摘要本發明公開的是大蝎子草的臨床新用途，具體是指大蝎子草在制備治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性疾病藥物中的應用。本發明以大蝎子草為原料，按常規工藝經提取得到大蝎子草的提取物，再加入輔料制成適合于臨床上使用的常規口服或非口服劑型，用于治療肝損傷、腎炎、前列腺肥大、腫瘤以及血管栓塞性等心血管疾病。文檔編號A61K36/185GK101224226SQ20071020163公開日2008年7月23日申請日期2007年9月3日優先權日2007年9月3日發明者沈祥春申請人:沈祥春