專利名稱：：山茶花有效成分及其提取方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發明屬于醫藥
技術領域：
，涉及山茶花的有效成分及其提取方法和用途，以及山茶花有效成分制劑的生產加工方法。
背景技術：
：山茶花("腳e7/iaw'/7e/^2'60，為山茶科，山茶屬植物山茶的花。在我國南方地區大面積栽培，栽培歷史悠久。茶花中含有豐富的黃酮類(主要為山柰酚型黃酮、槲皮素型黃酮、黃烷)、皂苷類(茶皂苷型)和苯乙醇苷類。藥理實驗表明，茶花提取物具有很好的降血糖、降血脂、保護胃粘膜、抗氧化等作用。而將茶花提取物用于降血糖、降血脂、保護胃粘膜還未見報道。
發明內容本發明的目的在于提供山茶花有效成分的提取方法，以及利用其有效成分生產加工數種制劑，將其作為治療或改善高血糖、高血脂、胃粘膜損傷等癥狀的藥物和功能性食品。本發明目的是通過如下方案實現的山茶花有效成分的制備方法分三種方法1:取干燥茶花去雜后，加15至30倍量的5%-95%的乙醇煎煮不少于兩次，每次提取時間不少于1小時，提取液濃縮至藥液體積的五分之一至二十分之一，提取液經大孔樹脂(HPD100或D101)進行分離純化，分別以水，5%-20%乙醇，30%-80%乙醇,洗脫，5%-20%乙醇洗脫物為有效成分組l,30%-80%乙醇洗脫物為有效成分組2,兩者按折合生藥材量l:l組合為山茶花有效提取物。'方法2:取干燥茶花去雜.后，加15至30倍量的5%-95%的乙醇煎煮不少于兩次，每次提取時間不少于l小時，提取液分別用石油醚(或環己烷、正己烷)、二氯曱烷(或氯仿)、乙酸乙酯、正丁醇萃取兩次以上至萃取完全。回收溶媒，所得正丁醇萃取層經大孔樹脂(HPD100或D1Q1)純化，分別以水，60%-100%乙醇，乙醇洗脫，60%-100%乙醇洗脫物為有效成分組分l，乙酸乙酯萃取層為有效成分組2,二者按折合生藥材量1:1組合為山茶花有效提取物。方法3:取干燥茶花去雜后，加15至30倍量水煎煮不少于兩次，每次提取時間不少于1小時，提取液濃縮至藥液體積的五分之一至二十分之一，加乙醇沉淀1-2次，控制提取液中乙醇濃度在50%-90%,在0-l(TC下低溫靜置12-48小時至沉淀完全，再次過濾，濾液回收乙醇至無醇味，所得上清液經大孔樹脂(HPD100或D101)進行分離純化，分別以水，5%-20%乙醇/30%-60%乙醇洗脫,5%-20%乙醇洗脫物為有效成分組1,30%-60%乙醇洗脫物為有效成分組2。兩者按折合生藥材量1:1:組合為山茶花有效提取°所得茶花有效成分提取物中，總黃酮1°/。-25%,總皂苷1%-20%,苯乙醇苷10/「3%。由上述方法可見，茶花有效成分提取物由總黃酮、總皂苷和苯乙醇苷組成，可通過上述三種方法制備，可簡述為方法一醇提-大孔樹脂分段純化；方法二醇提-溶劑分段萃取-大孔樹脂純化；方法三水提-醇沉-大孔樹脂分段純化。本發明所述提取物具有降血糖、降血脂、保護胃轱膜、抗氧化等活性，可用于治療或改善高血糖、高血脂、胃粘膜損傷等癥狀。本發明的優點如下(1)本制備方法所得山茶花提取物組成明確，由三種不同類型天然產物組成，具有多靶點協同作用且毒副作用低的優點。(2)制備方法簡便、易行，提取充分，適宜于工業生產(3曰)山茶花有效成分提取物活性顯著，療效確切，可有效降低中藥服(4)山茶花有效成分提取物作用廣泛、毒性低可作為功能性食品。具體實施例方式實施例1按照有效成分制備方法1(1)取干燥山茶花10kg,去除雜質、灰塵。(2)在中藥提取罐中加入藥材和20倍量的70%乙醇，加熱回流提取三次，分別為2小時，1.5小時，l小時。(3)合并三次提取液，濃縮至20L,上樣至非極性大孔樹脂柱，分別用水(5Vr)、10。/。乙醇(4Vr)、70%乙醇(81)、95%乙醇(4VR)梯度洗脫，得水洗物棄去10%乙醇洗脫物、70%乙醇洗脫物按照折合生藥量1:l比例混合，得山茶花有效提取物，其中總黃酮含量為21%，總阜苷含量為16%,苯乙醇苷含量為1.5%。實施例2按照有效成分制備方法2.(1)取干燥過山蕨全草6kg，去除雜質、灰塵(2)在中藥提取罐中加入藥材和25倍量的75%乙醇，加熱回流提取三次，分別為2小時，2小時，l小時。(3)合并三次提取液，濃縮至10L,等體積環己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取四次。得環己烷萃取物60克，二氯甲烷萃取物55g,乙酸乙酯萃取物170克，正丁醇萃取物740克。回收溶媒，所得正丁醇萃取物進一步經大孔樹脂純化，分別以水，75%乙醇洗脫，減壓回收溶媒得75%乙醇洗脫物340克。將75%乙醇洗脫物與乙酸乙酯萃取物按折合生藥比1:1比例混合，得到山茶花有效成分提取物。得山茶花有效提取物，其中總黃酮含量為22%，總皂苷含量為19%，苯乙醇苷含量為1.1%。實施例3-按照有效成分制備方法3(1)取干燥山茶花5kg,去除雜質、灰塵(2)在中藥提取罐中加入藥材和15倍量的水，加熱煮沸，提取兩次，每次1.5小時。(3)合并兩次提取液，濃縮至10L，加入乙醇，調節醇濃度至50%,在1(TC下低溫靜置24小時至沉淀完全，再次過濾，濾液回收乙醇至無醇味。(4)上清液上樣至非極性大孔樹脂柱，分別用水(5VJ、15%乙醇(4"、60%乙醇(6VR)、90%乙醇(4VR)梯度洗脫，得水洗物棄去，20%乙醇洗脫物、60%乙醇洗脫物按照折合生藥量1:1比例混合，得山茶花有效提取物，其中總黃酮含量為20%，總皂苷含量為15%,苯乙醇苷含量為1%。實施例4山茶花提取物對糖負荷大鼠血糖的影響實驗動物雄性Wistar大鼠，體重130~150g，購自曰本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakayama)。動物恒溫(23土2。C)飼養，飼料購自曰采MF.OrientalYeastCo.Ltd.(Tokyo)。實驗前動物禁食20~24小時，自由取水。'實驗方法取130~150g的雄性Wistar大鼠，禁食2024小時后，灌胃給與山茶花提取物，0.5小時后，灌胃給蔗糖(1.Og/kg),0.5小時后，眼底取血，離心分離血漿后釆用葡萄糖氧化酶法測定血糖水平。實驗結果見表1，山茶花提取物在2501000mg/kg劑量能顯著降低糖負荷大鼠血糖水平。表1山茶花提取物對糖負荷大鼠血糖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例5山茶花提取物對油負荷大鼠血漿中甘油三酯水平的影響實驗動物雄性DDY小鼠，體重2530g,購自日本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakayama)。動物恒溫(23±2。C)飼養，飼料購自曰呆MF..QrientalYeastCo.Ltd.(Tokyo)。實驗前動物禁i20~24小時，自由取水。實驗方法取2530g的雄性DDY小鼠，禁食2024小時后，灌胃給與山茶花提取物，0.5小時后，灌胃給橄欖油(5mL/kg)，2小時后，眼底取血，離心分離血漿后采用WAKO試劑盒測定血漿中甘油三酯水平。實驗結果見表2,山茶花提取物對油負荷小鼠血漿中甘油三酯水平的影響，山茶花提取物乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物在500mg/kg劑量能顯著降低油負荷小鼠血漿中甘油三酯水平。表2山茶花提取物對油負荷大鼠血漿中甘油三酯水平的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例6山茶花提取物保護乙醇誘導的胃粘膜損傷實驗動物雄性SD大鼠，體重230250g,購自曰本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakayama)。動物恒溫(23±2°C)飼養，飼料購自曰iMF.OrientalYeastCo.Ltd.,(Tokyo)。實驗前動物禁食24~26小時，自由取水。實驗方法取230~250g的雄性SD大鼠，禁食2426小時后，灌胃給與山茶花提取物(5%的阿拉伯膠混懸)，1小時后，灌胃給99.5%的乙醇(1.5mL)致胃粘膜損傷，1小時后，乙醚麻醉處死。取出大鼠胃部，抽出內容物后，注射10mL1.5y。的福爾馬林溶液固定胃壁，反復用清水沖洗后展平，計算機掃描計算胃粘膜損傷率。實驗結果結果如Table3所示，山茶花提取物在50~200mg/kg劑量能顯著減少乙醇引起的胃粘膜損傷；山茶花提取物正丁醇萃取層在25~200mg/kg劑量能顯著減少乙醇引起的胃粘膜損傷。表3山茶花提取物保護乙醇誘導的胃粘膜損傷TreatmentD0S6SemmTG(mg/dL)(mg/kg，；力.)Length(mm)Inhibition(%)Control_7115.7±13.9—50666.6±15.9*42.5'山茶花提取物100,648.9±13.3**57.7200613.5±5.9**88.4Control一8111.2±11.8—25655.9±6.3**49.7山茶花提取物50641.2±9.1**62.9正丁醇萃取層100612.9±8.4**88.320064.1±1.9**96.2p<0.05,**p<0.01實施例7山茶花提取物保護吲哚美辛誘導的胃粘膜損傷實驗動物雄性SD大鼠，體重230250g,購自日本KiwaLaboratoryAnimalCo.Ltd.(Wakayama)。動物恒溫(23±2°C)飼養，飼料購自曰iMF.OrientalYeastCo.Ltd.'(Tokyo)。實驗前動物禁杏24~26小時，自由取水。實驗方法取230~250g的雄性SD大鼠，禁食2426小時后，灌胃給與山茶花提取物(5%的阿拉伯膠混懸)，1小時后，灌胃給吲哚美辛(20mg/kg吲哚美辛溶于5y。碳酸氫鈉溶液，蒸餾水稀釋后，加0.2M鹽酸中和，1.5ml/rat)致胃粘膜損傷，4小時后，乙醚麻醉處死。取出大鼠胃部，抽出內容物后，注射10mL1.5y。的福爾馬林溶液固定胃壁，反復用清水沖洗后展平，掃描計算胃粘膜損傷率。實驗結果見表4中所示，山茶花提取物在50200mg/kg劑量能顯著減少吲哚美辛引起的胃粘膜損傷。山茶花提取物正丁醇萃取層在50~20Omg/kg劑量能顯著減少吲哚美辛引起的胃粘膜損傷。表4山茶花提取物保護吲噪美辛誘導的胃粘膜損傷<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*p<0.05,**p<0.01實施例8取山茶花有效提取物(制備方法如實施例1)干燥、粉碎、過80目篩，直接或加適宜稀釋劑(糊精、微晶纖維等)灌裝膠囊。實施例9.取山茶花有效提取物(制備方法如實施例2)按1:1~1:4比例加入稀釋劑(糊精、淀粉等)，干燥、粉碎，制粒、壓片或制丸劑。權利要求1、山茶花有效成分，其特征在于包括茶花中含有豐富的黃酮類、總皂苷類和苯乙醇苷類。2、根據權利要求l所述的山茶花有效成分，其特征在于所述的黃酮類成分為山柰酚型黃酮、槲皮素型黃酮、黃烷，皂苷類成分為茶皂苷型阜苷3、一種如權利要求l所述的山茶花有效成分的提取方法，其特征在于其提取方法如下取干燥茶花去雜后，加15至30倍量的5%-95%的乙醇煎煮不少于兩次，每次提取時間不少于1小時，提取液濃縮至藥液體積的五分之一至二十分之一，提取液經HPD100或D101大孔樹脂進行分離純化，分別以水，5%-20%乙醇,30°/。-80%乙醇,洗脫，5%-20%乙醇洗脫物為有效成分組1,30%-80%乙醇洗脫物為有效成分組2，兩者按折合生藥材量l:l組合為山茶花有效提取物；或取干燥茶花去雜后，加15至30倍量的5%-95%的乙醇煎煮不少于兩次，每次提取時間不少于1小時，提取液分別用石油醚或環己烷或正己烷、—二氯甲烷或氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取兩次以上至萃取完全。回收溶媒，所得正丁醇萃取層經HPD100或D101大孔樹脂純化，分別以水，60%-100%乙醇，乙醇洗脫，60'%-100°/。乙醇洗脫物為有效成分組分1,乙酸乙酯萃取層為有效成分組2,二者按折合生藥材量1:l組合為山茶花有效提取物；或取干燥茶花去雜后，加15至30倍量水煎煮不少于兩次，每次提取時間不少于1小時，提取液濃縮至藥液體積的五分之一至二十分之一，加乙醇沉淀1-2次，控制提取液中乙醇濃度在50%-90%,在O-l(TC下低溫靜置12-48小時至沉淀完全，再次過濾，濾液回收乙醇至無醇味，所得上清液經HPD100或D101大孔樹脂進行分離純化，分別以水，5%-20%乙醇，30%-60%乙醇洗脫，5%-20%乙醇洗脫物為有效成分組1,30%-60%乙醇洗脫物為有效成分組2，兩者按折合生藥材量1:1:組合為山茶花有效提取物。4、根據權利要求3所述的山茶花有效成分的提取方法，其特征在于所述的有效成分組中總黃酮1%-25%，總皂苷1°/。-20%,苯乙醇苷1%-3%。5、根據權利要求2所述的山茶花有效成分的提取方法，其特征在于還可以將山茶花有效成分組提取液經噴霧干燥制成粉末狀固體，提取粉中總有效成分含量〉40%。6、根據權利要求5所述的山茶花有效成分的提取方法，其特征在于其噴霧干燥條件為噴入的空氣預熱至280±20°C,噴入的空氣壓力為3-6kg/cm2,干燥室內溫度保持在120±20°C。7、山茶花有效成分在制備治療高血糖、高血脂、胃粘膜損傷的藥物或功能性食品中的應用。全文摘要本發明屬于醫藥
技術領域：
，提供了一種山茶花有效成分及其提取方法和用途。該提取方法包括水提法、醇提法、大孔樹脂純化法、溶劑萃取法。經該方法，所得的提取物主要有效成分為黃酮、茶皂苷、苯乙醇苷，其含量分別為總黃酮1％-25％，總皂苷1％-20％，苯乙醇苷1％-3％。本發明還提供了茶花直接或與藥學上通常用于該類制劑的固體或液體混合制成適宜劑型的方法，茶花有效成分及其制劑具有降血糖、降血脂、保護胃粘膜等作用。該提取方法簡單易行、成本低，提取充分，適宜于工業生產，所得提取物活性顯著，療效確切、無毒副作用。文檔編號A61P3/10GK101301401SQ200810011899公開日2008年11月12日申請日期2008年6月18日優先權日2008年6月18日發明者吳恩華,挺龐,寧李,超杜,皖肖,肖海濤申請人:沈陽藥科大學