專利名稱：：夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法及所得凍干物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及傳統(tǒng)中草藥領(lǐng)域，具體涉及夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，以及由該方法制得的夏天無總生物堿酸鹽凍干物在制備藥物制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：夏天無是罌粟科紫堇屬植物伏生紫堇Coo^z/^^cwm6ews(Thunb.)Pers.的干燥塊莖或全草廣泛分布于江蘇、安徽、浙江、江西、福建、臺灣、湖南等省，是我國常用中草藥，具有活血、通絡(luò)、行氣、止痛等功效、主治高血壓、腦血管引起的中風(fēng)偏癱，并對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛、小兒麻痹后遺癥等有較好的作用。其主要有效成分為異喹啉類總生物堿。市售的夏天無制劑包括夏天無片、夏天無注射劑及夏天無眼藥水等。但是這些制劑在臨床應(yīng)用上仍有很大的不足，目前市場上銷售的夏天無固體制劑是以部分生藥粉和部分浸膏制成的，需口服，一次46片，一曰3次。且因?yàn)樯幏壑苯尤胨幨沟弥苿┐嬖谏锢枚鹊停脛┝看蟮炔蛔恪Ｔ谙奶鞜o注射液的制備中也是利用酸提-交換樹脂工藝，然而在制備過程中需反復(fù)加熱和過濾，周期長，有效成分保留少，并且雜質(zhì)除不盡，制成制劑后，容易形成白點(diǎn)，產(chǎn)品澄明度差，色澤較深，有時由于鞣質(zhì)(鞣質(zhì)是引起疼痛的原因之一)或熱原等大分子雜質(zhì)去除不完全等方面的原因而導(dǎo)致產(chǎn)品M量問題，如不穩(wěn)定、產(chǎn)生絮凝沉淀等。且注射液需頻繁注射，給病人帶來極大的不便。目前，報(bào)道的提取夏天無總生物堿的方法很多。已公開的專利中涉及的提取夏天無總生物堿的方法多采用滲漉法，煎煮法，溶劑多為酸水溶液，再過大孔吸附樹脂或者陽離子交換樹脂，經(jīng)醇洗，過氧化鋁柱，調(diào)節(jié)pH值的方法使夏天無總生物堿析出。在這一系列的過程中有超聲、高速離心以及膜技術(shù)等新技術(shù)的應(yīng)用(詳見CN1445227A，CN1535969A，CN1456153A，CN1557414A，CN1626223A，CN1647816A，CN1891260A，CN1682927A，CN10ri04016A)。這些提取方法都存在耗時長、消耗溶劑多，步驟繁雜旦得到的夏天無生物堿提取物純度低等缺點(diǎn)，制約了夏天無總生物堿的應(yīng)用。因此無論從夏天無制劑的應(yīng)用現(xiàn)狀存在的問題，還是已經(jīng)報(bào)道的常用的夏天無總生物堿提取方法及提取物的質(zhì)量方面考慮，都有必要開發(fā)一種提取效率高、節(jié)能環(huán)保的夏天無總生物堿的提取方法。我們已經(jīng)利用超臨界C02萃取技術(shù)提取夏天無中的總生物堿有效部位(詳見專利申請CN101058576A)，所得的夏天無總生物堿有效成分含量高。該提取方法具有低溫操作、耗能低、時間短、無溶劑殘留等優(yōu)點(diǎn)。在上述發(fā)明中我們通過多因素多水平正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，并結(jié)合高效液相色譜法進(jìn)行指標(biāo)成分的含量測定，優(yōu)選了應(yīng)用超臨界C02流體萃取夏天無中異喹啉總生物堿的工藝條件，對夏天無總生物堿的提純應(yīng)用進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。但是所得的產(chǎn)品存在水溶性差，難以完全干燥等不足。
發(fā)明內(nèi)容為了解決現(xiàn)有技術(shù)中夏天無超臨界C02總生物堿提取物存在的水溶性差，難以完全干燥等不足，使夏天無總生物堿超臨界C02提取物適合于各種劑型的應(yīng)用，我們進(jìn)行了深入研究，制備得到夏天無總生物堿酸鹽凍干物。木發(fā)明的第一個目的是提供一種夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，包括如下步驟a)以夏天無超臨界C02總生物堿提取物為原材料，加酸水溶液使其溶解，得夏天無總生物堿的酸水溶液；b)取步驟a)的夏天無總生物堿的酸水溶液，濾過或離心后濾過，將澄清溶液冷凍干燥，即得夏天無總生物堿酸鹽凍干物。步驟a)中所述的夏天無超臨界C02總生物堿提取物根據(jù)本申請人的專利申請CN101058576A中所公開的方法制得。步驟a)中所述的酸可以是鹽酸、磷酸、醋酸、硫酸或硝酸，優(yōu)選鹽酸。所述的酸的濃度是0.5%10%(V/V)，優(yōu)選1%5°/。(V/V)。所述的酸的用量是夏天無超臨界c02總生物堿提取物的110倍(體積比)，優(yōu)選25倍。優(yōu)選地，步驟b)中所述的濾過采用膜分離法。所述的膜分離法可以是超濾、微濾、納濾和反滲透中的一種或幾種。所述的膜分離法優(yōu)選為微濾和超濾相結(jié)合的方式。本發(fā)明的第二個目的是提供由上述制備方法得到的夏天無總生物堿酸鹽凍干物，其特征在于，采用高效液相色譜法測定其總生物堿質(zhì)量占凍干物質(zhì)量的80%以上。本發(fā)明所得的夏天無總生物堿酸鹽凍干物為淺黃色至棕黃色粉末，水溶性好，可以迅速復(fù)溶。本發(fā)明的第三個目的是提供所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物在片劑、膠囊、顆粒劑、粉針和注射劑制備中的應(yīng)用。以高效液相色譜法測定由本發(fā)明方法所得的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的總生物堿含量為80%以上，高于未經(jīng)過酸處理的夏天無超臨界C02提取物的總生物堿含量。得到的夏天無總生物堿酸鹽凍干物具有水溶性好，呈粉末狀，易操作，有效成分含量高等特點(diǎn)，可以應(yīng)用于片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉針及供肌肉和靜脈給藥的注射劑的制備。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。在本發(fā)明中，采用高效液相色譜法測定生物堿在提取物中的百分含量。夏天無超臨界C02提取物的制備步驟取夏天無的干燥塊莖，粉碎成20100目的藥材粉末；取藥材粉末一定量，加入堿化劑，拌至弱堿性；將藥材投入萃取釜中，在萃取溫度4075°C、解析釜I溫度3070°C、解析釜II溫度3070"C時，萃取壓力3050MPa下萃取，萃取過程中連續(xù)加入一定濃度的乙醇作為夾帶劑；當(dāng)萃取23小時后，停止萃取，從解析釜I得到總生物堿提取物，作為進(jìn)一步研究的樣品。夏天無超臨界C02提取凍干物制備的具體步驟如下取上述所得的夏天無超臨界C02提取物，用一定體積、一定濃度的酸水溶液溶解，離心并采用超濾、微濾、納濾等技術(shù)進(jìn)行處理，得到澄清的溶液，冷凍干燥，得到夏天無總生物堿酸鹽凍干物。采用高效液相色譜法測定其總生物堿及其它單個堿的含量。并在相同條件下測定未經(jīng)酸水溶液處理的樣品溶液的總生物堿的含量，作為對照。此處涉及的酸可以是鹽酸、醋酸、硝酸和磷酸。涉及的膜有無機(jī)材料膜和有機(jī)材料膜。實(shí)施例h取不同夏天無超臨界C02總生物堿提取物的溶液各20mL于圓底燒瓶，旋干。分別加80mL不同濃度及不同類型的酸溶液，超聲使溶解，靜置過夜，離心后用微孔濾膜濾過。棄去初濾液，續(xù)濾液作為供試品溶液。取各供試品溶液各0.2mL于10mL量瓶中，并用流動相定容，作為樣品溶液。取各夏天無提取物溶液lmL于25mL量瓶中，揮干，加1。/^HCL溶液lmL溶解，用流動相定容，作為對照樣品溶液。分別取各樣品溶液、對照樣品溶液20)LiL進(jìn)樣。采用高效液相色譜法測定生物堿含量，以回收率來評價(jià)處理效果。結(jié)果見表1，2。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2不同濃度的鹽酸和磷酸的比較試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注回收率的計(jì)算一一酸處理后溶液的濃度占對照樣品溶液濃度的百分比。以下各實(shí)施例采用相同的計(jì)算方法。由表2可見不同濃度的鹽酸(0.5%、1%、2%、3%、10%)結(jié)果是0.5%HCL和1%HCL濃度的處理效果相近，為較優(yōu)結(jié)果；不同濃度的磷酸(0.5%、1%、1.5%、10%)結(jié)果是1%與1.5%濃度的處理結(jié)果相近，因此可考慮用低濃度的1%磷酸。取0.5。XHCL和1%HCL處理的供試品溶液在一定條件下干燥，得黃色粉末，溶解性很好，且測得其總生物堿的含量為80°/。以上。實(shí)施例2:取不同批號的夏天無超臨界C02總生物堿提取物溶液，分別加200mL的如表3所示的不同的酸溶液，超聲使溶解，靜置過夜，用微孔濾膜濾過。棄去初濾液，續(xù)濾液作為供試品溶液。取各供試品溶液各0.5mL于25mL量瓶中，并用流動相定容，作為樣品溶液。取各夏天無超臨界C02提取物溶液lmL于25mL量瓶中，揮干，力n1%HCL溶液lmL溶解，用流動相定容，作為對照樣品溶液。分別取各樣品溶液、對照樣品溶液20pL進(jìn)樣。采用高效液相色譜法測定生物堿含量，以回收率來評價(jià)不同酸的處理的效果。結(jié)果見表3，4。表3對照樣品及處理后樣品的測定結(jié)果丄-V-「1懺節(jié)畢扣扣靈(mgZml)延胡索乙素(mg/ml)鹽酸巴馬亭(rag/ml)原阿片堿(mgZml)總堿(mg/ml)XTW-1(對照樣品)5.6500294.67163830,1643058.36218626.61463vt、kirio/—/;^麗臺、丄vv—上、i/u'H|"]ttX乂J,，厶厶，u，>1/1乙r\"7乙，A1q-4.，"J16,1/H，/idi,/UV，J/，rv/iyt7ro丄7.^4/JOXTW-1(1%HCL)5.8092764.7280990.1491937.35254124.44021XTW-9(對照樣品)6.4714355.2057670.2341298.2692828.33524—XTW-9(1%磷酸)6.4820835.0871770.2235397.73436926.66705XTW-9(1%醋酸)5.1693824.4950300.2168746.84531024.51530XTW-9(1%硫酸)5.0444844.2999640.1848215.83976621.49795表4不同酸溶液對夏天無超臨界提取物處理結(jié)果樣品不同酸回收率(％)畢扣扣靈延胡索乙素鹽酸巴馬亭原阿片堿總堿(％)XTW-11%硝酸95.9795.71112.3033.0271.151%HCX102.82101.2490.9787.9591.83XTW-91%磷酸100.1997.6495.4793.5294,101%醋酸79.8888.3692,6382.7885.461%硫酸77.9582.6078.9470.6275.87由上表可見1XHCL和1%磷酸較其他相同濃度的不同的酸溶液對夏天無超臨界C02提取物的處理結(jié)果好，但是由于所得的夏天無生物堿磷酸鹽難于得到固型物，所以選擇r^HCL為好。取1%HCL處理的供試品溶液在一定條件下冷凍干燥，呈粉末狀，溶解性很好，測得其總生物堿的含量為80%以上。實(shí)施例3取同一批夏天無超臨界C02總生物堿提取物的溶液各10mL于圓底燒瓶，旋干。分別加如表5所示的不同倍體積的1XHCL;容液，超聲使溶解，靜置過夜，離心，納濾膜濾過。棄去初濾液，續(xù)濾液作為供試品溶液。取各供試品溶液各0.5mL于10mL量瓶中，并用流動相定容，作為樣品溶液。取各夏天無提取物溶液mL于25mL量瓶中，揮干，加1XHCL溶液imL溶解，用流動相定容，作為對照樣品溶液。分別取各樣品溶液、對照樣品溶液20(iL進(jìn)樣。釆用高效液相色譜法測定生物堿含量，以回收率來評價(jià)處理效果。結(jié)果見表5，6。表5對照樣品及處理后樣品的測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6不同倍體積的酸溶液對夏天無提取物處理的試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>綜合考慮，3倍體積的1。XHCL溶液對夏天無提取物最經(jīng)濟(jì)，效果較好。取供試品溶液在一定條件下冷凍干燥，得夏天無總生物堿酸鹽凍干物，溶解性很好，且總生物堿的含量為80%以上。取一批夏天無超臨界C02總生物堿提取物的溶液4份各30mL，一份作為對照樣品儲備液。其他3份分別旋干，再分別加90mL的1%鹽酸溶液，超聲使溶解，靜置過夜，離心，先微濾再超濾，棄去初濾液，續(xù)濾液作為供試品溶液。取各樣品溶液及供試品溶液各0.2mL于10mL量瓶中，并用流動相定容，作為樣品溶液。取對照樣品儲備液lmL于25mL量瓶中，揮干，加1XHCL溶液lmL溶解，用流動相定容，作為對照樣品溶液。分別取各樣品溶液、對照樣品溶液20pL進(jìn)樣。采用高效液相色譜法測定生物堿含量，以回收率來評價(jià)處理效果。結(jié)果見表7，8。續(xù)濾液經(jīng)冷凍干燥并測定其生物堿的含量，結(jié)果見表9。表7對照樣品及處理后樣品的測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表8夏天無超臨界C02提取物1XHCL溶液處理的試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表9凍干樣品的含量測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>由表8可見夏天無超臨界總生物堿提取物經(jīng)1%HCL處理的重現(xiàn)性比取供試品溶液在一定條件下干燥，得夏天無總生物堿酸鹽凍干物，溶解性很好，且總生物堿的含量為80%以上。實(shí)施例5:取超臨界方法制得的夏天無超臨界C02總生物堿提取物2份，用i%HCL溶液300mL溶解，離心并用超濾膜濾過，續(xù)濾液留取20mL溶液作為對照樣品貯備液，其余作為樣品溶液。分別取上述對照樣品C:備液各lmL于10mL量瓶中，去離子水定容，作為對照樣品溶液。2個樣品溶液分別再取150mL旋蒸，并真空干燥(60°C，10h)，得干浸膏。分別稱取一定量干浸膏，于容量瓶中，去離子水溶解并定容，作為旋干樣品溶液。2個樣品再分別取一定量，真空冷凍干燥，再分別稱取一定量干浸膏，于10mL量瓶中，去離子水溶解并定容，作為凍干樣品溶液。分別將對照樣品溶液、旋干樣品溶液和凍干樣品溶液取20(iL進(jìn)樣，采用高效液相色譜法測定生物堿含量，最終試驗(yàn)結(jié)果見表10。表10超臨界提取物的鹽酸溶液不同干燥方式的結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表9可見旋千和凍干兩種干燥方式都可以使總生物堿的含量有所提高，考慮到夏無寧堿含量的變化，凍干優(yōu)于旋干。且冷凍干燥所得的夏天無總生物堿酸鹽凍干物為黃色粉末，溶解性很好，總生物堿含量為80%以上。實(shí)施例6:夏天無總生物堿酸鹽凍干物的一種制劑一一片劑夏天無總生物堿酸鹽凍干物5g硬脂酸鎂lg滑石粉3g微晶纖維素20g淀粉31g1000片上述組分均過100目篩備用。按上述各物料用量稱量，混勻、直接壓片或制粒干燥后壓片、包衣、質(zhì)檢即得到夏天無總生物堿片劑。實(shí)施例7:夏天無總生物堿酸鹽凍干物的一種制劑一一膠囊劑夏天無總生物堿酸鹽凍干物5g硬脂酸鎂lg滑石粉3g微晶纖維素20g淀粉35g1000個上述組分均過100目篩備用。按上述各物料用量稱量，混勻、直接或制粒干燥后裝入膠囊、質(zhì)檢即得到夏天無總生物堿膠囊劑。實(shí)施例8:夏天無總生物堿酸鹽凍干物的一種制劑一一注射劑夏天無總生物堿酸鹽凍干物2g甘露醇適量注射用水_i000mi1000支取夏天無總生物堿凍干物2g，加注射用水1000ml加熱溶解，攪拌均勻，調(diào)pH45，粗濾，測含量，配全量，再用超濾技術(shù)處理，灌封，滅困'l守o權(quán)利要求1.夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，包括如下步驟a)以夏天無超臨界CO2總生物堿提取物為原材料，加酸水溶液使其溶解，得夏天無總生物堿的酸水溶液；b)取步驟a)的夏天無總生物堿的酸水溶液，濾過或離心后濾過，將澄清溶液冷凍干燥，即得夏天無總生物堿酸鹽凍干物。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于步驟a)中所述的酸選自鹽酸、磷酸、醋酸、硫酸或硝酸。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于所述的酸是鹽酸。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于步驟a)中所述的酸的濃度是0.5。/。10。/。(V/V)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于所述的酸的濃度是1%5%(V/V)。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于步驟a)中所述的酸的用量是夏天無超臨界C02總生物堿提取物體積的110倍。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于所述的酸的用量是夏天無超臨界C02總生物堿提取物體積的25倍。8.根據(jù)權(quán)利要求l所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于步驟b)中所述的濾過采用膜分離法。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于所述的膜分離法選自超濾、微濾、納濾和反滲透中的一種或幾種。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，其特征在于所述的膜分離法為微濾和超濾相結(jié)合的方式。11.根據(jù)權(quán)利要求1至10所述的制備方法得到的夏天無總生物堿酸鹽凍千物，其特征在于，采用高效液相色譜法測定其總生物堿質(zhì)量占凍干物質(zhì)量的80%以上。12.根據(jù)權(quán)利要求ll所述的夏天無總生物堿酸鹽凍干物在制備片劑、膠囊、顆粒劑、粉針和注射劑中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種夏天無總生物堿酸鹽凍干物的制備方法，包括如下步驟a)以夏天無超臨界CO₂總生物堿提取物為原材料，加酸水溶液使其溶解，得夏天無總生物堿的酸水溶液；b)取步驟a)的夏天無總生物堿的酸水溶液，濾過或離心后濾過，將澄清溶液冷凍干燥，即得夏天無總生物堿酸鹽凍干物。本發(fā)明所得的夏天無總生物堿酸鹽凍干物具有水溶性好，呈粉末狀，易操作，有效成分含量高等特點(diǎn)。本發(fā)明還公開了由該方法制得的夏天無總生物堿酸鹽凍干物在制備片劑、膠囊、顆粒劑、粉針和注射劑中的應(yīng)用。文檔編號A61K36/185GK101623332SQ20081004044公開日2010年1月13日申請日期2008年7月10日優(yōu)先權(quán)日2008年7月10日發(fā)明者楊義芳,蔣愛芳,黃春躍申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院