專利名稱：植物血凝素長效劑型的制備方法
技術領域：
本發明屬于生物藥物的制備技術，特別涉及一種植物血凝素長效劑型的制備方法。
背景技術：
植物血凝素多數是指從菜豆屬(Phaseolus Vulgaris)如紅蕓豆(Redkidneybean)和金雀花(P. Communis)中提取的凝集素。提純后蛋白質含量較高，它具有凝集紅血球，促進淋巴細胞的分化、成熟和分裂的作用。植物血凝素為廣譜抗病毒和免疫調節藥植物血凝素主要為D-甘露糖、氨基葡萄糖酸衍生物所構成的低聚糖輔基與蛋白質的復合物，屬于高分子糖蛋白類物質。植物血凝素具有抗病毒、促進細菌感染的恢復以及調節機體免疫功能等達到緊急防治動物疫病作用。適用于豬、牛、羊、雞、鴨、鵝、鴿等畜禽由于各種病毒感染后的早期治療和潛伏期感染階段的緊急預防，如口蹄疫病毒、豬瘟病毒、圓環病毒、病毒性腹瀉病毒、痘病毒、新城疫病毒、傳染性鴨肝炎病毒、法氏囊病毒、小鵝瘟病毒，傳染性支氣管炎病毒、流行性感冒病毒、鵝副粘病毒等早期感染的治療。 目前，植物血凝素都是以注射的途徑給藥，通常有較好的治療效果，但多者每天需要注射1-2次，連用2-5天，給養殖業主的使用帶來很多不便，因此將其制成長效劑型便成為人們追求的目標。已有的植物血凝素存在需要長期頻繁注射、使用不便、生物利用度低以及藥物使用量大等缺陷。 因此，提供一種植物血凝素長效劑型的制備方法，有效預防和治療各種畜、禽病毒性疾病，是該技術領域科研人員急需開發的新課題之一。

發明內容
本發明的目的是為克服已有技術的不足之處，提供一種制備簡單、應用方便、效果顯著的植物血凝素長效劑型的制備方法。
—種植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于包括如下步驟 (1)將一定量的植物血凝素溶解在含有穩定劑的PBS緩沖溶液，制成水相溶液
(Wl)，植物血凝素的含量為0. 5-50毫克/毫升； (2)將丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(0)，丙交脂/乙交脂共聚物的含量為0. 1-0. 5克/毫升；將上述含植物血凝素的水相溶液(Wl)加入到油相溶
液(o)中，油相溶液(o)與水相溶液(wi)的比例為20 : l至2 : i，使這兩種溶液在溫度
5-3(TC下攪拌混合均勻，制成初乳Wl/0，在4-l(TC下保存； (3)將聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量濃度為0. 5-50X;將上述初乳Wl/0加入到水相溶液(W2)攪拌均勻，初乳Wl/0與水相溶液(W2)的比例為1 : 50至1 : 200，制成復乳Wl/0/W2，在4-10。C下保存； (4)將復乳Wl/0/W2轉移到NaCl水溶液中，攪拌均勻，使有機溶劑揮發，然后離心收集微球；
(5)所述步驟(2)中的攪拌溫度為5-3(TC，攪拌速度為500-8000轉/分，攪拌時間為0. 02-0. 2小時； (6)所述步驟(3)中的攪拌溫度為5-3(TC，攪拌速度為100-3000轉/分，攪拌時間為0. 2-0. 5小時； (7)所述步驟(4)中的攪拌溫度為5-3(TC，攪拌速度為500-3000轉/分，攪拌時間為0. 2-0. 5小時； (8)為了保持溶液的穩定，加入一定量的穩定劑，穩定劑直接加入到所述制備步驟(1)溶液中。 所述穩定劑選自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一種或一種以上。
所述穩定劑的加入量為最終溶液的0. 1% _10%。 本發明方法的有益效果是該注射用植物血凝素長效劑型能夠減少植物血凝素用藥次數，是一種理想的植物血凝素長效劑型。具有制備工藝簡單，容易實現，應用方便，所需成本低等特點，該方法采用毒性小，注射安全的分散劑及油相等材料，使植物血凝素均勻的分散溶解到油相中，最終成為一種植物血凝素的長效劑型。采用該方法制成的植物血凝素的長效劑型體外實驗表明，用畜、禽擾素為包裹對象，所制得的植物血凝素微球形態圓整，粒度分布均勻，粒徑分布在40微米以下，載藥量可達6. 0%以上，包封率在30. 0%以上，體外緩釋可以達4周釋藥，符合長效制劑特征。 一次注射后能夠在較長時間內發揮抗病毒藥效。將植物血凝素做成微球制劑，可以延長藥物作用時間，大大提高藥物療效和經濟效益。
具體實施例方式以下結合實施例，對依據本發明提供的具體實施方式
詳述如下
實施例1 —種植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于具體實施步驟如下 (1)將70. 0毫克植物血凝素溶解在1. 0毫升含有2%的聚乙二醇4000的PBS緩
沖溶液，制成水相溶液(Wl); (2)將900. 0毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于2毫升二氯甲烷制成油相溶液(0); (3)將上述含植物血凝素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使這兩種溶液在溫度15t:下、攪拌速度為8000轉/分、攪拌時間為0. 05小時，攪拌混合，制成初乳W1/0，在4-l(TC下保存； (4)將上述初乳W1/0在2000轉/分攪拌情況下加入到400毫升3%的聚乙烯醇中，攪拌溫度為5-3(TC，攪拌時間為0. 2小時，制成復乳Wl/0/W2，在4-l(TC下保存；
(5)將復乳Wl/0/W2加入到3倍復乳體積的3% NaCl水溶液中，通過800轉/分攪拌，使有機溶劑揮發，然后1800轉/分離心10分鐘，收集微球，存放于冰箱中冷藏。
所制得的植物血凝素微球形態圓整，粒度分布均勻，平均粒徑在19.4微米，載藥量可達9. 1 % ，包封率在35. 5 % ，體外釋放實驗表明，緩釋可以達3周，符合長效制劑特征。動物實驗證明這種新型植物血凝素除具有植物血凝素的抗畜、禽病毒作用外，其在體內的半衰期是普通植物血凝素的4. 3倍，從而延長了其在體內的作用時間。
實施例2
—種植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于具體實施步驟如下 (1)將90毫克植物血凝素溶解在1毫升含有2%的海藻糖的PBS緩沖溶液，制成
水相溶液(Wl); (2)將1000毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于4毫升二氯甲烷制成油相溶液(0); (3)將上述含植物血凝素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使這兩種溶液在溫度15t:下、攪拌速度為8000轉/分、攪拌時間為0. 05小時，攪拌混合，制成初乳Wl/0，在4-l(TC下保存； (4)將上述初乳Wl/0在1500轉/分攪拌情況下加入到300毫升2%的聚乙烯醇中，攪拌溫度為5-3(TC，攪拌時間為0. 2小時，制成復乳Wl/0/W2，在4-l(TC下保存；
(5)將復乳Wl/0/W2加入到3倍復乳體積的2% NaCl水溶液中，通過1500轉/分攪拌使有機溶劑揮發，然后2000轉/分，離心15分鐘，收集微球，存放于冰箱中冷藏。
所制得的植物血凝素微球形態圓整，粒度分布均勻，平均粒徑在15. 5微米，載藥量可達9. 5 % ，包封率在37. 1 % ，體外釋放實驗表明，緩釋可以達4周，符合長效制劑特征。動物實驗證明這種新型植物血凝素除具有植物血凝素的抗畜、禽病毒作用外，其在體內的半衰期是普通植物血凝素的2. 0倍，從而延長了其在體內的作用時間。
實施例3 —種植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于具體實施步驟如下 (1)將150. 0毫克植物血凝素溶解在2. 5毫升含有2%的牛血清白蛋白的PBS緩
沖溶液，制成水相溶液(Wl); (2)將1000毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于3. 5毫升二氯甲烷制成油相溶液(0); (3)將上述含植物血凝素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使這兩種溶液在溫度15t:下、攪拌速度為8000轉/分、攪拌時間為0. 05小時，攪拌混合，制成初乳W1/0，在4-l(TC下保存； (4)將上述初乳W1/0在2000轉/分攪拌情況下加入到400毫升3%的聚乙烯醇
中，攪拌溫度為5-3(TC，攪拌時間為0. 2小時，制成復乳Wl/0/W2，在4-l(TC下保存； (5)將復乳Wl/0/W2加入到2倍復乳體積的1% NaCl水溶液中，通過1000轉/分
攪拌使有機溶劑揮發，然后1300轉/分離心20分鐘，收集微球，存放于冰箱中冷藏。 所制得的植物血凝素微球形態圓整，粒度分布均勻，平均粒徑在19.4微米，載藥
量可達8. 2%，包封率在32. 3%，體外釋放實驗表明，緩釋可以達3周，符合長效制劑特征。
動物實驗證明這種新型植物血凝素除具有植物血凝素的抗畜、禽病毒作用外，其在體內的
半衰期是普通植物血凝素的3. 0倍，從而延長了其在體內的作用時間。 上述參照實施例對該植物血凝素長效劑型的制備方法進行的詳細描述，是說明性
的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個實施例，因此在不脫離本發明總體構
思下的變化和修改，應屬本發明的保護范圍之內。
權利要求
一種植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將一定量的植物血凝素溶解在含有穩定劑的PBS緩沖溶液，制成水相溶液(W1)，植物血凝素的含量為0.5-50毫克/毫升；(2)將丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(O)，丙交脂/乙交脂共聚物的含量為0.1-0.5克/毫升；將上述含植物血凝素的水相溶液(W1)加入到油相溶液(O)中，油相溶液(O)與水相溶液(W1)的比例為20∶1至2∶1，使這兩種溶液在溫度5-30℃下攪拌混合均勻，制成初乳W1/O，在4-10℃下保存；(3)將聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量濃度為0.5-50％；將上述初乳W1/O加入到水相溶液(W2)攪拌均勻，初乳W1/O與水相溶液(W2)的比例為1∶50至1∶200，制成復乳W1/O/W2，在4-10℃下保存；(4)將復乳W1/O/W2轉移到1-5％的NaCl水溶液中，攪拌均勻，使有機溶劑揮發，然后離心收集微球；(5)所述步驟(2)中的攪拌溫度為5-30℃，攪拌速度為500-8000轉/分，攪拌時間為0.02-0.2小時；(6)所述步驟(3)中的攪拌溫度為5-30℃，攪拌速度為100-3000轉/分，攪拌時間為0.2-0.5小時；(7)所述步驟(4)中的攪拌溫度為5-30℃，攪拌速度為500-3000轉/分，攪拌時間為0.2-0.5小時；(8)為了保持溶液的穩定，加入一定量的穩定劑，穩定劑直接加入到所述制備步驟(1)溶液中。
2. 根據權利要求1所述的植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于所述丙交脂/ 乙交脂共聚物分子量為2000-5000Da。
3. 根據權利要求1所述的植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于所述穩定劑選 自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一種或一種以上。
4. 根據權利要求1所述的植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于所述穩定劑的 加入量為最終溶液的O. 1% -10%。
全文摘要
本發明公開了一種可每周肌肉注射一次的植物血凝素長效劑型的制備方法，其特征在于采用復乳-溶劑揮發法制備，丙交脂/乙交脂共聚物為微球載體，用植物血凝素為包裹對象，制成的植物血凝素長效劑型體外釋藥性能符合長效制劑特征。本發明有益效果是該注射用植物血凝素長效劑型克服了已有的植物血凝素注射針劑需要長期頻繁注射、使用不便以及生物利用度低和藥物使用量大的缺陷，一次注射后能夠在較長時間內發揮抗病毒藥效，是理想的植物血凝素的長效劑型。本發明制備簡單，應用簡便，且易吸收，更好的發揮治療畜、禽病毒性疾病的效果。
文檔編號A61K47/36GK101698098SQ20081005341
公開日2010年4月28日 申請日期2008年6月3日 優先權日2008年6月3日
發明者王連民, 田杏芳 申請人:天津生機集團股份有限公司