專利名稱：一種雙靶向作用的嵌合多肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白制多肽的制備及其應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種包含人溶菌酶N端氨基酸序列和Exendin-4氨基酸序列的雙靶向作用的嵌合多肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：
溶菌酶是一種存在于蛋清和身體分泌液(如唾液、淚液等)中、能有效水解細(xì)菌壁多糖的防御性酶。人溶菌酶由148個氨基酸殘基組成，其結(jié)構(gòu)如SEQ ID No1所示，其中靠近N-端約有18個氨基酸殘基組成的結(jié)構(gòu)域與晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)具有高度親和力，其解離常數(shù)Kd為50nM。體外實驗發(fā)現(xiàn)溶菌酶能結(jié)合AGEs修飾的清蛋白，并促進單核巨噬細(xì)胞對AGEs的攝入。基于體內(nèi)AGEs受細(xì)胞外酶降解的事實，科學(xué)家在實驗糖尿病小鼠體內(nèi)注入溶菌酶后，發(fā)現(xiàn)其血清AGEs水平顯著降低，并減少細(xì)胞因子如IGF-1的產(chǎn)生，恢復(fù)系膜細(xì)胞的MMP-9表達水平，降低尿蛋白含量，尿中AGEs濃度升高達2倍，減少糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，尤其對糖尿病性腎病的減緩效果，顯示溶菌酶對于清除體內(nèi)AGEs和防治糖尿病并發(fā)癥具有顯著的功效。最近美國的科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，小鼠輸入溶菌酶后，其血清和肝臟的AGEs含量顯著減少，同時減少AGEs造成的氧化應(yīng)激反應(yīng)，還原型谷胱甘肽比例升高(GSH/GSSG)，小鼠的存活率比對照的高兩倍，再次證明溶菌酶對于體內(nèi)AGEs有對抗作用。然而，溶菌酶對體內(nèi)AGEs的對抗作用與它的水解酶活性無關(guān)，此酶主要通過它的N端序列與AGEs結(jié)合，進而促進后者的清除，包括被細(xì)胞吞噬和水解酶的水解，其水解產(chǎn)物(小分子AGEs)經(jīng)過腎臟從尿中排出體外。最近的實驗證明，溶菌酶N端約77個氨基酸組成的序列(多肽)對AGEs具有很高的結(jié)合活性，能在體外實驗中有效地結(jié)合AGEs分子，但這個多肽并沒有溶菌酶的水解酶活性，說明溶菌酶的N端片段可能具有溶菌酶全酶的抗AGEs活性，包括促進體內(nèi)AGEs的清除和排泄。另外，在生產(chǎn)溶菌酶蛋白的技術(shù)上，當(dāng)應(yīng)用基因工程技術(shù)利用原核細(xì)菌生產(chǎn)溶菌酶時，因產(chǎn)物溶菌酶蛋白對工程菌的破壞作用，大大影響了產(chǎn)量的提高，因此，用溶菌酶的部分基因構(gòu)建的原核表達載體，只生產(chǎn)溶菌酶的N端片段，將有利于大量生產(chǎn)上述的具有抗AGEs活性的溶菌酶片段。
AGEs是一類非酶催化的糖基化產(chǎn)物。體內(nèi)的葡萄糖、果糖、6-磷酸葡萄糖等還原糖的醛基與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等生物大分子的氨基形成Schiff堿，再經(jīng)過分子重排生成早期糖基化產(chǎn)物--Amadori產(chǎn)物，后者經(jīng)過一系列非酶促反應(yīng)包括氧化、脫水、分子重排等變成不可逆的AGEs。由于AGEs具有很強的反應(yīng)活性(如形成分子間交聯(lián))以及對蛋白水解酶的抵抗性等特點，生物大分子一經(jīng)形成AGEs加合物后即嚴(yán)重影響甚至喪失其生物學(xué)活性，如AGEs使膠原分子異常交聯(lián)而降低其轉(zhuǎn)換率，導(dǎo)致組織老化及血管彈性降低，DNA經(jīng)AGEs修飾后導(dǎo)致基因突變，AGEs修飾LDL而影響后者與LDL受體結(jié)合，造成它的清除率減慢等。同時，AGEs還通過與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，促進細(xì)胞因子如IL-6，粘附分子如VCAM-1，ICAM-1，及生長因子如PDGF，IGF-1的產(chǎn)生和分泌，造成炎癥反應(yīng)和組織損傷。
正常人體內(nèi)緩慢地產(chǎn)生少量AGEs，其生成與清除處于一定平衡。隨著年齡增加，體內(nèi)AGEs水平逐漸升高，因而AGEs被認(rèn)為是引起組織器官衰老的重要因素之一。糖尿病患者由于長期處于高血糖水平，體內(nèi)AGEs的生成異常增加，AGEs的大量堆積導(dǎo)致一系列病理變化，如血管壁基底膜增厚、彈性降低、通透性增高、管腔變狹窄，細(xì)胞外基質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與組成改變，以及炎癥因子的產(chǎn)生和釋放等，這些變化是造成糖尿病慢性并發(fā)癥如糖尿病性腎病、糖尿病性腦病、白內(nèi)障、糖尿病性心血管病等的主要原因。同時，老年患者因體內(nèi)AGEs含量升高，可導(dǎo)致一些老年性精神障礙疾病的發(fā)生，如阿爾茨海默病(老年癡呆癥)、腦血管病所致精神障礙、血管性癡呆等。因此，控制或降低體內(nèi)AGEs的水平，能延緩組織器官衰老、預(yù)防或減輕糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。
Exendin-4(一種腸促胰島素擬似物)是從一種蜥蜴的唾液腺毒素中分離出來的由39個氨基酸組成的多肽，其結(jié)構(gòu)如SEQ ID No2所示。Exendin-4是一種胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)受體的長效激動劑，它與GLP-1具有53％的序列同源性，具有促進葡萄糖依賴性的胰島素合成和分泌的作用，與GLP-1相比，exendin-4的降血糖作用更強。目前其人工合成多肽exenatide(商品名Byetta)已被用于臨床糖尿病治療。近年來，Exendin-4作為治療2型糖尿病的新型藥物廣泛引起人們的關(guān)注，而Exenatide作為首個獲準(zhǔn)的腸降血糖類似物，于2005年4月獲美國食品與藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于二甲雙胍、磺脲類藥物血糖控制不理想的糖尿病患者的治療，2007年5月在英國也成為一種有效的降糖藥。
多肽藥物是近年來生物醫(yī)藥研究的成果之一，多肽藥物的生產(chǎn)主要有化學(xué)合成法和基因工程生產(chǎn)法?；瘜W(xué)合成法主要是固相或液相合成法。固相合成技術(shù)目前已較為成熟，但成本較高，隨著基因工程技術(shù)的成熟，國內(nèi)外都嘗試用基因工程技術(shù)生產(chǎn)多肽以提高產(chǎn)量，降低成本。用基因工程方法生產(chǎn)中等長度(20-60個氨基酸殘基)多肽時，由于表達水平低，且容易降解，因此常與其他載體蛋白融合表達。但由于目的多肽在融合蛋白中所占比例很小，裂解后分離純化困難，影響了基因工程生產(chǎn)多肽藥物的發(fā)展。另一解決途經(jīng)就是把目的多肽的基因串聯(lián)，可以提高產(chǎn)量。但串聯(lián)體切割時需要大量的酶，間接增加了生產(chǎn)成本。近年來，隨著基因工程技術(shù)的進展，構(gòu)建各種融合蛋白或單體、串聯(lián)體多肽的報道迅速增加。然而，利用人體自身存在的酶，在體內(nèi)對多肽藥物進行裂解并緩慢釋放其有效成分，使之成為可在體內(nèi)產(chǎn)生兩種多肽而發(fā)揮不同效應(yīng)并達到治療同一種疾病的多肽藥物，尚未見報道。
綜上所述，溶菌酶能有效地發(fā)揮抗AGEs作用，促進AGEs的清除與排泄，主要是因為其對AGEs分子有結(jié)合作用，與溶菌酶的水解作用無關(guān)。所以，溶菌酶的N端序列是結(jié)合AGEs的部分，具有抗AGEs的藥用功能。Exendin-4是一種比GLP-1更有效、作用時間更長的降糖物質(zhì)。


發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種既能抗AGEs又能改善高血糖并對AGEs或高血糖引起的疾病具有防治作用的一種雙靶向作用的嵌合多肽及其應(yīng)用。
本發(fā)明的目的通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn)一種雙靶向作用的嵌合多肽，包括具有以下特征的三段序列序列1是人溶菌酶蛋白從N端計起的前20-80個氨基酸序列，也即從人溶菌酶N端第一個氨基酸殘基算起的20-80個氨基酸序列；序列2是Exendin-4蛋白的氨基酸序列；序列3是序列1和序列2的連接序列，包含凝血酶酶切位點和二肽基肽酶的酶切位點。
所述二肽基肽酶的酶切位點位于與Exendin-4蛋白的氨基酸序列相接的一側(cè)。
所述溶菌酶蛋白的氨基酸序列包括已發(fā)表的各種人源性溶菌酶N端氨基酸序列。
所述溶菌酶蛋白的氨基酸序列優(yōu)選SEQ ID No1的序列 所述Exendin-4蛋白的氨基酸序列已在NCBI網(wǎng)站登記，序列號為AAB22006，具體序列如SEQ ID No2所示。
所述嵌合多肽的結(jié)構(gòu)示意圖見圖1。
本發(fā)明提供了所述雙靶向作用的嵌合多肽的制備方法，通過本領(lǐng)域公知多肽合成技術(shù)合成；或者通過公知的基因工程技術(shù)來實現(xiàn)，具體包括包含編碼所述嵌合多肽的的核苷酸序列(此序列可通過PCR和或人工合成的技術(shù)得到)的表達載體，在基因工程菌株中表達并純化得到。
上述方法中還可包括任何本領(lǐng)域公知的對多肽進行化學(xué)修飾的步驟。
通過過對本發(fā)明嵌合多肽進行體內(nèi)和體外的活性實驗，證明其具有顯著的抗AGEs和降血糖的活性，完全可以應(yīng)用于制備抗AGEs和/或降低高血糖的藥物。
本發(fā)明的基本原理如下由于這種嵌合多肽含有凝血酶的切點和二肽基肽酶(DPP-4)的切點，當(dāng)這嵌合多肽直接用于人體后，在血液中的凝血酶和DPP-4作用下，將其裂解并產(chǎn)生兩種具有藥用活性的多肽，即人溶菌酶N端序列和Exendin-4，發(fā)揮不同的治療效果。所產(chǎn)生的人溶菌酶N端序列的多肽發(fā)揮與AGEs結(jié)合并促進后者清除和排泄的功能，達到防治由于AGEs升高而產(chǎn)生的疾病，包括糖尿病的并發(fā)癥和老年性精神障礙等；而所產(chǎn)生的Exendin-4則發(fā)揮調(diào)節(jié)血糖的功能，達到改善高血糖的問題，可防治由于高血糖而產(chǎn)生的疾病，包括1型和2型糖尿病等。因此，這種嵌合多肽在體內(nèi)能夠緩慢釋放溶菌酶N端序列和Exendin-4兩種具有藥效功用的多肽，因而具有抗AGEs和降血糖的雙靶向作用機制。
本發(fā)明的嵌合多肽在體內(nèi)和體外實驗具有圖2所示的作用機制。
相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的嵌合多肽具有以下有益效果 1、在應(yīng)用基因工程技術(shù)生產(chǎn)本發(fā)明的嵌合多肽時，將不存在生產(chǎn)其他融合蛋白所需的裂解純化的缺點，同時又可提高該多肽的表達量。
2、這種嵌合蛋白在體內(nèi)的緩慢水解能延長該兩種多肽藥物的半衰期，從而減少用藥次數(shù)。
3、這種嵌合蛋白在體內(nèi)產(chǎn)生的人溶菌酶N端序列和Exendin-4兩種多肽分別發(fā)揮兩種不同的作用，形成一種雙靶向疊加效應(yīng)。
4、由于糖尿病患者血中的凝血酶活性比正常人高20倍，本發(fā)明的嵌合多肽尤其適用于糖尿病及其并發(fā)癥，因而針對性強。



圖1為本發(fā)明的雙靶向作用嵌合多肽的氨基酸序列示意圖。
圖2為本發(fā)明的雙靶向作用嵌合多肽在體內(nèi)的作用機制示意圖。本示意圖列出的本發(fā)明的雙靶向嵌合多肽在體內(nèi)的作用機制所涉及的酶包括DPP-4、凝血酶、凝血因子X。
圖3為溶菌酶N端肽段對AGEs的結(jié)合活性。

具體實施例方式 實施例1 1、本發(fā)明嵌合多肽的制備 按照圖1的排列設(shè)計，用基因工程技術(shù)生成溶菌酶N端80個氨基酸、2個氨基酸連接序列、Exendin-4組成的嵌合肽序列，序列如下 MKALIVLGLVLLSVTVQGKVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNT RATNYNAGDRSTDYGIFQINSRGPHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID No3) 下劃線為連接序列，連接序列中的P還可以是A、S、V、L。
具體制備上述序列的步驟如下 1、利用PCR方法或化學(xué)合成法得到人溶菌酶N端80個氨基酸和含凝血酶和二肽肽酶酶切位點的DNA序列； 2、利用PCR方法或化學(xué)合成法得到含凝血酶和二肽肽酶酶切位點的連接序列和Exendin-4的DNA序列； 3、將上述兩段序列混合，94℃變性、52℃退火，互為模板延伸，得到嵌合肽的全DNA序列； 4、設(shè)計一對PCR引物，上游含有載體酶切位點、EK酶切位點序列和人溶菌酶N端DNA序列，下游含有Exendin-4C末端DNA系列和載體酶切位點序列，以嵌合肽全序列為模板進行PCR。酶切、純化PCR產(chǎn)物，連接到pET-32a(+)表達載體上，轉(zhuǎn)染E.coli DH5αAmp+平板挑取陽性菌落，小量提取質(zhì)粒，送上海生工測序證實后，擴大培養(yǎng)提取質(zhì)粒，轉(zhuǎn)導(dǎo)受體菌BL21(DE3)，通過篩選獲得陽性工程菌。用IPTG誘導(dǎo)并篩選高表達菌株保存，發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)得到嵌合肽的基因工程表達產(chǎn)物，按常規(guī)方法純化和制備適用于人體的本嵌合多肽。
2、生理活性實驗部分 以凝血酶、二肽基肽酶于PBS溶液中，37℃，1h模擬體內(nèi)水解嵌合肽，凝膠層析分離得到溶菌酶N端肽段和Exenden-4，分別開展活性實驗。
(1)以間接法測定溶菌酶N端肽段對AGEs的結(jié)合活性。取100mL濃度的5mg/mL糖基化白蛋白，4℃包被過夜，100mL封閉液于37℃封閉1h，洗滌后加入100mL不同濃度的溶菌酶N端肽段(3個復(fù)孔)于室溫溫育3h，洗滌后加入100mL兔抗嵌合多肽抗體，于37℃溫育1h，再加入100mL HRP-羊抗兔IgG抗體，于37℃溫育1h，洗滌后加入100mL OPD底物顯色，以BSA為陰性對照，測A490nm。結(jié)果發(fā)現(xiàn)多肽與包被的糖基化蛋白溫育3h，濃度在0.25mg/mL以上時，可以觀察到明顯的結(jié)合活性，并且隨著多肽濃度的提高，結(jié)合程度也隨之升高(如圖3所示)。
(2)體內(nèi)法鑒定Exenden-4的降血糖作用 利用鏈脲佐菌素制備糖尿病大鼠模型，隨機分為不同濃度給藥組和對照組，每組10只，分別于腹腔給藥(對照組注射生理鹽水)10min后取尾靜脈血用血糖儀測定血糖，1h后用尿糖試紙測定尿糖。如表1所示，Exenden-4具有顯著的降血糖效果。
表1體內(nèi)法鑒定Exenden-4的降血糖作用 下述實施例2-6是本發(fā)明實現(xiàn)的另外幾種實現(xiàn)方式，其制備方法均為現(xiàn)有基因工程及核苷酸或氨基酸化學(xué)合成的公知技術(shù)，它們得到的嵌合多肽在與實施例中所述的生理活性實驗中均體現(xiàn)了不同程度的對AGEs的結(jié)合活性以及將血糖的作用。
實施例2 按照圖1的排列設(shè)計，用化學(xué)合成的方法合成由人由溶菌酶N端60個氨基酸、6個氨基酸連接序列、Exendin-4組成的嵌合多肽，再按常規(guī)方法純化和制備適用于人體的本嵌合多肽藥物成分。
本例嵌合多肽的序列為 MKALIVLGLVLLSVTVQGKVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNT RALVPRGPHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID No4) 下劃線為連接序列，連接序列中的L、V還可以是A、I、M、F、P、W等，連接序列中G后一位的P還可以是A、S、V、L。
實施例3 按照圖1的排列設(shè)計，用化學(xué)合成的方法合成由溶菌酶N端40個氨基酸、12個氨基酸連接序列、Exendin-4組成的嵌合多肽，再按常規(guī)方法純化和制備適用于人體的本嵌合多肽藥物成分。
本例嵌合多肽的序列為 MKALIVLGLVLLSVTVQGKVFERCELARTLKRLGMDGYRGLVPRGPLVPRGPHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID No5) 下劃線為連接序列，連接序列中的L、V還可以是A、I、M、F、P、W等，連接序列中G后一位的P還可以是A、S、V、L。
實施例4 按照圖1的排列設(shè)計，用化學(xué)合成的方法合成由人由溶菌酶N端20個氨基酸、18個氨基酸連接序列、Exendin-4組成的嵌合多肽，再按常規(guī)方法純化和制備適用于人體的本嵌合多肽藥物成分。
本例嵌合多肽的序列為 MKALIVLGLVLLSVTVQGKVLVPRGPLVPRGPLVPRGPHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID No6) 下劃線為連接序列，連接序列中的L、V還可以是A、I、M、F、P、W等，連接序列中G后一位的P還可以是A、S、V、L。
實施例5 按照圖1的排列設(shè)計，用化學(xué)合成的方法合成人由溶菌酶N端80個氨基酸、24個氨基酸連接序列、Exendin-4組成的嵌合多肽，再按常規(guī)方法純化和制備適用于人體的本嵌合多肽藥物成分。
本例嵌合多肽的序列為 MKALIVLGLVLLSVTVQGKVFERCELARTLKRLGMDGYRGISLANWMCLAKWESGYNT RATNYNAGDRSTDYGIFQINSRLVPRGPLVPRGPLVPRGPLVPRGPHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ ID No7) 下劃線為連接序列，連接序列中的L、V還可以是A、I、M、F、P、W等，連接序列中G后一位的P還可以是A、S、V、L。
實施例6 按照圖1的排列設(shè)計，用化學(xué)合成的方法合成人由溶菌酶N端20個氨基酸、6個氨基酸連接序列、Exendin-4組成的嵌合多肽，再按常規(guī)方法純化和制備適用于人體的本嵌合多肽藥物成分。
MKALIVLGLVLLSVTVQGKVLVPRGPHGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(SEQ IDNo8) 下劃線為連接序列，連接序列中的L、V還可以是A、I、M、F、P、W等，連接序列中G后一位的P還可以是A、S、V、L。
實施例7 按照圖1的排列設(shè)計，用化學(xué)合成的方法合成人溶菌酶N端20-80個氨基酸序列、由24個氨基酸組成的連接序列、Exendin-4序列組成的嵌合多肽，再按常規(guī)方法純化和制備適用于人體的本嵌合多肽藥物成分。
實施例8 利用常規(guī)工藝制成含本發(fā)明的嵌合多肽250微克/毫升、500微克/毫升、750微克/毫升、1000微克/毫升、1500微克/毫升和2000微克/毫升的皮下注射藥物。該藥物在臨床實驗中均體現(xiàn)了按AGEs和降血糖的功能。
實施例9 利用常規(guī)工藝制成含本發(fā)明的嵌合多肽0.1微克/毫升、0.2微克/毫升、0.5微克/毫升、1微克/毫升和2微克/毫升的靜脈注射藥物。該藥物臨床實驗中均體現(xiàn)了按AGEs和降血糖的功能。
序列表
<110>暨南大學(xué)
<120>一種雙靶向作用的嵌合多肽及其應(yīng)用
<130>5
<160>8
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>80
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>1
Met Lys Ala Leu Ile Val Leu Gly Leu Val Leu Leu Ser Val Thr Val
1 5 10 15
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<210>2
<211>39
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<400>2
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35
<210>3
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<212>PRT
<213>人工序列
<400>3
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<212>PRT
<213>人工序列
<400>4
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<212>PRT
<213>人工序列
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<213>人工序列
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Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro
50 55 60
Ser
6權(quán)利要求
1.一種雙靶向作用的嵌合多肽，其特征在于包括具有以下特征的三段序列序列1是從N端計起的前20-80個人溶菌酶蛋白的氨基酸序列；序列2是Exendin-4蛋白的氨基酸序列；序列3是序列1和序列2的連接序列，包含凝血酶酶切位點和二肽基肽酶的酶切位點。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙靶向作用的嵌合多肽，其特征在于所述二肽基肽酶的酶切位點位于與Exendin-4蛋白的氨基酸序列相接的一側(cè)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙靶向作用的嵌合多肽，其特征在于所述溶菌酶蛋白的氨基酸序列包括已發(fā)表的各種人源性溶菌酶N端氨基酸序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙靶向作用的嵌合多肽，其特征在于所述溶菌酶蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No1所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙靶向作用的嵌合多肽，其特征在于所述Exendin-4蛋白的氨基酸序列是NCBI已公布序列，序列號為AAB22006，氨基酸序列如SEQ IDNo2所示。
6.權(quán)利要求1-5任一項所述雙靶向作用的嵌合多肽的制備方法，其特征在于通過多肽合成技術(shù)合成；或者通過構(gòu)建包含編碼所述嵌合多肽的的核苷酸序列的表達載體，在基因工程菌株中表達并純化得到。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙靶向作用的嵌合多肽，其特征在于所述核苷酸序列通過PCR和/或人工合成的手段得到。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的雙靶向作用的嵌合多肽，其特征在于還包括對多肽進行化學(xué)修飾。
9.權(quán)利要求1-5任一項所述雙靶向作用的嵌合多肽應(yīng)用于制備抗AGEs和/或降低高血糖的藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種雙靶向作用的嵌合多肽及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的嵌合多肽包括具有以下特征的三段序列序列1是從N端計起的前20-80個人溶菌酶蛋白的氨基酸序列；序列2是Exendin-4蛋白的氨基酸序列；序列3是序列1和序列2的連接序列，包含凝血酶酶切位點和二肽基肽酶的酶切位點。本發(fā)明的制備方法可以是通過多肽合成技術(shù)合成或者通過構(gòu)建包含編碼所述嵌合多肽的的核苷酸序列的表達載體，在基因工程菌株中表達并純化得到。本發(fā)明的嵌合多肽具有顯著的抗AGEs和降血糖的雙靶向活性，可以應(yīng)用于制備抗AGEs和/或降低高血糖的藥物。
文檔編號A61P3/10GK101698681SQ200810304890
公開日2010年4月28日 申請日期2008年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月10日
發(fā)明者劉譽, 謝琪璇 申請人:暨南大學(xué)