專利名稱：：阿魏酸在增加某些藥物的藥效作用及其用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及阿魏酸在增加某些藥物的藥效作用及其用途。本發明涉及的阿魏酸包括正阿魏酸和異阿魏酸以及他們的同分異構體?；瘜W名稱為4-羥基-3-甲氧基苯丙烯酸，分子量194.18，順式和反式阿魏酸的結構特征見有關文獻[張娟，金青哲，王興國。阿魏酸及其衍生物合成及藥理研究進展，糧食與油脂，2007年第1期，43-45]。本發明所涉及某些藥物包括生物堿類藥物及其與無機鹽所組成的鹽類如苦參堿、苦參素、槐果堿、莨菪堿、罌粟堿、漢防己甲素、小檗堿、嗎啡、嗎啡、可待因、吳茱萸堿、士的寧、長春堿、長春新堿、紫杉醇、貝母堿、麻黃堿、偽麻黃堿、雷公藤堿，等。本發明所涉及某些藥物包括黃酮類(苷及苷元)藥物，例如葛根素、人參皂苷、人參皂苷元、芒果苷、黃芩苷、紫草素、槲皮素、蘆丁、橙皮苷、大豆苷、大豆異黃酮、大豆素、紅花苷、兒茶素類，等。本發明所涉及阿魏酸增加藥物的藥效作用可以通過改變藥物的物理性質實現的，例如增加藥物的水溶性、脂溶性，降低藥物的pH，改善藥物的生物利用度，增加藥物通過生物膜能力的特性(包括皮膚、體內的腔道膜結構、細胞膜、血管膜、血腦屏障等)。改變藥物的藥代動力學以及組織分布與排泄特性等實現的。本發明所涉及阿魏酸增加藥物的藥效作用可以通過與藥物藥物復方、形成藥物組合物，包括與藥物形成可溶性分子間的絡合物、締合物、復鹽或成酰胺鹽等實現。本發明所涉及阿魏酸增加藥物的藥效作用可以通過與藥物產生化學反應(成酯作用、成酮作用、成醚作用等)形成的復合物等實現的。本發明涉及阿魏酸增加一些藥物的療效可以是阿魏酸本身具有的抗血小板聚集、抗血栓、抗氧化、抗自由基、抗菌消炎、抗腫瘤、抗突變、抗衰老、抗血脂、抗動脈硬化、增加免疫功能、增強人體精子活力和運動性的藥效作用與一些藥物的藥效作用形成協同效應或相加效應從而增加了藥物的療效。其增加藥物的療效作用涉及到藥物以及阿魏酸本身的抗血小板聚集、抗血栓、抗氧化、抗自由基、抗菌消炎、抗腫瘤、抗突變、抗衰老、抗血脂、抗動脈硬化、增加免疫功能、增強人體精子活力和運動性的藥效作用。本發明所涉及的阿魏酸與這些藥物組成的組合物，包括復方制劑、鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類等，其阿魏酸可以和1種藥物制成復方制劑和/或鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類制劑等，也可以和2種及2種以上藥物制成復方制劑和/或有機鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類制劑等。其阿魏酸與藥物的分子摩爾比為0.01-10:1。這些類型的藥物組合物，包括復方制劑、鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類等，可以采用藥學上可接受的方式制成藥用劑型，包括注射劑、口服制劑、皮膚粘膜吸收制劑等。用于治療感冒、發熱、骨關節和肌肉腫脹、老年癡呆、疼痛、老年癡呆、風濕性疾病、心血管疾病、動脈硬化性疾病、腫瘤、過敏性疾病、蚊叮蟲咬等。具體實施例實施例一、阿魏酸增加生物堿類藥物水溶性的觀察取阿魏酸與生物堿類藥物，分別以i:i;i:2;i:3;i:4;i:5;i:6摩爾比混合后，置于球磨機內研磨。15分鐘后，取出藥物，觀察水溶性的改變。結果見表l。表1.阿魏酸對生物堿類藥物在水溶液中溶解度的觀察(mg/mL)生物堿名稱阿魏酸與生物堿的分子摩爾比0:11:11:21:31:41:51:6苦參堿100300〉500〉500〉500300200紫杉醇難溶200200200100505小檗堿難溶200300200100100100長春堿難溶10010050502020貝母堿難溶10010050505020士的寧難溶100200100505020麻黃堿易溶300〉500〉500〉500200200吳茱萸堿難溶10010050505020嗎啡溶解10010050505020罌粟堿難溶10010050505020雷公藤堿難溶10010050505020實施例二、阿魏酸增加黃酮類藥物水溶性和脂溶性的觀察取阿魏酸與黃酮堿類藥物，分別以i:i;i:2;i:3;i:4;i:5;i:6摩爾比按照化學合成的方法，合成鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類藥物，分離純化后，觀察水溶性和脂溶性的改變。結果見表2，3。表2.阿魏酸對黃酮堿類藥物在水溶液中溶解度的觀察(mg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例三、阿魏酸紫杉醇酮的溶解性和抗腫瘤活性的觀察紫杉醇具有良好的抗癌活性，成為第三代抗腫瘤藥物。紫杉醇治療卵巢癌、乳腺癌有良好的效果，對治療前列腺癌、上腸胃道癌、小細胞性和非小細胞性肺癌前景良好。由于紫杉醇幾乎不溶于水，使用中需加入助溶劑。然而其助溶劑可導致病人嚴重過敏甚至個別死亡，從而制約了其應用。采用阿魏酸與紫杉醇成酯反應所生成的酯類化合物，可大大增加紫杉醇的水溶性，并對其抗腫瘤活性有明顯的協同作用。材料與方法胃癌BGC2823細胞購自中科院上海細胞生物所，紫杉醇購自上海復旦紫杉新技術有限公司。藥物的制備和配置紫杉醇與阿魏酸2:l摩爾比混合，硫酸催化成酯后，其水溶性可從每升水溶解0.25毫克增加到200mg/L。將阿魏酸紫杉醇酯用生理鹽水配置成0，0.05umol/L，0.1umol/L，0.5umol/L，1umol/L，2umol/L的溶液。對胃癌細胞的體外干預實驗細胞培養以含10%小牛血清的RPMI1640培養基在37°C，5%C02的培養箱中培養，細胞培養在100mL的培養瓶中，根據細胞生長狀態23天換液或傳代，取對數生長期的細胞進行試驗，共分為4大組，分別為空白對照組，紫杉醇注射液對照組，阿魏酸藥物對照組，紫杉醇阿魏酸藥物組，每組6個藥物濃度，藥物干預濃度見上藥物的配置。將細胞接種到96孔板中，每孔100iiL，812h后除去培養液，每孔加入含相應藥物的培養液共100L，每個藥物濃度均設3個復孔，37°C、5%(A、飽和濕度條件下培養24h后，在培養液表面每孔加入50iiL50%的三氯醋酸(TCA)固定，室溫下放置5min后，將培養液移至4t:放置1小時，倒掉固定液，每孔用去離子水洗5遍，甩干，空氣干燥，每孔加入100iiLSRB，室溫放置10min，再用1%醋酸洗5遍，空氣干燥。結合的SRB用150yL10mmo1/L非緩沖Tris堿液(pH10.5)振蕩溶解，用酶標儀在波長570nm處測定吸光度(OD)值。用OD的大小表示細胞的增值數量。結果阿魏酸紫杉醇可明顯抑制胃癌BGC2823細胞的生長，其作用比紫杉醇注射液明顯增強(見表4)表4.阿魏酸紫杉醇對胃癌BGC2823細胞的抑制作用(OD值；x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與對照組比較，*P<0.05**P<0.01實施例四、阿魏酸增強善黃連素抗菌作用的療效觀察黃連素是一種重要的生物堿，是我國應用很久的中藥?？蓮狞S連、黃柏、三顆針等植物中提取。它具有顯著的抑菌作用。常用的鹽酸黃連素又叫鹽酸小檗堿，黃連素對痢疾桿菌、葡萄球菌和鏈球菌等均有抑制作用。臨床主要用于治療細菌性痢疾和腸胃炎，它無抗藥性和副作用。本試驗采用阿魏酸與黃連素合用用于治療復發性口腔潰瘍，其療效確切，口感好，病人易于接受。阿魏酸與鹽酸黃連素(鹽酸小檗堿)l:l等摩爾混合后。按照常規藥劑學的方法制成含片。每片50mg。復發性口腔潰瘍患者30對，分為試驗治療組和對照組。每組30例，試驗組采用口腔含化的方法，每日4-6次，療程為5天。對照組采用鹽酸黃連素藥片含化，每日4-6次，療程為5天。療效觀察潰瘍面基本消失，為顯效；潰瘍面縮小，為有效；潰瘍面變化不大，為無效。病人順應性觀察病人能夠完成含化完1片藥為順應性好。不能含化完1片藥為順應性差。結果試驗組顯效12例，有效16例，總有效率為93%，100%病人能夠完成含化。對照組顯效9例，有效11例，總有效率為67%。11人能夠完成含化，約占全部實驗病人37%，大部分病人不能完成含化。許多病人是強迫性完成的。實施例五、阿魏酸苦參素酰胺鎮痛作用的觀察阿魏酸苦參素酰胺的制備稱取l:2摩爾比的阿魏酸和苦參素，采用成鹽技術成鹽后，柱分離，得純度>98%的阿魏酸苦參素酰胺。選取健康小鼠，隨機分為6組，分別是苦參素50mg/kg，苦參素10mg/kg，阿魏酸苦參素酰胺50mg/kg，阿魏酸苦參素酰胺25mg/kg，阿魏酸苦參素酰胺12.5mg/kg，和空白對照組。每組10只。各組分別灌胃給藥，連續3天，末次給藥30min后，腹腔注射0.6X醋酸10ml/kg，記錄15min內小鼠出現扭體反應次數。計算藥物鎮痛百分率。藥物鎮痛百分率(％)=(對照組扭體次數治療組扭體次數)/對照組扭體次數X100%結果苦參素10mg/kg未見有明顯的鎮痛作用，苦參素50mg/kg有一定的鎮痛作用，阿魏酸苦參素酰胺12.5、25、50mg/kg均有明顯的鎮痛作用(表5)。表5.阿魏酸對苦參素鎮痛作用的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實施例六、阿魏酸麻黃素鹽的抗炎作用的觀察。阿魏酸麻黃素鹽的制備將一定比例的阿魏酸和麻黃素混合成鹽反應。選取小鼠，隨機分為5組，分別為麻黃堿5mg/kg，麻黃堿20mg/kg，麻黃堿5mg/kg+阿魏酸10mg/kg，麻黃堿5mg/kg+阿魏酸5mg/kg，麻黃堿5mg/kg+阿魏酸2.5mg/kg，每組10只。稱重標記后，將小鼠的右耳用二甲苯棉球接觸5分鐘，左耳作為對照，于致炎10min后，分別在致炎耳殼上，涂覆給予藥物濃度為1^受試藥物，空白對照組給生理鹽水，30min后將小鼠脫臼處死，用直徑6mm打孔器在耳朵的相同部位取等面積左(自身對照)、右耳(二甲苯處理)稱重，計算耳腫脹率。耳腫脹率(％)=(右耳重量_左耳重量)/左耳重量X100%.結果阿魏酸可明顯增加麻黃堿抗二甲苯所致的耳腫脹作用(見表6)。表6.阿魏酸對麻黃素的抗炎作用的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實施例七阿魏酸對長春新堿腸道吸收作用的觀察。阿魏酸長春新堿鹽的制備將阿魏酸與長春新堿l:l摩爾配比成鹽，柱分離后即得。實驗方法取大鼠100只，體重200-250g，雌雄各半。1次灌胃給藥2mg/kg，分別在給藥后10、30、60、120和180min眼眶靜脈叢取血，按照文獻方法測定血漿長春新堿血藥濃度[王小晨，王向偉，秦燕，徐智儒，王光風，來慶勤，楊正茂，劉全海，長春新堿脂質體的藥代動力學及其抗腫瘤作用。實驗動物與比較醫學，2007;27(1):15-19頁]，結果表明，常春新堿口服吸收較差，阿魏酸長春新堿鹽可明顯增加長春新堿的吸收。其AUC?！?藥-時曲線下的面積)約是長春新堿的5倍(見表5)。[ooee]表5.阿魏酸對長春新堿藥代動力學的影響(7士sD)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例八、阿魏酸對貝母總生物堿止咳化痰作用的影響止咳作用取22±3g合格小鼠40只，雌雄兼用，按咳嗽次數和性別分層隨機分成4組，分別灌胃給與NS、25mg/kg貝母總生物堿、阿魏酸25mg/kg、50mg/kg貝母總生物堿、25mg/kg貝母總生物堿+阿魏酸25mg/kg，20min后，按照文獻方法氨水引咳，[徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M]第3版.北京人民衛生出版社，2002，1359]，記錄3min內咳嗽次數。結果表明，25mg/kg貝母總生物堿和阿魏酸25mg/kg無鎮咳作用，50mg/kg貝母總生物堿、25mg/kg貝母總生物堿+阿魏酸25mg/kg止咳作用明顯，貝母總生物堿和阿魏酸聯合用藥作用最好。祛痰作用采用小鼠酚紅排泌法[參考文獻同止咳作用]，給藥劑量和分組同止咳作用。分別在給藥后30分鐘立即腹腔注射0.25%酚紅(0.2ml/10g)，用分光光度計測558nm處吸收度。結果表明，5mg/kg貝母總生物堿和阿魏酸25mg/kg無祛痰作用，50mg/kg貝母總生物堿、25mg/kg貝母總生物堿+阿魏酸25mg/kg祛痰作用明顯，貝母總生物堿和阿魏酸聯合用藥作用最好。實施例九阿魏酸對小檗堿的口服血藥濃度的觀察儀器1100高效液相色譜(HPLC)儀，包括G1315A紫外-可見光二級管陣列檢測器(美國惠普公司)。試驗方法取比格犬12只，隨機分為2組，試驗前禁食14小時，稱重，第1組吞服小檗堿200mg/kg，第2組給與小檗堿200mg/kg+阿魏酸100mg/kg分別在給藥后0、0.5、1、2、3、4、6h于股靜脈留置滯留針管，定時取血2ml，置于加入肝素鈉抗凝劑的離心管中，2000r/min離心20min，取上清液按照文獻方法測定血清小檗堿的含量，結果表明，阿魏酸可明顯增加小檗堿的血藥濃度(表6)。表6.阿魏酸對小檗堿藥濃度的影響時間血藥濃度小檗堿(yg/ml)阿魏酸小檗堿(yg/ml)0000.50.435±0.0052.653±0.18411.389±0.0195.448±0.35821.513±0.03810.321±0.88232.209±0.19615.336±0.92741.627±0.13512.287±0.88251.016±0.0767.664±0.48760.896±0.0156.921±0.33911實施例十、阿魏酸苦參素抗動脈硬化的觀察有報道表明阿魏酸具有降低血脂、改善血液流變學和抗動脈硬化的作用，但苦參素未見降低血脂和抗動脈硬化的作用的報道，其抗炎和抗纖維化作用可與阿魏酸的作用發生協同作用，從而其抗動脈硬化作用比單獨使用阿魏酸的作用強。本試驗觀察到阿魏酸苦參素可明顯改善高血脂模型動物的動脈硬化水平。試驗方法藥物制備將阿魏酸苦參素以1:2分子摩爾比混合后，置于球磨機中混勻即可。按照文獻方法進行[劉占濤，劉賽，王守蘭，張健，仲偉珍。海洋貝類綜合提取物對實驗性動脈粥樣硬化的治療作用。中國動脈硬化雜志2005年第13巻第3期；305-308]。取雄性鵪勢140只，隨機分為7組，正常對照組、模型組、陽性對照組(羅伐它丁10mg/kg)，阿魏酸口服對照組(40mg/kg)和藥物高、中、低劑量組(分別給藥10、20、40mg/kg)。除正常對照組喂基礎飼料外，其余5組按照文獻方法建立高脂食餌性動脈硬化模型。各用藥組灌胃給藥，每日一次，連續用藥4周。分別于用藥后第4周末，每組取10只動物測定其血清脂質。于實驗結束時對存活的鵪鶉進行病理學檢測。血清脂質含量測定各組于用藥后第2，4周末，禁食12h后經頸靜脈取血2mL，分離血清，采用酶法測定血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。結果阿魏酸苦參素可明顯降低動脈硬化模型鵪勢血清TC、TG水平，其作用比阿魏酸明顯增強(表7)。模型組多數主動脈有明顯的病變，多數As病變在2級以上，阿魏酸苦參素組主動脈粥樣硬化病變程度較輕，多在12級以下(表8)。鏡下可見多數動脈內膜完整，部分有輕度脂質浸潤，內含散在泡沫細胞。表7.阿魏酸苦參素對高血脂模型鵪鶉血脂的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表8.阿魏酸苦參素對高血脂模型鵪鶉主動脈動脈硬化病變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>權利要求本發明涉及阿魏酸在增加某些藥物的藥效作用及其用途。2.根據權利要求l，本發明涉及的阿魏酸包括正阿魏酸和異阿魏酸以及他們的同分異構體。化學名稱為4羥基3甲氧基苯丙烯酸，分子量194.18，順式和反式阿魏酸的結構特征見有關文獻[張娟，金青哲，王興國阿魏酸及其衍生物合成及藥理研究進展，糧食與油脂，2007年第1期，43-45]。3.根據權利要求l，本發明所涉及某些藥物包括生物堿類藥物及其與無機鹽所組成的鹽類如苦參堿、苦參素、槐果堿、莨菪堿、罌粟堿、漢防己甲素、小檗堿、嗎啡、嗎啡、可待因、吳茱萸堿、士的寧、長春堿、長春新堿、紫杉醇、貝母堿、麻黃堿、偽麻黃堿、雷公藤堿，等。4.根據權利要求l，本發明所涉及某些藥物包括黃酮類(苷及苷元)藥物，例如葛根素、人參皂苷、人參皂苷元、芒果苷、黃芩苷、紫草素、槲皮素、蘆丁、橙皮苷、大豆苷、大豆異黃酮、大豆素、紅花苷、兒茶素類，等。5.根據權利要求l-4，本發明所涉及的阿魏酸增加藥物的藥效作用可以的通過改變藥物的理化性質實現的，例如增加藥物的水溶性、脂溶性，降低藥物的pH，改善藥物的生物利用度，增加藥物通過生物膜能力的特性(包括皮膚、體內的腔道膜結構、細胞膜、血管膜、血腦屏障等)。改變藥物的藥代動力學以及組織分布與排泄特性等實現的。6.根據權利要求l-4，本發明所涉及的阿魏酸增加藥物的藥效作用可以通過與藥物藥物復方、形成藥物組合物，包括與藥物形成可溶性分子間的絡合物、締合物、復鹽或成酰胺鹽等實現。7.根據權利要求l-4，本發明所涉及的阿魏酸增加藥物的藥效作用阿魏酸可以通過與藥物產生化學反應(成酯作用、成酮作用、成醚作用等)形成的復合物等行為等實現的。8.根據權利要求l-4，本發明涉及的阿魏酸增加一些藥物的療效可以是阿魏酸本身具有的抗血小板聚集、抗血栓、抗氧化、抗自由基、抗菌消炎、抗腫瘤、抗突變、抗衰老、抗血脂、抗動脈硬化、增加免疫功能、增強人體精子活力和運動性的藥效作用與一些藥物的藥效作用形成協同效應或相加效應從而增加了藥物的療效。其增加藥物的療效范圍作用涉及到藥物本身的作用以及阿魏酸本身的抗血小板聚集、抗血栓、抗氧化、抗自由基、抗菌消炎、抗腫瘤、抗突變、抗衰老、抗血脂、抗動脈硬化、增加免疫功能、增強人體精子活力和運動性的藥效作用。9.根據權利要求l-8，本發明所涉及的阿魏酸與這些藥物組成的組合物，包括復方制劑、鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類等，其阿魏酸可以和1種藥物制成復方制劑和/或鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類制劑等，也可以和2種及2種以上藥物制成復方制劑和/或有機鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類制劑等。其阿魏酸與藥物的分子摩爾比為0.01-10:1。10.根據權利要求l-9，這些類型的藥物組合物，包括復方制劑、鹽類、酮類、酯類、醚類、酰胺類等，可以采用藥學上可接受的方式制成藥用劑型，包括注射劑、口服制劑、皮膚粘膜吸收制劑等。用于治療感冒、發熱、骨關節和肌肉腫脹、老年癡呆、疼痛、老年癡呆、風濕性疾病、心血管疾病、動脈硬化性疾病、腫瘤、過敏性疾病、蚊叮蟲咬等。全文摘要本發明涉及阿魏酸在增加某些藥物的藥效作用及其用途，其藥物主要包括苦參堿、苦參素、槐果堿、莨菪堿、罌粟堿、漢防己甲素、小檗堿、嗎啡、嗎啡、可待因、吳茱萸堿、士的寧、長春堿、長春新堿、紫杉醇、貝母堿、貝母甲素、貝母乙素、麻黃堿、偽麻黃堿、雷公藤堿、雷公藤甲素，雷公藤乙素，等生物堿類藥物，以及葛根素、人參皂苷、人參皂苷元、芒果苷、黃芩苷、紫草素、槲皮素、蘆丁、橙皮苷、大豆苷、大豆異黃酮、大豆素、紅花苷、兒茶素類等黃酮類藥物。阿魏酸與這些藥物可形成組合物、藥物復方、或與藥物產生化學反應(包括成鹽作用、成酯作用、成酰胺作用、成酮作用、成醚作用等)，和/或與藥物產生協同效應和相加效應。文檔編號A61K47/14GK101721400SQ20081030490公開日2010年6月9日申請日期2008年10月13日優先權日2008年10月13日發明者宋健,彭康康,馬維富申請人:青島啟元生物技術有限公司