專利名稱：松花粉及其提取物在治療炎癥性腸病中的用途及該提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥用途領(lǐng)域，具體涉及松花粉、松花粉提取物以及包含該松花粉提 取物的藥物組合物在治療炎癥性腸病中的用途及該包含松花粉提取物的藥物組合物的其 制備方法。
背景技術(shù)：
炎癥性腸病(inflammatory bowel disease, IBD)是一組病因不明的慢性腸道炎 癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)和克隆氏病(Crohn，s disease, CD)。近年來國內(nèi)外IBD的發(fā)病率呈上升趨勢，其病因和發(fā)病機制是多方面因素引起的，即 在遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)上，由于抗原刺激和體內(nèi)免疫系統(tǒng)的激活，各種環(huán)境因素相互作用而引起 的慢性腸道炎癥。目前確切病因和發(fā)病機制仍不甚清楚，其發(fā)病機制的復(fù)雜性給臨床根治 造成了一定的困難，被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一。目前用于治療IBD的藥物有傳 統(tǒng)的水楊酸類制劑、皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和新興的生物制劑，因長期服用的不良反應(yīng)和價 格因素，尋找IBD新的治療方法和藥物已經(jīng)逐漸成為一種熱點。松花粉藥名松花、松黃，是我國松科植物馬尾松Pinus massoniana Lam b.、油松 Pinus tabulaeform is Carr.或同屬數(shù)種植物的干燥花粉，為鮮黃色或淡黃色細(xì)粉，其性 味甘平無毒。松花粉藥食兼用的歷史已逾千年，是中醫(yī)古藉中收載的兩種花粉之一，是祖 國醫(yī)藥學(xué)寶庫中僅有的食、藥兼用花粉品種，我國第一部藥典《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有“松黃” 的記載，將其列為上品；唐代官頒藥典《新修本草》也將其收錄其中；明朝李時珍在《本草綱 目》中更稱“松花、甘、溫、無毒。潤心肺、益氣，除風(fēng)止血，亦可釀酒。”作為古老的藥源和 營養(yǎng)源，近年國家衛(wèi)生部已確認(rèn)松花粉為新資源食品，并列為普通食品管理，現(xiàn)已收入2005 版《中國藥典》。松花粉含有松樹植株所具有的一切營養(yǎng)成分和生命活性物質(zhì)，其中有多種蛋白 質(zhì)、20余種氨基酸(包括人體必須的8種)、15種維生素、30多種礦物質(zhì)元素、11%的脂肪、 近百種酶和輔酶，以及核酸、不飽和脂肪酸、卵磷脂、類黃酮、單糖、多糖、纖維素等，總量達(dá) 到200余種，且搭配合理能夠全部補充、均衡人體所需的營養(yǎng)，具有提高免疫力、抗衰老、抗 疲勞、調(diào)整機體代謝、降血脂和養(yǎng)顏等功效，在國內(nèi)外已被廣泛地應(yīng)用于保健品、藥品、化妝 品和飼料添加劑等領(lǐng)域。炎癥性腸病的發(fā)生原因和致病機制迄今尚未完全闡明，多年研究證實該病與自身 免疫反應(yīng)有關(guān)，異常的免疫反應(yīng)或正常免疫調(diào)節(jié)的破壞是其發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。松花粉中所 含多糖具有免疫調(diào)節(jié)功能，能改善由免疫功能異常；其中所含有效成分多糖及多種營養(yǎng)成 分(氨基酸、微量元素及維生素C等)，對受損組織有修復(fù)和營養(yǎng)作用。松花粉中的纖維素 能夠可以減少膽汁酸的吸收量，改變食物的消化速度和消化液的分泌量。但是松花粉及松花粉提取物用于炎性腸病的治療未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了松花粉及其提取物在制備治療炎 癥性腸病的藥物中的用途。本發(fā)明的另一目的是提供松花粉提取物的制備方法。本發(fā)明的再一目的是提供含有松花粉提取物的藥物組合物。
為了解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案本發(fā)明提供了松花粉提取物的制備方法。松花粉使用水、醇類、或水與醇類的混合物提取。優(yōu)選的醇類包括甲醇、乙醇，醇濃 度優(yōu)選為40%-99%，進(jìn)一步優(yōu)選為80%。提取時溶劑量為原藥重量的5 15倍(體積/ 重量，ml/g)，優(yōu)選體積為10倍量。提取的溫度是從室溫(例如20°C )到溶劑回流溫度的 范圍內(nèi)，優(yōu)選在回流溫度。提取時可重復(fù)1 4次，每次提取時間為0. 5h 2h，優(yōu)選時間為 Ih0上步結(jié)束后，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮蒸干或噴霧干燥，即為松花粉提取物。本發(fā)明還涉及松花粉提取物作為活性成分的藥物組合物。該藥物組合物可根據(jù)本 領(lǐng)域公知的方法制備。可通過將松花粉提取物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦 形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動物使用的任何劑型。松花粉提取物在其藥物組合物 中的含量通常為0. 1 95% (重量)。本發(fā)明了還提供了松花粉及其提取物在制備治療炎癥性腸病藥物中的用途。我們采用2，4，6_三硝基苯磺酸(TNBS)法造模建立了大鼠實驗性炎癥性腸病模 型，考察了松花粉及其提取物對炎癥性腸病的治療作用。有關(guān)炎癥性腸病的臨床和實驗研究均發(fā)現(xiàn)自由基及其觸發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)在 其發(fā)生、發(fā)展中有重要作用。而SOD能有效地清除氧自由基，催化超氧化自由基分解成H2O2， 進(jìn)而在過氧化氫酶的作用下分解成H2O和氧分子，從而抑制腸組織中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。 SOD活性可間接反映機體的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和抗脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的能力。機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪 酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物以及新的氧自由基等。因而測試MDA的 量常常可以反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映細(xì)胞損傷的程度。通過對SOD值和MAD值的測定，我們發(fā)現(xiàn)模型組的SOD活力與正常組比較有顯著性降低(P<0.001)；陽性藥物組的SOD活 力與正常組比較有降低(P < 0. 05)，與模型組比較有顯著性升高(P < 0. 001)；松花粉組的 SOD活力與正常組比較有降低(P < 0. 05)，但與模型組比較則有升高(P < 0. 05)；低劑量 組的SOD活力與正常組比較有降低(P < 0. 05)，但與模型組比較則有升高(P < 0. 05)，中、 高劑量組的SOD活力與正常組比較無顯著性差異(P > 0. 05)，與模型組比較則有顯著性升 高(P < 0. 01)。模型組的MDA含量與正常組比較有顯著性升高(P < 0. 001)；陽性藥物組的MAD含 量與正常組比較無顯著性差異(P > 0. 05)，但與模型組比較則有顯著性降低(P < 0. 01)； 松花粉組的MDA含量與正常組比較無顯著性差異(P > 0. 05)，與模型組比較則有顯著性降 低(P < 0. 01)；低劑量組的MDA含量與正常組比較有升高(P < 0. 05)，與模型組比較則有 降低(P<0. 05)，中、高劑量組的MDA含量與正常組比較無顯著性差異(P>0. 05)，與模型 組比較則有顯著性降低(P < 0. 01)。
通過實驗發(fā)現(xiàn)，松花粉及其提取物對大鼠病變結(jié)腸黏膜有一定的修復(fù)作用，能有 效改善炎癥性腸病的癥狀。本發(fā)明的松花粉及其提取物可單獨服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使 用。當(dāng)本發(fā)明的松花粉或其提取物與其它治療藥物存在協(xié)同作用時，應(yīng)根據(jù)實際情況調(diào)整 它的劑量。
具體實施方式

實施例1 松花粉1公斤用5倍量40%乙醇20°C提取1次，提取0. 5h，合并提取液，濾去藥 渣，得乙醇提取物，減壓濃縮回收乙醇溶液至干，即得松花粉提取物48g。實施例2 松花粉1公斤用15倍量99 %乙醇回流提取4次，每次提取2h，合并提取液，濾去 藥渣，得乙醇提取物，噴霧干燥即得松花粉提取物91g。實施例3 松花粉1公斤用10倍量80 %乙醇回流提取3次，每次提取lh，合并提取液，濾去 藥渣，得乙醇提取物，減壓濃縮回收乙醇溶液至干，即得松花粉提取物105g。實施例4 松花粉1公斤用10倍量80 %甲醇回流提取3次，每次提取lh，合并提取液，濾去 藥渣，得甲醇提取物，減壓濃縮回收甲醇溶液至干，即得松花粉提取物103g。實施例5:松花粉1公斤用15倍量水回流提取4次，每次提取1. 5h，合并提取液，濾去藥渣， 得水提取物，噴霧干燥回收水溶液至干，即得松花粉提取物39g。實施例6 松花粉1公斤用10倍量無水乙醇回流提取3次，每次提取0. 5h，合并提取液，濾去 藥渣，得乙醇提取物，減壓濃縮回收乙醇溶液至干，即得松花粉提取物88g。實施例7 稱取松花粉提取物(按上述實施例3制備)100g，混勻，過80目篩，加入微晶纖維 素200g、淀粉90g作為稀釋劑組成制劑配方，混勻，噴入75%乙醇為粘合劑制軟材，用24目 篩制粒，干燥后整粒，混勻，壓片，制成1000片，包衣，即得，每片含松花粉提取物lOOmg。實施例8 稱取松花粉提取物(按上述實施例3制備)100g，混勻，過80目篩，加入預(yù)膠化淀 粉280g，微晶纖維素80g，作為稀釋劑組成制劑配方，混勻，噴入75%乙醇為粘合劑制軟材， 用24目篩制粒，干燥后整粒，混勻，裝膠囊，制成1000粒，即得，每粒含松花粉提取物100mg。實驗例9 松花粉提取物(按上述實施例3制備)緩釋包衣微丸的制備。丸心處方松花粉提取物 20mg維性素CImg氯化鈉8mg
羧甲基淀粉鈉 25mg乳糖42mg包衣液處方(每IOOml用量)乙基纖維素3gPEG4002g鄰苯二甲酸二乙酯 0.6g乙醇至 IOOml按丸心處方所列的比例稱取原料及輔料，混合均勻，過80目篩，以3% HPMC水溶液 離心造粒，顆粒過18目篩，整粒，60°C下1小時，得丸心。取上述處方的包衣液包衣，得包衣 微丸。試驗例11.材料實驗動物健康3級SD大鼠，雌雄各半，體重200 220g。實驗藥物柳氮磺胺吡啶；松花粉；松花粉提取物(按上述實施例3制備)試劑與器材無水乙醇(分析純)，三硝基苯磺酸(美國，Sigma公司)；SOD、MDA 檢測試劑盒(北京邦定生物醫(yī)學(xué)公司)。TU-1810紫外可見分光光度計(北京普析通用儀 器有限責(zé)任公司)，Aglientl200高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)，TDL-5-A離心機 (上海安亭科學(xué)儀器廠)。大鼠實驗性炎癥性腸病模型的建立采用2，4，6_三硝基苯磺酸(TNBS)法造模將大鼠禁食24h后麻醉，一次性將 TNBS(100mg/kg)和50%乙醇溶液0. 25ml用橡膠輸液管緩慢注入距肛門約8cm處的腸腔 內(nèi)。造模后第3天治療組開始給藥。實驗分組及給藥正常組及模型對照組，予以生理鹽水灌胃，1次/天，共5周；陽性藥物對照組(以 下稱陽性藥物組)選用柳氮磺胺吡啶(SASP)按相當(dāng)于人的中等治療劑量，灌胃給予0. 3g/ kg SASP混懸液，1次/天，共治療5周；松花粉組(150mg/kg)灌胃，1次/天，共治療5周。 松花粉提取物分別按低劑量組(7. 5mg/kg)、中劑量組(15mg/kg)和高劑量組(30mg/kg)灌 胃，1次/天，共治療5周。觀察指標(biāo)及測定方法5周后各組大鼠經(jīng)10%水合氯醛(400mg/kg)麻醉，立即開腹分離結(jié)腸，沿腸系膜緣剪開腸腔，取病變處結(jié)腸1 2cm速凍于液氮中，后轉(zhuǎn)至-70°C保存，留待測超氧化物歧化 酶(SOD)、丙二醛(MDA)，以兩者含量作為觀察指標(biāo)。結(jié)腸組織勻漿SOD含量測定，采用黃嘌 呤氧化酶法測定，結(jié)果用U/mg表示。MDA含量采用硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物比色法測定，結(jié)果 用μ mol/g表示。統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)用;c±s表示，各組間進(jìn)行t檢驗。2.結(jié)果表1各組結(jié)腸組織中SOD和MDA含量變化(η = 10，x±s )組別SOD/ (IU/mg)MAD/ (μπιο /g)
正常組133.592 士21.62216.081 ±14.251
模型組62.369 士 17.525δδδ37.672 士6.731 δδδ
陽性藥物組107.043 土 18.760δ***21.719 ±4.372**
松花粉組95.246 士25.164δ*23.789 ±7.342δ*
低劑量組94.233 ±26.069δ*24.992 ±7.978Δ*
中劑量組115.014 士24.021***19.736 ±4.259**
高劑量組104.174 士22.756**21.799 ±3.598**注:ΔΡ<0.05，δδδΡ<0· 001，與正常組比較；*P < 0. 05，**Ρ<0· 01，***Ρ<0· 001，
與模型組比較。表2各組大鼠結(jié)腸大體形態(tài)和組織學(xué)損傷評分比較(η = 10，^士s，分)
項目大體損傷評分組織學(xué)損傷評分
正常組0.25 士0.501.20 士 1.03
模型組6.45 士 1.155.78 ±0.45
陽性藥物組0.96 士0.52**1.05 ±0.48**
松花粉組0.91 士0.43**0.97+0.11**
低劑量組6.25 士 1.335.58 士0.42
中劑量組0.93 士0.41**1.00 ±0.12**
高劑量組0.95 ±0.62**1.02 ±0.23**注廣P < 0. 01，與模型組比較。(腸組織損傷大體形態(tài)和組織學(xué)形態(tài)評分方法朱峰，錢家鳴，潘國宗.細(xì)胞免疫 反應(yīng)性炎癥性腸病動物模型的建立[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報，1998，20(4) :271.大體形 態(tài)損傷評分指標(biāo)包括粘連、局部充血、潰瘍及炎癥。粘連及充血按有無及輕重分別計0，1,2 分，出現(xiàn)炎癥、潰瘍數(shù)目增加1個、潰瘍面> 2cm時，范圍每增加1cm，計分均加1。組織學(xué)指 標(biāo)包括潰瘍、炎癥、肉芽腫、纖維化及病變深度，按有無及輕重分別計0，1，2分，病變深度達(dá) 黏膜下層肌層、漿膜層分別計1，2，3分。各項相加得總分。)3.結(jié)論綜上所述，本實驗證明①松花粉對大鼠病變結(jié)腸黏膜有一定的修復(fù)作用；②炎 癥性腸病大鼠經(jīng)松花粉提取物治療后MAD含量降低，SOD的活力增加；③松花粉提取物對大 鼠病變結(jié)腸黏膜有一定的修復(fù)作用；④炎癥性腸病大鼠經(jīng)松花粉提取物治療后MAD含量降 低，SOD的活力增加，以中、高劑量組的治療效果為佳。
權(quán)利要求
一種藥物組合物，其特征在于，含有治療有效劑量的松花粉提取物及藥用輔料。
2.松花粉提取物在制備用于治療炎性腸病的藥物中的用途。
3.松花粉在制備用于治療炎性腸病的藥物中的用途。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物是片劑、膠囊、丸劑、 緩釋制劑、控釋制劑或各種微粒給藥系統(tǒng)。
5.一種制備松花粉提取物的方法，其特征在于包含下列步驟1)松花粉以5 15倍(重量/體積，g/ml)的水或醇類或水醇混合溶液提取藥材，提 取溫度可以從室溫到溶劑回流溫度范圍之內(nèi)，重復(fù)1 4次，每次提取時間為0. 5h 2h ；2)合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮或噴霧干燥，即得松花粉提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備松花粉提取物的方法，其特征在于步驟1)中的醇指甲醇 或乙醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備松花粉提取物的方法，其特征在于步驟1)中醇濃度優(yōu)選 為40 % -99 %，進(jìn)一步優(yōu)選為80 %。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備松花粉提取物的方法，其特征在于步驟1)中松花粉與水 或醇類或水醇混合溶液的優(yōu)選比例為1 10 (重量/體積，g/ml)。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備松花粉提取物的方法，其特征在于步驟1)中的提取溫度 優(yōu)選為回流溫度。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備松花粉提取物的方法，其特征在于步驟1)中提取時間 優(yōu)選為Ih。
全文摘要
本發(fā)明公開了松花粉、松花粉提取物以及包含該松花粉提取物的藥物組合物在治療炎癥性腸病中的用途以及包含該松花粉提取物的藥物組合物的制備方法。該制備方法為松花粉使用水、醇類、或水與醇類的混合物提取。優(yōu)選的醇類包括甲醇、乙醇，醇濃度優(yōu)選為40％-99％，進(jìn)一步優(yōu)選為80％。提取時溶劑量為原藥重量的5～15倍(體積/重量，ml/g)，優(yōu)選體積為10倍量。提取的溫度是從室溫(例如20℃)到溶劑回流溫度的范圍內(nèi)，優(yōu)選在回流溫度。提取時可重復(fù)1～4次，每次提取時間為0.5h～2h，優(yōu)選時間為1h。上步結(jié)束后，合并濾液，濾去藥渣，減壓濃縮蒸干或噴霧干燥，即為松花粉提取物。
文檔編號A61K36/15GK101804083SQ200910014429
公開日2010年8月18日 申請日期2009年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月16日
發(fā)明者劉軍鋒, 劉志河, 劉珂, 王桐, 石麗花, 邵萌 申請人:煙臺新時代健康產(chǎn)業(yè)有限公司;山東靶點藥物研究有限公司