專利名稱：一種植物中提取純化5-O-甲基-myo-肌醇的方法
技術領域：
本發明涉及一種用溶劑回流法提取并純化植物中5-0-甲基-myo-肌醇的方法。
背景技術：
早期研究表明5-0_甲基-myo-肌醇能顯著降低糖尿病模型高血糖、抑制肝糖原 分解和葡萄糖的吸收、降低血脂、改善自由基代謝和保護胰島β細胞，但不降低正常小鼠 血糖；而且其毒性極低。(梁敬鈺，等，CN1488344A)是-個很有價值的抗糖尿病藥物。5-0-甲基-myo-肌酉享(5-0-methy-myo-inositol, sequoyitol, 5-0-甲基-myo-肌 醇，結構見圖1)是中肌醇的甲基衍生物。前期研究所得5-0-甲基-myo-肌醇多是從紅豆杉 屬植物中發現的，由于紅豆杉植物資源的有限，使得大規模研究和開發5-0-甲基-myo-肌 醇受到了限制。進一步的研究發現5-0-甲基-myo-肌醇廣泛存在于多種植物中，尤其是在 蕨類等植物中的存在，大大地豐富了藥用資源的來源，在原料成本上可以大大降低下來，使 得大量使用和開發成為藥物制劑的工業化生產成為可能。由于植物來源的原料中存在大量極性較大的雜質，這些雜質具有較強的水溶性， 現有的柱層析等分離方法對這些植物提取物中進行5-0-甲基-myo-肌醇的分離純化工藝 路線長，成本高，難度大，效率低，如前述幾個專利中描述的工藝過程含以下步驟提取一萃 取一過分離柱(填料為大孔樹脂、活性炭、聚酰胺等)一重結晶。采用這樣的提取工藝，操 作路線長，效率低，成本高，不利于大規模工業化生產。(梁敬鈺等，CN1488344A ；孫明杰等， CN1706369)因此尋找路線短，效率高，成本低并且能大規模生產的新的分離純化5-0-甲 基-myo-肌醇方法就成為該化合物是否能夠進行商業化生產和藥物開發的關鍵因素。

發明內容
本發明的目的是提供一種路線簡潔，易操作，效率高，成本低的分離純化5-0-甲 基-myo-肌醇的方法。本發明的目的可以通過以下工藝路線達到1.植物(原料)干品粉碎至粒徑至少30目；2.用提取溶媒對原料進行提取；提取溶媒組成為水與低級醇或丙酮、乙腈組成， 溶媒中水比例為10% 40% ；原料與提取溶媒的比例原料溶媒=1 3 6(kg/L)， 優選為4 5(kg/L)；提取液在80°C條件下揮去溶媒得提取浸膏；3.提取浸膏分別用石油醚和乙酸乙酯(或丙酮或乙醇)等有機溶劑進行提取，浸 膏與有機溶劑的比例浸膏有機溶劑=1 2 8(kg/L)，優選為3 5(kg/L)；所用溶劑 各提取二次；4.步驟3中的提取液過濾，濾渣用水與低級醇、丙酮、乙酸乙酯等有機溶劑中的任 何一種組成的溶媒在70°C 100°C條件下進行熱回流提取，溶媒中水含量為5% 30%，優 選為10% 20%;濾渣與溶媒的比例濾渣溶媒=1 2 20 (kg/L)，優選為5 10 (kg/ L)；熱回流提取次數2 3次；提取液50°C 80°C熱濾，合并濾液，濾液冷存，5°C以下，析
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5.過濾后得結晶，烘干，結晶為5-0-甲基-myo-肌醇粗品；6.重復步驟4和5可使5-0-甲基-myo-肌醇粗品含量達99%以上。所述的低級醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇，提取效率及毒性綜合考慮一般選用乙上述植物可以是腎蕨屬植物，如腎蕨(Nephrolepis auriculata(L. )Trimen)、 雙齒腎蕨(N. biseroata (Sw. ) Schott.)、高大腎蕨(N. exaltata (Sw. ) Schott.)、毛葉腎 蕨(N.hirsutula(Forst.)Presl)、迷你腎蕨(N. cordifolia)、波士 頓腎蕨(N. exaltata cv. Bostoniensis)等。上述植物也可以是蓼科植物，如甜蕎(Fagopylrum esculentumMoench.)、苦蕎 [F. tatarium(L.)Gaertn.]、翅養(F. emarginatumMitissner)、米養(Fagopyrum sp.)等。上述植物也可以是紅豆杉科植物，如曼地亞紅豆杉(Taxusmedia)、或太平洋紅 豆杉(Taxus brevifolia Nutt.)、加拿大紅豆杉(Taxus Canadensis)、歐洲短葉紅豆杉 (Taxus baccata)等。上述植物也可以是豆科植物，如大豆(Glycine max (Linn. )Merr.)、寬葉蔓豆 (原變禾中)(Glycine gracilis Skv. Var. gracilis)、滲湖大豆(Glycine clandestine Wendl.)、狹頁白花野大豆(Glycine soja Sieb. etZucc. var. albiflora f. angustifolia P. Y. Fu et T.A.Chen)、煙豆(Glycinetabacina Benth·)、寬葉蔓豆(Glycine gracilis Skv.)、豆(Glycine so ja Sieb. et. Zucc.)、埃及三葉草(Trifolium alexandrinum Linn.)寸。上述植物也可以是銀杏屬，如來自于銀杏(原栽培變種)(Ginkgobiloba Linn.c v. Biloba)> 銀杏(Ginkgo biloba Linn.)甲鳥尾銀杏(Ginkgobiloba Linn, c v. Yaweiyinxing)、無心銀杏(Ginkgo biloba Linn, c v. Wuxinyinxing)、棉花果(Ginkgo biloba Linn. cv. Mianhuaguo.)等。步驟5、6中所述的5-0-甲基-myo-肌醇含量是通過HPLC-ELSD方法測量所得。為進一步理解本發明，以下將結合實例對本發明做出詳細的，非限制性的說明實施例一腎蕨中的5-0-甲基-myo-肌醇提取純化取原料腎蕨(N^hrokpis auriculata(L. ) Trimen) 10kg，用粉碎機粉碎成粒度為 30目，75%乙醇水溶液分三次對原料熱回流提取，提取溫度為90°C，三次用量分別為50L、 40L、30L ；提取時間分別為2h，2h，1. 5h ；合并提取液，濃縮成漿狀溶液，采用旋轉蒸發儀減 壓濃縮至干；用3L石油醚對浸膏熱回流提取，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L 乙酸乙酯熱回流，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L 90%乙醇水溶液進行熱回 流提取，提取溫度為90°C，提取三次，合并提取液，提取液5°C以下靜置，析晶，烘干晶體； 5-0-甲基-myo-肌醇粗晶用90%乙醇水溶液熱回流提取，提取液5°C以下靜置，析晶，反復 二次，可得5-0-甲基-myo-肌醇精品含量烘干稱量得10. Sg (98. 5% )0含量測定見實施例六。實施例二腎蕨中的5-0-甲基-myo-肌醇提取純化取原料雙齒腎蕨(N. biseroata (Sw.) Schott.) 10kg，用粉碎機粉碎成粒度為30 目，80%丙酮水溶液分三次對原料熱回流提取，提取溫度為90°C，三次用量分別為50L、
440L、30L ；提取時間分別為2h，2h，1. 5h ；合并提取液，濃縮成漿狀溶液，采用旋轉蒸發儀減 壓濃縮至干；用3L石油醚對浸膏熱回流提取，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L 乙醇熱回流，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L 80%丙酮水溶液進行熱回流提 取，提取溫度為90°C，提取三次，合并提取液，提取液5°C以下靜置，析晶，5-0-甲基-myo-肌 醇粗晶用80%丙酮水溶液熱回流提取，提取液5°C以下靜置，析晶，反復二次，可得5-0-甲 基-myo-肌醇精品含量烘干稱量得11. 2g(99. 5% )0含量測定見實施例六。實施例三蕎麥中的5-0-甲基-myo-肌醇提取純化取原料苦蕎[F. tatarium(L. ) Gaertn. ] 10kg，用粉碎機粉碎成粒度為30目，90% 乙酸乙酯水溶液分三次對原料熱回流提取，提取溫度為90°C，三次用量分別為50L、40L、 30L ；提取時間分別為2h，2h，1. 5h ；合并提取液，濃縮成漿狀溶液，采用旋轉蒸發儀減壓濃 縮至干；用3L石油醚對浸膏熱回流提取，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L丙酮 熱回流，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L 90%乙酸乙酯水溶液進行熱回流提 取，提取溫度為90°C，提取三次，合并提取液，提取液5°C以下靜置，析晶，5-0-甲基-myo-肌 醇粗晶用90 %乙酸乙酯水溶液熱回流提取，提取液5°C以下靜置，析晶，反復二次，可得 5-0-甲基-myo-肌醇精品含量烘干稱量得1. 20g(98. 9% )0含量測定見實施例六。實施例四豆中的5-0-甲基-myo-肌醇提取純化取原料澎湖大豆(Glycine clandestine Wendl.)種子10kg，用粉碎機粉碎成粒 度為30目，75 %乙腈水溶液分三次對原料熱回流提取，提取溫度為90°C，三次用量分別 為50L、40L、30L ；提取時間分別為2h，2h，1. 5h ；合并提取液，濃縮成漿狀溶液，采用旋轉蒸 發儀減壓濃縮至干；用3L石油醚對浸膏熱回流提取，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾 渣用3L乙醇熱回流，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L 90%乙腈水溶液進行 熱回流提取，提取溫度為90°C，提取三次，合并提取液，提取液5°C以下靜置，析晶，5-0-甲 基-myo-肌醇粗晶用90%乙腈水溶液熱回流提取，提取液5°C以下靜置，析晶，反復二次，可 得5-0-甲基-myo-肌醇精品含量烘干稱量得0. 3125g(99. 2% )0含量測定見實施例六。實施例五多種植物的5-0-甲基-myo-肌醇提取純化取植物原料如下表所列，干燥植物藥材原料Ikg干燥植物藥材原料用粉碎機粉碎 成粒度為30目，75%乙腈水溶液分三次對原料熱回流提取，提取溫度為80 100°C，三次 用量分別為50 90L、40 60L、30L ；提取時間分別為2 3h，2h，1. 5h ；合并提取液，濃縮 成漿狀溶液，采用旋轉蒸發儀減壓濃縮至干；用2 5L石油醚對浸膏熱回流提取，提取溫度 為80°C，提取二次，過濾，濾渣用3L乙醇熱回流，提取溫度為80°C，提取二次，過濾，濾渣用 3L 90%乙腈水溶液進行熱回流提取，提取溫度為90°C，提取三次，合并提取液，提取液5°C 以下靜置，析晶，5-0-甲基-myo-肌醇粗晶用90%乙腈水溶液熱回流提取，提取液5°C以下 靜置，析晶，反復二次，可得5-0-甲基-myo-肌醇精品含量烘干稱量，并計算得率。含量測定見實施例六。表1 幾種植物提取5-0-甲基-myo-肌醇得率 實施例六5-0-甲基-myo-肌醇的含量測定方法1.對照品溶液配制精密稱取對照品(sigma公司提供)0. Olg于IOml容量瓶，用 流動相75%乙腈水溶液超聲溶解定容至刻度，搖勻得對照品溶液，過孔徑為0. 45 μ m的微 孔濾膜，取續濾液即得。2.樣品溶液配制精密稱取樣品(前面所述實施例所得)0. Olg于IOml容量瓶， 用流動相75%乙腈水溶液超聲溶解定容至刻度，搖勻得對照品溶液，過孔徑為0. 45 μ m的 微孔濾膜，取續濾液即得。3.色譜條件色譜柱Agilent zorbax NH2 (4. 6 X 250mm, 5 μ m)；流動相乙腈: 水=75 25;流動相流速1.0ml/min;檢測器SEDEX 75蒸發光散射檢測器，漂移管溫度 40°C;gain(6),Bar(3. 5)；進樣體積=IOul ；柱溫30°C ；色譜圖見(圖2，3)，出峰時間在7 8分鐘左右。4.計算方法以進樣量的對數值(χ)為橫坐標，以峰面積的對數值(y)為縱坐標， 繪制標準曲線，當進樣量在2. 0 μ g 40 μ g之間時，進樣量對數值與峰面積對數值有良好的線性關系，線性方程為y = 1. 2119X+20. 594 (γ = 0. 9996)。5.采用實施例1 5所獲得的樣品，進行檢測，5-0-甲基_my0-肌醇進樣量在 2. 0 μ g 40 μ g的范圍里線性(r = 0. 9996)良好，平均回收率為99. 51 %，RSD值為2. 28% (η = 9)，本方法操作簡便，重現性好，結果準確；結果見表1。


圖1為5-0-甲基-myo-肌醇結構圖。圖2為對照品色譜圖。圖3為樣品色譜峰圖。
權利要求
一種提取并純化5 O 甲基 myo 肌醇的方法，具體實施步驟如下所述(1)植物(原料)干品粉碎至粒徑至少30目；(2)用提取溶媒對原料進行提取，提取溶媒組成為水與低級醇或丙酮、乙腈組成，溶媒中水比例為10％～40％；原料與提取溶媒的比例原料∶溶媒＝1∶3～6(kg/L)，優選為4～5(kg/L)；提取液在80℃條件下揮去溶媒得提取浸膏；(3)提取浸膏分別用石油醚和乙酸乙酯(或丙酮或乙醇)等有機溶劑進行提取，浸膏與有機溶劑的比例浸膏∶有機溶劑＝1∶2～8(kg/L)，優選為3～5(kg/L)；所用溶劑各提取二次；(4)步驟3中的提取液過濾，濾渣用水與低級醇、丙酮、乙酸乙酯等有機溶劑中的任何一種組成的溶媒在70℃～100℃條件下進行熱回流提取，溶媒中水含量為5％～30％，優選為10％～20％；濾渣與溶媒的比例濾渣∶溶媒＝1∶2～20(kg/L)，優選為5～10(kg/L)；熱回流提取次數2～3次；提取液50℃～80℃熱濾，合并濾液，濾液冷存，5℃以下，析晶；(5)過濾后得結晶，烘干，結晶為5 O 甲基 myo 肌醇粗品；(6)重復步驟4和5可使5 O 甲基 myo 肌醇粗品含量達98％以上。
2.根據權利要求1所述，所述的低級醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇。
3.根據權利要求1所述，植物可以是腎蕨屬植物，如腎蕨(N印hrol印is auriculata(L. )Trimen)、雙齒腎蕨(N. biseroata (Sw. ) Schott.) > 高大腎蕨 (N. exaltata(Sw.)Schott.),毛葉腎蕨(N. hirsutula(Forst.)Presl),迷你腎蕨 (N. cordifolia)、波士頓腎蕨(N. exaltata cv. Bostoniensis)等。
4.根據權利要求1所述，植物也可以是蓼科植物，如甜蕎(Fagopylrumesculentum Moench.)、苦養[F. tatarium(L.)Gaertn.]、翅養(F. emarginatum Mitissner)、米養 (Fagopyrum sp.)等。
5.根據權利要求1所述，植物也可以是紅豆杉科植物，如曼地亞紅豆杉(Taxus media)、或太平洋紅豆杉(Taxus brevifolia Nutt.)、加拿大紅豆杉(Taxus Canadensis)、 歐洲短葉紅豆杉(Taxusbaccata)等。
6.根據權利要求1所述，植物也可以是豆科植物，如大豆(Glycinemax(Linn.) Merr.)、寬葉蔓豆(原變種)(Glycine gracilis Skv. Var. gracilis)、滲湖大豆 (Glycine clandestine Wendl.)、狹頁白花野大豆(Glycine so ja Sieb. et Zucc. var. albif Iora f. angustifolia P. Y. Fu et Y. A. Chen)、煙豆(Glycine tabacina Benth.)、 寬葉蔓豆(Glycine gracilisSkv.)、豆(Glycine soja Sieb. et. Zucc.)、埃及三葉草 (Trifoliumalexandrinum Linn.)等。
7.根據權利要求1所述，植物也可以是銀杏屬，如來自于銀杏(原栽培變種)(Ginkgo biloba Linn· cv· Biloba)、銀杏(Ginkgo biloba Linn.)甲鳥尾銀杏(Ginkgo biloba Linn, cv. Yaweiyinxing)、無心銀杏(Ginkgobiloba Linn. cv. Wuxinyinxing)、棉花果(Ginkgo biloba Linn. cv. Mianhuaguo.)等。
全文摘要
本發明闡述了一種提取純化5-O-甲基-myo-肌醇的新方法，具有路線短，成本低，操作簡便，效率高等優點。適于大規模工業化生產。
文檔編號A61P3/06GK101921182SQ20091004026
公開日2010年12月22日 申請日期2009年6月16日 優先權日2009年6月16日
發明者孫明杰, 林紅, 王霆, 陳優生 申請人:湘北威爾曼制藥有限公司