專利名稱：：博落回提取物在經濟動物獸藥中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及到從含節基異喹啉類生物堿U柳^/^^/wo/f"e^汰a/oW)的植物博落回(Mflc/e《戸coWa似(W//《兄5a:)得到的提取物在促進經濟動物生長和提高飼料轉化率的飼料藥物添加劑和獸藥方面的應用。提取物中主要含芐基異喹啉總生物堿，其中包含血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿、二氫血根堿、二氫別隱品堿等。
背景技術：
：長期以來，由于動物飼料和獸藥中廣泛的使用抗生素、化學合成藥物、激素等促生長保健劑，這類添加劑在促進畜牧業發展的同時，也帶給了人類很多危害。抗生素的濫用的弊端越來越突出。主要表現在內源性感染和二重感染、微生物產生抗藥性、機體的免疫力下降、殘留毒副作用和環境污染。在這種形勢下，世界各國都紛紛制定了與飼料藥物添加劑相關的法律、法規和標準，規范和監管藥物飼料添加劑的使用，從而維護國家和消費者的利益。歐盟各成員國執行最為嚴格的飼料藥物使用制度。歐盟2003年公布了最新的《飼料添加劑準則》，迫于消費者和醫學方面的壓力，該準則規定，除了球蟲抑制劑和滴蟲抑制劑以外的藥物于2006年1月1日起全部停止使用。當今，人類迫切希望回歸自然，返璞歸真，順應這一世界潮流，圍繞"健康動物、安全食品、健康人類"這一主題，世界各國紛紛開始研究抗生素安全替代品。天然植物源藥物結構獨特，不易產生耐藥性，在環境中可自行降解，不至于在農產品、畜產品中長期殘留或通過食物鏈富集，不引起對環境的不可逆破壞，對人畜相對低毒，符合綠色生態畜牧業對藥品的要求，是未來獸藥的重要發展方向。我國有極其豐富的植物及天然產物資源，從天然產物資源中尋找新的抗生素替代物質，確定其活性骨架，發掘先導化合物，篩選其更有效的化合物，具有極其廣闊的發展前景和十分重要的意義。博落回(Macleayacordata(Willd.)R.Br.)，又名號筒草、號筒桿、泡桐桿、勃勒回是罌粟科博落回屬多年生高大草本，最早記載博落回的本草文獻為《本草拾遺》。現統一命名為博落回。博落回提取物，主要分布在罌粟科、蕓香科、小檗科等天然植物中，落回總生物堿中主要含有血根堿(S""gm'"fln'"e)、白屈菜紅堿(C/w/eo^""e)、博落回堿(5occo"/"e)、博落回寧堿(Boccow//"e)、甲氧基白屈菜紅堿(C7eWw""e)、二氫血根堿(D/Zj;^myfl"g"f朋n77e)、二氫白屈菜紅堿(Z)/Zz;^rac/^/eo^W"e)等苯并菲啶型生物堿及原阿片堿(iVoto;!'恥)、a-別隱品堿(a-J//oco^o;!'"e)、J3-別隱品堿(y9-J//oco^ojw'we)等原托品型生物堿和iVorsflwgw'mjrme、CbQ^a"gM/"ar/"e、/^0附0仁/^//60附>^、Co/rt>e、5e/"6en.we、C/^/Wom'恥、C/^/n/6/"e等原生物堿。現代藥理研究表明博落回具有明顯的抗菌、殺蟲、改善肝功能、提高免疫力及抗腫瘤等作用。在博落回的應用方面，農業部獸藥質量標準中收錄的博落回注射液是由博落回果經提取、分離制成的生物堿硫酸鹽的滅菌水溶液，其具有抗菌消炎的功能，主治仔豬的白痢、黃痢；郁建生(2007)將博落回果莢和根中經提取的有效成份總生物堿制成注射液、口服液用以治療仔豬白痢、禽霍亂疾病取得較好效果；郁建生等將博落回與穿心蓮配合制成復方博落回注射液已申請專利(專利號ZL200510020409.0)，其具有廣譜清熱解毒消腫、抗菌抗病毒消炎功效，主要用于治療畜禽患流行性感冒、腹瀉痢疾、仔豬白痢和黃痢等。綜合文獻可以得出博落回提取物的應用現主要是以治療畜禽動物消化道疾病的獸藥，且給藥方式多以注射為主。本發明的所提到的博落回提取物，是60%以上的總生物堿作為獸藥原料添加在飼料中進行日常飼喂，用以促進經濟動物的生長和提高飼料轉化率，這種作為獸藥和藥物飼料添加劑的應用尚未見相關報道。今年來，隨著畜禽養殖業迅速發展和集約化水平的提高，養殖密度越來越大，導致了一些疾病的發生率越來越高。病原微生物對畜禽養殖業的危害性十分嚴重，常引起消化道、呼吸道的疾病，使幼畜幼禽生長發育遲緩，成年畜禽育肥困難。給畜禽養殖業造成嚴重的經濟損失。選擇高效低毒、使用方便的藥劑來防治，成了人們普遍關心的問題。
發明內容發明人從博落回植物中提取出博落回總生物堿對其進行生物活性研究發現具有廣泛的抑菌，促進經濟動物生長和提高飼料轉化率作用，具體試驗見后。本發明所提到的博落回提取物用于制備促進經濟動物生長獸藥中的藥物飼料添加劑或對畜禽常見病原菌巴氏桿菌、李氏桿菌和嗜血桿菌有較好的抑制作用和殺滅作用的獸藥。本發明是通過將博落回提取物用于制備成獸藥或藥物飼料添加劑。博落回提取物中主要有效成份為天然活性成分芐基異喹啉類生物堿類可用于抑制和殺滅體內的病原微生物，促進經濟動物生長和提高飼料轉化率；或者是作為制備獸藥的原料。所述博落回提取物來源于罌粟科植物博落回植物，將其成熟的果莢或葉或兩者的混合體經提取制備而成。因本發明博落回提取物包含血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿、二氫血根堿、二氫別隱品堿等。本發明所提到的博落回提取物是從博落回植物中提取分離、精制獲得高純度博落回提取物組分；采用酸水提取，堿水沉淀后，將沉淀后用醇提取，濃縮后用濃酸沉鹽制備總生物堿的在60%以上。其博落回提取物含量是通過HPLC方法檢測，以血根堿和白屈菜紅堿的合計含量來計算博落回提取物中總生物堿原堿的含量。博落回提取物主要含芐基異喹啉生物堿，并可以以芐基異喹啉生物原堿、它的鹽酸鹽、硫酸氫鹽或磷酸二氫鹽的形式存在。本發明是將博落回提取物作為有效成分制成的抑制和殺滅病原微生物，促進經濟動物生長和提高飼料轉化率作用有良好效果。博落回提取物的應用是包括單獨使用，或者與其他抗菌藥物共同使用。在與其他抗菌獸藥配合使用時也具有良好抗寄生蟲作用。博落回提取物在獸藥或藥物飼料添加劑中的給藥濃度優選為0.1-30ppm。作為藥物飼料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計為較為優選的是0.1-5ppm。作為藥物飼料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計最為優選的是l-5ppm。本發明所述的獸藥可以通過混飼、飲水等形式給藥。將博落回提取物加稀釋劑相應的輔料可制成的各種劑型-預混劑或水劑等，應用于抑制和殺滅病原微生物，促進經濟動物豬、雞生長、提高飼料轉化率等方面具有良好的市場前景。具體實施例方式以下實施例旨在說明本發明而不是對本發明的進一步限定。實施例l博落回提取物的制備方法取博落回果莢，用20倍量的0.5%硫酸水溶液提取，然后用堿調pH到8-10，分離沉淀后，再用90%乙醇提取，部分濃縮提取液過濾后，加濃硫酸析出大量桔紅色沉淀物，干燥后得到博落回提取物，經過HPLC測定總生物含量約為66.4。/。(以原血根堿和白屈菜紅堿的含量合計，以下同)，其中血根堿約為46.4%，白屈菜紅堿約為20%。實施例2博落回提取物預混劑的制備實施例1方法制得的博落回提取物稱取100g,，使用藥物粉碎機粉碎，過120目篩，備用；再稱取藥用淀粉3900g。將博落回提取物與藥用淀粉使用小型混合機充分混合15分鐘，檢查變異系數<0.5，得到博落回提取物預混劑4000克。實施例3博落回提取物對畜禽常見病原菌體外抑制試驗選用博落回提取物，并測定其含量為進行試驗研究,將實施例l制得博落回提取物配制的溶液分別對嗜血桿菌、李氏桿菌、巴氏桿菌、鏈球菌等畜禽常見的動物致病菌進行體外抑菌試驗。按無菌操作規程，在無菌條件下，傾倒相應的菌種對應的培養基平板，上面涂布相應的菌種接種物，待平板凝固后，貼加藥敏試紙片，用無菌鑷子使紙片和平板結合緊密。同時用浸有金霉素的濾紙片做對照。每份樣品做3份，結果取平均值。37'C倒置培養，并于24hH察抑菌效果，測定抑菌圈的直徑，判斷敏感度。判斷標準抑菌環直徑大于7mm者判斷為有抑菌作用，抑菌環直徑小于或等于7mm無抑菌作用，抑菌直徑越大說明抑菌效果越好。結果檢測表明博落回提取物和金霉素的濃度均為100ug/ml條件下，嗜血桿菌、李氏桿菌、及巴氏桿菌和鏈球菌4種畜禽常見病原菌的抑菌直徑均大于7mm，顯示出很好的的抑菌作用表(1)。表l博落回提取物對抑菌直徑的影響(單位mm)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>采用試管稀釋法，以金霉素作對照，測定有抑菌活性的藥液的最低抑菌濃度(MIC)。博落回提取物為試驗組，每組取無菌試管13支，排成一排，除第l管加入1.8mlMH用肉湯稀釋1000倍的菌液，其余每管加入MH肉湯lml,在第l管加入由實例l所得博落回提取物配制的溶液原液0.21111混勻，然后吸取lml至第2管，混勻后再吸取lml至第3管，如此連續倍比稀釋至第12管，并從第12管中吸取lml棄去，第13管為不含藥物的生長對照。37'C培養24h，以無細菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。最小抑菌濃度的檢測結果表明博落回提取物對嗜血桿菌、李氏桿菌、巴氏桿菌、鏈球菌4種畜禽常見病原菌菌株的均有良好的抑菌效果，對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌均有良好的抑菌效果。可見博落回提取物具有廣譜的抑菌作用。試驗結果表明雖然博落回提取物的最小抑菌效果濃度高于金霉素組(表2)，作為替代抗生素的藥物，其來源天然、降解快、殘留低、副作用小等優點，良好的市場前景。表2博落回提取物對最小抑菌濃度MIC(單位ug/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例4博落回提取物對斷奶仔豬生長性能的影響試驗試驗設計本試驗采用單因素設計。選取28土2日齡體重相近(8.3±0.26kg)斷奶長白x大約克二元雜交健康仔豬120頭。試驗開始前先用基礎日糧飼喂3天，然后按初始重、公母各半原則分為12欄，分為3個處理，每個處理4欄，每欄10頭豬。處理一空白對照組；處理二添加100mg/kg的金霉素；處理三添加45mg/kg的實施例2制備的博落回提取物預混劑產品。本試驗在湖南新五豐股份有限公司永安分公司豬場進行。飼養管理所有試驗仔豬于封閉式畜舍進行飼養，保育欄為高床金屬漏縫地板鐵籠，乳頭式飲水器，自由飲水。消毒、免疫等其他管理照常規進行。人工添料，每天于7:00、11:00、15:00和19:00伺喂，在保證沒有消化不良的前提下自由采食，出現重度腹瀉或者疾病及時治療或淘汰。記錄指標平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、飼料轉化率(FCR)。腹瀉率=腹瀉仔豬頭次/仔豬總頭次><100%表3博落回提取物對仔豬生長性能的影響項目_空白對照組陽性對照組博落回提取物始重(kg)8.26±0.208.29±0.238.33±0.18末重(kg)20.45±0.73a21.49±0.85ab22.59±0.58b平均采食量(g/d)656.90±20.59a706.15±39.05ab737.78±14.87b平均日增重(g/d)406.25±17.54a440.25±23.33b475.25±14.43c料肉比1.62±0.02a1.60±0.01a1.55±0.02b注標中同行字母完全不相同者表示差異顯著(尸<0.05)。下同。如表3所示，3個處理組的平均日采食量和平均日增重由高到低依次為博落回提取物組、陽性對照組(金霉素)，空白對照組。與空白對照組相比，日糧中添加博落回提取物提高了平均采食量12.3%;平均日增重16.9%;料肉比下降了4.32%(p<0.05)。結果表明日糧中添加博落回提取物顯著的提高了仔豬的采食量和日增重，料肉比的降低有效的改善了仔豬的生長性能。與抗生素金霉素的對照組相比較效果相當。表4博落回提取物對仔豬腹瀉情況的影響指標空白對照組陽性對照組博落回提取物腹瀉率(％)謹±0.72a3.01±0.26b2.64±0.80b如表4所示，陽性對照組、博落回提取物與對照組相比顯著降低了腹瀉率(P0.05)。本試驗顯示在仔豬日糧中添加博落回提取物具有促進生長和預防腹瀉的作用，具有與金霉素相當效果。實施例5博落回提取物對肉豬生長性能的影響試驗試驗設計本試驗采用單因素設計。選取長白x大約克二元雜交健康仔豬60頭。試驗開始前先用基礎日糧飼喂3天，然后按初始重、公母各半原則分為6欄，分為2個處理，每個處理3欄，每欄10頭豬。處理一空白對照組；處理二添加5ppm的實施例1制備的博落回提取物預混劑產品。表5博落回提取物對肉豬腹瀉情況的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表5中可知，實驗表明，為與空白對照組相比較，博落回提取物組平均采食量提高了2.2%，日增重提高了9.3%((p<0.05)差異顯著，料肉比降低了6.6%(戶<0.05)差異顯著。可見在日糧重添加5ppm的博落回提取物對肉豬日增重和飼料利用率等生長性能指標改善有良好的效果。實施例6博落回提取物對肉雞生長性能的影響試驗試驗設計本試驗采用單因素試驗設計，選用450只1日齡黃雞。供試雞生長良好，健康無病。體重基本一致。將試雞隨機分為3組，每組6個重復，每個重復25只雞。試驗期為49天。實驗分為3個組組l為對照組(不添加抗生素和博落回提取物)；組2添加30mg/kg金霉素；組3添加100mg/kg實施例2制備的博落回預混劑。飼養管理試驗雞舍為開放式，自然通風，光照為14L:10D。每天記錄雞舍內的溫、濕度。試雞采用高床平養，計量不限量飼喂；自由飲水，飼喂量按推薦營養需要量結合實際采食量而定。按常規方法進行衛生清理和消毒。試驗期保持食槽、水槽清潔衛生。記錄指標平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、飼料轉化率(FCR)。表6博落回提取物對肉雞生長性能的影響結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>如表6所示結果表明3個處理組的平均日采食量和平均日增重由高到低依次為博落回提取物組、陽性對照組(金霉素)，空白對照組。與空白對照組相比，日糧中添加博落回提取物提高了平均采食量0.3%;平均日增重8.12%;料肉比下降了9.52%。在日糧中添加博落回提取物有效降低肉雞死亡數同時，能顯著的改善黃雞的生長性能，在日糧中添加博落回提取物有與金霉素相當的效果。實施例7博落回提取物對副豬嗜血桿菌病的防治試驗某實驗豬場12頭2月齡仔豬發生高熱病，病豬表現有體溫升高(4(TC以上)，精神沉郁，食欲下降，呼吸困難，被毛粗亂，皮膚發紅甚至發紫，消瘦，呼吸困難，關節腫大，跛行等。經染色后均可見到革蘭氏陰性的細小桿菌，細菌形態多樣，以纖細桿菌者居多，間有長而彎曲絲狀菌體。個別呈兩極濃染的球桿狀，鑒定為副豬嗜血桿菌。所有病豬日常飲用博落回提取物配制成的濃度為30ppm的水劑，連用6天。在治療的同時，對豬舍和周圍環境進行徹底消毒進行噴灑，每天一次，連用7d。2周后豬群逐漸恢復健康。權利要求1、博落回提取物在經濟動物獸藥中的應用，其特征在于博落回提取物用于制備促進經濟動物生長和提高飼料轉化率的獸藥中的藥物飼料添加劑或對畜禽常見病原菌李氏桿菌、嗜血桿菌和巴氏桿菌有較好的抑制作用和殺滅作用的獸藥。2、根據權利要求1所述的博落回提取物在經濟動物獸藥中的應用，其特征在于所述博落回提取物由來源于罌粟科植物博落回，從其成熟的果莢或葉或兩者的混合物中提取制備而成。3、根據權利要求1或2所述的博落回提取物在經濟動物獸藥中的應用，其特征在于博落回提取物中主要含有芐基異喹啉類生物堿，在提取物中以芐基異喹啉類生物堿原堿或它的鹽酸鹽、硫酸氫鹽或磷酸二氫鹽的任何一種形式存在。4、根據權利要求1所述的博落回提取物在經濟動物獸藥的應用，其特征在于作為藥物飼料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計為0.1-5ppm，作為獸藥添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計為0.1-30ppm。5、根據權利要求1所述的博落回提取物在經濟動物獸藥的應用，其特征在于作為藥物詞料添加劑添加到豬、雞飼料中的濃度以總生物堿計為l-5ppm。6、根據權利要求1所述博落回提取物在經濟動物飼料中獸藥的應用，其特征在于，所述的藥物飼料添加劑或獸藥以飼料拌喂口服的方式給藥。7、根據權利要求1所述的博落回提取物在經濟動物獸藥的應用，其特征在于所述的藥物飼料添加劑或獸藥是以預混劑或水劑的使用方式。全文摘要博落回提取物在經濟動物獸藥中的應用，博落回提取物用于制備促進經濟動物生長和提高飼料轉化率的獸藥中的藥物飼料添加劑或對畜禽常見病原菌李氏桿菌、嗜血桿菌和巴氏桿菌有較好的抑制作用和殺滅作用的獸藥。文檔編號A61P31/00GK101530475SQ20091004314公開日2009年9月16日申請日期2009年4月17日優先權日2009年4月17日發明者曾建國,鵬蔡,華饒申請人:湖南美可達生物資源有限公司