專利名稱：雞樹條莢蒾葉中綠原酸的制備工藝的制作方法
技術領域：
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及雞樹條莢蓮葉中綠原酸的制備工藝。本發明產品主要作用是降壓、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化、抗菌、抗病
毒等作用。
背景技術：
本發明涉及雞樹條莢蓮葉中綠原酸的制備工藝。雞樹條莢蓮Viburnum sargentii Koehne為忍冬科Caprifoliaceae莢蓮屬Viburnum植物，又名天目瓊花、雞樹條，為落葉灌 木，分布于遼寧、吉林、黑龍江、內蒙古、山東、河北、四川、浙江等地，朝鮮、日本、前蘇聯也有 分布，葉、嫩枝、果實均可入藥。雞樹條味甘、苦、平，入肺、肝、脾、腎四經，具有通經活絡、祛 風除濕、健脾消食、消腫、驅蟲、鎮咳祛痰等作用，其天然資源極為豐富，且蘊含量大。目前， 雞樹條莢蓮常作園林用途，在民間作“雞樹條”藥用，枝入藥治風濕痹痛，閃腰岔氣，跌打損 傷；葉外用治瘡癤，疥癬，皮膚瘙癢；以果實煎汁內服，具有止咳的功效，主治急、慢性支氣 管炎、咳嗽。由此可見，雞樹條莢蓮具有普遍的醫療價值。綠原酸主要存在于金銀花、杜仲葉中，其產品分別為金銀花提取物，杜仲提取 物薔薇科植物英國山楂Crataegus oxyacantha Linn.的果實，千屈菜科植物千屈菜 Lythrumsalicaria L. ^C ^^ ^ ^ Dodonaea viscose (L. ) Jacp. ,
植物歐亞水龍骨Polypodium vulgare L.根莖，馬鞭草科植物假敗醬Stachytarpheta jamaicensis (L. ) Vahl 根，十字花禾斗植物卷心菜 Brassica oleracea L. var. capitata L.莖、葉，蓼科植物扁蓄Polygonumaviculare L.全草，茜草科植物篷子菜Galium verum L.全草，忍冬科植物蒴翟Sambucusjavanica Reinw.全草均含有綠原酸。綠原酸具有較廣 泛的作用，毒性很小，幼大鼠口服的LD50大于lg/kg，腹腔注射大于0. 25g/kg。綠原酸主要 作用是降壓、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化、抗菌、抗病毒等。綠原酸提取和純化有如下方法水提醇沉法利用綠原酸易溶于水的特性，采用水作溶劑，加熱煮沸提取，然后用高 濃度醇沉淀蛋白質，多糖等雜質。該方法工藝簡單、經濟，但是水提取液中雜質較多，醇沉過 程中伴隨吸附夾帶，使部分綠原酸消失。水提石灰乳沉淀法綠原酸與鈣鹽生成沉淀，在水提取液中加入石灰乳，是綠原酸 沉淀下來，然后用硫酸分解沉淀。該方法操作簡單、經濟，其缺點是石灰乳沉淀不完全，硫酸 鈣對綠原酸有吸附作用，從而降低產率。醇提鉛鹽沉淀法采用乙醇溶劑，在醇提液中加入乙酸鉛溶液，使綠原酸以鉛鹽的 形式沉淀下來。優點是可得到較純綠原酸，缺點是工藝復雜，產量低，并使用有毒金屬鉛，可 能對綠原酸產品造成一定的污染。超聲波法利用超聲波能擊碎細胞壁，使細胞內組分滲透到溶液中，從而叨叨分離 的目的。該方法綜合成本低，污染小，無水提法難以過濾的制約因素，無醇提法中因溶劑使 用帶來不利之處，而且綠原酸得率高，但目前僅限于實驗室規模。
聚酰胺柱層析法依據聚酰胺對氫鍵的特殊吸附性來達到物質分離。特別適合分離 酚類、醌類、黃銅等化合物，對鞣質的吸附特強，近乎不可逆。該法能使綠原酸和黃銅獲得較 好的分離和提取，吸附劑聚酰胺可反復使用，反復層析可以純化，純化度高；但操作麻煩，產 量低，洗脫耗費時間長，主要用于分析研究中。超濾法依照超濾膜物理化學性能，采用超濾可除去水提或醇提液中多糖、蛋白質 等大分子，而綠原酸等小分子則可透過膜的一種提取方法。優點是能有效保留有效成分，無 污染，綠原酸得率較高；但該法對提取液預處理要求高，產量易受超濾條件的影響，而且膜 清洗麻煩。酶法采用纖維素酶和果膠酶分別或聯合處理藥材(金銀花)，然后在醇提。金銀花 用纖維素酶處理后，結構致密細胞壁中纖維素水解成水溶性糖類物質，而細胞壁水解有利 于胞內物質(綠原酸)溶出。該方法綠原酸得率比乙醇回流法提高約25. 97%，反應條件溫 和；但采用酶法處理，大大增加生產成本，其經濟可行性優待于進一步研究。超臨界法以超臨界CO2為溶劑從藥材中提取綠原酸。該方法操作范圍廣，可有針 對性提取有效成分，同時萃取同蒸餾合為一體，不需要溶劑，無污染，產品純度高。但設備昂 貴，產業化生產有一定困難。大孔樹脂吸附法大孔樹脂吸附特別適合水溶性化合物純化分離。該法具有吸附容 量大，選擇性好，易于解吸，機械強度高，再生處理簡單，吸附速度快，操作簡單，得率恒定， 產品質量穩定，生產成本低等特點，且吸附法僅用少量溶媒洗脫樹脂就能達到濃縮目的，但 耗用時間長，吸附樹脂清洗困難。目前，對于雞樹條莢蓮葉中綠原酸化學成分的研究國內外鮮見報道。

發明內容
1.本發明涉及以雞樹條莢蓮葉為原料制備綠原酸，其特征在于制備綠原酸包括以 下過程步驟(一)將雞樹條莢蓮葉干燥粗粉加入8-10倍量的乙醇浸泡過夜，濾液減壓 回收至無醇味，反復提取4-6次，然后用紗布過濾，得到濾液；步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，濃縮，濃縮液置于6°C冰箱中沉淀48h， 抽濾，除去沉淀的部分色素；步驟(三)將步驟(二)中的濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次、由此得 到乙酸乙酯層組分；步驟(四)將步驟(三)中乙酸乙酯層組分溶于無水乙醇中，拌以硅膠(200 300目)，揮干溶劑，通過硅膠(200 300目)柱層析，洗脫溶劑選擇石油醚乙酸乙酯 (10 1 1 7)梯度洗脫；步驟(五)將步驟(四)中的所得餾分用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，減 壓濃縮至小體積，再反復硅膠柱層析；步驟(六)將步驟(五)中的相似流分合并，減壓濃縮，得濃縮液，析出晶體；步驟(七)將步驟(六)中的晶體用甲醇重結晶得到綠原酸單體。2.根據本發明所述的制備綠原酸的原料為雞樹條莢蓮Viburnum sargentii Koehne 的葉。
根據本發明，本發明中的“ ％ ”是重量百分比。
具體實施例方式本發明所述的涉及以雞樹條莢蓮葉為原料制備綠原酸包括以下實施例，下面的實 施例可進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例1 步驟(一)將雞樹條莢蓮葉干燥粗粉IOOOg加入10倍量的乙醇浸泡過夜，濾液 減壓回收至無醇味，反復提取4次，然后用紗布過濾，得到濾液；步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，濃縮，濃縮液置于6°C冰箱中沉淀48h， 抽濾，除去沉淀的部分色素；步驟(三)將步驟(二)中的濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次、由此得 到乙酸乙酯層組分；步驟(四)將步驟(三)中乙酸乙酯層組分溶于無水乙醇中，拌以硅膠(200 300目)，揮干溶劑，通過硅膠(200 300目)柱層析，洗脫溶劑選擇石油醚乙酸乙酯 (10 1 1 7)梯度洗脫；步驟(五)將步驟(四)中的所得餾分用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，減 壓濃縮至小體積，再反復硅膠柱層析；步驟(六)將步驟(五)中的相似流分合并，減壓濃縮，得濃縮液，析出晶體；步驟(七)將步驟(六)中的晶體用甲醇重結晶得到綠原酸單體10. 2g。實施例2 步驟(一)將雞樹條莢蓮葉干燥粗粉IOOOg加入8倍量的乙醇浸泡過夜，濾液減 壓回收至無醇味，反復提取6次，然后用紗布過濾，得到濾液；步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，濃縮，濃縮液置于6°C冰箱中沉淀48h， 抽濾，除去沉淀的部分色素；步驟(三)將步驟(二)中的濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次、由此得 到乙酸乙酯層組分；步驟(四)將步驟(三)中乙酸乙酯層組分溶于無水乙醇中，拌以硅膠(200 300目)，揮干溶劑，通過硅膠(200 300目)柱層析，洗脫溶劑選擇石油醚乙酸乙酯 (10 1 1 7)梯度洗脫；步驟(五)將步驟(四)中的所得餾分用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，減 壓濃縮至小體積，再反復硅膠柱層析；步驟(六)將步驟(五)中的相似流分合并，減壓濃縮，得濃縮液，析出晶體；步驟(七)將步驟(六)中的晶體用甲醇重結晶得到綠原酸單體10. 6g。綠原酸結構鑒定白色粉末，mp 207 209°C。25°C水中微溶，熱水中溶解度增大。易溶于乙醇及丙 酮，極微溶于醋酸乙酯。ESI-MS :m/z 355 [M+H]+、377 [M+Na]+，分子式C16H1809。1H-WlUeOOMHz, DMS0_d6) δ 7. 43 (1H, d, J = 16. 2Hz, H- β ), 7. 06 (1H, H_2 ' )，6· 96 (1H, d, J = 7. 8Hz, H-6 ')， 6. 74 (1H, d, J = 7. 8Hz, H_5' ) ,6. 21 (1H, d, J = 16. 2Hz, H-α )，5. 16 (1H, H_3)，3. 46 (1H,d, J = 7. 8Hz, H-5) ,3. 89 (1H, H_4)，1. 79 (4H，m, H_2，6)。13C-NMR (150MHz, CD30D) δ 175. 1 (C-7)，166. 7 (C_8)，147. 7 (C_4 ' )，145. 1 (C_3 ' )，144. 9 (C- β )，125. 9 (C_l ')， 121. 0(C-6 ' ), 114. 6(C-2 ' )，113.4(C_5 ' )，113. 3 (C-α )，74. 2 (C_l)，71. 6 (C_4)， 70. 1 (C-3)，69. 4 (C-5)，36. 9 (C_2)，36. 3 (C_6)。經對照[51]，與綠原酸的理化數據和標準圖
譜基本一致。 經硅膠薄層層析后，斑點在254nm紫外燈下有熒光，遇碘蒸氣顯黃色，10%硫酸乙醇溶液噴霧后105°C烤板顯黑色，其Rf值與綠原酸標準品的Rf值一致。
權利要求
本發明涉及以雞樹條莢蒾葉為原料制備綠原酸，其特征在于制備綠原酸包括以下過程步驟(一)將雞樹條莢蒾葉干燥粗粉加入8-10倍量的乙醇浸泡過夜，濾液減壓回收至無醇味，反復提取4-6次，然后用紗布過濾，得到濾液；步驟(二)將步驟(一)中的濾液合并，濃縮，濃縮液置于6℃冰箱中沉淀48h，抽濾，除去沉淀的部分色素；步驟(三)將步驟(二)中的濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取三次，由此得到乙酸乙酯層組分；步驟(四)將步驟(三)中乙酸乙酯層組分溶于無水乙醇中，拌以硅膠(200～300目)，揮干溶劑，通過硅膠(200～300目)柱層析，洗脫溶劑選擇石油醚∶乙酸乙酯(10∶1～1∶7)梯度洗脫；步驟(五)將步驟(四)中的所得餾分用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，減壓濃縮至小體積，再反復硅膠柱層析；步驟(六)將步驟(五)中的相似流分合并，減壓濃縮，得濃縮液，析出晶體；步驟(七)將步驟(六)中的晶體用甲醇重結晶得到綠原酸單體。
2.根據本發明所述的制備綠原酸的原料為雞樹條莢蓮Viburnumsargentii Koehne的葉。
全文摘要
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及雞樹條莢蒾葉中綠原酸的制備工藝。將雞樹條莢蒾葉干燥粗粉加入8-10倍量的乙醇浸泡過夜，反復提取4-6次，濃縮液置于6℃冰箱中沉淀48h，抽濾，除去沉淀的部分色素，濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯各萃取三次，得到乙酸乙酯層組分，將乙酸乙酯層組分溶于無水乙醇中，拌以硅膠(200～300目)，通過硅膠柱層析，采用石油醚與乙酸乙酯梯度洗脫，所得餾分用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，所得各組分再反復硅膠柱層析，再經純化后得到單體化合物綠原酸。本發明產品主要作用是降壓、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、抗肌肉骨骼老化、抗菌、抗病毒等。
文檔編號A61P9/12GK101823964SQ20101014335
公開日2010年9月8日 申請日期2010年3月12日 優先權日2010年3月12日
發明者孫麗, 張崇禧, 張騰, 李攀登, 楊淑超, 陳曉芳 申請人:山東大學威海分校