專利名稱：一種埃博霉素b-內(nèi)酰胺衍生物化學(xué)的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物化學(xué)的合成方法。
背景技術(shù)：
埃博霉素(印othilone)是一類大環(huán)內(nèi)酯類化合物，由德國(guó)國(guó)家生物技術(shù)中心 (GBF)的G. H&ouml,fle等人于1993年首次報(bào)道。從粘細(xì)菌亞目的纖維堆囊菌菌株發(fā)酵液 中可以分離埃博霉素，其主要組分為Epothilone A和B，1995年，默克研究院的D.M. Bollag 等在大規(guī)模篩選微管抑制劑時(shí)發(fā)現(xiàn)一株纖維堆囊菌SMP 44的發(fā)酵提取物具有抑制微管解 聚的活性，經(jīng)分析鑒定該活性組份為埃博霉素(印othilone) A和B，它與紫杉醇具有相同的 抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用機(jī)制，并且對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞和耐紫杉醇的腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)強(qiáng) 大的抗癌活性。但是還沒(méi)有化學(xué)合成埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物化學(xué)的合成方法，它可以有效地化 學(xué)合成埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物。本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案一種埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物合成方法，它包括以 下步驟步驟一，開(kāi)環(huán)氮化反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在反應(yīng)釜中投入四氫呋喃和水的混合液、 埃博霉素B和催化劑，然后再分批投入疊氮鈉進(jìn)行攪拌，慢慢升溫，當(dāng)反應(yīng)溶液變成黃色后 依次采用乙酸乙酯萃取、有機(jī)相用飽和鹽水洗滌和無(wú)水硫酸鈉干燥后得到氮酸；步驟二，水 解反應(yīng)在氬氣的保護(hù)下，在反應(yīng)釜中投入四氫呋喃、步驟一得到的氮酸和三苯膦進(jìn)行第一 次攪拌和升溫，然后進(jìn)行第一次冷卻，冷卻后再滴加氫氧化銨，滴加后再進(jìn)行第二次升溫?cái)?拌，然后再進(jìn)行第二次冷卻至室溫，最后再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，有機(jī)相用飽和鹽水洗滌， 無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，得到氨基酸；步驟三，環(huán)合反應(yīng)在氬氣的保護(hù)下，在反應(yīng)釜中 投入四氫呋喃和步驟二得到的氨基酸，接著再投入碳酸鈉后降溫，然后溫度控制在零度以 下后緩慢地滴加二苯基磷酰基疊氮化物，保溫?cái)嚢瑁渲?5 %的磷酸二氫鈉溶液，將磷酸 二氫鈉溶液冷卻后加入反應(yīng)釜中與四氫呋喃、氨基酸和碳酸鈉混合攪拌，然后加入乙酸乙 酯進(jìn)行萃取，有機(jī)相無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物；步驟四，純 化在反應(yīng)釜中將埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物溶解在四氫呋喃中，依次用飽和鹽水清洗攪拌， 乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥以及減壓濃縮，最后通過(guò)兩次純化過(guò)程得到純的埃博霉素B 內(nèi)酰胺衍生物。所述的步驟一種四氫呋喃和水的混合液為800ml，四氫呋喃和水的體積比為 9 1，埃博霉素B為25g，疊氮鈉為4. 76g，催化劑為四(三苯基膦)合鈀，催化劑的重量為 3. 5g，在投入疊氮鈉后進(jìn)行攪拌的時(shí)間為7小時(shí)，在攪拌的過(guò)程中跟蹤TLC EtOAc/MSO = 1 2，慢慢升溫至60°C，在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯進(jìn)行萃取；在 洗滌時(shí)進(jìn)行2次洗滌，每次采用200ml的有機(jī)相用飽和鹽水進(jìn)行洗滌，最后得到的氮酸為 17. lg。所述的步驟二中反應(yīng)釜中投入四氫呋喃為500ml、氮酸17. Ig和三苯膦16. 3g，第一次攪拌的時(shí)間為18小時(shí)，升高的溫度為50°C，然后第一次冷卻的溫度為10°C以下，滴加氫 氧化銨時(shí)的溫度為10°C以下，氫氧化銨為25%的氫氧化銨，氫氧化銨的容量為150ml，第二 次升溫至50°C，攪拌的時(shí)間為6小時(shí)，在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用300ml的乙酸乙酯 進(jìn)行萃取；在洗滌時(shí)進(jìn)行2次洗滌，每次采用200ml的有機(jī)相用飽和鹽水進(jìn)行洗滌，最后得 到的氨基酸為12. 5g。所述的步驟三中四氫呋喃為500ml和氨基酸12. 5g，碳酸鈉為15g，二 苯基磷酰基疊氮化物為20ml，保溫?cái)嚢璧臅r(shí)間為24小時(shí)，磷酸二氫鈉溶液為200ml，磷酸二 氫鈉溶液冷卻的溫度0-3°C，磷酸二氫鈉溶液與四氫呋喃、氨基酸和碳酸鈉混合攪拌的時(shí)間 為2小時(shí)，乙酸乙酯的溫度為0-3°C在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用500ml的乙酸乙酯進(jìn) 行萃取，最后得到的埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物為5. 6g。所述的步驟四中埃博霉素B內(nèi)酰胺 衍生物為5. 6g，四氫呋喃為300ml，飽和鹽水為200ml，飽和鹽水清洗攪拌的時(shí)間為20分鐘， 在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，兩次純化的過(guò)程為第一次 色譜純化，色譜純化在10*60cm的二氧化硅上采用3-5%甲醇-氯仿進(jìn)行梯度洗脫，第二次 為制備型HPLC純化，它采用6-55%甲醇-氯仿梯度洗脫，最后得到純埃博霉素B內(nèi)酰胺衍 生物4. 8g。本發(fā)明具有以下有益效果本發(fā)明采用化學(xué)合成的方法制備埃博霉素B-內(nèi)酰胺 衍生物，不但制備過(guò)程簡(jiǎn)單，而且節(jié)約成本，同時(shí)制備的埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物可以抑 制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用機(jī)制，并且對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞和耐紫杉醇的腫瘤細(xì)胞均表現(xiàn)強(qiáng)大 的抗癌活性。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物化學(xué)的合成方法，它包括以下步 驟步驟一，開(kāi)環(huán)氮化反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，反應(yīng)釜中投入800ml混合液(四氫呋喃水 =9 1)、埃博霉素B25g(5. 76mmol)和3. 5g (0. 35mmol)四(三苯基膦)合鈀，分批投入 4. 76g(8. 64mmol)疊氮鈉，在攪拌下，慢慢升溫至60°C，攪拌7個(gè)小時(shí)，在攪拌的過(guò)程中跟 蹤TLC EtOAc/MSO = 1 2，使得反應(yīng)狀態(tài)為溶液變成黃色，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙 酯分3次，每次250ml進(jìn)行萃取，有機(jī)相用飽和鹽水洗滌，洗滌時(shí)進(jìn)行2次，每次采用200ml 有機(jī)相用飽和鹽水進(jìn)行洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，得到氮酸17. Ig ；步驟二，水解反 應(yīng)在氬氣保護(hù)下，反應(yīng)釜中投入四氫呋喃500ml、一步得的氮酸17. Ig和三苯膦16. 3g，攪 拌升溫至50°C，攪拌18小時(shí)，再冷卻至10°C以下，滴加25%氫氧化銨溶液150ml，溫度控 制在10°C以下，滴加完畢，再升溫至50°C，攪拌6個(gè)小時(shí)后，冷卻至室溫，再用乙酸乙酯萃 取，乙酸乙酯分3次，每次IOOml進(jìn)行萃取，有機(jī)相用飽和鹽水洗滌，洗滌時(shí)進(jìn)行2次，每次 采用200ml有機(jī)相用飽和鹽水進(jìn)行洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮。得到氨基酸12. 5g ； 步驟三，環(huán)合反應(yīng)在氬氣保護(hù)下，反應(yīng)釜中投入四氫呋喃500ml、二步得到的氨基酸12. 5g 攪拌，再投入15g碳酸鈉，降溫至0°C。緩慢滴加二苯基磷酰基疊氮化物20ml (8. 5mmol)， 溫度控制在0°C以下，保溫?cái)嚢?4小時(shí)。配制25%磷酸二氫鈉溶液200ml，冷卻至0_3°C， 加入到反應(yīng)釜中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。加入0-3°C乙酸乙酯進(jìn)行萃取，乙酸乙酯分3次，每次 500ml進(jìn)行萃取，有機(jī)相無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到5. 6g埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物； 步驟四，純化在反應(yīng)釜中投入第三步得的5. 6g埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物溶解在四氫呋喃 300ml中，用飽和鹽水200ml清洗攪拌20分鐘清洗，乙酸乙酯進(jìn)行萃取，乙酸乙酯分3次，每次250ml進(jìn)行萃取，乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，第一次色譜純化，色譜純 化在10*60cm的二氧化硅上采用3-5%甲醇-氯仿進(jìn)行梯度洗脫，第二次為制備型HPLC純 化，它采用5-50%甲醇-氯仿梯度洗脫，最后得到純埃博霉素D內(nèi)酰胺衍生物4. Sg。
權(quán)利要求
一種埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物合成方法，它包括以下步驟步驟一，開(kāi)環(huán)氮化反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，在反應(yīng)釜中投入四氫呋喃和水的混合液、埃博霉素B和催化劑，然后再分批投入疊氮鈉進(jìn)行攪拌，慢慢升溫，當(dāng)反應(yīng)溶液變成黃色后依次采用乙酸乙酯萃取、有機(jī)相用飽和鹽水洗滌和無(wú)水硫酸鈉干燥后得到氮酸；步驟二，水解反應(yīng)在氬氣的保護(hù)下，在反應(yīng)釜中投入四氫呋喃、步驟一得到的氮酸和三苯膦進(jìn)行第一次攪拌和升溫，然后進(jìn)行第一次冷卻，冷卻后再滴加氫氧化銨，滴加后再進(jìn)行第二次升溫?cái)嚢瑁缓笤龠M(jìn)行第二次冷卻至室溫，最后再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，有機(jī)相用飽和鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，真空濃縮，得到氨基酸；步驟三，環(huán)合反應(yīng)在氬氣的保護(hù)下，在反應(yīng)釜中投入四氫呋喃和步驟二得到的氨基酸，接著再投入碳酸鈉后降溫，然后溫度控制在零度以下后緩慢地滴加二苯基磷酰基疊氮化物，保溫?cái)嚢瑁渲?5％的磷酸二氫鈉溶液，將磷酸二氫鈉溶液冷卻后加入反應(yīng)釜中與四氫呋喃、氨基酸和碳酸鈉混合攪拌，然后加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，有機(jī)相無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物；步驟四，純化在反應(yīng)釜中將埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物溶解在四氫呋喃中，依次用飽和鹽水清洗攪拌，乙酸乙酯萃取，無(wú)水硫酸鈉干燥以及減壓濃縮，最后通過(guò)兩次純化過(guò)程得到純的埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步驟一 種四氫呋喃和水的混合液為800ml，四氫呋喃和水的體積比為9 1，埃博霉素B為25g，疊 氮鈉為4. 76g，催化劑為四(三苯基膦)合鈀，催化劑的重量為3. 5g，在投入疊氮鈉后進(jìn)行 攪拌的時(shí)間為7小時(shí)，在攪拌的過(guò)程中跟蹤TLC EtOAc/MSO = 1 2，慢慢升溫至60°C， 在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯進(jìn)行萃取；在洗滌時(shí)進(jìn)行2次洗滌，每 次采用200ml的有機(jī)相用飽和鹽水進(jìn)行洗滌，最后得到的氮酸為17. lg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步驟 二中反應(yīng)釜中投入四氫呋喃為500ml、氮酸17. Ig和三苯膦16. 3g，第一次攪拌的時(shí)間為 18小時(shí)，升高的溫度為50°C，然后第一次冷卻的溫度為10°C以下，滴加氫氧化銨時(shí)的溫度 為10°C以下，氫氧化銨為25%的氫氧化銨，氫氧化銨的容量為150ml，第二次升溫至50°C， 攪拌的時(shí)間為6小時(shí)，在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用300ml的乙酸乙酯進(jìn)行萃取；在洗 滌時(shí)進(jìn)行2次洗滌，每次采用200ml的有機(jī)相用飽和鹽水進(jìn)行洗滌，最后得到的氨基酸為 12. 5g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步驟三 中四氫呋喃為500ml和氨基酸12. 5g，碳酸鈉為15g，二苯基磷酰基疊氮化物為20ml，保溫?cái)?拌的時(shí)間為24小時(shí)，磷酸二氫鈉溶液為200ml，磷酸二氫鈉溶液冷卻的溫度0_3°C，磷酸二 氫鈉溶液與四氫呋喃、氨基酸和碳酸鈉混合攪拌的時(shí)間為2小時(shí)，乙酸乙酯的溫度為0-3°C 在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用500ml的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，最后得到的埃博霉素B內(nèi)酰 胺衍生物為5. 6g。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步驟四 中埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物為5. 6g，四氫呋喃為300ml，飽和鹽水為200ml，飽和鹽水清洗攪 拌的時(shí)間為20分鐘，在萃取時(shí)進(jìn)行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，兩次純 化的過(guò)程為第一次色譜純化，色譜純化在10*60cm的二氧化硅上采用3-5%甲醇-氯仿進(jìn)行梯度洗脫，第二次為制備型HPLC純化，它采用6-55%甲醇-氯仿梯度洗脫，最后得到純埃 博霉素B內(nèi)酰胺衍生物4. Sg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物合成方法，它包括以下步驟它采用埃博霉素B、疊氮鈉作為起始原料，選擇催化劑，進(jìn)行開(kāi)環(huán)氮化反應(yīng)生成氮酸，再進(jìn)行水解反應(yīng)，生成氨基酸，再進(jìn)行環(huán)合反應(yīng)生成埃博霉素B內(nèi)酰胺衍生物。本發(fā)明可以有效地化學(xué)合成埃博霉素B-內(nèi)酰胺衍生物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101880284SQ20101022777
公開(kāi)日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2010年7月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月16日
發(fā)明者周彬, 高榮 申請(qǐng)人:泰州市今朝偉業(yè)精細(xì)化工有限公司