專利名稱：利用與血管肽-2類似物結合的抗癌劑治療卵巢癌的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于治療卵巢癌的方法。
背景技術：
卵巢癌是一種嚴重的健康問題；美國國家癌癥研究所(National Cancer Institute)估測美國2008年死于卵巢癌的人數超過15，000，其中每年新增超過21，000病例。卵巢癌是死于婦科癌癥的首要原因，并且是女性癌癥死亡的最為常見的位居第五位的誘因。基于這些數字，可以預估女性具有1. 39%的發展卵巢癌的終身風險。很難較早地診斷出卵巢癌，因為對于該病的早期癥狀常常是非特異性的。因此，在癌癥從卵巢中擴散之前，只有19%的卵巢癌被診斷出；事實上，2/3(的癌癥)只有在癌癥轉移至身體中較遠的部位之后才被診斷出。癌癥一旦轉移，五年的相對存活率(與整體人口數相比)只有30.6%。由于這些原因，對于卵巢癌，尤其是患有轉移性癌癥(metastatic cancer)的患者，需要更有效的治療。

發明內容
我們發現通過給予ANG1005，即一種包括與肽血管肽_2 (Angiop印_2) (SEQ ID NO 97)結合的三分子的紫杉醇的治療劑，成功地治療了轉移性卵巢癌。該結合物(conjugate) 能夠治療在大腦外部和內部發生轉移的轉移性癌癥，甚至是治療不響應標準化療劑的患者。因為ANG1005有效地靶向癌細胞，因而在特定情況下，其能夠以相對于紫杉醇自身更低的等效劑量給予而維持功效。同樣，由于ANG1005的結合紫杉醇相比于未結合的藥劑毒性更小，因此ANG1005還可以相對于單獨的紫杉醇更高的劑量給予而表現出更少的副作用。基于這種發現，本發明的特征在于，一種治療患有原發于(originating from)卵巢的癌癥(如卵巢上皮癌或卵巢腺癌、或其轉移形式)的患者的方法。該方法包括向患者給予有效量的結合物，該結合物包含(a)抗癌劑，和(b)包含一種氨基酸序列的多肽、其修飾形式(如本文描述的)、或其片段，該氨基酸序列基本上同一于包含SEQ ID NO :1-105和 107-116(如SEQ ID NO 97)中任一個的氨基酸序列的多肽，其中該多肽、修飾形式、或片段與抗癌劑結合(conjugate)。在特定實施方式中，抗癌劑選自由紫杉醇、長春堿、長春新堿、 依托泊苷、多柔比星、環磷酰胺、泰索帝(taxotere)、美法侖、和苯丁酸氮芥組成的組。在具體的實施方式中，抗癌劑為紫杉醇。在特定實施方式中，多肽包括與SEQ ID N0:97的序列至少 70%、75%、80%、85%、90%、95%、或 100% 同一 (identical)的氨基酸序列。多肽可具有。該結合物可以約 1、10、25、50、100、150、200、250、300、400、500、600、700、800、900、1000、 1200、1400、1600、1800、2000、2500、或3000mg/m2的劑量、或這些數字之間的任意范圍進行給予。在特定實施方式中，該劑量在100mg/m2和2000mg/m2之間、或300mg/m2和1000mg/m2 之間。結合物可通過本領域中已知的任何方式給予患者，如靜脈內、口服、動脈內、鼻內、腹膜內、肌內、皮下、經皮、或經口(per os)給藥。
卵巢癌可處于本文描述的任何階段(如，階段IA、IB、IC、IIA、IIB、IIC、ΙΙΙΑ、 IIIB、IIIC、或IV)或任何形態學等級(如，等級1、等級2、或等級幻。癌癥可以是在一個卵巢或兩個卵巢中。癌癥可限定在卵巢內部，或可出現在卵巢的外表面上。在特定實施方式中，癌細胞發現于子宮、輸卵管、或這兩者中。在其他實施方式中，癌癥已擴散至骨盆器官如結腸、膀胱、或直腸中。在其他實施方式中，癌細胞發現于腹部(如肉眼可見(如橫向 (across)大于或小于2cm)、或僅在顯微鏡下可見)。癌癥還可能已轉移至腹部或骨盆的內層(腹膜)，腹部器官如腸、膀胱、子宮、肝和肺，或已轉移至腦部。癌癥可能已轉移至卵巢外的至少一個部位(如，轉移至腦、肺、或這兩者)。在特定實施方式中，癌癥在淋巴系統中。 在特定實施方式中，患者具有腦、肺、肝、腎、或眼外部的至少一種轉移。在特定實施方式中，癌癥可為耐藥性的或包括耐藥性細胞(如表達MDRl的細胞)。癌癥可以對任何化療劑，包括紫杉醇、卡鉬、順鉬、多柔比星、托泊替康、吉西他賓、多烯紫杉醇、紫杉烷衍生物、或本文描述的任何藥劑具有耐受性(抗性，resistant)，或者可包含對任何化療劑，包括紫杉醇、卡鉬、順鉬、多柔比星、托泊替康(topotecan)、吉西他賓 (gemcitabine)、多烯紫杉醇(docetaxel)、紫杉烷衍生物、或本文描述的任何藥劑具有耐受性的細胞。在其他的實施方式中，該方法包括給予第二抗癌治療(如本文描述的任何治療)。 在特定實施方式中，患者之前可能已接受另一種化療劑(如紫杉醇、鉬類藥劑如卡鉬、順鉬、多柔比星、托泊替康、吉西他賓、多烯紫杉醇、或本文描述的任何藥劑)，并可選地對于該治療具有耐藥性。在特定實施方式中，患者之前接受過卡鉬-紫杉醇聯合治療。患者還可具有發展卵巢癌的風險因子(如本文描述的任何風險因子)。在以上任意實施方式中，多肽可為任意長度，例如，至少6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19、20、21、25、35、50、75、100、200、或 500 個氨基酸。在特定實施方式中， 多肽為10至50個氨基酸長度。結合物可以是基本上純的(pure)。多肽可通過重組基因技術或化學合成而產生。結合物可與藥學上可接受的載體配制。多肽可包括具有下式的氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19其中，X1-X19中的每一個(如 X1-X6、X8、X9、X11-X14、和 X16-X19)獨立地為任意氨基酸(例如天然存在的氨基酸，如 Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Gin、Glu、Gly、His、lie、Leu、 Iys、Met、Phe, Pro、Ser、Thr、Trp, Tyr、和 Val)或不存在，并且 XI、X10、和 Χ15 中的至少一個(如2或3個)為精氨酸。在一些實施方式中，Χ7為Ser或Cys ；或XlO和Χ15各自獨立地為Arg或Lys。在一些實施方式中，從Xl至X19 (包括Xl和X19)的殘基基本上同一于SEQ ID NO 1-105和107-116中任一個的任意氨基酸序列(如血管肽_1、血管肽_2、血管肽_3、血管肽_4a、血管肽_4b、血管肽-5、血管肽-6、和血管肽-7)。在一些實施方式中， 氨基酸X1-X19中至少一個(如，2、3、4、或5個)為Arg。在一些實施方式中，該多肽在多肽的N端、多肽的C端、或這兩者上具有一個或多個另外的半胱氨酸殘基。在以上任意方面的特定實施方式中，多肽是經修飾的(如在本文所描述的)。多肽可以是經酰胺化的、乙酰化的、或既經酰胺化又經乙酰化的。對于多肽的此類修飾可以是在多肽的氨基或羧基末端。本發明的結合物還可包括本文描述的任意多肽的擬肽(模擬肽， ρ印tidomimetics)。多肽可為多聚體形式(multimeric form)，例如，二聚體形式(如，通過半胱氨酸殘基經二硫鍵形成)。在特定實施方式中，多肽具有本文描述的具有至少一個氨基酸取代(如2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、或12個取代)的氨基酸序列。多肽可包含，例如，1至12、1至10、1至5、 或1至3個氨基酸取代，例如，1至10個(如，至9、8、7、6、5、4、3、2個)氨基酸取代。(一個或多個)氨基酸取代可為保守的或非保守的。例如，多肽可在對應于SEQ ID N0:1、血管肽-1、血管肽_2、血管肽-3、血管肽-4a、血管肽-4b、血管肽_5、血管肽_6、和血管肽-7中任何一個的氨基酸序列的位置1、10、和15的至少一個、兩個、或三個位置上具有精氨酸。在以上任意方面中，結合物可特定地排除包括或由SEQ ID NO :1-105和107-116 中任一個組成的多肽(如血管肽-1、血管肽_2、血管肽-3、血管肽-4a、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、和血管肽-7)。在一些實施方式中，本發明的多肽和結合物排除SEQ ID NO :102、103、104、和 105 的多肽。在一些實施方式中，氨基酸序列與選自由SEQ ID NO :1-105和107-116、或其功能衍生物所組成的組中的氨基酸序列具有至少35%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、 80 %、85 %、90 %、或95 %的同一性。在特定實施方式中，氨基酸序列與選自由血管肽-2 (SEQ ID NO :97)、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、和血管肽-7 (SEQ ID NO :109-116)所構成的組中的氨基酸序列具有至少；35%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或 95%的同一性。在其他的實施方式中，氨基酸序列與血管肽-2(SEQ ID NO :97)的氨基酸序列具有至少 35%、40%、50%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、或 95% 的同一性。在一些實施方式中，氨基酸序列包含選自由SEQ ID NO :1-105和107-116、或其功能衍生物所組成的組中的氨基酸序列。在特定實施方式中，氨基酸序列為血管肽-2 (SEQ ID NO :97)、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、或血管肽-7 (SEQ ID NO :109-112)的氨基酸序列。在其他的實施方式中，氨基酸序列由選自由SEQ ID NO :1-105和107-116、或其功能衍生物所組成的組中的氨基酸序列組成。在特定實施方式中，氨基酸序列為血管 Ι -2 (SEQ ID NO :97)、血管肽-4b、血管肽-5、血管肽-6、或血管肽-7 (SEQ ID NO :109-112) 的氨基酸序列。“患者”意指治療人或非人動物(如，哺乳動物)。“治療”意指與同等未處理(未治療)的對照相比，改善患有病癥或疾病(如診斷為患有代謝紊亂的主體)的主體中該病癥或疾病的至少一種癥狀。通過任何標準技術測量， 該癥狀減輕(如血糖水平降低)至少5%、10%、20%、40%、50%、60%、80%、90%、95%、或 100%。“結合物”意指與抗癌劑連接的多肽(如，本文描述的這些)。結合可以是化學性質的，例如經由連接子，或是遺傳性質的，例如通過基因重組技術。“有效量”意指以臨床相關方式治療或減輕卵巢癌所需的化合物的量。例如，用于實施本發明的用于治療卵巢癌的活性化合物的足夠量取決于給予方式、年齡、體重、和癌癥的(嚴重)程度。最后，處方醫師將決定合適的量和給藥方案。“基本上同一(substantially identical) ”意指相對于參考氨基酸或核酸序列表現出至少；35%、40%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、85%、90%、95%、或甚至 99% 的同一性的多肽或核酸。對于多肽，對比序列的長度通常為至少4個(如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、50、或100個)氨基酸。對于核酸，對比序列的長
度通常為至少60個核苷酸，優選至少90個核苷酸，且更優選至少120個核苷酸，或全長。此處應當理解的是，在與原始多肽相同(同一)或相似的類似物的氨基酸之間存在空隙(空格、空位，gap)。空隙可包括沒有氨基酸、與原始多肽不相同或不相似的一個或多個氨基酸。 本發明載體(多肽)的生物活性類似物也包含在這里。同一性百分比可利用缺省空隙重量 (default gap weight),通過 Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0 中的 η算法GAP、BESTFIT、或FASTA進行測定。“片段”意指源于原始或親本序列或源于所述親本序列的類似物的一部分的多肽。 片段包含具有一個或多個氨基酸的截短體(truncations)的多肽，其中截短體可源于蛋白質的氨基端(N-端)、羧基端(C-端)或內部。片段可包括與原始序列的相應部分相同的序列。本發明包含本文描述的載體(多肽)的功能片段。片段可為至少5個(如，至少5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25、28、30、35、40、45、50、60、75、 100、或150個)氨基酸。本發明的片段可包括，例如，7、8、9或10個氨基酸至18個氨基酸的多肽。片段可包含本文描述的任何修飾(如，乙酰化、酰胺化、氨基酸替代)。“耐藥性(藥物耐受性、藥物抗性，drug resistant) ”癌癥意指對一種或多種化療劑(如本文描述的任何藥劑)不應答或表現為應答下降的癌癥。“測定為耐藥性的”癌癥意指基于對于化療劑的不應答性或下降的應答性，癌癥是耐藥性的，或者基于預后測試(如基因表達測試)預測癌癥為耐藥性的。本發明的其他特征和優點通過以下具體實施方式
、附圖和權利要求書將變得明
Mo


圖1是ANG1005結構的示意圖。ANG1005包含與血管肽_2肽(SEQ ID NO 97)結合的三分子的紫杉醇。圖2A和2B是示出在用ANG1005處理之前(圖2A)和之后(圖2B)患者腦部的CT 掃描的圖像。圖3A-3D是示出在用ANG1005處理之前(圖3A和3C)和之后(圖和3D)患者肺部的CT掃描的圖像。圖4A和4B是示出在用ANG1005處理之前(圖4A)和之后(圖4B)患者腹部(包括肝)的CT掃描的圖像。圖5A和5B是示出在用ANG1005處理之前(圖5A)和之后(圖5B)患者骨盆的CT 掃描的圖像。圖6A和6B是示出血管肽-2肽(圖6A)或受體相關蛋白(RAP)或抑肽酶 (aprotinin)(圖 6B)對 ANG1005 的抑制的圖。圖7是示出各種細胞類型和細胞系中LRP表達的圖。數據是從Novartis Research Foundation 的 Genetics Institute 的 Gene Expression Atlas 獲取(可于 http: // expression, gnf. org/cgi-bin/index. cgi#Q 在線使用)。
具體實施方式
我們發現給予肽-藥-結合物(例示為ANG1005(圖1))能夠治療患者的卵巢癌， 特別在，在用ANG1005治療兩次后，能夠顯著縮小患者腦內以及腦外(如在肺部)的轉移性腫瘤。事實上，該特定患者的癌癥對標準化療劑(包括多烯紫杉醇、卡鉬、吉西他賓、托泊替康、和多柔比星)表現出耐受性，因為患者的癌癥即使在接受這些藥劑后也繼續發展。因為已證明卵巢癌，尤其是轉移性卵巢癌，難以有效地治療，并且已知這樣的癌癥經常會發展為對標準治療具有耐受性，因此需要能夠治療原發于卵巢的癌癥的治療劑(therapeutics) 和治療方案，尤其是在癌癥已轉移的情況下。患有卵巢癌的患者的結合物治療一位被診斷為轉移性卵巢癌的73歲患者被選擇參與ANG1005的臨床試驗。該患者最初是在2006年11月被診斷為卵巢癌。在臨床試驗之前，該患者從2007年1月到2007 年4月接受Taxotere (多烯紫杉醇)和卡鉬的治療。從2008年2月至2008年3月，該患者接受Gemzar (吉西他賓)和Hycamtin (托泊替康)的聯合(治療)。該患者從2008年 3月直到2008年7月再次接受Taxotere (多烯紫杉醇)和卡鉬的聯合(治療)。在2008 年11月，給予該患者Doxil (多柔比星)。因為患者的癌癥即使在給予這些藥劑后也繼續發展，因而該癌癥表現出對這些藥劑的耐受性。該患者在2009年1月加入臨床試驗。在ANG1005治療之前，2009年1月7日進行的CT掃描表明，轉移出現在腦(圖2A)、肺(圖3A和3C)、和肝(圖4A)中。并在淋巴結中檢測到轉移。并進行了肝和骨盆的CT掃描(圖4A和5A)。2009年1月8日，向該患者靜脈內給予單劑量的ANG1005。三個星期后，給予第二次650mg/m2的劑量。在這些給予后，驚奇地出現了腫瘤體積的縮小。在2009年2月13日進行的CT掃描表明腦轉移瘤(圖 2B)以及肺轉移瘤(圖;3B和3D)和肝(圖4B)的尺寸顯著減小。也示出了骨盆(圖5B)的 CT掃描。該患者在2009年2月19日接受第三次ANG1005劑量。基于這些觀察，我們認為 ANG1005出乎預料地非常適用于轉移性癌癥的治療，尤其是在患者對標準化療劑具有耐藥性或被測定為對標準化療劑具有耐藥性的情況下。臨床試驗結果以上描述的患者是針對ANG1005治療劑分成兩組進行FDA試驗的一個組中的參與者。第一次臨床試驗的情況總結于下表1中。進行這些試驗以測定ANG1005的安全性。第一次試驗涉及的患者患有各種腦癌間變少突膠質細胞瘤(AO)、少突星形細胞瘤(OA)、間變星形細胞瘤(AA)、和多形性膠質母細胞瘤(GBM)。表 1# 性別(mg/m2)紫杉烷周期狀態整體
_____m____WM__
114 44/F AO 105 否4 退出PD
(Withdrawn) (12 周)
5 43/M OA 105 ^4 MtiiPD
混合(12周)
43/M AO 105 ^2 iitHPD
(6周)
8 43/F AA 105 ^2 MtiiPD
(6周)
9 56/M GBM200 ^ 2 iitH PD ________(6^)__
120 78/M GBM200 ^2 MtiiPD
________(6J|)__
121 41/M AO 200否3 退出SD SAE (3周期后的
(6周)7天)共濟失調和出血(與 ANGl 005 不相關)MRI在第6
_________周顯示丨22%
12273M GBM 200 ^1+1 Hj手術次研究患者
(將在核心研究
_________中繼續)_
12359/F GBM300 ^4 ^pSD
_______(Active) (6 周)__
12469/F GBM300^2 退出
________(6J|)__
125 63/F GBM 300 否4 參加SD 經歷2級嗜中性
(6周)白血球減少癥的
_________患者(ANC=1.2)
~ 26 42/F GBM300^2 MttJ
____200______
127 30/F GBM300 ^2 MtiiPD
________(6J|)__
~m 51/M GBM300p 參加fSD
_______I (6 周)_
12957/M GBM 3001 參加發燒和嗜中性白
血球減少癥(3
_________m_
130"33/M "AO~ 420‘ 2 參加
131~49/F "AO~ 420‘ 2 參加
132 66ΓΡ GBM 420 Μ \經歷3級嗜中性
白血球減少癥的
________ 患者(ANC=0.65)PD (進行性疾病)；SD (穩定性疾病)涉及患有轉移性癌癥的患者的第二進行中試驗也已開始。該試驗的結果在下表2中示出。上文描述的卵巢癌患者在表2中表示為患者134。表權利要求
1.一種治療患有原發于卵巢的癌癥的患者的方法，所述方法包括向所述患者給予有效量的結合物，所述結合物包含(a)抗癌劑；和(b)多肽，包含與TFFYGGSRGKRNNFKTEEY(SEQID NO :97)具有至少80%同一性的氨基酸序列，其中，所述多肽結合至所述抗癌劑。
2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述抗癌劑選自由紫杉醇、長春堿、長春新堿、依托泊苷、多柔比星、環磷酰胺、泰索帝、美法侖、和苯丁酸氮芥組成的組。
3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述抗癌劑為紫杉醇。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述多肽包含與SEQID N0:97的序列具有至少90%同一性的氨基酸序列。
5.根據權利要求4所述的方法，其中，所述多肽包含SEQID NO :97的氨基酸序列。
6.根據權利要求5所述的方法，其中，所述多肽由SEQID NO :97的氨基酸序列組成。
7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中，所述結合物以lOOmg/m2至2000mg/m2 的劑量給予。
8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述結合物以300mg/m2至1000mg/m2的劑量給予。
9.根據權利要求1-8中任一項所述的方法，其中，所述結合物是靜脈內給予。
10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其中，所述癌癥已轉移至卵巢外的至少一個部位，并且所述方法對治療所述轉移有效。
11.根據權利要求10所述的方法，其中，所述癌癥已轉移至所述患者的腦外的至少一個部位。
12.根據權利要求10所述的方法，其中，所述癌癥已轉移至所述患者的骨盆外。
13.根據權利要求10所述的方法，其中，所述癌癥已轉移至腦、肺、肝、或它們的組合。
14.根據權利要求10所述的方法，其中，所述癌癥已轉移至淋巴系統。
15.根據權利要求1-14中任一項所述的方法，其中，所述癌癥包含測定為具有耐藥性的細胞。
16.根據權利要求15所述的方法，其中，所述癌癥細胞表達MDRl。
17.根據權利要求15-16所述的方法，其中，所述細胞對紫杉醇治療或用紫杉烷衍生物治療具有耐受性。
18.根據權利要求1-17中任一項所述的方法，其中，所述方法還包括給予第二抗癌治療。
19.根據權利要求1-18中任一項所述的方法，其中，所述患者之前已接受另一種化療劑。
20.根據權利要求19所述的方法，其中，所述癌癥對所述之前已接受的化療劑具有耐受性。
21.根據權利要求19或20所述的方法，其中，所述之前已接受的化療劑為紫杉醇、鉬基藥劑、烷化劑、或它們的組合。
22.根據權利要求21所述的方法，其中，所述鉬基藥劑為卡鉬或順鉬。
23.根據權利要求21或22所述的方法，其中，所述患者之前已接受卡鉬-紫杉醇聯合治療。
24.根據權利要求1-21中任一項所述的方法，其中，所述癌癥為卵巢上皮癌或卵巢腺癌、或其轉移形式。
全文摘要
用抗癌劑與血管肽-2多肽類似物(即，包含與Seq.ID NO97至少80％同一的氨基酸序列的多肽)的結合物治療卵巢癌。這樣的治療包括在治療轉移性卵巢癌和治療之前已表現出對標準化療劑具有耐受性的患者中的應用。優選的抗癌劑包括紫杉烷類而優選的結合物為ANG1005，包含與肽血管肽-2結合的三分子的紫杉醇的結合物。
文檔編號A61K47/48GK102510759SQ201080027564
公開日2012年6月20日 申請日期2010年4月20日 優先權日2009年4月20日
發明者米歇爾·德默勒, 讓-保羅·卡斯泰恩, 貝蒂·勞倫斯 申請人:安吉奧開米公司