專利名稱：基于a-m模型的中藥新藥發(fā)現(xiàn)策略和藥物及其組合的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥新藥研發(fā)策略和基于該方法發(fā)現(xiàn)的藥物組份及組合物，這些藥物涉及調(diào)節(jié)胃腸道機能和抗真菌活性，具體講就是基于藥物吸收一代謝模型從中藥方劑金鈴子散、艾葉散和草藥博落回中篩選出有效部位的方法與用途。極大的降低了中藥藥效物質(zhì)基礎研究的難度，提高了中藥新藥發(fā)現(xiàn)的效率。
背景技術：
藥物研究是一個復雜的過程，可以有多種不同方法、技術和策略，但都有一個共同的目標，即開發(fā)新的治療疾病的藥物。數(shù)千年的臨床實踐已經(jīng)證實了中藥(包括復方)在臨床上的確切療效，但是由于其化學成份組成復雜性，中藥藥效物質(zhì)基礎的研究一直以米難獲突破。目前主流的中藥物質(zhì)基礎研究方法仍以中藥化學、天然藥物化學方法為主，根據(jù)成分極性分段對有效成分進行提取、分離，采用現(xiàn)代藥理模型進行體內(nèi)外活性篩選，對活性物質(zhì)進行體內(nèi)實驗，這種方法已經(jīng)不能高效、便利的發(fā)現(xiàn)新藥和新先導化合物。對于中藥新藥開發(fā)的難點在于適合中藥自身特點的研發(fā)思路和策略，尋找新的研究方法和策略比具體的新技術和方案意義重大影響更加深遠。新藥設計是指先導化合物的發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化的過程。新藥的設計是整個新藥創(chuàng)制流程中的關鍵步驟。是否能夠找到合適的候選藥物，則決定著該藥后期開發(fā)的風險和最終能否上市注冊為新藥。經(jīng)典的天然產(chǎn)物設計，尤其是一些中藥有效成分或已上市的天然藥物是通過系統(tǒng)的提取和分離，將組分或單體富集，建立合適的體外活性評價模型系統(tǒng)進行評價， 通過藥物化學技術對其進一步結(jié)構(gòu)改造，以求獲得更高活性、更低毒性的藥物候選物。這一方法曾經(jīng)推動我國中藥現(xiàn)代化的進程。近百年來國內(nèi)外科學家從中藥中先后分離報道了幾千個單體化合物，并對其中許多成分進行過生物活性研究，其中一些活性成分已被廣泛用于臨床。在傳統(tǒng)的藥物沒計流程中，對于候選化合物，最關心的往往是對于特定靶點的活性以及對于相關靶點的選擇性。至于這個化合物能否在腸道中溶解，能否通過腸道的黏膜細胞進入循環(huán)系統(tǒng)，在肝臟的代謝和轉(zhuǎn)化情況，能否通過血液循環(huán)到達有效部位等問題，人們極少關注。此外，化合物是否能夠在體內(nèi)對靶點保持足夠長的藥效而不被肝臟和腎臟降解或排出也是值得關注的問題。組分中藥是以中醫(yī)藥理論為基礎，遵循方劑的配伍理論與原則，有效組分、有效部位或者提取物配伍而成的現(xiàn)代中藥；是運用植物化學、現(xiàn)代分析技術等，將各種中藥材的有效組分、協(xié)同有效組分、有效部位或者定向提取物等都進行分析、研究，基本搞清楚物質(zhì)基礎，然后按照中醫(yī)辨證施治的原則，進行有效成分的組合和配方，成為現(xiàn)代新藥。除少數(shù)局部用藥物外，藥物要發(fā)生藥效作用，大多數(shù)口服藥物要通過胃腸道吸收進入血液循環(huán)達到靶組織部位發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。因此，中藥藥效作用物質(zhì)基礎首先是能通被腸道吸收進入血液循環(huán)系統(tǒng)的成分，而且這些成分還必須有較好的藥代特性。前期研究表明，中藥成分復雜，單一一味中藥成分多達千種，復方配伍之后成分就更多更加復雜；但是這些成分中能被吸收入血的占少數(shù)，吸收入血的成分中有一些也不具備合適的藥代特性而發(fā)揮藥效作用。所以，基于A-M模型的中藥藥效物質(zhì)基礎研究大大降低了研究的難度艾葉為菊科植物艾的干燥葉，能散寒止痛，溫經(jīng)止血。用于少腹冷痛，經(jīng)寒不調(diào)，溫經(jīng)上血；廣泛用于婦科溫經(jīng)上痛和止血。艾葉散(《圣惠》卷七十九)主治產(chǎn)后膿血痢久不愈，不思飲食，漸加羸瘦。艾葉散組成艾葉1兩(微炒)，黃柏3分(涂蜜微炙，銼)，赤芍藥3分，黃連3分(去須，微炒)，地榆3分(挫)，甘草半兩(炙微赤，銼)，干姜半兩(炮裂，銼)，阿膠3分(搗碎，炒令黃燥)。金鈴散(《素問病機氣宜保命集》卷中金鈴子散，金鈴子，玄胡各1兩)疏肝泄熱， 行氣止痛。治肝氣不舒，氣郁化火，致患心腹脅肋諸痛，臨床上主要用于治療肝郁化火諸痛證的代表方劑。博落回(Macleaya cordata)是罌粟科博落回屬的一種多年生草本植物，全草帶根入藥，有大毒，可治跌打損傷、惡瘡和蜂螫傷等。由于含有多種生物堿，博落回提取物還可用為農(nóng)藥和抗菌消炎藥。上述三者(艾葉散、金鈴子散和博落回)的應用一直以來都是停留在傳統(tǒng)的藥物形態(tài)(直接藥材入藥)，藥效物質(zhì)基礎不清楚，臨床療效尚無大規(guī)模的詢證醫(yī)學的證據(jù)來支持。現(xiàn)代科技的發(fā)展要求我們來挖掘和豐富傳統(tǒng)中藥的內(nèi)涵，三氧化二砷(俗稱砒霜)治療急性早幼粒細胞性白血病(APL)分子機制和臨床循證醫(yī)學研究便是一個很好的例證。因此，建立適合于中藥新藥的基于A-M模型的新藥發(fā)現(xiàn)策略對于指導新藥發(fā)現(xiàn)十分必要，同時在基本搞清藥效物質(zhì)基礎上進行中藥新藥開發(fā)還有利于傳統(tǒng)中藥被國際社會接受、進入國際市場。為了有效的進行中藥藥效物質(zhì)基礎研究加快中藥新藥開發(fā)，本發(fā)明人提供了一種新的適合于復雜體系中藥的研究策略利方法，并基于這一方法進行了部分方劑和草藥的研本發(fā)明人還發(fā)明了針對胃腸機能調(diào)節(jié)和抗真菌作用的中藥(包括中藥組合物)、 草藥(包括草藥組合物)及有效組份(包括有效組份組合物)。

發(fā)明內(nèi)容
技術問題本發(fā)明目的在于提供一種適合中藥新藥發(fā)現(xiàn)的方法和策略；以及基于該方法的針對胃腸機能調(diào)節(jié)和抗真菌作用的中藥(包括中藥組合物)、草藥(包括草藥組合物)及有效組份(包括有效組份組合物)。技術方案本發(fā)明提供一種適合中藥新藥發(fā)現(xiàn)的方法和策略。其特征在于基于藥物的吸收和代謝(A-M)從中藥藥效物質(zhì)基礎出發(fā)，以此為突破點和基礎指導中藥新藥開發(fā)和設計新藥。簡述如下1.制備A-M模型，并對模型的性能進行驗證2.將傳統(tǒng)中藥方劑或者適合的給藥形式(包括中藥提取物)加到A-M系統(tǒng)中3.分析和定量A-M系統(tǒng)中被吸收和代謝組分4.對吸收和代謝組分進行與方劑功能主治相關聯(lián)的活性確認和比較
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5.確定方劑的功能主治相關活性成分的種類及種類間的數(shù)量關系、即確定藥效物質(zhì)群6.以藥效物質(zhì)群為目標，采用現(xiàn)代化學定向提取、分離純化或其它方法制備7.通過工業(yè)化制備藥效物質(zhì)群后，進行候選藥物新藥系統(tǒng)研究。本發(fā)明提供了系列方劑和中草藥在基于上述方法篩選和發(fā)現(xiàn)的新中藥組合物 (包括中藥有效組分及組合物、中藥有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)，驗證了基于A-M模型的中藥新藥發(fā)現(xiàn)策略和方法的可行性。詳述如下1.按照常規(guī)方法制備外翻腸囊和肝微粒體肝微粒體的制各①健康Wistar大鼠禁食Mh，脫頸處死；②打開開腹腔，細塑料管插入肝門靜脈，通過蠕動泵將冰冷的KCL溶液灌洗肝臟至土黃色；③然后摘除肝臟，加入磷酸緩沖液攪勻，勻漿；取肝勻漿組織于4°C，IOOOOXg離心20min，取上清液，105000 Xg離心兩次，分別為60min和20min，分別得沉淀，為微粒體。 將微粒體板重懸于磷酸緩沖液中，分裝于-80°C保存，測定肝微粒體蛋白含量備用。腸外翻球囊的制備參照大鼠經(jīng)典腸外翻實驗[WilsonT H,Wiseman G. The use of sacs of everted small intestine for the study of the transference of substances from the mucosal to the serosal surface [J]. J Physiol, 1954,123(1) :116]大鼠，實驗前 12h 禁食，自由飲水。脫頸處死，打開腹腔，迅速取出約IOcm長的十二指腸、空腸、回腸、7cm結(jié)腸各段。放入冰Tyrode液中，沖洗，剝離腸系膜和脂肪。將腸管翻轉(zhuǎn)，結(jié)扎腸段下端，使之形成囊狀腸管。2. A-M體系構(gòu)建和藥物加入向上述腸囊內(nèi)注入2mL特定濃度肝微粒體的Tyrode液，作為代謝體系。將其放入已有Tyrode液的麥氏浴槽中，實驗過程中保持37°C恒溫，并向浴槽中通入95% O2/5% CO2. 平衡5min后，注入配制好的不同濃度的藥液(艾葉散、金鈴子散和博落回提取物)50mL，在給藥后不同時間點從腸囊內(nèi)取樣。腸管球囊作為離體腸吸收體系。3. A-M體系中藥物吸收和代謝組分分析取樣在4°C條件下離心或者其他適當方法處理，HPLC-LC分析吸收成分和代謝成分的種類和數(shù)量，并確定主要相關組分的藥代參數(shù)。4.對吸收和代謝組分進行與方劑功能主治相關聯(lián)的活性確認和比較艾葉散的主要功能散寒止痛、溫經(jīng)止血，主治少腹冷痛、經(jīng)寒不調(diào)，為婦科痛證之要藥。金鈴子散是治療肝郁化火諸痛證的代表方劑，疏肝泄熱，活血止痛。用于胸腹脅肋疼痛，也可用于痛經(jīng)和疝痛以及胃及十二指腸潰瘍、慢性胃炎、慢性肝炎、膽囊炎等屬肝郁化火者。博落回功能散瘀、祛風、解毒、止痛、殺蟲。臨床曾用于各種致病微生物所致的感染。 艾葉散和金鈴子散在臨床上均有用于胃腸疾病的治療，因此確定調(diào)節(jié)胃腸機能作為其主要目標活性、進行離體和在體試驗篩選和確認藥效組分群(或部位)。觀察主要艾葉散和金鈴子散有效組分群對離體大鼠胃條平滑肌自發(fā)性收縮活動以及賢上腺素、去甲賢上腺素引起離體鼠胃條平滑肌舒張的影響，同時還觀察各藥物對5-羥色胺引起大鼠胃條收縮的影響。 大鼠禁食48h，用鐵棒猛擊枕骨致昏迷后，立即剖開腹腔，取出胃立即放入克氏液中，沿胃小彎剪開胃腔，去除胃粘膜，并在胃底部橫向剪下胃肌條，將胃肌條放入37攝氏度的氏液中并通以C0295 %和5 % 02，穩(wěn)定20min后，用二道生理記錄儀記錄正常值后，分別加入不同劑量的上述組分，記錄腸道平滑肌在加入藥物后收縮活動。
觀察艾葉散和金鈴子散主要有效組分群對小鼠鎮(zhèn)痛和抗炎作用。。抗炎實驗小鼠按體重隨機分成正常對照組，艾葉散和金鈴子散有效組分群大、中、 小3個劑量組(相當于6. 8g生藥/kg，3. 4g生藥/kg和1. 7g生藥/kg)，各組每日經(jīng)口給予相應的藥物一次(0.2mL/10g)，空白組給予相同劑量的生理鹽水。連續(xù)給藥3天。并于第3 天藥后40min，各鼠由尾靜脈注入0. 5%伊文斯藍0. lml/10g,隨即腹腔內(nèi)注射0. 6%的HAc 溶液0. lml/10g, 30min后將小鼠脫頸椎處死，腹腔內(nèi)注入生理鹽水5mL，輕揉數(shù)下，剪開腹部，用吸管吸出洗滌液，3000r. min離心15min，取上清液于590nm處測定吸光度，以OD值高低表示抗炎作用的強弱。鎮(zhèn)痛實驗動物分組與給藥與上相同，在對小鼠腹腔內(nèi)注射0. 6 %的HAc溶液 0. lml/10g以后，觀察20分鐘內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應的次數(shù)，以腹腔內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高為陽性指標。并計算藥物對扭體反應得抑制率。
權(quán)利要求
1.基于藥物吸收-代謝(A-M)模型的適合中藥新藥發(fā)現(xiàn)和新藥設計的方法和策略。
2.基于權(quán)利要求1所述的方法的川楝子提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、延胡索提取物(有效組分及組合物、 有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、金鈴子散提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)之一新藥或者新藥組合物。
3.基于權(quán)利要求1所述的方法的艾葉提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、黃柏提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、黃連提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、地榆提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)、赤芍提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)艾葉散提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)之一新藥或者新藥組合物。
4.基于權(quán)利要求1所述的方法的博落回提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
5.用于預防和治療胃腸疾病的組合物，其中所含權(quán)利要求2和3任何一項或幾項所述的活性提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
6.用于預防和治療真菌感染相關疾病的組合物，其中所含權(quán)利要求4所述任一的活性提取物(有效組分及組合物、有效部位及組合物、特定提取物及組合物或上述三者的配伍組合物)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥新藥研發(fā)策略和基于該方法發(fā)現(xiàn)的藥物組份及組合物，這些藥物涉及調(diào)節(jié)胃腸道機能和抗真菌活性，具體講就是基于藥物吸收一代謝模型從中藥方劑金鈴子散、艾葉散和中草藥博落回中篩選出有效部位的方法與用途。基于本發(fā)明的中藥新藥具有藥效物質(zhì)基礎基本明確的特點，因此質(zhì)量控制就有針對性很，能被國際市場廣泛接受。
文檔編號A61P31/10GK102445513SQ201110282220
公開日2012年5月9日 申請日期2011年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月22日
發(fā)明者成龍 申請人:成龍