專利名稱：野山椒根莖總生物堿的提取方法和口腔藥用組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及野山椒根莖總生物堿及其提取方法，以該總生物堿作為活性成分的口腔藥用組合物，及其在治療和(或)預防蟲牙、齲齒和牙痛的藥物制備中的用途。
背景技術：
目前，可用于治療蟲牙、齲齒和牙痛的藥物以及用于預防蟲牙、齲齒和牙痛的口腔用品(如牙膏、漱口水、口香糖等)較多。但目前的藥物基本上只是對、齲齒和牙痛的發病起抑制作用，解決不了反復發病的問題，也就是只能治標不能治本，對于較嚴重的情況，一般是用手術處理，但仍然存在復發的問題。因此，一但患了、齲齒和牙痛，即使作過藥物或手術治療，平時都需要在飲食上注意，才能盡可能地減少牙病的復發。這是目前蟲牙患者特別苦惱的事。而對于預防、齲齒和牙痛的各種口腔用品，在實際應用中，能夠真正起到預防作用已經很不錯了，能起到治療作用的還未見應用。野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)傣族語麻獻，在漢語中也稱為蕓香科植物野花椒，別名麻感?！段麟p版納傣藥志》所述的藥材基源生態環境生于海拔500m以下的灌叢中，亦有栽培。資源分布分布于云南西雙版納等地。采收和儲藏7-8月采收成熟的果實，除去雜質，曬干根也可入藥?！吨腥A本草傣藥卷》所述性味辛；溫；有小毒；歸經胃經；性味根味微麻，氣香，性熱，入火、風塔。功能主治根、莖通氣除寒，解毒，消腫止痛用于胃寒腹痛，牙痛，風濕痹痛?，F有技術中已經被鑒定的存在于野山椒根莖中的堿類化合物有根含生物堿茵芋堿(skimmianine)，加錫彌羅果堿(edulinine)，左旋-7-去羥基日巴里尼定(ribalinine)， 阿瑞羅甫堿(araliopsine) ο根皮含二氫白屈菜紅堿(dihydrochelerythrine)，氧化白屈菜紅堿(oxychelerythrine), N-乙酉先基番蕩枝堿(N-acetylanonaine), Y -崖椒堿 (Y -fagarine),白屈菜紅堿(chelerythrine),木蘭花堿(magnoflorine), 8_ 甲氧基—N—甲基二甲吡喃并喹啉酮(8-methoxy-N-methylflindersine)和木脂素芝麻素(sesamine)，還含 β-谷甾醇(β-sitosterol) ο野山椒根莖提取物同屬植物的化學成分主要有生物堿，酰胺，木脂素，揮發油等， 并篩選出具有溫中止痛，殺蟲止癢等藥理作用的活性成分，但對本種的化學成分研究尚未見到詳細報道，只對其化學成分進行了初步研究，分離出10種化合物其中的茵芋堿 (skimmianine)，加錫彌羅果堿(edulinine)，左旋-7-去羥基日巴里尼定(ribalinine)， 阿 卷羅甫堿(araliopsine)，二 S白屈菜紅堿(dihydrochelerythrine)，氧化白屈菜紅堿(oxychelerythrine), N-乙酉先基番蕩枝堿(N-acetylanonaine), Y _崖椒堿 (Y-fagarine),白屈菜紅堿(chelerythrine),木蘭花堿(magnoflorine)為已知生物堿，其余3個分別為8-甲氧基-N-甲基二甲吡喃并喹啉酮(8-methoxy-N-methylf lindersine) 和木脂素芝麻素(sesamine)，還含β-谷留醇(β-sitosterol)，只是經過化學和光譜分析鑒定。茵芋堿(skimmianine)，加錫彌羅果堿(edulinine)為已知生物堿，具有較強的鎮痛效應和抑制神經中樞作用，具有與溫中止痛，殺蟲止癢活性相關的內酰氨結構。因此改進野山椒根莖提取物中的總生物堿的提取和純化工藝，對于更好的利用野山椒根莖提取物總生物堿具有非常重要的意義。

發明內容
本發明的目的之一是提供以總生物堿堿類化合物為主要成分野山椒根莖提取物；本發明還提供上述野山椒根莖總生物堿的制備方法；本發明還提供包括這種野山椒根莖總生物堿以及藥學上可接受的載體或賦形劑的口腔藥用組合物；本發明還提供上述野山椒根莖總生物堿在治療和(或)預防蟲牙、齲齒和牙痛的藥物制備中的用途以及在口腔用品中的應用。本發明提供的一種野山椒根莖總生物堿的提取方法，是指采用任何方法從植物野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)中提取獲得的，以生物堿堿類化合物作為主要成分 (或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根莖生物堿是脂溶性的，通過親脂性有機溶劑，從野山椒根莖中提取獲得的堿類化合物之總重量占提取物總重量的50% …90%，提取物中各種堿類化合物之間的含量比例可以與天然植物的含量比例一致，也可以不一致，所述的堿類化合物是指具有化學結構，屬于堿類的化合物以及其它形式的衍生物。所述的野山椒根莖作原料，采用含水或不含水的親脂性有機溶劑作提取溶劑，所述的提取及純化處理過程包括①取野山椒根莖藥材，粉碎，過篩，收集20…40目粒度的粗粉，得A品備用；②向A品中加入A品總量5⑴10倍量的60%…80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉24h ；③在35°C下熱回流，用索氏提取器反復提取3…5次，每次0. 5 - 3小時，靜置、過濾，合并濾液，澄清，得澄明提取液；④在25°C和2MPa條件下，采用平均孔徑為0. 25pm的膜對的上述澄明提取液進行微濾，滲透通量為400⑴650L/h · m3 ；⑤再將濾過液依次通過20萬分子量超濾及200分子量納濾，棄去20萬分子量以上膜上液及200分子量納濾膜下液，收集納濾膜上液，濃縮至相對密度0.9…1.40，得濃縮液；⑥將60 %…80 %乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B
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BFI ；⑦kphadex LH-20柱色譜純化選用kphadex LH-20柱，進行色譜純化，上樣前， 柱用兩倍柱容積的80%乙醇平衡；
⑧洗脫液先為60%乙醇，洗脫，繼而用70%乙醇洗脫，再用80%乙醇洗脫，收集 80%乙醇洗脫液；⑨濃縮得干燥品，用丙酮處理，得淡黃色粉末；⑩提取少量的總生物堿液，用kphadex LH_20吸附柱色譜鑒定生物堿有效成分。所述的親脂性有機溶劑為含水或不含水的甲醇、乙醇、丙酮之一種或幾種任意比例的混合物，其中乙醇含量為80%。所述的吸附柱色譜中的吸附劑為硅膠或氧化鋁，檢測的標準品為喹啉。在上述的總生物堿的提取方法中，較好的步驟②是向A品中加入A品總量8…10 倍量的80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉Mh ；本發明的另一方面是提供用于治療和(或)預防蟲牙、齲齒和牙痛的口腔藥用組合物，其包括有效治療量的野山椒根莖總生物堿以及藥學上可接受的載體或賦形劑的口腔藥用組合物。所述的包括野山椒根莖總生物堿以及藥學上可接受的載體或賦形劑，將提取物總生物堿按常規制劑工藝制成臨床用的噴劑、膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑。與現有技術比較，本發明是采用野山椒根莖為原料制成藥物及口腔用品，制作簡單，對蟲牙、齲齒和牙痛的治療和預防效果好。1、易于制作、應用；2、其藥物對蟲牙、齲齒和牙痛的治療效果好，痊愈率高，基本不復發3、其口腔用品不但預防效果好，還可起到比較好的治療作用的特點。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步詳細說明本發明提供的一種野山椒根莖總生物堿的提取方法，是指采用任何方法從植物野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)中提取獲得的，以生物堿堿類化合物作為主要成分 (或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根莖生物堿是脂溶性的，通過親脂性有機溶劑，從野山椒根莖中提取獲得的堿類化合物之總重量占提取物總重量的50% …90%，提取物中各種堿類化合物之間的含量比例可以與天然植物的含量比例一致，也可以不一致，所述的堿類化合物是指具有化學結構，屬于堿類的化合物以及其它形式的衍生物。實施例1按以下步驟進行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入56Kg的70%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；野山椒根莖原料經粗粉碎、浸潤后，由于溶劑的流動浸出，促使固、液兩相產生較高的相對運動速度，擴散邊界層變得更薄，加快了藥材中溶質向溶劑中的擴散，提高浸出效率。③在35°C下熱回流，用索氏提取器反復提取3…5次，每次0. 5…3小時，靜置、過濾，合并濾液，澄清，得澄明提取液；
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④在25°C和2MPa條件下，采用平均孔徑為0. 25pm的膜對的上述澄明提取液進行微濾，滲透通量為400⑴650L/h · m3 ；⑤再將濾過液依次通過20萬分子量超濾及200分子量納濾，棄去20萬分子量以上膜上液及200分子量納濾膜下液，收集納濾膜上液，濃縮至相對密度0.9…1.40，得濃縮液；由于浸出溫度較煎煮法低，既可預防藥材內淀粉、膠體物質過度糊化、膨脹，影響溶質滲出，又可避免因其大量浸出而造成分離、濃縮困難；⑥將70%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；⑦kphadex LH-20柱色譜純化選用kphadex LH-20柱，進行色譜純化，上樣前， 柱用兩倍柱容積的80%乙醇平衡；野山椒根莖總生物堿提取液中尚存在大量的靴質、蛋白質、淀粉、細菌、熱原等大分子物質以及許多微粒、亞微粒和絮狀物等，它們不但沒有藥效作用，而且嚴重影響產品質量，普通分離方法(如沉降、過濾等)不僅難以除盡，而且容易損耗有效成分甚至浪費大量的有機溶媒。選擇合適的超濾膜可將上述雜質有效除去，而又不損失有效成分、提高消毒液的澄明度和穩定性。⑧洗脫液先為60 %乙醇，洗脫，繼而用70 %乙醇洗脫，再用80 %乙醇洗脫，收集 80%乙醇洗脫液；⑨濃縮得干燥品，用丙酮處理，得淡黃色粉末；⑩提取少量的總生物堿液，用kphadex LH-20吸附柱色譜鑒定生物堿有效成分。羥丙基葡聚糖凝膠kphadeX LH 一 20可在極性有機溶劑或他們與水組成的混合溶劑中膨潤使用。苯環上所帶的一 OH越多，極性越強，在kphadex LH-20上滯留的時間越長，堿性物質比酸性或中性物質在kphadex LH-20上滯留的時間更長。故本項目的中野山椒根莖總生物堿能很好地與酸性、中性成分進行分離。按常規膠囊劑制備工藝，取提取物總生物堿90Kg，預膠化淀粉適量，將總生物堿粉碎過80目篩，備用，準確稱取處方量的總生物堿及預膠化淀粉，混合均勻，填充于空心膠囊殼中，得100萬粒膠囊，每粒含總生物堿90mg。口服，每日2次，每次2粒。實施例2按以下步驟進行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入50Kg的70%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實施例1，將70%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；濃縮得干燥品，用丙酮處理，得即得提取物總生物堿。按常規軟膠囊劑制備工藝，取提取物總生物堿90Kg，植物油適量，軟膠囊囊材適量，將總生物堿粉碎過80目篩，備用，準確稱取處方量的總生物堿，加植物油適量，使總生物堿混懸在植物油中或與植物油混合成稠膏狀，采用軋制法，填充于較膠囊中，得100萬粒軟膠囊，每粒含總生物堿90mg。口服每日2次，每次2粒。
實施例3按以下步驟進行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入63Kg的80 %乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實施例1，將80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；濃縮得干燥品，用丙酮處理，得即得提取物總生物堿。按常規片劑制備工藝，取提取物總生物堿90Kg，淀粉48Kg，微晶纖維素33Kg，羧甲基淀粉鈉6. 6Kg，10% PVP乙醇液適量，硬脂酸鎂2. Ig，將總生物堿粉碎過80目蹄，備用， 準確稱取處方量的總生物堿、淀粉及微晶纖維素，混勻，加10% PVP乙醇液，制軟材，將軟材用16…20目蹄，制粒，40…80°C干燥，加入處方量的羧甲基淀粉鈉及硬脂酸鎂，混勻，20目篩整粒，測顆粒含量，確定片重，壓片，包衣，得100萬片，每片含總生物堿90mg?？诜?，每日 2次，每次2片。實施例4按以下步驟進行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入70Kg的80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實施例1，將80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；濃縮得干燥品，用丙酮處理，得即得提取物總生物堿。按常規顆粒劑制備工藝，取提取物總生物堿180Kg，可溶性淀粉88Kg，糖精鈉 2. 2Kg, 10% PVP乙醇液適量，將總生物堿粉碎過80目篩，備用，準確稱取處方量的總生物堿、可溶性淀粉及糖精鈉，混勻，加10% PVP乙醇液，制軟材，將軟材用16 - 20目篩，制粒， 40…80°C干燥，20目篩整粒，測顆粒含量，確定每袋裝量，得100萬袋顆粒，每袋含總生物堿 ISOmgo熱水沖服，每日2次，每次1袋。實施例5按以下步驟進行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入70Kg的80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實施例1，將80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；按常規噴劑制備工藝，取提取物總生物堿50Kg的濾液，裝入包裝瓶內或帶有噴射頭的包裝瓶內，每瓶100g，得到500瓶本發明的另一方面是提供用于治療和(或)預防蟲牙、齲齒和牙痛的口腔藥用組合物，其包括有效治療量的野山椒根莖總生物堿以及藥學上可接受的載體或賦形劑的口腔藥用組合物。
本發明的口腔藥用組合物所述的包括野山椒根莖總生物堿以及藥學上可接受的載體或賦形劑，將提取物總生物堿按常規制劑工藝制成臨床用的噴劑、膠囊劑、軟膠囊劑、 片劑、顆粒劑。本發明的臨床試驗數據如下一、急性經口毒性試驗a、受試物——將樣品用蒸餾水配制成250mg/ml ；b、試驗動物——小鼠20只c、飼料——全價營養鼠料d、試驗方法——將小鼠按性別分為兩組，每組十只，禁食過夜后(自由飲水)一次經口灌胃，劑量5000mg/Kg，灌胃量0. 4ml/20go染毒后，繼續禁食3小時并觀察14天，記錄各種動物中毒反應和死亡數，依據化學物質急性毒性分級標準判斷該受試物的毒性級別。二、多次皮膚刺激性試驗a、試驗動物——白色家兔四只，均為雄性，體重2kg⑴3kgob、飼料——全價營養兔料；C、試驗方法正式實驗前Mh，使用彎頭剪刀將動物背部脊柱兩側毛剪掉，去毛范圍3cmX 3cm。正式實驗——取受試物0. 5ml涂抹在動物左側去毛皮膚上(另一側作對照)，涂抹面積2. 5cmX2. 5cm，每天涂抹一次，連續涂抹14天。從第二天開始每次涂抹前剪毛，并用清水清除殘留受試物，1小時后觀察動物皮膚反應，依據《化妝品衛生規范》評分。三、結果a、急性經口毒性試驗附表為本發明的噴劑對小鼠急性經口毒性試驗結果
權利要求
1.一種野山椒根莖總生物堿的提取方法和口腔藥用組合物，是指采用任何方法從植物野山椒根莖(Zanthoxylum simulans Hance)中提取獲得的，以生物堿堿類化合物作為主要成分(或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根莖總生物堿是脂溶性的， 通過親脂性有機溶劑，從野山椒根莖中提取獲得的堿類化合物之總重量占提取物總重量的 50%…90%，提取物中各種堿類化合物之間的含量比例可以與天然植物的含量比例一致， 也可以不一致，所述的堿類化合物是指具有化學結構，屬于堿類化合物以及其它形式的衍生物。
2.根據權利要求1所述的總生物堿的提取方法，其特征在于，用野山椒根莖作原料，采用含水或不含水的親脂性有機溶劑作提取溶劑，所述的提取及純化處理過程包括①取野山椒根莖藥材，粉碎過篩，收集20…40目粒度的粗粉，得A品備用；②向A品中加入A品總量5⑴10倍量的60%…80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉24h ；③在35°C下熱回流，用索氏提取器反復提取3- 5次，每次0. 5…3小時，靜置、過濾， 合并濾液，澄清，得澄明提取液；④在25°C和條件下，采用平均孔徑為0.25pm的膜對的上述澄明提取液進行微濾， 滲透通量為400⑴650L/h · m3 ；⑤再將濾過液依次通過20萬分子量超濾及200分子量納濾，棄去20萬分子量以上膜上液及200分子量納濾膜下液，收集納濾膜上液，濃縮至相對密度0. 9…1. 40，得濃縮液；⑥將60%…80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；⑦kphadexLH-20柱色譜純化選用kphadex LH-20柱，進行色譜純化，上樣前，柱用兩倍柱容積的80%乙醇平衡；⑧洗脫液先用60%乙醇，洗脫，繼而用70%乙醇洗脫，再用80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液；⑨濃縮得干燥品，用丙酮處理，得淡黃色粉末；⑩提取少量的總生物堿液，用kphadexLH-20吸附柱色譜鑒定生物堿有效成分。
3.根據權利要求1、2所述的總生物堿的提取方法，其特征在于所述的親脂性有機溶劑為含水或不含水的甲醇、乙醇、丙酮之一種或幾種任意比例的混合物。
4.根據權利要求2所述的總生物堿的提取方法，其特征在于所述的所述的吸附柱色譜中的吸附劑為硅膠或氧化鋁，檢測的標準品為喹啉。
5.根據權利要求1所述總生物堿的口腔藥用組合物，其特征在于，包括野山椒根莖總生物堿以及藥學上可接受的載體或賦形劑，將提取物總生物堿按常規制劑工藝制成臨床用的噴劑、膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑。
全文摘要
用野山椒根莖總生物堿的提取方法和口腔藥用組合物，是以野山椒根莖為原料，取其提取物制成藥劑。本發明具有易于制作、應用；其藥物對蟲牙、齲齒和牙痛的治療效果好，痊愈率高，基本不復發；其口腔藥物不但預防效果好，還可起到比較好的治療作用的特點。
文檔編號A61K125/00GK102423358SQ20111036574
公開日2012年4月25日 申請日期2011年11月18日 優先權日2011年11月18日
發明者邱宏亮 申請人:邱宏亮