專利名稱：與腹部疾病有關(guān)的表位的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在腹部疾病的診斷和治療中有用的表位，包括診斷劑、治療劑、試劑盒和使用前述的方法。
背景技術(shù)：
腹部疾病由免疫介導(dǎo)的對(duì)飲食谷蛋白的超敏反應(yīng)造成。小麥、黑麥、大麥和有些情況下燕麥中的谷蛋白，在腹部疾病中是毒性的。谷蛋白由小麥中的α/β、Y和ω麥醇溶蛋白和低和高分子量(LMW和HMW)麥谷蛋白，大麥中的大麥醇溶蛋白，黑麥中的黑麥醇溶蛋白，和燕麥中的燕麥蛋白組成。大麥醇溶蛋白和黑麥醇溶蛋白與小麥中的Y和ω麥醇溶蛋白和低和高分子量麥谷蛋白是同源的。燕麥蛋白在種系發(fā)生上比大麥醇溶蛋白和黑麥醇溶蛋白離小麥谷蛋白更遠(yuǎn)。研究腹部疾病的目的是，通過(guò)定義刺激谷蛋白-特異性的T-細(xì)胞的肽來(lái)定義谷蛋白的有毒組分。谷蛋白表位的準(zhǔn)確定義，允許開(kāi)發(fā)新的診斷、治療、食物中的谷蛋白污染的測(cè)試和保留傳統(tǒng)谷蛋白的烹飪/烘烤質(zhì)量的無(wú)毒谷物。許多這樣的應(yīng)用，需要全面理解谷蛋白中的全部而不是最常見(jiàn)的有毒肽。與大約35%—般高加索人口相比，編碼HLA-DQ2和/或HLA-DQ8的基因存在于超過(guò)99%患有腹部疾病的個(gè)體中。谷蛋白-衍生的結(jié)合HLA-DQ2或HLA-DQ8的肽(表位)刺激特定的T-細(xì)胞。HLA-DQ2和DQ8-限制的表位包括“核心”9氨基酸序列，其直接與HLA-DQ2 或DQ8的肽結(jié)合溝和同源的T-細(xì)胞受體相互作用。通常，含有抗原中的所有獨(dú)特的10或 12聚體肽的重疊肽(通常15-20聚體)文庫(kù)，已經(jīng)用于繪制HLA II類-限制的T-細(xì)胞表位的圖譜。已知一系列的谷蛋白肽在腹部疾病中激活谷蛋白特異性的T-細(xì)胞。以前的研究已經(jīng)從選擇的谷蛋白或谷蛋白消化物中鑒別出了谷蛋白肽。從腸活組織檢查分離的T-細(xì)胞克隆和系，已經(jīng)用于篩選這些谷蛋白組分。酶(存在于腸組織中的組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(tTG))對(duì)谷蛋白的修飾相當(dāng)大地增加谷蛋白對(duì)谷蛋白特異性的T-細(xì)胞的刺激能力。谷蛋白-特異性的T-細(xì)胞的大多數(shù)已知表位，對(duì)應(yīng)著tTG-脫酰胺的谷蛋白肽。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶介導(dǎo)谷蛋白中的特定谷氨酰胺殘基的脫酰胺作用(生成谷氨酸)。對(duì)tTG的脫酰胺作用易感的含有谷氨酰胺的序列通常符合基序 QXPX 或 QXX (FYMILVW)，(見(jiàn) Vader W.等 2002J. Exp. Med. 195 :643-649, PCT WO 03/066079 和 Fleckenstein B. 2002. J Biol Chem277 :34109-16)。結(jié)合 HLA-DQ2 且對(duì) tTG 的脫酰胺作用易感的肽的基序，已經(jīng)用于預(yù)測(cè)某些谷蛋白表位(Vader等J Exp Med 2002J. Exp. Med. 195 :643-649,PCT WO 03/066079)。
但是，其它組已經(jīng)使用一系列11種重組α / β (11)和5種Y麥醇溶蛋白(Arentz-Hansen H.2000. J. Exp. Med. 191 :603-612, Arentz-Hansen H.2002. Gastroenterology 123 :803-809, PCT W002/083722)和純化的谷蛋白蛋白的裂解物(Sjostrom H.等 1998.Scand.J.Immunol. 48,111-115 ；van de Wal, Y.等 1998. J. Immunol. 161(4) :1585-1588 ；van de Wal，Y.等 1999.Eur. J. Immunol. 29 :3133-3139 ； Vader W.等 2002. Gastroenterology 122 1729-1737.)，鑒別出了谷蛋白-特異性的腸 T-細(xì)胞克隆和系的表位。我們的工作已利用了下述發(fā)現(xiàn)，即谷蛋白體內(nèi)攻擊誘導(dǎo)外周血中表達(dá)腸-歸巢的整聯(lián)蛋白(α4β7)的HLA-DQ2限制的⑶4+谷蛋白-特異性的T-細(xì)胞。該技術(shù)允許對(duì) A-麥醇溶蛋白(57-73QE65)中的優(yōu)勢(shì)表位繪制圖譜(Anderson, RP等2000. Nat. Med. 6 337-342.，W001/25793)。A-麥醇溶蛋白57-73 QE65對(duì)應(yīng)著使用腸T-細(xì)胞克隆鑒別出的 2 種重疊表位(Arentz-Hansen H. φ 2000. J. Exp. Med. 191 :603-612, Arentz-Hansen H.等 2002. Gastroenterology 123 :803-809)。體內(nèi)谷蛋白攻擊誘導(dǎo)谷蛋白特異性的T-細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是，可以消耗任意的食物，且得到的在血液中誘導(dǎo)的T-細(xì)胞(使用簡(jiǎn)單的過(guò)夜干擾素 YELISP0T測(cè)定，在外周血中定量的)，會(huì)受到內(nèi)源地存在的表位的體內(nèi)刺激，而不是由合成的或純化的抗原體外預(yù)處理。新鮮的多克隆的外周血T-細(xì)胞的過(guò)夜測(cè)定，也會(huì)避免與 T-細(xì)胞克隆的非常長(zhǎng)的純化有關(guān)的假象的可能性。有趣地，對(duì)幾種γ-麥醇溶蛋白表位特異性的T-細(xì)胞克隆和系(Arentz-Hansen H. 2002. Gastroenterology 123 :803-809,PCT W002/083722)與最初定義的 A-麥醇溶蛋白表位57-73QE65交叉反應(yīng)。盡管在α/β麥醇溶蛋白中存在相當(dāng)大的同源性，但早期的工作(見(jiàn)WO 03/104273)已經(jīng)表明，在HLA-DQ2-相關(guān)的腹部疾病中識(shí)別出的優(yōu)勢(shì)表位“Α-麥醇溶蛋白 57-73QE65”，是由Genbank中存在的少數(shù)α/β麥醇溶蛋白編碼的。

發(fā)明內(nèi)容
本研究的目的是開(kāi)發(fā)一種方法，其允許對(duì)谷蛋白中的所有T-細(xì)胞表位繪制圖譜。 使用小麥面包(每天200g，持續(xù)3天)或燕麥(每天100g，持續(xù)3天)的消耗，誘導(dǎo)外周血中的谷蛋白或燕麥蛋白-特異性的T-細(xì)胞(在開(kāi)始攻擊后6天收集)。使用谷蛋白和燕麥蛋白肽文庫(kù)，包括在小麥谷蛋白和/或燕麥的燕麥蛋白的每個(gè)Genbank登記項(xiàng)中包含的所有獨(dú)特的12聚體序列，在過(guò)夜干擾素Y ELISP0T測(cè)定中評(píng)價(jià)外周血單核細(xì)胞(PBMC)。通過(guò)確立一種算法，以設(shè)計(jì)跨過(guò)Genbank中的谷蛋白的所有潛在表位的肽(四22個(gè)20聚體包括所有14964獨(dú)特的9聚體-潛在的T-細(xì)胞表位)，將干擾素-Y ELISP0T測(cè)定修改成能用單一個(gè)體血液篩選超過(guò)1000種肽的高通量測(cè)定，并開(kāi)發(fā)用于分析和解釋產(chǎn)生的數(shù)據(jù)的生物信息學(xué)工具，可以實(shí)現(xiàn)該目的。將小麥谷蛋白肽的一系列的41個(gè)“超家族”鑒別為推定的T-細(xì)胞表位。超家族共有基序，其中允許有限水平的冗余。許多最有效的家族包括已知的T-細(xì)胞表位，其中包括以前描述的優(yōu)勢(shì)表位A-麥醇溶蛋白57-73。通過(guò)使用谷蛋白攻擊后的PBMC，對(duì)谷蛋白表位詳盡地繪制圖譜，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了與HLA-DQ2和HLA-DQ8有關(guān)的腹部疾病的一系列新的麥醇溶蛋白、LMW和HMW麥谷蛋白和燕麥蛋白表位。為HLA-DQ2和HLA-DQ8-相關(guān)的腹部疾病，鑒別了新表位。在識(shí)別的T-細(xì)胞表位的范圍方面，HLA-DQ2和HLA-DQ8相關(guān)的腹部疾病在遺傳上和功能上是不同的。另外， 在HLA-DQ2+腹部疾病受試者中進(jìn)行燕麥攻擊后，存在于燕麥的燕麥蛋白中的3種肽也會(huì)激活外周血單核細(xì)胞(PBMC)，首次定義了燕麥表位。體內(nèi)燕麥攻擊后由T-細(xì)胞識(shí)別的燕麥蛋白肽的鑒別，提供了觀察到的燕麥暴露后腹部疾病的偶然復(fù)發(fā)的分子基礎(chǔ)(Limdin KEA等 2003 Gut 52:1649-52)，并可以提供燕麥的預(yù)測(cè)性診斷或遺傳解毒作用的基礎(chǔ)。這里顯示的數(shù)據(jù)會(huì)提供詳盡的基礎(chǔ)，用于定義腹部疾病中常見(jiàn)的“優(yōu)勢(shì)的”和偶然的“較弱的”T-細(xì)胞表位。該信息是諸如診斷、食品測(cè)試、免疫治療和預(yù)防的功能應(yīng)用的平臺(tái)，和用于設(shè)計(jì)在改良的谷物中有用的無(wú)毒的谷蛋白的平臺(tái)。具體地，通過(guò)谷蛋白T細(xì)胞表位的詳盡繪圖，發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了具有類似的核心序歹Ij (例如，SEQ ID NO :1-199)和類似的延伸序列(例如，SEQ ID NO =200-1554, 1555-1655,1656-1671和1830-1903)的小麥麥醇溶蛋白和麥谷蛋白中的在HLA-DQ2+患者的腹部疾病中有生物活性的表位。發(fā)明人還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了下述物質(zhì)中的在HLA-DQ2+患者的腹部疾病中有生物活性的表位具有類似的核心序列(例如，SEQ ID NO =1684-1695)和類似的延伸序歹Ij (例如，SEQ ID NO 1672-1683、1696-1698和1764-1768)的燕麥的燕麥蛋白；黑麥的黑麥醇溶蛋白(SEQ ID NO :1769-1786)；和大麥的大麥醇溶蛋白(SEQ ID NO 1787-1829)。另外，在具有類似的核心序列(例如，SEQ ID NO 1699-1721)和類似的延伸序列(例如，SEQ ID NO :1722-1763和1908-1927)的小麥麥醇溶蛋白中已經(jīng)鑒別出了在 HLA-DQ8+患者的腹部疾病中有生物活性的表位。因而，該詳盡的繪圖提供了腹部疾病患者中由T細(xì)胞識(shí)別的優(yōu)勢(shì)表位。因而使用這些鑒別出的表位、其類似物和等價(jià)物中的任一種， 可以實(shí)現(xiàn)本文所述的本發(fā)明的方法。也就是說(shuō)，本發(fā)明的試劑包括這些表位。另外，已經(jīng)表明，表位的組合即“combitope”或包含2個(gè)或更多個(gè)表位的單個(gè)肽誘導(dǎo)與單獨(dú)的表位等價(jià)的反應(yīng)，從而表明幾個(gè)表位可以用于本發(fā)明的治療、診斷和其它用途。這樣的combitope 可以是例如SEQ ID NO :1906的形式。優(yōu)選地，本發(fā)明的試劑包括一個(gè)或多個(gè)具有在SEQ ID NO 1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、1672-1698、 1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 中列出的序列的表位，如本文定義的其類似物和等價(jià)物。優(yōu)選的在HLA-DQ8+患者的腹部疾病中有生物活性的試劑在序列中具有谷氨酰胺，其指示著對(duì)脫酰胺作用的易感性，其與也對(duì)脫酰胺作用易感的第二個(gè)谷氨酰胺由7個(gè)殘基隔開(kāi)(例如，如在QGSFQPSQQ中發(fā)現(xiàn)的)，其中在tTG的脫酰胺作用后，脫酰胺的序列是 HLA-DQ8的高親和力結(jié)合劑(HLA-DQ8的結(jié)合基序偏好在位置1和9處的谷氨酸)。在一個(gè)次優(yōu)選的實(shí)施方案中，試劑具有對(duì)脫酰胺作用易感的谷氨酰胺殘基，但是與對(duì)tTG-介導(dǎo)的脫酰胺作用易感的第二個(gè)谷氨酰胺之間沒(méi)有被7個(gè)殘基隔開(kāi)。因而，本發(fā)明提供了診斷個(gè)體中的腹部疾病或?qū)Ω共考膊〉囊赘行缘姆椒ǎ浒率霾襟E(a)使來(lái)自宿主的樣品接觸選自下述的試劑(i)表位，其包含選自SEQ ID NO :1-1927,優(yōu)選選自 SEQ ID NO 1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、 1623-1655、1656-1671、1672-1698、1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、 1895-1903、1906和1908-1927的氨基酸序列，或來(lái)自天然產(chǎn)生的谷蛋白的等價(jià)序列，(ii) (i)的類似物，其能被識(shí)別(i)的T細(xì)胞受體識(shí)別，在肽類似物的情況下，它的長(zhǎng)度不超過(guò)50個(gè)氨基酸，或(iii)產(chǎn)物，其包含兩種或更多種如⑴或(ii)中所定義的試劑；和(b)體外測(cè)定樣品中的T細(xì)胞是否識(shí)別該試劑，其中T細(xì)胞的識(shí)別指示著該個(gè)體患有或易感腹部疾病。術(shù)語(yǔ)“谷蛋白”包括小麥中的α/β、Y和ω麥醇溶蛋白，和低和高分子量(LMW 和HMW)麥谷蛋白，大麥中的大麥醇溶蛋白，黑麥中的黑麥醇溶蛋白，和燕麥中的燕麥蛋白。 本發(fā)明特別地涉及麥醇溶蛋白和燕麥蛋白。本發(fā)明也提供了試劑在制備用于診斷個(gè)體中的腹部疾病或?qū)Ω共考膊〉囊赘行缘姆椒ㄖ械脑\斷工具中的用途，所述方法包含，測(cè)定個(gè)體的T細(xì)胞是否識(shí)別該試劑，其中T 細(xì)胞的識(shí)別指示著該個(gè)體患有或易感腹部疾病。被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾的表位的發(fā)現(xiàn)，也允許基于測(cè)定是否存在針對(duì)這些表位的其它類型的免疫反應(yīng)來(lái)診斷腹部疾病。因而，本發(fā)明也提供了診斷個(gè)體中的腹部疾病或?qū)Ω共考膊〉囊赘行缘姆椒ǎ浒瑴y(cè)定來(lái)自個(gè)體的樣品中能結(jié)合表位的抗體的存在，其中抗體的存在指示著該個(gè)體患有或易感腹部疾病。本發(fā)明提供了測(cè)定組合物是否能造成腹部疾病的方法，其包含測(cè)定組合物中是否存在能被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾成如上定義的寡肽序列的蛋白，其中所述蛋白的存在指示著該組合物能造成腹部疾病。本發(fā)明也提供了突變的谷蛋白，其野生型序列可被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾成包含表位的序列，所述表位包含如上定義的序列，但是該突變的谷蛋白已經(jīng)被修飾，該修飾方式使它不含有可以被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾成包含這樣的包含所述序列的表位的序列的序列；或這樣的突變的谷蛋白的片段，其長(zhǎng)度為至少7個(gè)氨基酸(例如，至少7、8、9、10、11、12、13、14或 15個(gè)氨基酸長(zhǎng))，且其包含已經(jīng)以所述方式修飾的序列。本發(fā)明也提供了蛋白，其包含能結(jié)合T細(xì)胞受體的序列，該T細(xì)胞受體識(shí)別試劑， 且該序列能造成攜帶這樣的T細(xì)胞受體的T細(xì)胞的拮抗作用。另外，本發(fā)明提供了包含如上定義的蛋白的食物。另外，本發(fā)明提供了試劑，其任選地與載體相結(jié)合，用于通過(guò)使識(shí)別試劑的T細(xì)胞耐受來(lái)治療或預(yù)防腹部疾病的方法中。還提供了具有識(shí)別(i)的T細(xì)胞受體的T細(xì)胞的拮抗劑，其任選地與載體相結(jié)合，用于通過(guò)拮抗這樣的T細(xì)胞來(lái)治療或預(yù)防腹部疾病的方法中。另外，提供了結(jié)合抗體(其結(jié)合試劑)的試劑或類似物，其用于通過(guò)使個(gè)體耐受以預(yù)防這樣的抗體的生成來(lái)治療或預(yù)防腹部疾病的方法中。本發(fā)明也提供了預(yù)防或治療腹部疾病的方法，其包含給個(gè)體施用至少一種選自下述的試劑a)肽，其包含至少一個(gè)表位，所述表位包含選自SEQ ID N0:l-1927，優(yōu)選地選自 SEQ ID NO :1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、 1672-1698、1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 的序列，和其等價(jià)物；和b)a)的類似物，其能被識(shí)別a)的肽的T細(xì)胞受體識(shí)別，且其長(zhǎng)度不超過(guò)50個(gè)氨基酸。在有些實(shí)施方案中，試劑是HLA-DQ2-限制的、HLA-DQ8-限制的，或一種試劑是HLA-DQ2-限制的，且第二種試劑是HLA-DQ8-限制的。在有些實(shí)施方案中，試劑包含小麥表位、燕麥表位、黑麥表位、大麥表位或其任意組合，或者是作為單一試劑或者是作為復(fù)合試劑。本發(fā)明也提供了預(yù)防或治療腹部疾病的方法，其包含給個(gè)體施用藥物組合物，所述組合物包含如上定義的試劑和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明也提供了預(yù)防或治療腹部疾病的方法，其包含給個(gè)體施用藥物組合物，所述組合物包含具有如上定義的T細(xì)胞受體的T細(xì)胞的拮抗劑，和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明也提供了預(yù)防或治療腹部疾病的方法，其包含給個(gè)體施用組合物，以用于使個(gè)體耐受谷蛋白，以抑制生成對(duì)如上定義的試劑的T細(xì)胞或抗體反應(yīng)，該組合物包含如上定義的試劑。本發(fā)明也提供了預(yù)防或治療腹部疾病的方法，這通過(guò)下述來(lái)實(shí)現(xiàn)1)診斷個(gè)體的腹部疾病，這通過(guò)下述來(lái)實(shí)現(xiàn)a)使來(lái)自宿主的樣品接觸至少一種選自下述的試劑 i)肽，其包含至少一個(gè)表位，所述表位包含選自SEQ ID NO: 1-1927，優(yōu)選地選自SEQ ID NO 1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、1672-1698、 1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 的序列，和其等價(jià)物；和ii)i)的類似物，其能被識(shí)別i)的T細(xì)胞受體識(shí)別，且其長(zhǎng)度不超過(guò)50個(gè)氨基酸；和體外測(cè)定樣品中的T細(xì)胞是否識(shí)別該試劑；T細(xì)胞的識(shí)別指示著個(gè)體患有或易感腹部疾病；或b)施用如上定義的試劑，和體內(nèi)測(cè)定個(gè)體中的T細(xì)胞是否識(shí)別該試劑，其中試劑的識(shí)別指示著個(gè)體患有或易感腹部疾病；和2、給診斷為患有或易感腹部疾病的個(gè)體，施用用于預(yù)防或治療腹部疾病的治療劑。本發(fā)明也提供了如上定義的試劑，其任選地與載體相結(jié)合，以用于通過(guò)使識(shí)別試劑的T細(xì)胞耐受來(lái)治療或預(yù)防腹部疾病的方法中。本發(fā)明也提供了具有如上定義的T細(xì)胞受體的T細(xì)胞的拮抗劑，其任選地與載體相結(jié)合，以用于通過(guò)拮抗這樣的T細(xì)胞來(lái)治療或預(yù)防腹部疾病的方法中。本發(fā)明也提供了蛋白，其包含能結(jié)合T細(xì)胞受體的序列，該T細(xì)胞受體識(shí)別如上定義的試劑，且該序列能造成攜帶這樣的T細(xì)胞受體的T細(xì)胞的拮抗作用。本發(fā)明也提供了藥物組合物，其包含如上定義的試劑或拮抗劑，和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明也提供了組合物，其用于使個(gè)體耐受谷蛋白，以抑制生成對(duì)如上定義的試劑的T細(xì)胞或抗體反應(yīng)，該組合物包含如上定義的試劑。本發(fā)明也提供了組合物，其用于拮抗對(duì)如上定義的試劑的T細(xì)胞反應(yīng)，該組合物包含如上定義的拮抗劑。本發(fā)明也提供了突變的谷蛋白，其野生型序列可以被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾成作為如上定義的試劑的序列，該突變的谷蛋白包含一個(gè)突變，所述突變可以預(yù)防它被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾成作為如上定義的試劑的序列；或這樣的突變的谷蛋白的片段，其長(zhǎng)度為至少7個(gè)氨基酸(例如，至少7、8、9、10、11、12、13、14或15個(gè)氨基酸長(zhǎng))，且其包含該突變。本發(fā)明也提供了多核苷酸，其包含編碼如上定義的蛋白或片段的編碼序列。本發(fā)明也提供了細(xì)胞，其包含如上定義的多核苷酸，或其已經(jīng)被這樣的多核苷酸轉(zhuǎn)化。本發(fā)明也提供了哺乳動(dòng)物，其表達(dá)如上定義的T細(xì)胞受體。本發(fā)明也提供了診斷個(gè)體中的腹部疾病或?qū)Ω共考膊〉囊赘行缘姆椒ǎ浒?a)使來(lái)自宿主的樣品接觸至少一種選自下述的試劑i)肽，其包含至少一個(gè)表位，所述表位包含選自 SEQ ID NO 1-1927，優(yōu)選地選自 SEQ ID NO SEQ ID NO 1578-1579、1582-1583、 1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、1672-1698、1699-1763、1764-1768、 1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 的序列，和其等價(jià)物；和 ii)i)的類似物，其能被識(shí)別i)的T細(xì)胞受體識(shí)別，且其長(zhǎng)度不超過(guò)50個(gè)氨基酸；和b)體外測(cè)定樣品中的T細(xì)胞是否識(shí)別該試劑；T細(xì)胞的識(shí)別指示著該個(gè)體患有或易感腹部疾病。本發(fā)明也提供了測(cè)定該組合物是否能造成腹部疾病的方法，其包含測(cè)定組合物中是否存在能被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾成寡肽序列的蛋白，其中蛋白的存在指示著該組合物能造成腹部疾病。本發(fā)明也提供了鑒別T細(xì)胞的拮抗劑的方法，該T細(xì)胞識(shí)別如上定義的試劑，所述方法包含使候選物質(zhì)接觸T細(xì)胞，和檢測(cè)該物質(zhì)是否造成T細(xì)胞經(jīng)歷抗原特異性的反應(yīng)的能力的降低，其中所述能力的任何這樣的降低的檢測(cè)，指示著所述物質(zhì)是拮抗劑。本發(fā)明也提供了用于實(shí)施上述的任一種方法的試劑盒，其包含如上定義的試劑和用于檢測(cè)T細(xì)胞對(duì)肽的識(shí)別的工具。本發(fā)明也提供了鑒別作為腹部疾病的治療劑的產(chǎn)物的方法，其包含給如上定義的患有或易感腹部疾病的哺乳動(dòng)物施用候選物質(zhì)，并測(cè)定該物質(zhì)是否預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中的腹部疾病，其中腹部疾病的預(yù)防或治療指示著該物質(zhì)是治療產(chǎn)物。本發(fā)明也提供了生產(chǎn)由如上定義的編碼序列編碼的蛋白的方法，該方法包含a) 在允許表達(dá)蛋白的條件下，培養(yǎng)上述的細(xì)胞；和任選地b)回收表達(dá)的蛋白。本發(fā)明也提供了得到轉(zhuǎn)基因的植物細(xì)胞的方法，其包含用如上所述的載體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，以生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因的植物細(xì)胞。本發(fā)明也提供了得到第一代轉(zhuǎn)基因植物的方法，其包含再生用如上所述的載體轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因的植物細(xì)胞，以生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因植物。本發(fā)明也提供了得到轉(zhuǎn)基因植物種子的方法，其包含從可如上得到的轉(zhuǎn)基因植物得到轉(zhuǎn)基因種子。本發(fā)明也提供了得到轉(zhuǎn)基因后代植物的方法，其包含從可由如上所述的方法得到的第一代轉(zhuǎn)基因植物，得到第二代轉(zhuǎn)基因后代植物，并任選地從由此得到的第二代后代植物，得到再后一代或多代的轉(zhuǎn)基因植物。本發(fā)明也提供了可由任一種上述的方法得到的轉(zhuǎn)基因的植物細(xì)胞、植物、植物種子或后代植物。本發(fā)明也提供了轉(zhuǎn)基因植物或植物種子，其包含如上所述的植物細(xì)胞。本發(fā)明也提供了轉(zhuǎn)基因的植物細(xì)胞愈傷組織，其包含如上所述的可從如上定義的轉(zhuǎn)基因的植物細(xì)胞、第一代植物、植物種子或后代得到的植物細(xì)胞。本發(fā)明也提供了得到作物產(chǎn)物的方法，其包含從根據(jù)任一種上述的方法的植物收獲作物產(chǎn)物，和任選地進(jìn)一步加工收獲的產(chǎn)物。本發(fā)明也提供了食物，其包含如上定義的蛋白。


圖1顯示了從一組蛋白產(chǎn)生所有可能的肽表位的方法。圖2顯示了在2003年6月16日的Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)中存在的谷蛋白基因產(chǎn)物的Genbank登記號(hào)。圖3A顯示了分析來(lái)自ELISpot的數(shù)據(jù)的期望最大化(EM)算法。圖;3B顯示了對(duì)腹部疾病患者的數(shù)據(jù)集的測(cè)試。圖4顯示了發(fā)現(xiàn)反應(yīng)性表位的最小集的迭代過(guò)程。圖5顯示了麥醇溶蛋白和麥谷蛋白序列(SEQ ID NO :1-1554)。在“一致”列中， 小寫(xiě)字母使用標(biāo)準(zhǔn)的單字母氨基酸代碼，但是大寫(xiě)字母具有不同的含義E = [e或q]，F(xiàn) = [f或y或w]，I = [i或1或v]，S= [s或t]，R= [r或k或h]。“序列”列使用標(biāo)準(zhǔn)的單字母氨基酸代碼。圖6顯示了在HLA-DQ2+腹部疾病志愿者中谷蛋白攻擊后6天收集的PBMC中，刺激Y干擾素的谷蛋白肽(SEQ ID NO :1555-1655)。標(biāo)示的9聚體是200組生物活性的“結(jié)構(gòu)上”有關(guān)的20聚體肽共有的。根據(jù)受試者反應(yīng)的生物活性X比例，排列谷蛋白序列。圖7顯示了小麥攻擊實(shí)驗(yàn)的結(jié)果(SEQ ID NO :1656-1671)。在小麥攻擊后，這些肽在10位受試者(A-J)中產(chǎn)生高質(zhì)量反應(yīng)(標(biāo)示‘Y’ )。圖8顯示了在HLA-DQ2+腹部疾病志愿者中谷蛋白攻擊后6天收集的PBMC中，刺激干擾素-Y的燕麥蛋白肽(+/_tTG的脫酰胺作用)(SEQ ID NO :1672-1698)。標(biāo)有*的那些是燕麥攻擊后誘導(dǎo)IFN- γ的最佳的獨(dú)特的20聚體。圖9顯示了在2位根據(jù)共有的核心序列分組的HLA-DQ8 (不是HLA-DQ^受試者中最有效的40種20聚體(SEQ ID NO :1699-1763)。組6的核心序列(QGSFQPSQQ)對(duì)應(yīng)著 van de Wal 等(J. Immunol. 1998，161 G) :1585-1588)所述的 α-麥醇溶蛋白表位。受試者A中的最大反應(yīng)是27ISFC (單獨(dú)的介質(zhì)，沒(méi)有肽反應(yīng)4SFC)，且在B中，是^SFC (單獨(dú)的介質(zhì)，沒(méi)有肽反應(yīng)1 SFC)。圖10顯示了基于氨基酸測(cè)序的A-麥醇溶蛋白(SEQ ID NO :1928)的氨基酸序列。
具體實(shí)施例方式術(shù)語(yǔ)“腹部疾病”包括通過(guò)改變谷蛋白敏感度的程度造成的多種狀況，其包括特征在于扁平小腸粘膜(增生性絨毛萎縮)的嚴(yán)重形式和特征在于輕癥狀的其它形式。上面(在診斷或治療的上下文中)提及的個(gè)體是人。他們可能患有或被懷疑患有腹部疾病(有癥狀的或無(wú)癥狀的)。他們可能采用無(wú)谷蛋白的飲食。他們可能是在急性期反應(yīng)中(例如，他們可能患有腹部疾病，但是在最近的M小時(shí)，僅僅攝入谷蛋白，然后他們采用無(wú)谷蛋白的飲食14- 天)。個(gè)體可能易感腹部疾病，例如遺傳易感性(例如通過(guò)有患有腹部疾病的親戚或具有會(huì)造成對(duì)腹部疾病的素因的基因的個(gè)體來(lái)確定)。試劑試劑一般地是肽，例如長(zhǎng)為7-50個(gè)氨基酸，例如長(zhǎng)為10-40、12-35或15_30個(gè)氨基酸。試劑可以是由SEQ ID NO :1-1927中的任一個(gè)代表的肽，或包含序列的表位，所述序列包含SEQ ID NO :1-1927中的任一個(gè)，其是分離的源自谷蛋白蛋白的寡肽；或來(lái)自天然產(chǎn)生的谷蛋白蛋白的這些序列的等價(jià)物。在本發(fā)明的另一組實(shí)施方案中，試劑是燕麥谷蛋白的任意肽表位(例如，燕麥蛋白的任意T細(xì)胞表位)。
優(yōu)選地，試劑是由SEQ ID NO 1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、 1623-1655、1656-1671、1672-1698、1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、 1895-1903、1906和1908-1927中的任一個(gè)代表的肽，或包含序列的表位，所述序列包含SEQ ID NO 1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、1672-1698、 1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 中的任一個(gè)， 其是分離的源自谷蛋白的寡肽；或來(lái)自天然產(chǎn)生的谷蛋白的這些序列的等價(jià)物。因而，表位可以是天然產(chǎn)生的谷蛋白的衍生物，尤其是來(lái)自小麥或燕麥谷蛋白。這樣的衍生物一般地是谷蛋白的片段，或整個(gè)蛋白或片段的突變的衍生物。因此，本發(fā)明的表位不包括天然產(chǎn)生的整個(gè)谷蛋白，且不包括其它的整個(gè)的天然產(chǎn)生的谷蛋白。一般地，這樣的片段長(zhǎng)為至少7個(gè)氨基酸(例如，至少7、8、9、10、11、12、13、14或 15個(gè)氨基酸長(zhǎng))。一般地，在本文所述的使用來(lái)自腹部疾病患者的樣品的任意測(cè)定中，T細(xì)胞會(huì)以至少與識(shí)別片段所來(lái)源的試劑相同的程度識(shí)別這樣的片段。試劑可以是由SEQ ID NO 1-1927中的任一個(gè)代表的肽，優(yōu)選地由SEQ ID NO 1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、1672-1698、 1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 中的任一個(gè)代表的肽，或蛋白，所述蛋白包含與SEQ ID NO :1-1927中的任一個(gè)相對(duì)應(yīng)的序列，優(yōu)選地包含與 SEQ ID NO :1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、 1672-1698、1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 中的任一個(gè)相對(duì)應(yīng)的序列(例如包含SEQ ID NO :1-1927中的任一個(gè)，優(yōu)選地包含SEQ ID NO1578-1579、1582-1583、1587-1593、1600-1620、1623-1655、1656-1671、1672-1698、 1699-1763、1764-1768、1769-1786、1787-1829、1895-1903、1906 和 1908-1927 中的任一個(gè)的谷蛋白片段，例如，在已經(jīng)用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶處理谷蛋白后)。這樣的序列的生物活性的片段，也是本發(fā)明的試劑。一般地，這樣的片段長(zhǎng)為至少7個(gè)氨基酸(例如，至少7、8、9、10、 11、12、13、14或15個(gè)氨基酸長(zhǎng))。與SEQ ID NO :1-1927中的任一個(gè)等價(jià)的序列或這些序列的類似物，也是本發(fā)明的試劑。在表位包含與來(lái)自另一種谷蛋白(例如，任一種本文提及的谷蛋白或任一種會(huì)造成腹部疾病的谷蛋白)的上述表位(包括片段)等價(jià)的序列的情況下，這樣的等價(jià)序列對(duì)應(yīng)著一般地用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(部分地或完全地)處理的谷蛋白的片段。通過(guò)比對(duì)其它谷蛋白和原始表位所來(lái)源的谷蛋白的序列(例如，使用任一種本文提及的程序)，可以確定這樣的等價(jià)肽。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶是可商業(yè)上得到的(例如，Sigma T-5398)。作為類似物的試劑能被識(shí)別⑴的TCR識(shí)別。因此，通常當(dāng)在存在⑴的情況下， 且一般地，也在抗原呈遞細(xì)胞(APC)(例如本文提及的APC中的任一種)存在的情況下，將類似物添加給T細(xì)胞時(shí)，類似物抑制⑴的識(shí)別，即類似物能在這樣的系統(tǒng)中與⑴競(jìng)爭(zhēng)。類似物可以是能結(jié)合識(shí)別⑴的TCR的一種類似物。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)，可以檢測(cè)這樣的結(jié)合。從已經(jīng)表明能識(shí)別(i)的T細(xì)胞，可以分離這樣的TCR(例如，使用本發(fā)明的方法)。然后，通過(guò)測(cè)定TCR是否抑制類似物與結(jié)合類似物的物質(zhì)(例如，類似物的抗體) 的結(jié)合，可以證實(shí)類似物與TCR的結(jié)合，一般地，在這樣的結(jié)合測(cè)定的抑制中，類似物結(jié)合于II類MHC分子(例如HLA-DQ2)。
1
一般地，類似物抑制(i)與TCR的結(jié)合。在該情況下，在有類似物存在下，可以結(jié)合TCR的⑴的量會(huì)減少。這是因?yàn)椋愃莆锬芙Y(jié)合TCR，并因此與⑴競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合TCR。從腹部疾病患者中，可以分離出在上面的結(jié)合實(shí)驗(yàn)中使用的T細(xì)胞，例如，在本發(fā)明的方法的輔助下。類似物的其它結(jié)合特征也可以與(i)相同，并且因而一般地，類似物結(jié)合與肽結(jié)合的相同的MHC II類分子(HLA-DQ2或-DQ8)。一般地，類似物結(jié)合對(duì)(i)特異性的抗體，并從而抑制(i)與這樣的抗體的結(jié)合。一般地，類似物是肽。它可以與⑴具有同源性，一般地，與(i)具有至少70%同源性，優(yōu)選地至少80、90%、95%、97%或99%同源性，例如，在至少7、8、9、10、11、12、13、14、 15或更多個(gè)鄰接氨基酸的區(qū)域內(nèi)(例如類似物和/或(i)的整個(gè)長(zhǎng)度，或跨過(guò)接觸TCR或結(jié)合MHC分子的區(qū)域)。測(cè)量蛋白同源性的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，且本領(lǐng)域的技術(shù)人員能理解，在上下文中，在氨基酸同一性(有時(shí)稱作“硬同源性(hard homology)”)的基礎(chǔ)上，計(jì)算同源性。例如，UWGCG包提供了 BESTFIT程序，其可以用于計(jì)算同源性(例如，在它的缺省設(shè)置下使用)(Devereux 等(1984) Nucleic Acids Research 12，p387_3%)。PILEUP 和 BLAST 算法可以用于計(jì)算同源性或比對(duì)序列(一般地，在它的缺省設(shè)置下)，例如，如Altschul S.F. (1993)J Mol Evol 36 :290-300 ；Altschul, S，F(xiàn) 等(1990)J Mol Biol215 :403-10 所述。在環(huán)球網(wǎng)上，通過(guò)因特網(wǎng)在例如“www. ncbi. nlm. nih. gov/”，可以從國(guó)家生物技術(shù)信息中心(National Center for Biotechnology Information)公開(kāi)地得到進(jìn)行 BLAST 分析的軟件。該算法包含，首先通過(guò)鑒別查詢序列中長(zhǎng)為W的短字，其在與數(shù)據(jù)庫(kù)序列中相同長(zhǎng)度的字比對(duì)時(shí)，會(huì)匹配或滿足一些正值閾分?jǐn)?shù)T，來(lái)鑒別高分序列對(duì)(HSP)。T被稱作相鄰字分?jǐn)?shù)閾(Altschul等，同上)。這些初步的相鄰字命中值(hit)作為開(kāi)始搜索的種子， 以發(fā)現(xiàn)含有它們的HSP。字命中值沿著每個(gè)序列向兩方盡可能遠(yuǎn)地延伸，只要可以增加累積比對(duì)分?jǐn)?shù)。在下述情況下，終止字命中值在每個(gè)方向的延伸累積比對(duì)分?jǐn)?shù)從它達(dá)到的最大值下降量X ；由于一個(gè)或多個(gè)負(fù)分?jǐn)?shù)殘基比對(duì)的積累，累積分?jǐn)?shù)達(dá)到0或以下；或達(dá)到任一個(gè)序列的末端。BLAST算法參數(shù)W、T和X決定著比對(duì)的敏感度和速度。BLAST程序使用下述缺省值字長(zhǎng)度(W)為11，BL0SUM62評(píng)分矩陣(見(jiàn)Henikoff和Henikoff (199 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :10915-10919)比對(duì)(B)為 50，期望(E)為 10，M = 5，N = 4，且對(duì)比兩條鏈。BLAST算法進(jìn)行兩個(gè)序列之間的相似性的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；見(jiàn)例如，Karlin和 Altschul (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :5873_5787。BLAST 算法提供的相似性的一種度量是最小總和概率(P(N))，其指示著兩個(gè)核苷酸或氨基酸序列偶然發(fā)生匹配的概率。 例如，如果在將第一個(gè)序列與另一個(gè)序列相比較時(shí)，最小總和概率小于約1，優(yōu)選地小于約 0. 1，更優(yōu)選地小于約0. 01，且最優(yōu)選地小于約0. 001，則認(rèn)為序列與另一個(gè)序列類似。一般地，同源的肽類似物與(i)的差異在于1、2、3、4、5、6、7、8或更多個(gè)突變(其可以是取代、缺失或插入)。關(guān)于計(jì)算同源性，可以跨過(guò)上述區(qū)域中的任一個(gè)，測(cè)量這些突變。取代優(yōu)選地是“保守的”。根據(jù)下表，定義它們。在第二列的相同單元中的氨基酸，且優(yōu)選地在第三列的相同行中的氨基酸，可以彼此取代。
權(quán)利要求
1.試劑在制備用于治療或預(yù)防腹部疾病的藥物中的用途，其中所述試劑包含(a)肽，其包含至少一個(gè)表位，所述表位包含選自轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶脫酰胺的SEQID NO 1787的序列，和其等價(jià)物；和(b)(a)的類似物，其能被識(shí)別(a)的肽的T細(xì)胞受體識(shí)別，且其長(zhǎng)度不超過(guò)50個(gè)氨基酸。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述肽包含選自SEQID NOS 1787、1793、1794、1796和1797的表位。
3.權(quán)利要求1的用途，其中所述試劑是HLA-DQ2-限制的。
4.權(quán)利要求1的用途，其中所述試劑是HLA-DQ8-限制的。
5.權(quán)利要求1的用途，其中一種試劑是HLA-DQ2-限制的，且第二種試劑是HLA-DQ8-限制的。
6.權(quán)利要求1的用途，其中所述試劑包含小麥表位。
7.權(quán)利要求1的用途，其中所述試劑包含燕麥表位。
8.權(quán)利要求1的用途，其中一種試劑包含小麥表位，且一種試劑包含燕麥表位。
9.權(quán)利要求1的用途，其中所述試劑存在于藥物組合物中，所述組合物包含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
10.如權(quán)利要求1所定義的試劑的用途，用于通過(guò)抑制對(duì)所述試劑的抗體或T細(xì)胞反應(yīng)使個(gè)體耐受谷蛋白。
11.如權(quán)利要求1所定義的試劑，其任選地與載體相結(jié)合，以用于通過(guò)使識(shí)別試劑的T 細(xì)胞耐受來(lái)治療或預(yù)防腹部疾病的方法中。
12.具有如權(quán)利要求1所定義的T細(xì)胞受體的T細(xì)胞的拮抗劑，其任選地與載體相結(jié)合，以用于通過(guò)拮抗這樣的T細(xì)胞來(lái)治療或預(yù)防腹部疾病的方法中。
13.如權(quán)利要求1所定義的試劑，其用于通過(guò)使個(gè)體耐受以預(yù)防結(jié)合所述試劑的抗體的生產(chǎn)，來(lái)治療或預(yù)防個(gè)體的腹部疾病的方法中。
14.如權(quán)利要求1所定義的試劑。
15.如權(quán)利要求9所定義的拮抗劑。
16.藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1所定義的試劑或如權(quán)利要求9所定義的拮抗劑和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
17.組合物，其用于使個(gè)體耐受谷蛋白，以抑制生成對(duì)如權(quán)利要求1所定義的試劑的T 細(xì)胞或抗體反應(yīng)，所述組合物包含如權(quán)利要求1所定義的試劑。
18.組合物，其用于拮抗對(duì)如權(quán)利要求1所定義的試劑的T細(xì)胞反應(yīng)，所述組合物包含如權(quán)利要求9所定義的拮抗劑。
19.試劑在制備用于診斷個(gè)體中的腹部疾病或?qū)Ω共考膊〉囊赘行缘姆椒ㄖ械脑\斷工具中的用途，所述試劑選自i)肽，其包含至少一個(gè)表位，所述表位包含選自轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶脫酰胺的SEQID NO 1787的序列，和其等價(jià)物；和ii)(i)的類似物，其能被識(shí)別(i)的T細(xì)胞受體識(shí)別，且其長(zhǎng)度不超過(guò)50個(gè)氨基酸； 且所述方法包含，測(cè)定(a)個(gè)體的T細(xì)胞是否識(shí)別該試劑，其中T細(xì)胞的識(shí)別指示著該個(gè)體患有或易感腹部疾病；或(b)來(lái)自個(gè)體的樣品中結(jié)合表位的抗體的存在，其中所述抗體的存在指示著該個(gè)體患有或易感腹部疾病。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中所述試劑是類似物(iii)，其包含結(jié)合到(a)HLA分子或(b)能結(jié)合⑴或(ii)的HLA分子的片段上的⑴或(ii)。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的用途，其中所述HLA分子或片段是在復(fù)合物中，所述復(fù)合物包含 4個(gè)HLA分子或HLA分子的片段。
22.根據(jù)權(quán)利要求19-21中的任一項(xiàng)的用途，其中所述方法包含，給個(gè)體的皮膚施用試劑，和檢測(cè)炎癥在施用部位的存在，其中炎癥的檢測(cè)指示著個(gè)體的T細(xì)胞識(shí)別該試劑。
23.根據(jù)權(quán)利要求19-21中的任一項(xiàng)的用途，其中所述方法包含使所述試劑與來(lái)自宿主的樣品接觸。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中所述樣品是血液樣品。
25.根據(jù)權(quán)利要求20、21、23或?qū)Φ挠猛荆渲性谒鰷y(cè)定之前，未以抗原特異性的方式體外地再次刺激T細(xì)胞。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的用途，其中通過(guò)檢測(cè)T細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子的分泌，來(lái)確定T細(xì)胞對(duì)試劑的識(shí)別。
27.根據(jù)權(quán)利要求沈的用途，其中所述細(xì)胞因子是IFN-Y。
28.根據(jù)權(quán)利要求沈或權(quán)利要求27的用途，其中通過(guò)允許細(xì)胞因子結(jié)合固定化的對(duì)該細(xì)胞因子特異性的抗體，且然后檢測(cè)抗體/細(xì)胞因子復(fù)合物的存在，來(lái)檢測(cè)細(xì)胞因子。
29.根據(jù)權(quán)利要求25的用途，其中所述測(cè)定是通過(guò)測(cè)量試劑是否結(jié)合T細(xì)胞受體來(lái)完成的。
30.鑒別如權(quán)利要求19、20或21中所定義的類似物的體外方法，其包含測(cè)定候選物質(zhì)是否能被τ細(xì)胞受體識(shí)別，所述T細(xì)胞受體識(shí)別包含如權(quán)利要求19所定義的序列的表位， 其中該物質(zhì)的識(shí)別指示著該物質(zhì)是類似物。
31.測(cè)定組合物是否能造成腹部疾病的體外方法，其包含測(cè)定組合物中是否存在能被轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶修飾成如權(quán)利要求19所定義的寡肽序列的蛋白，其中該蛋白的存在指示著該組合物能造成腹部疾病。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的體外方法，其中如下完成所述測(cè)定使組合物接觸對(duì)能被修飾成寡肽序列的序列特異性的抗體，其中抗體與組合物中蛋白的結(jié)合，指示著該組合物能造成腹部疾病。
33.鑒別T細(xì)胞的拮抗劑的體外方法，所述T細(xì)胞識(shí)別如權(quán)利要求1所定義的試劑，所述方法包含使候選物質(zhì)接觸T細(xì)胞，和檢測(cè)該物質(zhì)是否造成T細(xì)胞經(jīng)歷抗原特異性的反應(yīng)的能力的降低，其中所述能力的任何這樣的降低的檢測(cè)，指示著物質(zhì)是拮抗劑。
34.試劑盒，其用于實(shí)現(xiàn)根據(jù)權(quán)利要求19-29中的任一項(xiàng)的用途，其包含如權(quán)利要求 19,20或21所定義的試劑和用于檢測(cè)下述中任一個(gè)的工具(a)T細(xì)胞對(duì)肽的識(shí)別；或(b)識(shí)別所述試劑的抗體。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的試劑盒，其中用于檢測(cè)T細(xì)胞對(duì)肽的識(shí)別的工具包含IFN-Y的抗體。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的試劑盒，其中所述抗體固定化在固體支持物上，且任選地該試劑盒也包含用于檢測(cè)抗體/IFN-γ復(fù)合物的工具。
37.如權(quán)利要求1所定義的試劑在生產(chǎn)對(duì)試劑特異性的抗體中的用途。
38.對(duì)如權(quán)利要求1所定義的試劑特異性的抗體。
全文摘要
此處公開(kāi)的本發(fā)明涉及在診斷、治療和預(yù)防腹部疾病的方法中使用的表位。提供了包含至少一種表位的治療組合物。
文檔編號(hào)A61K38/00GK102430111SQ20111037877
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2005年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月28日
發(fā)明者J·T·丁, R·安德森, T·貝斯巴思 申請(qǐng)人:英國(guó)技術(shù)集團(tuán)國(guó)際有限公司