專利名稱：具有預防及治療癌癥效果的納米組合物及其制造方法
技術領域：
本發明涉及一種具有預防及治療癌癥效果的納米組合物及其制造方法，特別是涉及一種含有特定比例的兒茶素及納米金的組合物，并利用物理方法將兒茶素及納米金充分混合的制造方法，藉由該組合物可用以有效預防及治療多種癌癥。
背景技術：
許多自然產生的酚類化合物以及生物技術產品，其在于抗氧化作用方面是持續受到關注的，并且已被證明在生物系統中是有效的抗氧化劑。綠茶的許多癌癥預防特性是藉由一種兒茶素-3-沒食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)來達成,EGCG是一種酚類化合物，其可誘導細胞凋亡以及阻止細胞生長。綠茶可提升體液性及細胞性免疫，降低某些癌癥發生的風險，并可治療發炎性疾病。EGCG及其衍生物是常重要的候選成分以發展出有效且無毒性的藥物，其具有很強的自由基清除能力以及抗氧化作用。在許多研究中指出，EGCG可用以預防及治療許多癌癥，例如膀胱癌、乳癌、攝護腺癌以及大腸癌。另外，在流行病學的研究更指出，飲 用綠茶可降低罹患如胃癌、肺癌、大腸癌、肝癌、乳癌以及胰臟癌的風險。雖然EGCG有許多理想的抗癌特性，但有研究指出過量服用EGCG會導致如肝炎等副作用。因此，為了能有效利用EGCG在臨床上做為抗癌劑，必須考慮到如何將EGCG傳送到正確的位置并保持適當的細胞流體程度。近年來，納米醫藥的發展突飛猛進。納米醫藥涉及了利用納米技術來造福人類健康和福祉。將納米技術應用于各種醫藥療法上，已對于醫藥領域產生了革命性的進展。金屬納米粒子是新一代的材料，其是廣泛的被使用于生物醫學和治療上的應用，包括使用于診斷、治療、以及研究生物醫學的工具。例如物理性的納米金(nanogold particles,pNGs),其大小、形狀、表面化學、光學性質等參數皆可受到良好的控制。他們也有非常獨特和令人興奮的能力，例如和生物分子相同的大小以及結合多種生物分子的能力，這使得他們具有潛力應用于化學及生物領域上，例如藥物傳遞、細胞特異性標的以及藥物控制釋放等。藉由其光電特性的優勢，各種衍生技術已廣泛應用于生醫領域，例如電漿子的標簽與成像、光學與電化學感測、診斷、以及治療多種疾病與癌癥。由此可見，上述現有的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物及其制造方法在結構及方法與使用上，顯然仍存在有不便與缺陷，而亟待加以進一步改進。為了解決上述存在的問題，相關廠商莫不費盡心思來謀求解決之道，但長久以來一直未見適用的設計被發展完成，而一般結構及方法又沒有適切的結構及方法能夠解決上述問題，此顯然是相關業者急欲解決的問題。因此如何能創設一種新的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物及其制造方法，使該組合物包含有EGCG的抗癌特性，同時能藉由納米金的藥物傳遞及細胞特異性標的功能而使EGCG能準確被傳送到癌細胞，以增加癌癥的治療效果，實屬當前重要研發課題之一，亦成為當前業界極需改進的目標
發明內容
本發明的主要目的在于，提供一種具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，藉由該組合物同時包含兒茶素及納米金的特性，以有效提升癌癥的預防及治療效果。本發明的另一目的在于，提供一種具有預防及治療癌癥效果的組合物的制造方法，藉由物理方法將兒茶素及納米金充分混合，使兒茶素及納米金能緊密結合，并有效控制其相對濃度，使組合物對于癌癥的預防及治療效果能達到最佳。本發明的目的及解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。依據本發明提出的一種具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其至少包含一兒茶素以及一納米金屬。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該納米金屬為納米金。本發明的目的及解決其技術問題還可采用以下技術措施進一步實現。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該納米金屬為納米粒徑金屬，尤其是納米金。前述的具有預防及治療癌 癥效果的納米組合物，其中納米粒徑金屬為納米金。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該納米金為物理、化學或生物納米金。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該納米金的粒徑為1.0nm 50nmo前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該兒茶素以及該納米金的比例范圍為 23: 0.5 23: 10 (ppm/ppm)。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該兒茶素以及該納米金的比例為 23: 2.5 (ppm/ppm)。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中各式癌癥是以下組合:膀胱癌、皮膚癌、胃癌、大腸癌、乳癌、攝護腺癌、口腔癌、血癌及肺癌。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該組合物具有強抗氧化力及抗酸特性。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該組合物具有抑制血管增生的特性。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該組合物具有促進免疫系統抗癌以及促進自然殺手細胞抗癌的特性。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其中該組合物抑制腫瘤細胞的機轉為藉由細胞毒殺、生長抑制、抑制血管新生、促進免疫抗癌與自然殺手細胞來達成抗癌效果O本發明的目的及解決其技術問題還采用以下技術方案來實現。依據本發明提出的一種具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其包含以下步驟:(1)提供一兒茶素及一納米金屬 '及(2)混合該兒茶素及該納米金屬。本發明的目的及解決其技術問題還可采用以下技術措施進一步實現。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其還包含以下步驟:
(3)將步驟(2)的混合產物以HOOOrpm離心2個小時，并去除上清液；(4)以去離子水回溶步驟⑶的沉淀物；(5)額外重復步驟(3)以及步驟⑷兩次；及(6)分別測量兒茶素以及納米金屬的濃度。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中該納米金屬為納米金。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中該納米金為物理、化學或生物納米金。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中該納米金的粒徑為 1.0nm 50nmo前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中在步驟(I)中，該兒茶素以及該納米金的比例范圍為23: 0.5 23: 10(ppm/ppm)。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中在步驟(I)中，該兒茶素以及該納米金的比例為23: 2.5 (ppm/ppm)。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中在步驟(2)中，是利用一物理方法將該兒茶素及該納米金屬混合。前述的具有預防及治療癌 癥效果的納米組合物的制造方法，其中該物理方法是一種超音波震蕩法。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中該超音波震蕩法是在室溫下超音波震蕩5分鐘。前述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其中所有癌癥的種類是選自于以下組合:膀胱癌、皮膚癌、胃癌、大腸癌、乳癌、攝護腺癌、口腔癌、血癌及肺癌。本發明與現有技術相比具有明顯的優點和有益效果。借由上述技術方案，本發明具有預防及治療癌癥效果的納米組合物及其制造方法至少具有下列優點及有益效果:(I)藉由本發明所提供的兒茶素-納米金組合物，可有效預防與治療多種癌癥，例如膀胱癌、皮膚癌、胃癌、大腸癌、乳癌、攝護腺癌、口腔癌、血癌及肺癌，并且其效果比單獨的兒茶素或納米金更好。(2)本發明將兒茶素與納米金的比例做最佳化調整，可最有效的預防及治療各種癌癥。(3)藉由本發明所提供的制造方法，可提高兒茶素及納米金之間的結合程度，進而穩定兒茶素-納米金對癌癥預防與治療的效果及時間。上述說明僅是本發明技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本發明的技術手段，而可依照說明書的內容予以實施，并且為了讓本發明的上述和其他目的、特征和優點能夠更明顯易懂，以下特舉較佳實施例，并配合附圖，詳細說明如下。


圖1是本發明一種具有預防及治療癌癥效果的組合物的制造方法流程圖；圖2是兒茶素-納米金組合物的抗氧化作用示意圖；圖3是猴腎細胞與MBT-2細胞在處理不同濃度的兒茶素及納米金之后的細胞存活率示意圖；圖4是單獨的兒茶素以及兒茶素-納米金組合物對于老鼠體內試驗的抗腫瘤效果示意圖5是MBT-2細胞株以各種濃度的兒茶素及納米金處理后以Annexin V染色法偵測細胞凋亡情況分析圖；圖6是是MBT-2細胞在不同兒茶素及納米金濃度處理后的caspase_3以及_7相對表現程度分析圖；圖7是兒茶素由兒茶素-納米金組合物上分離出來的態樣統計圖；及圖8是兒茶素-納米金組合物在不同pH質環境下的解離速率常數(k)分析圖。101-106:本發明納米組合物制造方法的步驟編號
具體實施例方式為更進一步闡述本發明為達成預定發明目的所采取的技術手段及功效，以下結合附圖及較佳實施例，對依據本發明提出的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物及其制造方法其具體實施方式
、方法、步驟、特征及其功效，詳細說明如后。首先對于本發明一種具有預防及治療癌癥效果的組合物的成分進行介紹。本發明具有預防及治療癌癥效果的組合物主要包含一特定含量的兒茶素以及納米金屬，其中，該特定含量的范圍可為23毫克到800毫克之間，該納米金屬為物理、化學或生物納米金，其粒徑為1.0nm 50nm。該兒茶素以及該納米金的比例范圍為23: 0.5 23: 10 (ppm/ppm),其中，兒茶素以及納米金的最佳比例 為23: 2.5(ppm/ppm)。藉由本發明所提供的組合物，可對于多種癌癥種類具有治療效果，例如膀胱癌、皮膚癌、胃癌、大腸癌、乳癌、攝護腺癌、口腔癌、血癌及肺癌。本發明所提供的組合物具有多項特性，包括抗酸特性、抑制血管增生的特性、促進免疫系統抗癌以及促進自然殺手細胞抗癌的特性等，其中，該組合物抑制腫瘤細胞的機轉為藉由細胞毒殺、生長抑制、抑制血管新生、促進免疫抗癌與自然殺手細胞來達成抗癌效果。接著請參照如圖1所示，是本發明具有預防及治療癌癥效果的組合物的制造方法流程圖。本發明具有預防及治療癌癥效果的組合物的制造方法包含以下步驟:提供一兒茶素及一納米金(步驟101),其中，該兒茶素以及該納米金的比例范圍為23: 0.5 23: 10 (ppm/ppm),而該兒茶素以及該納米金的最佳比例為23: 2.5 (ppm/ppm);利用一物理方法混合該兒茶素及該納米金(步驟102)，其中，該物理方法是一種超音波震蕩法，并且該超音波震蕩法是在室溫下超音波震蕩5分鐘；將步驟102的混合產物以HOOOrpm離心2個小時，并去除上清液(步驟103)；以去離子水回溶步驟103的沉淀物(步驟104);額外重復步驟103以及步驟104兩次(步驟105);及分別測量兒茶素以及納米金的濃度(步驟106)，以確定兒茶素以及納米金的濃度以及比例是否達到預期情況。膀胱癌是目前最普遍的癌癥之一。在2009年，美國人民中約有70980的案例被檢測出罹患有膀胱癌，其中更有14330位病患死于此癌癥。利用化學治療方法將藥物經由尿道注入膀胱內是目前最普遍用于治療早期膀胱癌，并且隨著膀胱癌的進展，在外科手術治療之前或之后，化學治療方法仍可做為輔助療法。然而，有許多副作用會隨著化學治療方法而產生，包括了腹部疼痛、貧血、膀胱刺激、視力模糊、過度呼吸、瘀傷、疲勞、頭痛、感染、食欲不振、惡心以及嘔吐等，甚至有其他更嚴重的副作用。為了確定本發明所提供的組合物是否確實具有預防及治療癌癥的效果，發明人以膀胱癌做為代表性的研究標的，利用本發明的組合物處理膀胱癌細胞，進行了多項相關實驗及測試，以下對于相關的實驗結果進行詳細的介紹。1.兒茶素-納米金組合物的抗氧化作用請參照如圖2所示，是兒茶素-納米金組合物的抗氧化作用示意圖。如圖中所示，本實驗測試了兒茶素-納米金組合物對于超氧化物自由基的清除效果、氫氧自由基效果，以及兒茶素-納米金組合物(23: 2.5ppm)對于老鼠紅血球中H2O2所誘導的溶血情況以及老鼠肝臟中脂質過氧化的治療效果(縱軸表示三種成分在三種測試組中與維生素E的相對活性比值)。如結果顯示，兒茶素、納米金以及兒茶素-納米金組合物具有顯著的超氧化物自
由基清除效果。在紅血球中H2O2所誘導的溶血過程中，H2O2與Fe2+共同作用以形成羥自由基，其可誘導溶血現象。在紅血球溶血實驗中，其結果與羥自由基清除作用的結果一致。脂質過氧化是一種復雜的過程，其牽涉到過氧化脂質的形成及傳播，以及細胞膜脂質的最終銷毀，進而制造分解產物，例如微粒(miCTosome)中的丙二醛(malondialdehyde)。在本實驗中，兒茶素-納米金組合物具有強烈的脂質過氧化自由基的清除效果，其效果大約是原生細胞的4倍。2.兒茶素以及納米金在細胞試驗中的抗腫瘤活性首先，為了確認不同的兒茶素與納米金比例分別對于正常細胞以及癌細胞的毒殺作用，發明人利用多種比例的兒茶素與納米金分別處理猴腎細胞(vero cell，代表正常細胞)以及MBT-2 (老鼠膀胱癌細胞)，觀察這兩種細胞在處理48小時后的存活率，即可代表正常細胞以及癌細胞對于本發明的組合物的感受性。如圖3所示，是猴腎細胞與MBT-2細胞在處理不同濃度的兒茶素及納米金之后的細胞存活率示意圖，由圖中可見，兒茶素及納米金可抑制MBT-2細胞的存活率，并且隨著其濃度的增加有更加顯著的趨勢。接著請參照下表所示，是兒茶素及納米金對于細胞抑制率達50% (IC50)的濃度統計表，兒茶素及納米金對于膀胱癌細胞的IC50值分別為28.4μ M以及4.3ppm。相較之下，猴腎細胞在兒茶素及納米金的處理之下，其細胞數量并未有明顯的改變。為了測定兒茶素與納米金結合后對于抗腫瘤效果是否有加乘作用，發明人將多種兒茶素及納米金的濃度組合處理MTB-2細胞。結果顯示當兒茶素及納米金的濃度分別為12.5 μ M以及2ppm時，MTB-2細胞數量相較于控制組顯著僅剩下25.5%，而同樣濃度的兒茶素及納米金分別單獨處理MTB-2細胞時，其細胞數量相較于控制組仍分別有49.7%以及48.1%。因此，兒茶素及納米金對于MTB-2細胞的
抑制作用具有協同效果。
權利要求
1.一種具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其至少包含一兒茶素以及一納米金屬。
2.根據權利要求1所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該納米金屬為納米金。
3.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該納米金為物理、化學或生物納米金。
4.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該納米金的粒徑為1.0nm 50nm。
5.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該兒茶素以及該納米金的比例范圍為23: 0.5 23: 10(ppm/ppm)。
6.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該兒茶素以及該納米金的比例為23: 2.5 (ppm/ppm)。
7.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中各式癌癥是以下組合:膀胱癌、皮膚癌、胃癌、大腸癌、乳癌、攝護腺癌、口腔癌、血癌及肺癌。
8.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該組合物具有強抗氧化力及抗酸特性。
9.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該組合物具有抑制血管增生的特性。
10.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該組合物具有促進免疫系統抗癌以及促進自然殺手細胞抗癌的特性。
11.根據權利要求2所述的有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其特征在于其中該組合物抑制腫瘤細胞的機轉為藉由細胞毒殺、生長抑制、抑制血管新生、促進免疫抗癌與自然殺手細胞來達成抗癌效果。
12.—種具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其包含以下步驟: (1)提供一兒茶素及一納米金屬'及 (2)混合該兒茶素及該納米金屬。
13.根據權利要求12所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其還包含以下步驟: (3)將步驟(2)的混合產物以HOOOrpm離心2個小時，并去除上清液； (4)以去離子水回溶步驟(3)的沉淀物； (5)額外重復步驟(3)以及步驟(4)兩次；及 (6)分別測量兒茶素以及納米金屬的濃度。
14.根據權利要求12所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中該納米金屬為納米金。
15.根據權利要求12所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中該納米金為物理、化學或生物納米金。
16.根據權利要求14所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中該納米金的粒徑為1.0nm 50nm。
17.根據權利要求12所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中在步驟(1)中，該兒茶素以及該納米金的比例范圍為23: 0.5 23: 10 (ppm/ppm)。
18.根據權利要求12所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中在步驟(1)中，該兒茶素以及該納米金的比例為23: 2.5(ppm/ppm)。
19.根據權利要求12所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中在步驟(2)中，是利用一物理方法將該兒茶素及該納米金屬混合。
20.根據權利要求19所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中該物理方法是一種超音波震蕩法。
21.根據權利要求20所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中該超音波震蕩法是在室溫下超音波震蕩5分鐘。
22.根據權利要求12所述的具有預防及治療癌癥效果的納米組合物的制造方法，其特征在于其中所有癌癥的種類是選自于以下組合:膀胱癌、皮膚癌、胃癌、大腸癌、乳癌、攝護腺癌、口腔癌、血癌及肺癌。
全文摘要
本發明是有關于一種具有預防及治療癌癥效果的納米組合物及其制造方法，該具有預防及治療癌癥效果的納米組合物，其包含一兒茶素以及一納米金，該兒茶素以及該納米金的比例范圍為23∶0.5～23∶10(ppm/ppm)；本發明更揭露一種制造該組合物的方法，其是利用一種超音波震蕩法將兒茶素以及納米金充分混合，使其具有良好的結合程度。
文檔編號A61P39/06GK103212080SQ20121001978
公開日2013年7月24日 申請日期2012年1月21日 優先權日2012年1月21日
發明者唐上文, 葉明功, 謝達士, 吳彰哲 申請人:京華堂實業股份有限公司