專利名稱：冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
癌癥是危害人類生命與健康的嚴(yán)重疾病。近年來，癌癥發(fā)病率和死亡率已呈明顯上升趨勢。據(jù)統(tǒng)計，全球每年新發(fā)病的惡性腫瘤約635萬，其中原發(fā)性肝癌30萬，占4. 7%。 我國是世界上肝癌高發(fā)國家之一，肝癌年發(fā)病人數(shù)逾13萬人，占全世界肝癌年死亡人數(shù)的 43. 7%。目前臨床上的癌證治療一般視手術(shù)、放療、化療為三大支柱，但由于肝癌起病隱匿，惡性程度高，發(fā)展變化快，患者就診時往往已進(jìn)入中晚期，失去了最佳手術(shù)時機。因此， 在肝癌的臨床治療中廣泛應(yīng)用的是化學(xué)藥物療法。大多數(shù)化療藥物雖可抑制腫瘤細(xì)胞過度增生，但其毒副作用大，對正常細(xì)胞組織也有很強的殺傷作用，部分病人因身體極度虛弱已無法耐受西藥的治療。中藥在治療肝癌方面因其獨特的優(yōu)勢而被臨床廣泛采納，其在治療局部的同時，重視全身治療，能夠改善和提高病人的生活質(zhì)量，延長生命周期，并且副作用小。比較當(dāng)前的肝癌一線治療藥物，不難發(fā)現(xiàn)，多數(shù)中藥只定位于癌腫的輔助治療用藥，這種現(xiàn)象很可能與中藥本身缺乏強有力的針對癌腫局部臟器藥物靶點治療有關(guān)。為此，有必要研究中藥有效組分的分子治療技術(shù)，將有效治療用藥物分子，直接輸送到腫瘤細(xì)胞內(nèi)，提高藥物靶向性，大幅度提高中藥針對局部腫瘤臟器的治療效果。冬凌草甲素(Oridonin, 0RI)為唇形科香茶菜屬植物冬凌草(Rabdosia rubescens)的主要抗癌有效成分，分子中與環(huán)外亞甲基共軛的環(huán)戊酮結(jié)構(gòu)是其抗癌活性中心。冬凌草甲素屬四環(huán)二萜類化合物，分子式C2tlH28O6，如圖I所示，分子量364，為無色棱柱狀結(jié)晶，熔點248-250°C，味道極苦，不溶于水，溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、醋酸乙酯、1，2 丙二醇和二甲基亞砜等有機溶劑。冬凌草甲素屬于貝殼杉烯型二萜，它具有與肉瘤毒素相類似的抗癌活性中心α-亞甲基環(huán)戊酮。如果環(huán)外雙鍵變成飽和鍵或裂環(huán)，則抗癌活性消失，因此也認(rèn)為具有雙功能，烷化烯酮O = C-C = CH2系統(tǒng)則有抗癌活性。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，ORI抗癌譜較廣，可通過多種途徑誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，對人肝癌 BEL-7402細(xì)胞，非小細(xì)胞肺癌組織NCI-H520、NCI-H460、NCI-H1299，人白血病HL-60細(xì)胞， 食管癌CaES-17細(xì)胞及結(jié)腸癌HCT8細(xì)胞等均有明顯細(xì)胞毒作用，臨床上也顯示了一定療效。但由于冬凌草甲素水溶性差，體內(nèi)生物半衰期短，目前有關(guān)制劑的抗癌療效尚不理想， 因此需要尋求新的制劑以克服這些問題。冬凌草制劑有片劑和糖漿劑，因?qū)儆诖种苿远璨菁姿氐暮枯^低，片劑含量為I. 189%，糖漿劑含量為O. 566%，加之冬凌草甲素為二萜類成分，幾乎不溶于水，因此上述劑型口服后血藥濃度較低，腫瘤細(xì)胞周圍的冬凌草甲素濃度更低，很難達(dá)到有效治療濃度，從而影響冬凌草甲素的抗癌效果。單純以冬凌草甲素制成的制劑僅有“癌得寧”注射液一種，雖然其抗癌的臨床療效高于片劑和糖漿劑，但“癌得寧”注射液主要采用有機溶劑加表面活性劑的辦法增加冬凌草甲素的溶解度，長期靜脈滴注宜引起血管發(fā)炎、疼痛等副作用，從而限制了冬凌草甲素注射液的應(yīng)用。CN1994293公開了冬凌草甲素在制藥中的應(yīng)用，是目前有關(guān)冬凌草甲素的唯一專利，還未出現(xiàn)制劑方面的專利。納米粒(nanoparticles)具備較高的載藥量；較高的包封率；有適宜的制備及提純方法；有適當(dāng)?shù)牧脚c形狀；可控制藥物的釋放；有較長的體內(nèi)循環(huán)時間，減少藥物被網(wǎng)狀內(nèi)皮吞噬系統(tǒng)(RES)吞噬，增加對病變部位的暴露時間，從而增加療效；載體材料可生物降解，毒性較低或沒有毒性。殼聚糖，又名甲殼質(zhì)，是自然界普遍存在的一種多糖，主要來源于蝦蟹的外殼中， 化學(xué)名稱為β - (1-4) -2-氨基-2-脫氧-D-匍聚糖，是由2-氨基-2-脫氧-D-匍萄糖以 β-1，4糖苷鍵縮合而成。分子中大量氨基的存在賦予殼聚糖許多獨特的性質(zhì)，加之其生物相容性好，毒性小，價廉易得，因此近年來殼聚糖在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用越來越受到廣泛關(guān)注。微粒、納米制劑是近幾年逐漸發(fā)展的新型藥物傳遞系統(tǒng)，與其他傳統(tǒng)劑型相比微粒納米制劑具有改善藥物的功效，提高藥物穩(wěn)定性，控制藥物釋放，降低藥物毒性及改善患者的順應(yīng)性等優(yōu)點。殼聚糖可溶于酸或酸性水溶液，無毒無抗原性，在體內(nèi)能被溶菌酶等酶解，具有優(yōu)良的生物降解性，在體內(nèi)可溶脹成水凝膠，具有良好的成球性能，可以作為微粒給藥載體用來控釋和輸送藥物。殼聚糖納米粒除了具有殼聚糖本身的性質(zhì)外，還可以提高藥物穩(wěn)定性，使藥物到達(dá)病灶部位，達(dá)到靶向治療的目的。殼聚糖納米粒作為一種新型的藥物載體，具有無毒、生物相容性和生物可降解性良好，可提高藥物穩(wěn)定性、增加藥物吸收、提高藥物生物利用度、降低藥物毒性作用等特點， 還可使藥物在體內(nèi)達(dá)到控釋和靶向治療的作用。殼聚糖目前已成為靶向和緩控釋研究的熱點，特別適合于基因、蛋白質(zhì)、多肽等生物活性大分子藥物的包載，具有廣闊的應(yīng)用前景。運用現(xiàn)代分子設(shè)計思想和先進(jìn)的合成技術(shù)對殼聚糖納米粒表面進(jìn)行修飾，使其具有靶器官、 靶組織和靶細(xì)胞所要求的選擇性，也是未來研究的方向。半乳糖是肝細(xì)胞表面去唾液酸糖蛋白受體的特異性配體，是肝靶向基團，具有誘導(dǎo)和提高肝細(xì)胞在細(xì)胞外基質(zhì)支架材料上的黏附性能。以殼聚糖為基體材料，在EDC和 NHS的活化作用下，將半乳糖基引入到殼聚糖的結(jié)構(gòu)中，合成和制備出新型肝靶向支架材料一一半乳糖基化殼聚糖。其中藥物的平均粒徑小于I μ m,—般在100_500nm之間。殼聚糖納米粒可以進(jìn)一步制備為適合口服、注射或其他給藥途徑的藥物劑型，從而提高藥物的吸收和生物利用度。納米粒的制備方法主要有乳化蒸發(fā)-低溫固化法、高壓乳勻法、薄膜-超聲分散法、溶劑揮發(fā)法、微乳法、溶劑分散凝聚法等。根據(jù)殼聚糖的特點和藥物本身性質(zhì)，采用溶劑揮發(fā)法制備載藥殼聚糖納米粒，此法工藝簡單、回收率較高。綜上所述，將冬凌草甲素制成半乳糖基化殼聚糖納米粒，預(yù)期可以達(dá)到改變藥物體內(nèi)分布、延長藥物作用時間、提高生物利用度、藥物作用靶向性增強等目的。現(xiàn)有技術(shù)中并未見有關(guān)于將冬凌草甲素制成半乳糖基化殼聚糖納米粒的報道。雖然將藥物制成納米粒是常規(guī)的技術(shù)手段，但要研制出一種具有效果好、生物相容性好、生物利用度高、釋藥可控等優(yōu)點的配方及制備方法并不是很容易的，需要付出創(chuàng)造性勞動。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，針對冬凌草甲素水溶性差、生物利用度低的臨床應(yīng)用局限性，本發(fā)明提供了一種冬凌草甲素的新劑型冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，該制劑可以增加冬凌草甲素的生物利用度，且毒副作用小、體系穩(wěn)定；本發(fā)明還提供了該冬凌草甲素納米粒制劑的制備方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，是由冬凌草甲素、脂質(zhì)材料、表面活性劑、半乳糖基化殼聚糖、凍干保護(hù)劑和注射用水組成的，以IOOml納米粒制劑計，各組分含量如下
冬凌草甲素0.01 I.Og
脂質(zhì)材料表面活性劑半乳糖基化殼聚糖注射用水
所述脂質(zhì)材料與表面活性劑的質(zhì)量比為I
O. I 10.0 g 0.2 20.0 g 0.005 I.O g 100 ml2。
優(yōu)選的，以IOOml納米粒制劑計,各組分含量如下
冬凌草甲素0.05 0.25
脂質(zhì)材料0.5 2.5 g
表面活性劑I.O 5.0 g
半乳糖基化殼聚糖0.025 0.25g
注射用水IOOmh所述脂質(zhì)材料與表面活性劑的質(zhì)量比為I : 2。所述脂質(zhì)材料為Soybean Oil (藥用大豆油)或/和MCT (中鏈三酸甘油酯)。所述表面活性劑為脂肪酸甘油酯、多元醇型非離子表面活性劑、聚氧乙烯型非離子表面活性劑、泊洛沙姆、卵磷脂中的一種或多種的組合，優(yōu)選泊洛沙姆188或卵磷脂。所述半乳糖基化殼聚糖是由殼聚糖(Chitosan, CS)與乳糖醒酸(Lactobionic acid, LA)反應(yīng)制備而成。所述殼聚糖(Chitosan, CS)與乳糖醒酸(Lactobionic acid, LA)反應(yīng)條件為將殼聚糖、乳糖醛酸溶于含有EDAC(碳二亞胺鹽酸鹽)和NHS (N-羥基丁二酰胺)的乙酸溶液中，其中，殼聚糖、乳糖醛酸與乙酸溶液的質(zhì)量體積比(w/v，g/ml)分別為O. 05% 2.5%、
O.1% 5%，EDAC、NHS與乙酸溶液的質(zhì)量體積比(w/v，g/ml)分別為O. 7%,O. 3%，乙酸溶液濃度為 O. 6% (w/v, g/ml), TMEA (N，N，N’，N’-四甲基乙二胺)調(diào) pH 至 4 5，500r/min 攪拌72h，所得溶液在透析袋中透析3天，每天換三次水；透析后按照2mL/瓶分裝至西林瓶，迅速放入超低溫冰箱，在-80°C溫度下冷凍24小時，再取出迅速放入溫度已降至-50°C 的凍干機擱板上，蓋上真空罩，開啟真空泵開關(guān)，凍干48小時后，取出，即得半乳糖基化殼聚糖；其中，每O. 01 O. 5g殼聚糖與O. 02 I. Og乳糖醛酸進(jìn)行反應(yīng)。
所述泊洛沙姆188為一種0/W型表面活性劑，是目前用于靜脈乳劑的極少數(shù)合成表面活性劑之一，具有無毒、無抗原性、無致敏性、無刺激性、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定及不引起溶血的優(yōu)良性質(zhì)，制備的乳劑能夠耐受熱壓滅菌和低溫冰凍而不改變其物理穩(wěn)定性；所述卵磷脂制得的乳劑的乳滴很細(xì)且穩(wěn)定，無毒，可用注射用乳劑的表面活性劑，也可作為脂質(zhì)微粒制劑的主要輔料。所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑的制備方法，包括以下步驟(I)將冬凌草甲素、表面活性劑和脂質(zhì)材料加入有機溶劑中，在超聲下使冬凌草甲素、表面活性劑和脂質(zhì)材料全部溶解，得到油相；(2)將半乳糖基化殼聚糖加入注射用水中；(3)在磁力攪拌作用下，將油相分散到上述含有半乳糖基化殼聚糖的注射用水中， 得冬凌草甲素納米粒溶液；(4)將步驟(3)所得冬凌草甲素納米粒溶液在真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，即得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑。所述步驟(I)中，有機溶劑為乙醇或/和丙酮，優(yōu)選丙酮和乙醇的混合，丙酮和乙醇二者的體積比為5 : I I : 5，最優(yōu)選7 3。所述步驟(I)中，表面活性劑和脂質(zhì)材料分散在有機溶劑中時，其用量關(guān)系如下 每O. I 10. Og脂質(zhì)材料分散在50ml有機溶劑中。所述步驟(3)中，油、水兩相混合的具體操作為在轉(zhuǎn)速為IOOOrpm磁力攪拌作用下，將油相逐滴緩慢加入到水相中。所述步驟(4)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)條件為在30 60°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)10 30min,除去有機溶劑。本發(fā)明的冬凌草甲素納米粒制劑的制備方法，采用乳化-溶劑揮發(fā)法，它是先將藥物溶于溶有表面活性劑和脂質(zhì)材料的有機溶劑中，然后在磁力攪拌作用下將其滴入含有半乳糖基化殼聚糖材料的水相中，最后在真空條件下蒸去有機溶劑，制得納米粒。本法還適于制備注射用的微乳、脂質(zhì)體、納米囊等。本發(fā)明所制備得到的冬凌草甲素納米粒制劑在具體應(yīng)用時，可以制成注射劑應(yīng)用，毒副作用小，體系穩(wěn)定；也可以制成口服制劑，如片劑、膠囊劑等。本發(fā)明為了提高冬凌草甲素的口服生物利用度以及制備注射用冬凌草甲素，以增加療效和拓展臨床應(yīng)用，采用了適當(dāng)?shù)妮o料和乳化-溶劑揮發(fā)法制備了冬凌草甲素納米粒。本發(fā)明所使用的表面活性劑、脂質(zhì)材料和靶向因子均為藥物制劑領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的輔料， 無毒、無刺激性，無免疫應(yīng)答性，具備良好的生物相容性。本發(fā)明通過工藝優(yōu)化和處方篩選， 選擇適當(dāng)?shù)臄嚢杷俣龋砻婊钚詣⒅|(zhì)材料種類及濃度，有機溶劑配比及組成，制備出粒徑大小可以控制的冬凌草甲素納米粒。本發(fā)明的方法制備得到的冬凌草甲素納米粒溶液在透射電鏡下觀察，可見冬凌草甲素為類球形的實體粒子，粒徑在250nm左右，根據(jù)粒子的形態(tài)和大小可以判定該制劑為冬凌草甲素納米粒。預(yù)期可以達(dá)到改變藥物體內(nèi)分布、延長藥物作用時間、提高生物利用度等目的。本發(fā)明的冬凌草甲素納米粒的制備工藝簡單，所得納米粒生物相容性好，做成口服納米粒溶液有利于兒童和老人等吞服困難的人群適用，增加生物利用度，減小給藥劑量，降低毒副作用。


圖I :冬凌草甲素化學(xué)結(jié)構(gòu)式。圖2 :冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒的透射電鏡照片。圖3 :冬凌草甲素納米粒溶液的粒徑分布圖(橫坐標(biāo)粒徑(Diameter,單位nm), 縱坐標(biāo)百分率(Cumulative Intensity, % )),其中，圖3A為制備后的粒徑分布圖，圖3B 為放置30天后的粒徑分布圖。圖4:冬凌草甲素及冬凌草甲素納米粒體外釋放的釋放百分率-時間曲線示意圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實施例I :制備冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒將O. 05g殼聚糖、O. Ig半乳糖酸溶于含有140mg EDAC和60mg NHS的20ml O. 6% 乙酸溶液中，用TMEA調(diào)pH至4 5, 500r/min攪拌72h。所得溶液在透析袋中透析3天,每天換三次水，然后進(jìn)行冷凍干燥透析后按照2mL/瓶分裝至西林瓶，迅速放入超低溫冰箱， 在-80°C溫度下冷凍24小時，再取出迅速放入溫度已降至-50°C的凍干機擱板上，蓋上真空罩，開啟真空泵開關(guān)，凍干48小時后，取出，得半乳糖基化殼聚糖。稱取O. Ig冬凌草甲素、I. 25g MCT、2. 5g卵磷脂溶于50ml有機溶劑(乙醇與丙酮體積比為7 3)中，超聲至藥物與輔料全部溶解后,在磁力攪拌IOOOrpm作用下將其逐滴加入到含O. 02g半乳糖基化殼聚糖的IOOml注射用水中，然后在40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 20min,除去有機溶劑，即可得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒。取上述冬凌草甲素納米粒溶液稀釋到一定倍數(shù)，透射電鏡下觀察，如圖2所示；粒徑分布圖如圖3A所示，由圖可見，為類球形的實體粒子，粒徑在250nm左右，根據(jù)粒子的形態(tài)和大小可以判定該制劑為冬凌草甲素納米粒；將制劑置于_4°C條件下放置30天后，以同樣方法測得粒徑分布圖如圖3B所示，與圖3A相比，無明顯變化，可見其穩(wěn)定性良好。冬凌草甲素納米粒的藥物釋放，通過以下方式實現(xiàn)精密吸取冬凌草甲素納米粒 2ml置于含100ml PBS(pH 7.4)的小溶出杯中，設(shè)定溫度為37°C，攪拌漿轉(zhuǎn)速為100r/min。 取樣經(jīng)超濾離心后，進(jìn)樣20 μ I進(jìn)行HPLC測定，計算累積釋放百分率，如圖4所示，由圖可知冬凌草甲素納米粒體外釋放呈雙相動力學(xué)，即最初為突釋后為緩釋，可以顯著延長冬凌草甲素的體外釋放。實施例2 :制備冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒將0.06g殼聚糖、O. 15g半乳糖酸溶于含有140mg EDAC和60mg NHS的20ml O. 6% 乙酸溶液中，用TMEA調(diào)pH至4-5, 500r/min攪拌72h。所得溶液在透析袋中透析3天,每天換三次水，然后進(jìn)行冷凍干燥。稱取O. 2g冬凌草甲素、2. 5g MCT,5. Og卵磷脂溶于25ml有機溶劑(乙醇與丙酮體積比為I : I)中，超聲至藥物與輔料全部溶解后，在磁力攪拌IOOOrpm作用下將其逐滴加入到含O. 02g半乳糖基化殼聚糖的IOOml注射用水中，然后在40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min， 除去有機溶劑，即可得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒。實施例3 :制備冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒
將O. Ig殼聚糖、O. 05g半乳糖酸溶于含有140mg EDAC和60mg NHS的20ml O. 6% 乙酸中，用TMEA調(diào)pH至4-5, 500r/min攪拌72h。所得溶液在透析袋中透析3天,每天換三次水，然后進(jìn)行冷凍干燥。稱取O. 8g冬凌草甲素、10. Og MCT、20. Og卵磷脂溶于50ml有機溶劑(乙醇與丙酮體積比為3 : 2)中，超聲至藥物與輔料全部溶解后,在磁力攪拌IOOOrpm作用下逐滴加入到含O. 2g半乳糖基化殼聚糖的注射用水中，然后在40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min，除去有機溶劑，即可得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒。實施例4 :制備冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒將O. 15g殼聚糖、O. 25g半乳糖酸溶于含有140mg EDAC和60mg NHS的20ml O. 6% 乙酸溶液中，用TMEA調(diào)pH至4-5, 500r/min攪拌72h。所得溶液在透析袋中透析3天,每天換三次水，然后進(jìn)行冷凍干燥。稱取O. Ig冬凌草甲素、I. 25g大豆油、2. 5g卵磷脂溶于25ml有機溶劑(乙醇與丙酮體積比為2 3)中，超聲至藥物與輔料全部溶解后，在磁力攪拌IOOOrpm作用下逐滴加入到含O. 02g半乳糖基化殼聚糖的注射用水中，然后在40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min，除去有機溶劑，即可得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒。實施例5 :制備冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒將O. 05g殼聚糖、O. Olg半乳糖酸溶于含有140mg EDAC和60mg NHS的20ml O. 6% 乙酸溶液中，用TMEA調(diào)pH至4-5, 500r/min攪拌72h。所得溶液在透析袋中透析3天,每天換三次水，然后進(jìn)行冷凍干燥。稱取O. 5g冬凌草甲素、6. 25g MCT、12. 5g卵磷脂溶于15ml有機溶劑(乙醇與丙酮體積比為I : 3)中，超聲至藥物與輔料全部溶解后,在磁力攪拌IOOOrpm作用下逐滴加入到含O. 12g半乳糖基化殼聚糖的注射用水中，然后在40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min，除去有機溶劑，即可得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒。實施例6 :制備冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒將0.05g殼聚糖、0.05g半乳糖酸溶于含有140mg EDAC和60mg NHS的20ml O. 6% 乙酸溶液中，用TMEA調(diào)pH至4-5, 500r/min攪拌72h。所得溶液在透析袋中透析3天,每天換三次水，然后進(jìn)行冷凍干燥。稱取O. 2g冬凌草甲素、2. 5g大豆油、5. Og卵磷脂溶于50ml有機溶劑(乙醇與丙酮體積比為3 I)中，超聲至藥物與輔料全部溶解后，在磁力攪拌IOOOrpm作用下逐滴加入到含O. 05g半乳糖基化殼聚糖的注射用水中，然后在40°C下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)20min，除去有機溶劑，即可得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒。
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權(quán)利要求
1.一種冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，其特征在于是由冬凌草甲素、脂質(zhì)材料、表面活性劑、半乳糖基化殼聚糖、凍干保護(hù)劑和注射用水組成的，以IOOml納米粒制劑計，各組分含量如下冬凌草甲素0.01 I.Og脂質(zhì)材料O. I 10.0 g表面活性劑0.2 20.0 g半乳糖基化殼聚糖0.005 I.Og注射用水IOOml所述脂質(zhì)材料與表面活性劑的質(zhì)量比為I : 2。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，其特征在于以 IOOml納米粒制劑計,各組分含量如下冬凌草甲素脂質(zhì)材料表面活性劑半乳糖基化殼聚糖注射用水0.05 0.25 g 0.5 2.5 g I.O 5.0 g 0.025 0.25g IOOmlo
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，其特征在于 所述脂質(zhì)材料為Soybean Oil或/和MCT。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，其特征在于 所述表面活性劑為脂肪酸甘油酯、多元醇型非離子表面活性劑、聚氧乙烯型非離子表面活性劑、泊洛沙姆、卵磷脂中的一種或多種的組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，其特征在于所述表面活性劑為泊洛沙姆188或卵磷脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，其特征在于 所述半乳糖基化殼聚糖是由殼聚糖與乳糖醛酸反應(yīng)制備而成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，其特征在于所述殼聚糖與乳糖醛酸反應(yīng)條件為將殼聚糖、乳糖醛酸溶于含有EDAC和NHS的乙酸溶液中，其中，殼聚糖、乳糖醛酸與乙酸溶液的質(zhì)量體積比分別為O. 05% 2. 5%、0. I % 5%， EDAC, NHS與乙酸溶液的質(zhì)量體積比分別為O. 7%,O. 3%，乙酸溶液濃度為O. 6%，用TMEA 調(diào)pH至4 5，500r/min攪拌72h,所得溶液在透析袋中透析3天，每天換三次水；透析后在_80°C溫度下冷凍24小時，取出，_50°C真空凍干48小時，即得半乳糖基化殼聚糖；其中， 每O. 01 O. 5g殼聚糖與O. 02 I. Og乳糖醛酸進(jìn)行反應(yīng)。
8.權(quán)利要求I 7中任一項所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟(I)將冬凌草甲素、表面活性劑和脂質(zhì)材料加入有機溶劑中，在超聲下使冬凌草甲素、 面活性劑和脂質(zhì)材料全部溶解，得到油相；(2)將半乳糖基化殼聚糖加入注射用水中；(3)在磁力攪拌作用下，將油相分散到上述含有半乳糖基化殼聚糖的注射用水中，得冬凌草甲素納米粒溶液；(4)將步驟(3)所得冬凌草甲素納米粒溶液在真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，即得冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中，有機溶劑為乙醇或/和丙酮。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑的制備方法， 其特征在于所述步驟(I)中，每O. I 10. Og脂質(zhì)材料分散在50ml有機溶劑中。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種冬凌草甲素半乳糖基化殼聚糖納米粒制劑，是由冬凌草甲素、脂質(zhì)材料、表面活性劑、半乳糖基化殼聚糖、凍干保護(hù)劑和注射用水組成的，以100ml納米粒制劑計，各組分含量如下冬凌草甲素0.01～1.0g，脂質(zhì)材料0.1～10.0g，表面活性劑0.2～20.0g，半乳糖基化殼聚糖0.005～1.0g，注射用水100ml。本發(fā)明克服了冬凌草甲素難溶于水的缺陷，本發(fā)明所制備的納米粒可以顯著延長冬凌草甲素的體外釋放。本發(fā)明的納米粒生物相容性好，做成口服納米粒溶液有利于兒童和老人等吞服困難的人群適用，增加生物利用度，減小給藥劑量，降低毒副作用。
文檔編號A61P35/00GK102600084SQ20121008033
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月23日
發(fā)明者劉光璞, 劉悅, 張典瑞, 段存賢, 王飛虎, 程惠玲, 鄭丹丹 申請人:山東大學(xué)