專利名稱：一種刺五加提取物的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種刺五加提取物的制備方法。
背景技術：
刺五加為五加科植物Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim. ) Harms.的根、 根莖和莖，莖葉、果實均可作藥用。又名五加參、刺拐棒，主要分布在我國東北、華北地區，以及朝鮮、日本及俄羅斯等地，在祖國醫學中作為藥物廣泛應用已有悠久的歷史。具有益氣健脾、補腎安神的功效，用于脾腎陽虛，體虛乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多夢。刺五加根和根莖的主要成分之一總苷為酹苷和黃酮苷類化合物，它是其生物活性成分之一，而且紫丁香苷和刺五加苷E占總苷含量最高。總苷在根和根莖中的含量分別占干藥材重量的O. 6% O. 9%和O. 6% I. 5%。從文獻資料上知刺五加苷能改善衰老大鼠免疫功能，延緩免疫衰老；刺五加總皂苷具有改善家兔血液流變性、抑制血栓形成作用，而此作用是通過解聚紅細胞聚集性、降低全血黏度完成的；刺五加總皂苷對犬急性心肌缺血有較好的保護作用，此外還有抗疲勞、抗腫瘤及抗炎等作用。在傳統醫學著作中記載刺五加具有抗炎作用，國內也有學者研究了刺五加水提物的抗炎作用，指出刺五加水提物可能通過抑制活化巨噬細胞產生的炎癥介質發揮其抗炎功效。目前，市場上可買到的刺五加相關產品有刺五加浸膏、五加參茶、刺五加片、五加參沖劑、刺五加注射液等，這些產品都是刺五加原藥的粗提物處理所得，成分復雜，其有效成分含量和質量控制都很模糊，因而難以進行深入的研究。因此，對剌五加的抗炎有效部位進行深入研究，進而開發出新的安全有效的藥物，具有廣闊的前景。

發明內容
本發明目的是提供一種刺五加提取物的制備方法。為達到上述目的，本發明采用的技術方案是一種刺五加提取物的制備方法，包括如下步驟(I)以刺五加根為原料，放入過量的乙醇中浸泡至少12h，然后進行加熱，回流提取I 3h ;重復上述操作至少2次，合并提取液，得到刺五加醇提物；(2)取大孔樹脂，濕法裝柱，將上述刺五加醇提物上樣，使其吸附達到飽和，水洗至 Molishi反應呈陰性，然后進行乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。優選的技術方案，所述步驟(I)中的乙醇為體積濃度50 70%的乙醇。上述技術方案中，所述步驟(2)中，依次以3倍柱體積10%、20%、30%、40%、 50^^60^^70^^80%乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。優選的技術方案，所述刺五加提取物為50%洗脫部位100 μ g/mL和70%洗脫部位 30 μ g/mLο優選的技術方案，所述步驟(2)中的大孔樹脂為HPD 100大孔樹脂。
本發明同時請求保護上述刺五加提取物在制備抗炎藥物中的應用。過量的一氧化氮(NO)的釋放是炎癥的特征之一，有關研究認為急慢性炎癥的發生均與NO有關系。本發明是圍繞抗炎新藥研究標準，以開發刺五加新藥為目的對刺五加中總苷進行工藝純化以及對所得有效部位和有效成分進行抗炎作用研究。本發明采用大孔吸附樹脂純化刺五加總苷類有效成分，在此基礎上，進一步研究刺五加有效部位及有效成分，以LPS和IFN-Y誘導的單核巨噬細胞RAW264. 7作為細胞炎癥模型，通過一氧化氮釋放抑制活性實驗發現刺五加醇提物上大孔吸附樹脂后10%到 80%不同濃度乙醇洗脫部位均表現出很強的活性，并且呈劑量依賴性。從中篩選出了兩個最好的活性部位當測試樣品濃度在100 μ g/mL時，50%乙醇洗脫部位表現出最強的NO釋放抑制活性，抑制率大于95% ;當濃度在30μ g/mL時，70 %乙醇洗脫部位表現出最強的NO 釋放抑制活性，抑制率大于85%，均高于陽性對照，并且兩部分無細胞毒性。由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點I.本發明開發了一種刺五加提取物的制備方法，先用乙醇提取得到醇提物，再用大孔吸附樹脂進行純化，獲得了刺五加提取物，實驗發現當測試樣品濃度在100 μ g/mL 時，50%乙醇洗脫部位表現出最強的NO釋放抑制活性，抑制率大于95% ;當濃度在30 μ g/ mL時，70%乙醇洗脫部位表現出最強的NO釋放抑制活性，抑制率大于85%，均高于陽性對照，并且兩部分無細胞毒性。2.本發明采用大孔吸附樹脂純化刺五加總苷類有效成分，具有快速、便捷的優點。3.本發明的制備方法簡單，易于實現，且成本較低，適于推廣應用。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步描述實施例一一種刺五加提取物的制備方法，包括如下步驟(I)刺五加的提取稱取刺五加根lOOOg，放入IOL的圓底燒瓶中用8000mL60%乙醇浸泡過夜，用電熱套加熱使微沸，回流提取2h ;重復三次，合并提取液，濃縮至浸膏；(2)大孔樹脂對刺五加醇提物的純化取已處理的HPD 100大孔樹脂，濕法裝柱，將刺五加醇提物以lBV/h的上樣速度上樣，上樣體積為18BV，使其吸附達到飽和，水洗至Molishi反應呈陰性，依次以3倍柱體積10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液，每柱體積經適當稀釋后，HPLC法測定其中紫丁香苷和刺五加苷E的量，并濃縮蒸干，稱重；結果見下表
權利要求
1.一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)以刺五加根為原料，放入過量的乙醇中浸泡至少12h，然后進行加熱，回流提取I 3h ;重復上述操作至少2次，合并提取液，得到刺五加醇提物；(2)取大孔樹脂，濕法裝柱，將上述刺五加醇提物上樣，使其吸附達到飽和，水洗至 Molishi反應呈陰性，然后進行乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。
2.根據權利要求I所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述步驟(I) 中的乙醇為體積濃度50 70%的乙醇。
3.根據權利要求I所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述步驟(2) 中，依次以3倍柱體積10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。
4.根據權利要求3所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述刺五加提取物為50%洗脫部位100 μ g/mL和70%洗脫部位30 μ g/mL。
5.根據權利要求I所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述步驟(2) 中的大孔樹脂為HPD 100大孔樹脂。
6.權利要求I所述的一種刺五加提取物在制備抗炎藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種刺五加提取物的制備方法，包括如下步驟(1)以刺五加根為原料，放入過量的乙醇中浸泡至少12h，然后進行加熱，回流提取1～3h；重復上述操作至少2次，合并提取液，得到刺五加醇提物；(2)取大孔樹脂，濕法裝柱，將上述刺五加醇提物上樣，使其吸附達到飽和，水洗至Molishi反應呈陰性，然后進行乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。本發明開發了一種刺五加提取物的制備方法，實驗發現當測試樣品濃度在100μg/mL時，50％乙醇洗脫部位表現出最強的NO釋放抑制活性，抑制率大于95％；當濃度在30μg/mL時，70％乙醇洗脫部位表現出最強的NO釋放抑制活性，抑制率大于85％，均高于陽性對照，并且兩部分無細胞毒性。
文檔編號A61P29/00GK102600221SQ20121011707
公開日2012年7月25日 申請日期2012年4月20日 優先權日2012年4月20日
發明者李賀然, 樊潔 申請人:蘇州大學