專利名稱：姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及姜黃素在制備腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
姜黃素類是從姜科、天南星科中的ー些植物根莖中提取的ー種化學(xué)成分，是植物界很稀少的具有ニ酮的色素。具有破血行氣、通經(jīng)止痛的功能。姜黃素類的主要成分有姜黃素、脫甲氧基姜黃素及雙脫甲氧基姜黃素。目前國(guó)內(nèi)外研究證明，姜黃素不僅是ー種天然的營(yíng)養(yǎng)素，具有姜黃的傳統(tǒng)作用，而且還具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗人類免疫缺陷病毒、防癌、抗癌、保護(hù)肝臟和腎臟及抗纖維化等新的藥理作用。
無(wú)論是在戰(zhàn)時(shí)或平時(shí)，缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury)均是臨床常見(jiàn)急危重癥病象。腸系膜血管急性病變引起血管狹窄和/或急性循環(huán)衰竭導(dǎo)致腸管供血不足或中斷是造成腸缺血的重要原因，臨床上可分為腸系膜血管阻塞及腸系膜血管供血不足。腹股溝嵌頓性斜疝、腸套疊、腸梗阻、失血性休克、大器官移植術(shù)后、嚴(yán)重感染性休克等都是臨床常見(jiàn)的疾病，而這些缺血性疾病的病理生理基礎(chǔ)就與腸缺血再灌注損傷有夫。腸黏膜對(duì)缺血缺氧尤為敏感，持續(xù)的缺血缺氧必將導(dǎo)致腸組織發(fā)生嚴(yán)重壞死，進(jìn)而表現(xiàn)為腸黏膜廣泛的功能障礙、黏膜屏障的通透性增高、腸道細(xì)菌移位、毒素的吸收及遠(yuǎn)處肝、肺、腎等重要器官的損傷，出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀和并發(fā)癥，導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，進(jìn)一歩發(fā)展為多器官功能障礙綜合征(MODS)甚至死亡，給臨床診治帶來(lái)很大的困難。隨著現(xiàn)代醫(yī)療科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)腸缺血再灌注損傷的認(rèn)識(shí)及診療提高到了一個(gè)新的水平，為臨床防治提供了新的線索。但是通過(guò)近10年來(lái)的臨床實(shí)踐及調(diào)查統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)病死率與20多年前比較，有增無(wú)減。究其原因，主要是缺乏早期診斷及有效防治措施。因此，尋找有效地預(yù)防和早期治療的藥物，從而應(yīng)用于臨床是十分必要的。腸缺血再灌注損傷的病理生理機(jī)制目前尚不清楚，人們先后提出過(guò)能量衰竭、氧自由基損傷、白細(xì)胞粘附與內(nèi)皮細(xì)胞損傷、介質(zhì)病等一系列學(xué)說(shuō)，并針對(duì)腸缺血再灌注損傷的可能機(jī)制，進(jìn)行了相應(yīng)的防治實(shí)驗(yàn)研究。盡管研究和臨床人員嘗試了很多的方法用于預(yù)防和治療諸如腸缺血再灌注導(dǎo)致的急危重病象，例如，臨床上結(jié)合補(bǔ)液并應(yīng)用擴(kuò)血管藥物治療、肝素及抗纖溶系統(tǒng)藥物治療、抗細(xì)胞因子治療等，但是近十多年來(lái)的實(shí)踐證明，均未能取得預(yù)期的效果。這是由于此類急危重病象的發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，受到多種因素的調(diào)控；發(fā)展速度快，必須在早期予以干渉和治療，所以臨床上預(yù)防和治療的效果仍然不是很明顯。因此，尋找一些藥物新的作用，從而能早期應(yīng)用于腸缺血再灌注導(dǎo)致的急危重病象如失血性休克、大器管移植術(shù)后、嚴(yán)重感染性休克等是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于發(fā)現(xiàn)ー種傳統(tǒng)藥物的新作用，即姜黃素能夠在早期預(yù)防和治療腸缺血再灌注導(dǎo)致的急危重病象。
姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用。所述腸缺血再灌注損傷為腸道黏膜壞死、出血或炎癥反應(yīng)。治療腸缺血再灌注損傷的藥物為 姜黃素注射劑；所述姜黃素注射劑的制備方法如下取姜黃素3g，3ml無(wú)水こ醇溶解，滴加入聚維酮溶液中，用IOml無(wú)水こ醇洗瓶，手動(dòng)攪拌，倒入250ml燒杯中攪拌充分,攪拌后凍干3-5h,得到姜黃素固體分散體，取900mg姜黃素固體分散體，加注射用生理鹽水5ml，得到20mg/ml的姜黃素注射劑，置于于棕色瓶中保存。所述姜黃素能顯著抑制腸缺血再灌注損傷導(dǎo)致的谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平異常增高，改善肝功能損傷。所述姜黃素能顯著抑制腸缺血再灌注損傷導(dǎo)致的尿酸水平異常增高，改善腎功能損傷。所述姜黃素能顯著抑制促凋亡因子及促炎因子的表達(dá)水平。本發(fā)明的有益效果姜黃素能在早期顯著改善腸組織病理?yè)p傷，井能作用于遠(yuǎn)端器官，顯著改善腸缺血再灌注導(dǎo)致的肝、腎功能的損傷，并且能夠調(diào)控腸組織中凋亡、炎癥相關(guān)的調(diào)控因子的水平，控制了損傷后機(jī)體往更壞的方面發(fā)展，有利于臨床應(yīng)用。由于姜黃素比較易得，并且在大劑量使用時(shí)無(wú)急性毒性及長(zhǎng)期毒性，同時(shí)姜黃素類藥物的劑型較多，使用非常方便，大大避免了臨床上在治療此類疾病時(shí)面臨的藥物毒副作用大、僅能針對(duì)單一臟器進(jìn)行支持治療、藥物費(fèi)用昂貴、藥物使用復(fù)雜等缺陷。同時(shí)由于姜黃素能在損傷早期就具有很好的療效，所以為進(jìn)一歩治療此類疾病爭(zhēng)取了機(jī)會(huì)和時(shí)間，極大地穩(wěn)定了病情的進(jìn)ー步惡化，降低了死亡率。


圖I腸組織肉眼觀察圖；圖中，A-假手術(shù)組，B-對(duì)照組，C-姜黃素治療組。圖2各組處理小鼠的死亡率。圖3各組處理小鼠的腸組織病理?yè)p傷圖。圖4各組處理小鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力。圖5各組處理小鼠的尿酸水平。圖6各組處理小鼠的相關(guān)因子表達(dá)水平；圖中，A-Caspase-3的表達(dá)量，B-磷酸化P38的表達(dá)量，C-磷酸化cPLA2的表達(dá)量，D-C0X-2的表達(dá)量。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)ー步說(shuō)明。實(shí)施例I姜黃素治療小鼠腸缺血再灌注損傷(I)姜黃素制劑的制備聚維酮(PVP)姜黃素固體分散體質(zhì)量比(姜黃素PVP = I : 8)PVP 24g，40ml無(wú)水こ醇溶解，磁力攪拌；姜黃素3g，3ml無(wú)水こ醇溶解，滴加入PVP溶液中，用IOml無(wú)水こ醇洗瓶，手動(dòng)攪拌，倒入250ml燒杯中大轉(zhuǎn)子攪拌充分，攪拌后凍干4h，得到姜黃素固體分散體。姜黃素固體分散體溶液稱取900mg姜黃素固體分散體,加注射用生理鹽水5ml,即為姜黃素20mg/ml,于棕色瓶中，呈透明橘紅色，粘稠，取20mg/ml Iml+生理鹽水7ml即為2. 5mg/ml的應(yīng)用液。(2)小鼠腸缺血再灌注損傷模型的制備及姜黃素對(duì)損傷模型的治療制作小鼠腸缺血再灌注損傷模型雄性昆明小鼠60只，稱重約25g，其中分為假手術(shù)組A 20只，對(duì)照組B 20只，姜黃素治療組C 20只，術(shù)前12h禁食自由飲水，麻酔后腹部消毒，正中開(kāi)ロ，小心分離出腸系膜上動(dòng)脈，微型動(dòng)脈夾夾閉形成缺血，45min后松夾進(jìn)行再灌注，姜黃素治療組與再灌注同時(shí)及以后每6h分別腹腔注射300ul姜黃素工作溶液，對(duì)照組注射相同體積的PVP-K30溶液，24h后采集小鼠標(biāo)本，保存待檢測(cè)。假手術(shù)組僅分離腸系膜上動(dòng)脈，不夾閉，Ih后處死取標(biāo)本。 圖I顯示各組腸組織的損傷情況，從圖中可以看出，假手術(shù)組A和姜黃素治療組C的腸組織損傷明顯小于對(duì)照組B ;圖2顯示各組小鼠的死亡率，對(duì)照組B死亡率明顯高于姜黃素治療組C。實(shí)施例2姜黃素對(duì)腸缺血再灌注損傷小鼠腸組織病理?yè)p傷，肝、腎功能，凋亡、炎癥相關(guān)調(diào)控因子表達(dá)的影響(I)姜黃素對(duì)小鼠腸組織病理?yè)p傷的影響取實(shí)施例I處理后的各組小鼠腸回盲部IOcm以上腸管，經(jīng)10%的中性甲醛固定，石蠟包埋、切片，蘇木素-伊紅(HE)染色后行組織學(xué)檢查，并對(duì)小腸組織損傷程度進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果如圖3所示，假手術(shù)組A幾乎觀察不到損傷，對(duì)照組B腸組織損傷嚴(yán)重，腸絨毛幾乎全部脫落，黏膜壞死嚴(yán)重；姜黃素治療組C腸組織雖仍有壞死，但是程度明顯比對(duì)照組輕，提示姜黃素雖然不能避免但是能顯著減輕腸組織損傷壞死。(2)姜黃素對(duì)損傷后肝功能的影響取采集的小鼠血清標(biāo)本，試劑盒檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)在37°C及PH7. 4條件下，作用于丙氨酸及α -酮戊ニ酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應(yīng)30min后加入2、4_ ニ硝基苯肼(DNPH)鹽酸溶液，既終止反應(yīng)，同時(shí)(DNPH)與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于505nm比讀吸光度并計(jì)算酶活力。結(jié)果如圖4所示，損傷后(對(duì)照組)小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力顯著升高，姜黃素治療組比對(duì)照組顯著降低，與假手術(shù)組水平基本一致。(3)姜黃素對(duì)損傷后腎功能的影響取采集的小鼠血清標(biāo)本，試劑盒檢測(cè)血清中尿酸(UA)水平。無(wú)蛋白濾液中的尿酸在堿性狀態(tài)下還原磷鎢酸生成鎢藍(lán)、尿囊素和ニ氧化碳，于690nm處測(cè)定吸光度，藍(lán)色深淺與尿酸濃度成正比例。結(jié)果如圖5，損傷后(對(duì)照組)小鼠血清中尿酸水平顯著升高，姜黃素治療組水平雖然也有所升高，但是差異無(wú)顯著性，其水平與假手術(shù)組比較接近。(4)姜黃素對(duì)凋亡、炎癥相關(guān)因子表達(dá)水平的影響采集各組小鼠腸組織，采用免疫印跡法檢測(cè)腸組織中ー些與凋亡、炎癥相關(guān)的因子表達(dá)水平。用細(xì)胞裂解液提取腸組織細(xì)胞全蛋白，定量后按照每孔50ug蛋白上樣電泳，后將電泳后的蛋白轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素薄膜上，用特異性抗體及化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)相關(guān)因子的表達(dá)水平。結(jié)果如圖6，損傷后(對(duì)照組)腸組織中Caspase-3、磷酸化P38、磷酸化胞漿型磷脂酶A2 (cPLA2)、環(huán)氧合酶-2 (C0X-2)這些與細(xì)胞凋亡和提示組織細(xì)胞損傷的指標(biāo)均顯著增高，而姜黃素治療組的以上指標(biāo)表達(dá)水平均得到顯著的抑制，他們的表達(dá)水平都和假手術(shù)組比較接近。以上提示，姜黃素可以調(diào)控抑制這些與損傷相關(guān)的因子表達(dá)，避免機(jī)體向更壞的方向發(fā)展。姜黃素對(duì)腸缺血再灌注損傷的治療效果明顯，姜黃素比較易得，使用方便。在早期使用可以明顯避免腸道損傷及顯著改善損傷導(dǎo)致的遠(yuǎn)端肝、腎等重要臟器的損傷，及抑制促凋亡、促炎因子的表達(dá)水平，從而控制損傷后機(jī)體的進(jìn)ー步惡化。這就為臨床上治療失血性休克、大器管移植術(shù)后、嚴(yán)重感染性休克等，與腸缺血再灌注損傷有關(guān)的急危重病象，爭(zhēng) 取了機(jī)會(huì)和時(shí)間，提高了患者的生存率和生活質(zhì)量。
權(quán)利要求
1.姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述腸缺血再灌注損傷為腸道黏膜壞死、出血或炎癥反應(yīng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用，其特征在于，治療腸缺血再灌注損傷的藥物為姜黃素注射劑；所述姜黃素注射劑的制備方法如下取姜黃素3g，3ml無(wú)水こ醇溶解，滴加入聚維酮溶液中，用IOml無(wú)水こ醇洗瓶，手動(dòng)攪拌，倒入250ml燒杯中攪拌充分,攪拌后凍干3-5h,得到姜黃素固體分散體,取900mg姜黃素固體分散體，加注射用生理鹽水5ml，得到20mg/ml的姜黃素注射劑，置于于棕色瓶中保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用，其特征在干，所述姜黃素能顯著抑制腸缺血再灌注損傷導(dǎo)致的谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平異常增高，改善肝功能損傷。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述姜黃素能顯著抑制腸缺血再灌注損傷導(dǎo)致的尿酸水平異常增高，改善腎功能損傷。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述姜黃素在制備治療腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述姜黃素能顯著抑制促凋亡因子及促炎因子的表達(dá)水平。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了屬于藥物制備技術(shù)領(lǐng)域的姜黃素在制備腸缺血再灌注損傷藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備腸缺血再灌注損傷模型，將姜黃素-PVP固體分散體用注射用生理鹽水溶解后用于治療該疾病模型。通過(guò)組織大體觀察、疾病模型死亡率、組織病理學(xué)變化、血清肝腎功能變化、組織中凋亡、炎癥相關(guān)調(diào)控因子的變化來(lái)檢測(cè)姜黃素的治療效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)姜黃素能有效的治療腸缺血再灌注損傷，為姜黃素在急危重病象的應(yīng)用提供依據(jù)。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102670574SQ201210149140
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月15日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月15日
發(fā)明者廖杰, 薛輝, 鄧子輝, 顏光濤 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院