專利名稱：轉錄調控物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種轉錄調控物組合物。
背景技術：
雄激素定義為廣泛種類的主要控制雄性特征發展及維持的類固醇激素。其經由雄激素受體(AR)發揮其生理作用，該雄激素受體為類固醇激素核受體總科中的一員。該AR通過結合雄激素(例如睪固酮)或相關配位體得以活化。經活化之AR引發信號轉導路徑，其驅動眾多"雄激素響應"靶基因(例如前列腺特異性抗原(PSA))之轉錄增加。應注意的是，此路徑中的信號轉導步驟尚未完全闡明。由雄激素活化AR，接著增加雄激素響應靶基因的轉錄，會激發眾多疾病，例如前列腺癌。因此，治療前列腺癌通常包括投與AR拮抗劑。不幸地，由于由癌細胞所表現之AR常變成雄激素非依賴性，意即組成性活性(例如由于突變)，因此其效用常為短期的。因此，配位體非依賴性AR即使在AR拮抗劑存在下仍驅動高水平的支持持久性癌生長的靶基因轉錄。因此，需要在A R活化下游的信號轉導步驟中調控雄激素回應靶基因轉錄的組合物，以及用于其識別及治療用途的方法。

發明內容
本發明部分基于意外發現，即IkB激酶亞單位a (IKKa)與AR相互作用且其活性對于雄激素響應基因轉錄很關鍵。因此，本發明一方面涉及通過對受檢者投與含有有效劑量之IKKa活性抑制劑的組合物來治療雄激素刺激的疾病的方法。較佳地，在投與該組合物之前，該受檢者經診斷患有該雄激素刺激的疾病。雄激素刺激的疾病為由AR活性所引起或惡化的任何健康異常病癥，例如前列腺癌、良性前列腺肥大、乳癌、男性禿頭癥、痤瘡丙酸桿菌、多囊性卵巢癥、體染色體顯性多囊性腎病或雄性素過多癥。組合物可含有來自膨蜞菊(Wedelia chinensis)、鱧腸(Eclipta prostrata)或旱蓮草(Eclipta alba)的提取物。IKK α活性抑制劑可為葉含膨蜞菊內酯(wedelolactone)、葉黃酮(Iuteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黃素(apigenin)、15-脫氧-Λ 12，14-前列腺素J2或前列腺素Al。該方法也包括在對受檢者投與上述組合物之前或之后測定來自該受檢者的生物試樣中的PSA含量。在投藥之前測定PSA含量適用于診斷受檢者患有雄激素刺激的疾病(例如前列腺癌)。在投藥之后所測定的PSA含量為響應上述用于治療雄激素刺激的疾病之方法的治療的可靠指數。本發明另一方面涉及通過對高風險受檢者投與含有有效劑量的IKKa活性抑制劑來降低該受檢者的前列腺癌風險的方法。
本發明另一方面涉及用于識別調控物(意即IKK α調節的轉錄活性的抑制劑或刺激劑)的方法。轉錄活性抑制劑適用于(例如)治療諸如前列腺癌等的雄激素刺激的疾病。該方法包括(I)提供哺乳動物細胞，其表達IKKa及AR，且含有包括可操作性地連接于編碼報導體多肽序列上的雄激素回應促進劑序列的分離的核酸，從而使得該細胞也表達該報導體多肽，(2)將該細胞與測試組合物接觸，且(3)檢定表達量(意即mRNA或蛋白質的表達量)或報導體多肽的活性。若該測試組合物增加或降低與負控制治療有關的表達量或編碼的報導體多肽的活性，則認為其為由IKKa調節的轉錄活性的調控物。經表達的AR可為組成性活性突變體。若AR為非組成性活性，則該 方法包括將細胞與AR促效劑接觸。該方法也可包括判定測試組合物對IKKa活性的作用以進一步表征機制，測試組合物通過該機制調控由此激酶調節的轉錄活性。本發明另一方面涉及用于測定非人類哺乳動物測試受檢者中由IKKa調節的轉錄活性的方法。該方法適用于(例如)判定活體內候選IKK α抑制劑組合物的功效。該方法包括(I)引入眾多細胞，其表現IKK α及雄激素受體，且含有具有可操作性地連接于編碼報導體多肽序列上的雄激素回應促進劑序列的分離的核酸，從而使得該細胞也表達該報導體多肽；及(2)檢測由該等細胞所表達的報導體多肽的活性。報導體活性(例如活體內)的檢測指示測試受檢者中由IKKa調節的轉錄活性。該方法也可包括測定來自測試受檢者的生物試樣中的IKK α活性程度。本發明還提供了下列各項I. 一種用于治療或預防病患的前列腺癌疾病的醫藥組合物，其包含含有有效劑量的I K B激酶亞單位α抑制劑。2.如項I的醫藥組合物，其中該醫藥組合物為植物提取物。3.如項2的醫藥組合物，其中該植物為膨蜞菊(Wedelia chinensis)、鱧腸(Eclipta prostrata)或旱蓮草(Eclipta alba)。4.如項3的醫藥組合物,其中該抑制劑為葉含膨蜞菊內酯(wedelolactone)、葉黃酮(Iuteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黃素(apigenin)、15-脫氧-Δ 12’14-前列腺素J2或前列腺素Al。5.如項I的醫藥組合物，其中該抑制劑為葉含蟛蜞菊內酯。6.如項I的醫藥組合物，其進一步包含無毒非經腸可接受的稀釋劑或溶劑中的溶液或懸浮液。7.如項6的醫藥組合物，其中該溶液或該懸浮液為1，3- 丁二醇溶液、甘露醇、水、林格氏液或等張氯化鈉溶液。8.如項I的醫藥組合物，其進一步包含不揮發性油的溶劑或懸浮介質。9.如項8的醫藥組合物，其中該溶劑或該懸浮介質為合成的單甘油酯、合成的二甘油酯、油酸的脂肪酸及其甘油酯衍生物、橄欖油或蓖麻油。10.如項8的醫藥組合物，其進一步更包含長鏈醇稀釋劑或分散劑、羧甲基纖維素或其類似分散劑。11.如項I的醫藥組合物，其進一步包含界面活性劑或生物可用性增強劑。12.如項I的醫藥組合物，其為任何經口可接受的劑型，包括膠囊、錠劑、乳液及水性懸浮液、分散液及溶液。
13.如項12的醫藥組合物，其進一步可包含載劑、潤滑劑、適用稀釋劑、甜味劑、調味劑或著色劑。14.如項13的醫藥組合物，其中該載劑為一種或多種可用作傳遞活性化合物的醫藥賦形劑。15.如項13的醫藥組合物，其中該載劑為膠狀氧化硅、硬脂酸鎂、纖維素、或月桂基硫酸納。
16.如項I的醫藥組合物，其為鼻可用噴霧劑或吸入組合物，進一步可包含使用芐醇的防腐劑、增強生物可用性的吸收促進劑、碳氟化合物、增溶劑或分散劑。17.如項16的醫藥組合物，其為制備成于生理食鹽水中的溶液。此外，本發明還提供下列各項I. 一種含有有效劑量的I K B激酶亞單位α抑制劑的組合物的用途，其用于制備這樣的藥劑，所述藥劑用于治療需要治療的受檢者中雄激素刺激的疾病。2.如權利要求I的用途，其中在投與該藥劑之前，進一步診斷該受檢者患有所述雄激素刺激的疾病。3.如權利要求I的用途，其中該組合物為植物提取物。4.如權利要求3的用途，其中該植物為膨蜞菊(Wedelia chinensis)、鱧腸(Eclipta prostrata)或旱蓮草(Eclipta alba)。5.如權利要求I的用途，其中該抑制劑為葉含膨蜞菊內酯(wedelolactone)、葉黃酮(Iuteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黃素(apigenin)、15-脫氧-Δ 12’14-前列腺素J2或前列腺素Al。6.如權利要求5的用途，其中該抑制劑為葉含蟛蜞菊內酯。7.如權利要求I的用途，其中該雄激素刺激的疾病為前列腺癌、良性前列腺肥大、乳癌、男性禿頭癥、痤瘡丙酸桿菌、多囊性卵巢癥、體染色體顯性多囊性腎病或雄性素過多癥。8.如權利要求7的用途，其中該雄激素刺激的疾病為前列腺癌。9.如權利要求8的用途，其中在投與該藥劑之前或之后進一步測定來自該受檢者的生物試樣中的前列腺特異性抗原含量。10. 一種含有有效劑量的I K B激酶亞單位α活性抑制劑的組合物的用途，其用于制備這樣的藥劑，所述藥劑用于降低對于前列腺癌具高患病風險的受檢者的前列腺癌風險。11. 一種用于識別由I K B激酶亞單位α調節的轉錄活性的調控物的方法，其包含提供哺乳動物細胞，其表達I K B激酶亞單位α及雄激素受體，且含有經分離的核酸，所述核酸包括可操作性地連接于編碼報導體多肽序列的雄激素回應促進劑序列，以使得該細胞表達該報導體多肽；將該細胞與測試組合物接觸；及檢測表達量或所表達的報導體多肽的活性，其中與無該測試組合物的情況相比，在該測試組合物存在下該表達量或該報導體多肽的活性的差異指示該測試組合物調控由I K B激酶亞單位α調節的轉錄活性。
12.如權利要求11的方法，其中該雄激素回應促進劑包括SEQ ID N0s:l、2或3中的至少一個復本。13.如權利要求12的方法，其中該雄激素回應促進劑包括SEQ ID N0s:l、2及3中的至少一個復本。 14.如權利要求13的方法，其中該雄激素回應促進劑包括SEQ ID N0:4。15.如權利要求11的方法，其進一步包含將該細胞與該雄激素受體的促效劑接觸。16.如權利要求11的方法，其中該雄激素受體為該雄激素受體的組成性活性突變體。17.如權利要求11的方法，其進一步包含在該接觸步驟之后，測定該I K B激酶亞單位α的活性程度。18. 一種用于測定非人類哺乳動物測試受檢者中由I K B激酶亞單位α調節的轉錄活性的方法，其包含將細胞引入該測試受檢者中，該細胞表達IkB激酶亞單位α及雄激素受體且含有包括可操作性地連接于編碼報導體多肽序列的雄激素回應促進劑的經分離的核酸，以使得所述細胞表現該多肽；及檢測由引入該測試受檢者中的所述細胞所表達的該報導體多肽的活性，其中該報導體活性之檢出指示在該測試受檢者中由I K B激酶亞單位α調節的轉錄活性。19.如權利要求18的方法，其中該雄激素回應促進劑包括SEQ ID N0s:l、2或3中的至少一個復本。20.如權利要求19的方法，其中該雄激素回應促進劑包括SEQ ID N0s:l、2及3中的至少一個復本。21.如權利要求20的方法，其中該雄激素回應促進劑包括SEQ ID N0:4。22.如權利要求18的方法，其中該活性在活體內檢測。23.如權利要求18的方法，其進一步包含測定來自該測試受檢者的生物試樣中該
IK B激酶亞單位α的活性程度。本發明其它特征或優點將因以下實施方式亦及申請專利范圍而顯而易見。實施方式下文所描述用于識別特定調控例如雄激素響應靶基因而發生轉錄的IKKa調節型轉錄(IKKaRT)的組合物的方法。下文也描述通過投與有效劑量的所屬組合物來治療患有雄激素刺激的疾病或對于雄激素刺激的疾病具高風險的受檢者的方法。 IKK a RT調控物組合物(意即降低或增加IKK a RT的組合物)通過雄激素回應報導體檢測來識別。雄激素響應報導體結構通過將雄激素響應促進劑與編碼報導體多肽的核酸融合來產生。雄激素回應促進劑為可由AR依賴性信號轉導路徑活化的促進劑。將該雄激素響應報導體結構引入宿主細胞中以產生雄激素回應報導體細胞，在該雄激素回應報導體細胞中該雄激素響應促進劑驅動報導體多肽的表達。為評估在報導體細胞中測試組合物調控IKKaRT的能力，可通過在有或無測試組合物的情況下將所屬細胞與雄激素(例如睪固酮或5α-二氫睪固酮)接觸來增加報導體細胞的IKKa活性。將細胞與雄激素在加上或無測試組合物的情況下接觸后，測定報導體表達或活性。若在測試組合物存在下與無測試組合物相比，響應雄激素刺激的報導體的表達或活性增加或降低，則認為該組合物為IKK a RT調控物。測試組合物可為(例如)自生物源純化或合成的天然產生的組合物、植物提取物、蛋白質、肽或小分子(例如選自組合合成庫的化合物)。合適的雄激素響應報導體細胞可衍生自哺乳動物組織或細胞株(例如衍生自人類、猴、小鼠、大鼠或倉鼠)。宿主細胞內因性或異源性地表現IKKa (例如GenBank第ΝΡ_001269號)及AR (例如GenBank第ΑΑΑ51729號)。舉例而言，得自美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection) (ATCC 保藏號:CRL_250 5 )的人類 PCa22Rvl細胞株可用于產生雄激素回應報導體細胞株。在報導體測定中，可通過使用表現組成性活性AR的報導體細胞來避免雄激素刺激，例如Marcelli等人(1995)，Endocrinology第136卷,第3期中所述。用于產生報導體結構、將其引入細胞中且測定多種報導體多肽活性的方法于(例如)Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (2005),分別3. 16-3. 17及9. 1-9. 14中詳細說明。雄激素回應促進劑應包括以下雄激素響應元素中的至少一種AGAACAGCAAGTGCT (SEQIDN0:1)GGATCAGGGAGTCTC (SEQ ID NO 2)GGAACATATTGTATC (SEQ ID NO 3)參見Cleutjens 等人(1997)，Mol. Endocrinol. 11 (9) : 1256-65。舉例而言，雄激素回應促進劑可為P S A促進劑，其含有全部三種上文所列的雄激素響應元素，且具有以下序列AGCTTCTAGTTTTCTTTTCCCGGTGACATCGTGGAAAGCACTAGCATCTCTAAGCAATGATCTGTGACAATATTCACAGTGTATTGCCATCCAGGGAACTCAACTGAGCCTTGATGTCCAGAGATTTTTGTGTTTTTTTCTGAGACTGAGTCTGGCTCTGTGCCCAGGCTGGAGTGCAGTGGTGCAACCTTGGCTCACTGCAAGCTCCGCCTCCTGGGTTCACGCCATTCTCCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGACTACAGGCACCCGCCACCACGCCTGGCTAATTTTTTTGTATTTTTAGTAGAGATGGGGTTTCACTGTGTTAGCCAGGATGGTCTCAGTCTCCTGACCTCGTGATCTGCCCACCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAG
GCGTGAGCCACTGCGCCTGGCCGATATCCAGAGATTTTTTGGGGGGCTCCATCACACAGACATGTTGACTGTCTTCATGGTTGACTTTTAGTATCCAGCCCCTCTAGAAATCTAGCTGATATAGTGTGGCTCAAAACCTTCAGCACAAATCACACCGTTAGACTATCTGGTGTGGCCCAAACCTTCAGGTGAACAAAGGCACTCTAAACTGGCAGGATATTCCAAAGCATTAGAGATGACCTCTTGCAAAGAAAAAGAAATGGAAAAGAAAAAGAAAGAAAGGAAAAAAAAAAAAAAAAAGAGATGACCTCTCAGGCTCTGAGGGGAAACGCCTGAGGTCTTTGAGCAAGGTCAGTCCTCTGTTGCACAGTCTCCCTCACAGGGTCATTGTGACGATCAAATGTGGTCACGTGTATGAGGCACCAGCACATGCCTGGCTCTGGGGAGTGCV Vcv Vccv Crrccrr V Oj V Crrcrr VVv-ZVV rrcc C Crr < < C C Crr Crr < Crrc < rr C C < Ce rc T ICJ
COXCIOVBOXSVVXOOXOVOVSVOSVOXVVOXSVXXOXOVVOBXX 〔ζ. IO
ovoxoxovvvosvossxovvsvvoxoxvsxosvovvsvsvvv 〔91O
OXXXVVOXXOXBOVBXOSXOVSVOXOVOXXXOSXOXXOVVOVOXV 〔91O SSXOOOXVOSSVVOBOXVSVOXOOOOVOSVVXVVOVBOVVVO〔寸 IO
3οχ3ν8χ3ν3ον3οοχ3χοχοχ3νο3χνο83χοονχ3 χχοονν8ννχ 〔ε IO
33οχνχχχνχχ3οχ33χν3ν3χοχ3χχ3χχονχνννχχν8ν8χχο3νν 〔31O
3χ3χον3νοον3οχ3χοχχ83ν8χχ8ονον8ον3χχοχ3νονν83 〔 UO Χ80χχνν0ν00χν8νν0ν3ν0χ03νχν0ν3ν3ν3ν0νν0ν0χ30χχχ3 〔O IO XOXOOXXOXSVVVVVVVVVOVBXVVOVVOVVVOXXBXVOVVVOVXXX 〔60O ooxoooxvsvvooxxoxvoxvxvovovovoxoxvsxooovvoovvxov 〔80 δ〕 ovsvxoxvxxvxxxoxvxxvovovovvxoxxoxoxvvvovvvxovovox 〔S δ〕 xooxoxxvooxvxoxxvxvovvsvsxoxovxoovovovvvvoxxvsx 〔90 δ〕 χοχνοχνοχχοχνχχνχνοννοχνοχοχοχοΧΧΧΒονοχοοχοονννο } 〔SO XXOVVOVOSXOVXVXXOXVVOXBXVVSVXXVOVOXOOVVVOVOXOOX 〔寸 OO OVBOXOXXXSSOVOVOOXOXOOXVSXSVXOXOVOOVOVBVOXS 〔SO
0νχ0χχ3χννν88880χχ33ν3νχ0νχχν3ν3χχ0χν0χχ00ν0χν 〔SO
OOVOVOVOOVXXOOVOVOXOOXOVXXXXOSVVVOSVOVOXOVOXBXCI 〔 5 δ〕 VOVOXVBXOVOVOOOXOOXVVOXOXXXXOVOVBXXXOVVXOOVVXVVV 〔00O OVVVOOXXOVOXOVXXXXVOVOXOSSVVOXOXOVVXOVOXOXXXOXB 〔6600U
V830X0V3X3XC)V3C)XC)V8SX3C)V83XXVX3X3XVX33X88XS 〔86001——1 3χ3ον8χν3οχ3ν83οχ3ν883νοχνχ3χ3νοχχ3χ38νχοχοχχ 〔ζ.600ι__ι
V5XXV88VSVX3VXVC)XV8V8X33VC)X3XXX3X3SC)VXXXX3X 〔9600U 3X83VC)XX:0VX33X8VVX3V3XX:0VSXSVSXSC)VC)VSX8X 〔9600U 0χ38χ0χν0χ800χ0χχννχχννν0ν0ν30χ3νν8ν0χ3ν8ν0χν3 〔寸 60s 0VSV8X3V§0SXVSX3X3V3V§V8VC)VX3V8V§§ 〔ε602
VVVOVOXOSXOXOSXOVVVOVSXVOXXXVOXBSXOVXXVXOSXV 〔3600U SOXVXOVOXVOOVOVOXBXVOXOXVOXOOXVOVOVXXOVOOVOXXOXV 〔SOS
xxvosvoxoxoxvosxosxvvoxooxovooxxooxvxoxovvxoxoo060SX ε /9 Pf-ZH M V Z98ZSST Zo
權利要求
1.一種用于治療或預防病患的前列腺癌疾病的醫藥組合物，其包含含有有效劑量的 IkB激酶亞單位a抑制劑。
2.如權利要求1的醫藥組合物，其中該醫藥組合物為植物提取物。
3.如權利要求2的醫藥組合物，其中該植物為膨蜞菊(Wedeliachinensis)、鱧腸 (Eclipta prostrata)或旱蓮草(Eclipta alba)。
4.如權利要求3的醫藥組合物，其中該抑制劑為葉含膨蜞菊內酯(wedelolactone)、葉 黃酮(luteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黃素(apigenin)、15-脫氧-A 12’14-前列腺 素J2或前列腺素A1。
5.如權利要求1的醫藥組合物，其中該抑制劑為葉含蟛蜞菊內酯。
6.如權利要求1的醫藥組合物，其進一步包含無毒非經腸可接受的稀釋劑或溶劑中的 溶液或懸浮液。
7.如權利要求6的醫藥組合物，其中該溶液或該懸浮液為1，3-丁二醇溶液、甘露醇、 水、林格氏液或等張氯化鈉溶液。
8.如權利要求1的醫藥組合物，其進一步包含不揮發性油的溶劑或懸浮介質。
9.如權利要求8的醫藥組合物，其中該溶劑或該懸浮介質為合成的單甘油酯、合成的 二甘油酯、油酸的脂肪酸及其甘油酯衍生物、橄欖油或蓖麻油。
10.如權利要求8的醫藥組合物，其進一步更包含長鏈醇稀釋劑或分散劑、羧甲基纖維 素或其類似分散劑。
11.如權利要求1的醫藥組合物，其進一步包含界面活性劑或生物可用性增強劑。
12.如權利要求1的醫藥組合物，其為任何經口可接受的劑型，包括膠囊、錠劑、乳液及 水性懸浮液、分散液及溶液。
13.如權利要求12的醫藥組合物，其進一步可包含載劑、潤滑劑、適用稀釋劑、甜味劑、 調味劑或著色劑。
14.如權利要求13的醫藥組合物，其中該載劑為一種或多種可用作傳遞活性化合物的 醫藥賦形劑。
15.如權利要求13的醫藥組合物，其中該載劑為膠狀氧化硅、硬脂酸鎂、纖維素、或月 桂基硫酸鈉。
16.如權利要求1的醫藥組合物，其為鼻可用噴霧劑或吸入組合物，進一步可包含使用 芐醇的防腐劑、增強生物可用性的吸收促進劑、碳氟化合物、增溶劑或分散劑。
17.如權利要求16的醫藥組合物，其為制備成于生理食鹽水中的溶液。
全文摘要
本發明涉及通過對需要治療的受檢者投與含有有效劑量的IκB激酶亞單位α活性抑制劑的組合物來治療該受檢者的雄激素刺激的疾病的方法。亦可對具有前列腺癌高患病風險的受檢者投與該組合物作為用以降低該受檢者的前列腺癌風險的方法。另一種方法涉及識別由I κB激酶亞單位α所調節的轉錄活性的調控物。又一種方法涉及測定非人類哺乳動物測試受檢者中由IκB激酶亞單位α調節的轉錄活性。
文檔編號A61K36/28GK102657867SQ20121015027
公開日2012年9月12日 申請日期2007年5月30日 優先權日2007年5月30日
發明者蕭培文 申請人:中央研究院