專利名稱：血清胸腺因子在制備抗腫瘤藥物、腫瘤物理及化學(xué)治療藥物的保護(hù)藥物方面的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物化學(xué)物質(zhì)在制藥工程中的新用途，更具體的是血清胸腺因子在制備抗腫瘤藥物、腫瘤物理及化學(xué)治療藥物的保護(hù)藥物或增強(qiáng)免疫藥方面的用途。
背景技術(shù)：
癌癥是引起人類死亡的主要原因之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球每年死于癌癥的病人約有五百萬，而且最近幾年由于我們生活環(huán)境的惡化，癌癥的發(fā)病率上升，且呈現(xiàn)患者低齡化的趨勢。可見癌癥的預(yù)防和治療十分迫切。藥物治療是癌癥的主要治療手段之一。近一個世紀(jì)以來，癌癥的藥物治療取得了顯著成績，開發(fā)出了幾十種抗腫瘤藥物，有效地延長了患者的生命或提高了患者的生存質(zhì)量。其中有些腫瘤的藥物治療效果非常顯著，如藥物治療小兒急性白血病等。采用合理的給藥方式或與其它治療手段相結(jié)合，通常可改進(jìn)藥物的治療效果。但腫瘤的藥物研究和開發(fā)仍面臨巨大的挑戰(zhàn)，如目前腫瘤藥物種類比較單一，多數(shù)為細(xì)胞毒藥物，能殺死各種生長周期的腫瘤細(xì)胞，但是其副作用也很明顯，原因在于這些藥物在殺死腫瘤細(xì)胞的同時，也限制了這些藥物療效的發(fā)揮。另外，對多數(shù)實體瘤如肺癌、肝癌和胰腺癌等，化學(xué)藥物的治療效果常不明顯，而且到目前為止，大多數(shù)化療藥物并不能有的放矢地“靶向”治療腫瘤，往往在殺傷癌細(xì)胞的同時，對正常的組織細(xì)胞產(chǎn)生影響和損傷，所以在產(chǎn)生治療作用的同時，常伴有不同程度的不良反應(yīng)。同時還存在抗腫瘤藥物的耐藥性問題。上述這些問題的解決一方面要依賴于腫瘤分子生物學(xué)的深入研究，另一方面也要通過進(jìn)一步研究以發(fā)現(xiàn)大量更多的具有抗腫瘤活性的藥物，從中開發(fā)出高效低毒的新型抗腫瘤藥物。隨著科學(xué)技術(shù)及人們生活的現(xiàn)代化，環(huán)境污染給人們的健康帶來越來越多的不利影響，尤其是在疾病的診斷與治療過程中，如在腫瘤放療、化療過程中，某些藥物對人類具有不可低估的輻射作用。還有些帶有輻射性的職業(yè)工作都無時不在侵害著人們的機(jī)體，損害著人類的健康。因此，研究開發(fā)抗輻射藥物已經(jīng)受到人們的極大重視。放療和化療是治療腫瘤的主要方式，但都具有明顯的副作用。如環(huán)磷酰胺(CY)是臨床上用于治療惡性腫瘤和自身免疫性疾病的一種常用且有效的化療劑，但其毒副作用較大，特別是抑制骨髓造血，致外周血中紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板減少，以及明顯的胃腸道反應(yīng)使病人食欲下降、免疫力低下。由于這些毒副作用，使CY的用量和療程均受到了限制。為了減輕化療劑的毒副作用，臨床上常輔用一些升白細(xì)胞藥，如利血生、肌酐等，但效果不理
胸腺是人體重要的中樞免疫器官，是T細(xì)胞成熟發(fā)育的主要器官，對于維持和發(fā)展正常的免疫應(yīng)答及維持生命是必要的。它能分泌多種胸腺激素，血清胸腺因子(facteurthymic serique,FTS)就是其上皮細(xì)胞分泌的九肽。FTS由九個氨基酸Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn 組成。FTS最初由JF Bach等從豬血純化，1977年在Nature上發(fā)表以來引起廣泛關(guān)注。天然的FTS分子中含有等摩爾的鋅離子，若將其絡(luò)合去除其生物學(xué)活性則喪失。與天然的FTS相比，人工合成的FTS具有相同的生物學(xué)活性。華東理工大學(xué)學(xué)報第31卷第6期727-730頁公開了利用化學(xué)方法合成血清胸腺因子(FTS)以及對所合成的血清胸腺因子進(jìn)行了活性測定的內(nèi)容。據(jù)報道，自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化等，其胸腺的FTS分泌減少；獲得性免疫缺陷綜合癥病人血清中的FTS含量也降低。FTS與這些病的病因有何關(guān)系尚不明確，但是給予FTS治療后病人的免疫功能低下和免疫紊亂的狀態(tài)皆可糾正。FTS似乎對多種免疫細(xì)胞都能產(chǎn)生作用。在胸腺內(nèi)，F(xiàn)TS對鳥類和哺乳動物的T細(xì)胞前體的發(fā)育起重要作用，有研究證明FTS可以調(diào)節(jié)鳥類⑶4+ ⑶8+的比例。FTS也能增加自然殺傷細(xì)胞的活力。在雞模型中，F(xiàn)TS能增加IL-2R的表達(dá)。FTS也被提出影響人IFN-Y受體表達(dá)。但是，到目前為止，國內(nèi)外還未見FTS作為抗腫瘤及增強(qiáng)免疫藥方面的應(yīng)用的專利和研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供血清胸腺因子在制備抗腫瘤藥物、腫瘤物理治療及化學(xué)治療藥物的保護(hù)藥物或增強(qiáng)免疫藥物方面的用途。本發(fā)明中藥理學(xué)實驗采用的血清胸腺因子，可以是從動物血中自然提取的，也可以是通過化學(xué)合成方法人工合成的。本發(fā)明的藥理學(xué)實驗試驗中所用的材料以及試驗方法一、材料I、試驗動物本發(fā)明中的試驗動物為實驗用昆明小鼠，體重20_22g ；ffistar大鼠，體重100-120g，均為SPF級，雄雌各半。動物合格證號京動許字(2000)第017號，由中國藥品生物制品檢定所實驗動物中心提供。實驗動物室為無菌空氣二級過濾，人工日光燈12h自動照明，恒溫恒濕，溫度22-24°C，相對濕度40%-50%o荷瘤鼠種由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供。人肝癌Heps瘤，購自于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和藥物所。裸鼠由中國藥品生物制品檢定所動物繁育場提供，清潔級，合格證號為=SCXK京(2005-2004)。2、主要試劑本發(fā)明中的血清胸腺因子(FTS)由中國藥品生物制品標(biāo)準(zhǔn)化研究中心提供，是人工合成的血清胸腺因子(FTS)，合成方法見華東理工大學(xué)學(xué)報第31卷第6期727-730頁，為白色凍干粉末，用前純水稀釋；環(huán)磷酰胺由山西普德藥業(yè)有限公司提供，批號14023686 ；5-氟尿嘧啶由上海旭東海普藥業(yè)有限公司提供，批號H31020593 ;印度墨水由北京篤信精細(xì)制劑廠提供；RPMI-1640培養(yǎng)液由北京天象鑫隆技術(shù)有限公司提供。
二、方法I、劑量設(shè)置根據(jù)藥效曲線結(jié)果設(shè)置高中低三個劑量組小鼠高劑量O. 25mg · kg'中劑量 O. 125mg · kg'低劑量 O. 0625mg · kg_1 ；EAC 腹水瘤的陽性對照5-氟尿嘧啶給藥劑量25mg · kg-1, H22實體瘤陽性對照藥環(huán)磷酰胺給藥劑量20mg · kg-1 ;給藥體積均為IOml · kg'空白對照用生理鹽水。大鼠高劑量2. 2mg ·kg—1、中劑量I. Img .kg—1、低劑量O. 55mgkg^ ;大鼠W256實體瘤陽性對照藥為環(huán)磷酰胺89. 2mg. kg—1，給藥體積均為2ml · kg'空白對照用生理鹽水。
裸鼠高劑量O. 125mg · kg—1 ;中劑量 O. 0625mg · kg—1 ;低劑量 O. 032mg · kg—1 ;陽性對照組環(huán)磷酰胺IOmg · kg_S僅給藥一次，給藥體積均為O. Iml · lOg—1 ;空白對照用生理鹽水。2、動物模型制備腹水瘤取接種于小鼠的腹腔第7天的EAC瘤配成瘤細(xì)胞懸液接種于同種異體鼠腹腔，每鼠接種含106個瘤細(xì)胞的細(xì)胞懸液O. 4ml。實體瘤〈1>小鼠取接種于小鼠的腹腔第7天的H22瘤配成細(xì)胞懸液接種于同種異體鼠前肢腋窩皮下，每鼠接種含106個瘤細(xì)胞的細(xì)胞懸液O. 2ml ；<2>取接種于大鼠腹腔第7天的Walker-256瘤配成瘤細(xì)胞懸液接種于同種異體大鼠右側(cè)腿肌肉，每鼠接種含106個瘤細(xì)胞的細(xì)胞懸液O. 2ml。人肝癌Heps瘤購自于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院協(xié)和藥物所，取腫瘤腋下接種于裸鼠前肢腋窩皮下，接種后觀察成活后給藥進(jìn)行實驗。共給藥17天，末次給藥后第二天解剖稱瘤重、測出長短徑計算體積。3、免疫功能測試用淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(MTT法)體外實驗在給藥結(jié)束次日小鼠眼眶放血致死，無菌取脾。用RPMI1640培養(yǎng)液制成3X 106-8X 106/mL的淋巴細(xì)胞懸液備用。用96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)淋巴細(xì)胞，每孔含備用淋巴細(xì)胞液100 μ L，每種濃度3復(fù)孔。按試驗要求除空白對照孔夕卜，分別加入樣品，樣品+鋅各IOOyL以及ConAlOug/^OyL。淋巴細(xì)胞在37°C CO2孵箱中孵育72h，終止孵育前4h，每孔加MTT20ul，5mg/mL。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后加二甲基亞砜200 μ L，待紫色結(jié)晶全部溶解后用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm處測OD值。小鼠碳粒廓清試驗取末次給藥次日小鼠尾靜脈注射稀釋好的印度墨汁液O. lml/10g，分別采5min和IOmin的眼靜脈叢血加至0. I % Na2C032ml，再用721型分光光度計在600nm處測OD值。4、檢驗指標(biāo)
給藥組生存天數(shù)-對照組生存天數(shù)腹水瘤生命延長率= -
對照組生存天數(shù)實體瘤
給藥組生存天數(shù)-對照組生存天數(shù)
抑瘤率=-
對照組生存天數(shù)
生命延長率和抑瘤率均需大于30%抗腫瘤作用明確；刺激指數(shù)SI =實驗組OD值/對照組OD值；廓清指數(shù)K= (IogOD1-IogOD2)/ (^t1)其中OD1和OD2分別為在某一時刻h與t2所測得光密度值；
權(quán)利要求
1.血清胸腺因子在制備抗EAC腹水瘤藥物或抗H22實體瘤藥物方面的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了將血清胸腺因子(FTS)在制備抗腫瘤藥物、腫瘤物理治療及化學(xué)治療藥物的保護(hù)藥物或增強(qiáng)免疫藥物方面的用途。試驗結(jié)果顯示，荷瘤小鼠、W256大鼠給藥各組與生理鹽水組均有顯著性差異且抑瘤率均大于30％，因此FTS抗腫瘤作用確實。FTS還能夠多方面提高機(jī)體的免疫活性，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。FTS無毒，所產(chǎn)生的副作用很小，而且它的有效作用劑量范圍很廣，安全范圍較大。在作為腫瘤物理及化學(xué)治療藥物的保護(hù)藥的研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TS對機(jī)體免疫指標(biāo)具有明顯的保護(hù)。因此FTS可以為臨床上治療腫瘤提供一個新的靶向和發(fā)展方向。
文檔編號A61P35/00GK102772783SQ20121026079
公開日2012年11月14日 申請日期2007年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月25日
發(fā)明者樂嘉靜, 廖曉泉, 張長平, 徐康森, 李湛君, 王悅 申請人:中國生化制藥工業(yè)協(xié)會