普那霉素ⅱa晶體的制作方法
【專利摘要】本發明提供了普那霉素ⅡA晶體及其制備方法和用途、以及含有治療有效量的所述普那霉素ⅡA晶體的藥物組合物，所述普那霉素ⅡA晶體在X射線圖譜中具有下述2θ角的特征峰：6.0、8.7、9.7、12.0、12.7、13.2、14.8、18.1、19.6、20.9、21.3、21.8、22.5、23.3，并且所述普那霉素ⅡA晶體的熔點為206℃～210℃。本發明的普那霉素ⅡA晶體純度高、穩定性好，有助于提高普那霉素的生物利用度。
【專利說明】普那霉素II A晶體
【技術領域】
[0001]本發明涉及普那霉素IIA晶體，更具體地說，涉及普那霉素IIA晶體及其制備方法和用途、以及含有治療有效量的所述普那霉素IIA晶體的藥物組合物。
【背景技術】[0002]普那霉素是由始旋鏈霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)產生的一種鏈陽性菌素類抗生素，由兩類化學性質不同的物質組成，即屬于B族鏈陽性菌素的普那霉素1(主要為PIA)和屬于A族鏈陽性菌素的普那霉素11(主要為PIIA)組成，兩者的組合比例大約是30: 70。兩者聯合使用的體外抗菌活性至少是單一組分活性的10倍，這種協同作用同時也擴大了兩組分的抗菌譜，使之對細菌表現為殺菌作用，而各組分單獨使用則表現為抑菌作用。同時，由于存在兩種結構完全不同的組分，耐藥性獲得較緩慢。這是該新藥區別于其他抗耐藥菌藥物的顯著特點之一，它是唯一的口服給藥抗耐藥菌藥物。
[0003]普那霉素主要作用于細菌核糖體，抑制蛋白質的合成。但是，由于普那霉素水溶性極差，不易制成腸外制劑，因此其臨床應用受到限制。天然的普那霉素IA和IIA經化學修飾可以得到水溶性衍生物RP59500解決該問題，它是由奎奴普汀與達福普汀以30: 70(ff/W)比例混合制成的。
[0004]現在上市的普那霉素是由sanofi aventis生產的，主要由普那霉素IA和普那霉素IIA組成的，商品名為PY0STACINE的口服普那霉素片。
[0005]目前普那霉素(pristinamycins)、奎奴普汀(quinupristin) /達福普汀(dalfopristin)在歐洲已經有一定的市場。普那霉素在歐洲的用量與銷量分別為40噸、
1.2億美元,奎奴普汀(quinupristin)/達福普汀(dalfopristin)的用量和銷量分別為3噸、約3億美元。
[0006]作為藥效優良的抗生素，對普那霉素純化工藝的研究和開發具有重要意義。普那霉素中的兩個組分可以分別用于合成奎奴普汀、達福普汀，因此有必要對兩個組分分別進行純化，得到精品，用于后期合成。其中的達福普汀是由本發明的普那霉素IIA經化學修飾而得。
[0007]現今存在的關于普那霉素的工藝專利中，得到的普那霉素純度都比較低，如工業化生產的普那霉素經純化后還含有20%的雜質，迄今所進行的純化努力總是以失敗而告終，常常導致各組成分中的一種降解，這是由于許多操作導致不穩定產物中環形結構的打開或成分的脫水。由于這一事實，多年來認為純度提高是不可能達到的。這種局面造成的結果是普那霉素的銷售被嚴格限制在諸如法國和比利時的一些國家中，導致某些地區人口失去了對革蘭氏陽性球菌嚴重感染的一種治療，特別是對其它抗生素具有耐受性的病人的治療[2]。
[0008]普那霉素由I組分和II組分組成，它是通過連接到核糖體上從而抑制蛋白的合成來抑制細菌的生長。普那霉素I和II都作用在細菌核糖體50S亞基上，并在鏈延伸階段抑止mRNA的轉譯。普那霉素II使肽基轉移酶的供體和受體部位失活，從而干擾該酶的功能。它們在兩處阻斷了肽鏈的延伸:核糖體A位點的氨酰tRNA (tRNA)和肽基-tRNA在P位點形成肽鍵。
[0009]普那霉素I干擾肽基-tRNA在P位點的正確定位；繼而抑制肽鍵形成，導致產生一條不完全肽鏈。后一過程具有模板依賴性，即選擇性地影響mRNA對堿性氨基酸和脯氨酸的編碼。現在已經有人提出了一種普那霉素的作用機制模型來解釋普那霉素I和II的協同作用。
[0010]普那霉素I和II兩者之間協同作用與兩者的比例關系無關，但由于普那霉素II A在體內較弱的吸收性，所以在小鼠體內試驗時普那霉素II的量要多于普那霉素I才能使協同作用明顯。一般兩者聯合使用時的體外抗菌活性至少是單一組分活性的10倍。而且這種協同作用也擴大了兩組分的抗菌譜，如拮抗耐紅霉素的金黃色葡萄球菌(耐甲氧西林菌株)、單核細胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)、產氣夾膜梭狀芽抱桿菌(Clostredium perfringens)和淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae)。另外當每一組分有抑菌作用時,聯合使用的協同作用表現出混合殺菌性。小鼠體內試驗顯示，對于金黃色葡萄球菌感染，普那霉素I和普那霉素II聯合使用CD50為50mg/kg，而單獨使用時CD50分別為75~150mg/kg及300mg/kg[1]
[0011]細菌對普那霉素產生耐藥性存在三種不同機制:改變靶位點結構、存在藥物滅活酶和增加藥物泵出。普那霉素最常見的耐藥性為erm基因編碼的甲基化酶催化23S rRNA甲基化，從而使大環內脂類抗生素、Iincosamides及普那霉素I組分(MLSB)與rRNA親和力下降，表現為MLSB耐藥性[3]，但是這種甲基化不影響普那霉素II組分的的抗菌活性，普那霉素對組成型及誘導型MLSB耐藥金黃色葡萄球菌仍有抗菌作用[4]。普那霉素的滅活酶如普那霉素I水解酶和普那霉素II乙酰基轉移酶，它們能分別滅活普那霉素I和II，但由于這兩種酶同時出現在同一菌株中的幾率相對較小，故普那霉素耐藥性獲得較緩慢[5]。此外在某些葡萄球菌中發現一種ATP結合蛋白，能將普那霉素和大環內脂類抗生素泵出細胞外而產生耐藥性。
[0012]普那霉素在體外對眾多的革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌、厭氧菌具有很強的抑制殺菌作用。普那霉素對金葡球菌`(MRSA，MSSA)、表葡球菌(MRSE，MSSE)、溶血葡球菌、肺炎鏈球菌等均有很強的抗菌活性[6’7]。體內試驗中，普那霉素對于對紅霉素敏感或耐藥的MRSA療效與萬古霉素相當M，它還能有效地預防對紅霉素敏感或耐藥地鏈球菌引起的心膜炎[8]。另外，體外試驗顯示普那霉素與萬古霉素有協同作用[9]。普那霉素對普通病菌的殺菌活性見表1，對其他微生物的殺菌活性見表2和表3。但普那霉素對梅毒密螺旋體和布魯氏菌卻沒有殺菌作用。
[0013]表1普那霉素的抗菌活性
[0014]
【權利要求】
1.一種如式I所示的普那霉素IIA晶體，
2.如權利要求1所述的普那霉素IIA晶體，其中，所述普那霉素IIA晶體在X射線圖譜中具有下述 2 Θ 角的特征峰:6.0,8.7,9.7,12.0,12.7,13.2,14.8,18.1,19.6,20.9,21.3、21.8,22.5,23.3，并且所述普那霉素IIA晶體的熔點為206°C~210°C。
3.—種藥物組合物，包括治療有效量的如權利要求1或2所述的普那霉素IIA晶體及其藥學上可接受的載體。
4.如權利要求3所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物還包括選自由普那霉素IA、普那霉素IB、普那霉素1C、普那霉素IIB、普那霉素IIC組成的組中的至少一種。
5.如權利要求3或4所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑或顆粒劑。
6.一種如權利要求1或2所述的普那霉素IIA的晶體在制備用于治療抗耐藥菌感染的藥物中的應用。
7.一種制備如權利要求1或2所述的普那霉素IIA晶體的方法，所述方法包括如下步驟: 步驟a):將普那霉素IIA溶于Cl~C4的一元醇或者C3~C6的酮的溶劑中，在0°C~70°C溫度下攪拌溶解，過濾，得到濾液； 步驟b):在步驟a)所得的濾液中加0.5~10倍濾液體積的純化水，或者將所得的溶液在常壓或減壓下加熱至溶劑的沸點，蒸出溶劑至剩余體積為加入純化水體積的0.5~2倍，得到含有結晶的懸濁液； 步驟c):將步驟a)所得的濾液或步驟b)所得的懸濁液冷卻到-30°C~30°C，析出結晶，過濾得到普那霉素IIA晶體。
8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述Cl~C4的一元醇為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇。
9.根據權利要求7所述的方法，其中，所述C3~C6的酮為丙酮、丁酮或環己酮。
【文檔編號】A61P31/04GK103665101SQ201210347844
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年9月19日 優先權日:2012年9月19日
【發明者】毛文華, 吳亞銘, 黃志明, 周苗 申請人:浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠