專利名稱：一葉秋堿在制備抑制mda-mb-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳腺癌是女性排名第一的常見惡性腫瘤。2011年美國CA:ACancer Journal forClinicians雜志(2010年影響因子94. 262)公布的最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，美國2011年預(yù)計(jì)將有230480例女性罹患乳腺癌，占女性新發(fā)惡性腫瘤的30%，排名女性惡性腫瘤發(fā)病率第一位。在我國北京、上海、天津等大城市的統(tǒng)計(jì)顯示乳腺癌同樣是我國女性最常見的惡性腫瘤，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢。
—葉秋堿，別名葉秋堿、硝酸一葉秋堿。其化學(xué)名稱為(6S, IlaR, IIbS)-9，10，11，11&-四氫_8!1-6，IIb-亞甲呋喃并[2，3_c]吡啶并[1，2_a]氮雜卓-2 (6H)-酮。目前還沒有其抑制乳腺癌(MDA-MB-157)細(xì)胞增殖的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。一葉秋堿主要興奮脊髄使反射活動(dòng)和肌張カ增加。此外能興奮腦干增強(qiáng)呼吸及心肌收縮力，升高血壓，并有抑制膽堿酯酶的作用。臨床用于治療小兒麻痹后遺癥和面神經(jīng)麻痹，對神經(jīng)衰弱、低血壓、植物神經(jīng)功能紊亂引起的頭暈、耳鳴、耳聾等有一定療效。現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制MDA-MB-157細(xì)胞増殖。有益效果一葉秋堿抑制MDA-MB-157細(xì)胞増殖，效果良好。
具體實(shí)施例方式一葉秋堿抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料I實(shí)驗(yàn)材料I. I實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株乳腺癌(MDA-MB-157)，來自本公司實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實(shí)驗(yàn)藥物研究藥物一葉秋堿，寶雞國康生物科技有限公司，批號(hào)20110523藥液儲(chǔ)液稱取IOOmg —葉秋堿，溶于5ml無水こ醇中，O. 2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí)O. 2 μ m濾器過濾無水こ醇以備對照組之用。I. 3實(shí)驗(yàn)試劑DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESCO 公司批號(hào)2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10);Penicillin G Sodium Salt (AMRESCO 公司批號(hào)2010242);Str 印 tomycin Su I fate (AMRESCO公司批號(hào)2010382);無水こ醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào)080310182);MTT(Biosharp批號(hào):0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；I. 4實(shí)驗(yàn)器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號(hào)DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號(hào)SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào)3111);超凈臺(tái)(蘇凈集団安泰公司制造型號(hào)SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號(hào)S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號(hào)P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號(hào)BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號(hào)MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào)DHG9123A);冰箱(西門子公司型號(hào)KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào)2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào)SLGP033RB) ; IOcm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。 2實(shí)驗(yàn)方法I) MDA-MB-157 細(xì)胞用 DMEM+10%FBS 于 37°C、5%C02 進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期吋，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0. 25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%_70%，加入一葉秋堿溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I ニ甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、ニ甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示細(xì)胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。3統(tǒng)計(jì)處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean + S. D.表不。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對MDA_MB_157細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0. 01 )，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I 一葉秋堿對MDA-MB-157細(xì)胞增殖抑制影響研究(X土SD)
權(quán)利要求
1. 一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)，一葉秋堿，別名葉秋堿、硝酸一葉秋堿。其化學(xué)名稱為(6S,11aR,11bS)-9,10,11,11a-四氫-8H-6,11b-亞甲呋喃并[2,3-c]吡啶并[1,2-a]氮雜卓-2(6H)-酮，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制MDA-MB-157細(xì)胞增殖。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102824347SQ20121035580
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月22日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:南京正亮醫(yī)藥科技有限公司